缝隙连接与内耳的关系

关于内耳支持细胞的生理功能，过去人们一直认为其仅对毛细胞起到机械支撑作用。近年来随着分子生物学理论和技术的发展，人们逐渐认识到这些细胞在听觉形成和内耳离子交换过程中发挥着不可替代的作用。而内耳中细胞间的缝隙连接通讯就是实现这些作用的重要途径，本文将就有关     

内耳Connexin缝隙连接的功能与耳聋机理

缝隙连接对于维持正常听觉功能有着重要的作用，编码组成缝隙连接蛋白的Connexin基因突变可引起严重的听力损失．占整个新生儿耳聋病例的70—80％。此类基因病理变化仅发生于耳蜗内，虽听觉毛细胞上并无缝隙连接或Connexin基因表达，但其支持细胞借助于缝隙连接的耦合作用在内耳联结成一个特殊的网络。本文总结了近年来内耳缝隙连接生物物理学特性方面的研究进展，阐述了耳蜗缝隙连接对于听觉功能的重要性；同时也展望了阐明其功能对治疗因Connexin基因突变所致的遗传性耳聋的前景。     

浆膜蛋白RTN1和RTN4基因在小鼠内耳的表达

目的 探讨浆膜蛋白RTN1和RTN4基因在小鼠内耳的表达。方法 采用5只成年小鼠内耳组织提取总RNA，逆转录后获得小鼠内耳细胞cDNA，根据RTN1和RTN4基因编码区序列设计的引物进行PCR扩增，通过PCR产物分析和DNA测序确定RTN1和RTN4是否在小鼠内耳细胞表达。结果 采用小鼠内耳组织总RNA，RT—PCR扩增出RTN1和RTN4基因部分编码区，扩增产物测序证实小鼠内耳中有RTN1和RTN4基因的表达。结论 RTN1和RTN4基因在内耳有表达，为RTN1和RTN4与连接蛋白26（connexin26）蛋白的互作关系提供了进一步的证据。浆膜蛋白RTN1和RTN4可能与连接蛋白26在听觉生理中起作用。     

ICAM—1与自身免疫性内耳病

细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）是一种单链糖蛋白，免疫反应中，表达于各种免疫细胞，内皮细胞及表皮细胞，在诱导免疫活性细胞与血管内皮细胞粘附，并向炎症组织迁移过程中发挥重要作用，在内耳免疫反应早期，ＩＣＡＭ－１表达于内耳螺旋轴静脉及其回流小静脉，内淋巴囊及其囊周组织，螺旋韧带等，随之出现免疫细胞在内耳的聚积，并导致损害引起内耳病变，因此推测，阻断ＩＣＡＭ－１受体在内耳的表达，将阻止炎性细胞的浸润所     

内耳间隙连接和连接蛋白基因家族与遗传性聋

耳蜗有非感觉上皮细胞和结缔组织细胞2套间隙连接系统,内耳前庭的感觉上皮也有间隙连接。已发现在内耳表达的连接蛋白有Cx26、Cx30、Cx31、Cx32、Cx43和Cx45。连接蛋白是同一基因家族编码,其中GJB2(Cx26)、GJB3(Cx31)、GJB6(Cx30)、GJA1(Cx43)、GJB1(Cx32)都与遗传性聋有关。GJB2基因敲除小鼠在胚胎期致死。GJB3敲除小鼠60%在胚胎死亡,成活小鼠无耳聋和皮肤疾病等表型。GJA1裸鼠表现心脏发育缺陷与膜内和软骨内成骨延迟。GJB1敲除小鼠表型无明显异常,但外周神经表现脱髓鞘改变。不同间隙连接的缺陷导致听力下降的机制可能不同。间隙连接与耳聋关系的深入研究,可能有助于阐明听觉和耳聋的部分机制。     

内耳免疫反应中的细胞凋亡活性及其与FasL表达的相关性

目的 观察内耳免疫反应过程中是否存在细胞凋亡以及细胞凋亡活性与FasL表达相关性。方法16只雌性白色豚鼠。随机分为实验组与对照组，每组各8只。所有动物均先以钥孔虫戚血蓝蛋白全身免疫。然后，实验组再以相同抗原进行单侧内耳局部免疫，对照组则于单侧内耳注射等量磷酸盐缓冲生理盐水。3天后处死动物，取内耳免疫侧（或对照注射侧）耳蜗制备石蜡切片，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测内耳细胞凋亡活性，免疫组化法检测内耳FasL表达水平。结果实验组动物内耳Cord器毛细胞、血管纹的缘细胞和螺旋神经节细胞中存在阳性着色的凋亡细胞，对照组豚鼠内耳则否。实验组动物内耳Corti、蜗管侧壁、螺旋神经节细胞FasL表达阳性。对照组则为阴性。结论 内耳免疫反应可诱导局部细胞凋亡活性增高，FasL在此过程中可能发挥重要作用。     

459细胞凋亡与内耳毛细胞的损伤方式

细胞凋亡对细胞的增殖，器官的发生和功能维持起着重要作用，近期研究发现，细胞凋亡也是内耳感觉上皮毛细胞的一种重要的损伤方式，并可能与感觉上皮细胞的增殖过程有关，本综述了内耳感觉上皮毛细胞损伤方式和毛细胞的凋亡，探讨内耳毛细胞的损伤方式与感觉上皮修复的关系。     

缝隙连接阻断剂1-庚醇对豚鼠听觉的作用

目的：探讨缝隙连接在维持正常的听功能方面可能发挥的作用。方法：通过向豚鼠外淋巴中注入缝隙连接阻断剂1-庚醇（1-heptanol），然后检测给药前后豚鼠听性脑干诱发反应（ABR）阈值和潜伏期的改变，并借助透射电镜观察药物对豚鼠耳蜗中的缝隙连接结构的影响。结果：注射1-heptanol后，豚鼠ABR阈值显著提高，潜伏期延长（P〈0．01），并随时间推移呈动态升高趋势。同时，通过电镜可以观察到在豚鼠耳蜗中存在着大量的缝隙连接结构，其主要分布在毛细胞和其下的支持细胞间。1-heptanol可以使缝隙连接结构破坏，毛细胞水肿、变性。结论：缝隙连接阻断剂1-heptanol能明显影响豚鼠的听功能，缝隙连接结构在听觉形成过程中起着重要的作用。     

凋亡及其相关基因在实验性自身免疫性内耳病小鼠内耳组织中的表达

目的探讨凋亡及其相关基因在自身免疫性内耳病形成和发展中的作用。方法选用近交系C57BL／6小鼠随机数字表法分为正常对照组和免疫7、14、21、28d组，每组16只。提取豚鼠内耳膜迷路组织为抗原，与等量完令弗氏佐剂，百日咳杆菌一次免疫实验组动物，制备自身免疫性内耳病动物模型，应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术（terminal deoxynucleotidyl transferase—mediated d-UTP nick end—labing，TUNEL）检测内耳中的细胞凋亡，应用免疫组化和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测Fas、FasL及bcl-2在内耳的表达。结果正常小鼠内耳组织中，TUNEL染色阳性细胞极为少见，偶尔在Corti器或球囊斑的支持细胞发现。免疫7d后，内毛细胞和少量的血管纹边缘细胞TUNEL染色阳性，14d后TUNEL染色阳性的细胞数量及种类显著增加，但外毛细胞、螺旋神经节细胞与前庭神经节细胞免疫前后均未见凋亡表达。免疫组化染色显示，正常小鼠内耳中Fas表达广泛，FasL存部分螺旋神经节细胞与前庭神经节细胞表达，bcl-2仅在螺旋神经节细胞、前庭神经节细胞有较强表达。免疫后FasL在各种组织均有较强表达，bcl一2在外毛细胞出现表达，在耳蜗神经无细胞的表达增加。RT—PCR检测正常小鼠内耳组织的Fas mRNA、FasL mRNA、bcl-2mRNA均为阳性，FasL mRNA低水平表达，免疫后升高，在2周达到高峰后逐渐下降；bcl-2 mRNA在免疫后进行性升高。结论Fas／FasL信号系统介导的凋亡与自身免疫性内耳病的发生、发展过程关系密切，bcl-2对内耳中Fas／FasL介导的凋亡有重要的调节作用。     

不同龄小鼠内耳中ABAD的表达及临床意义

目的探讨ABAD（AmyloidβBinding Alcohol Dehydrogenase）在不同龄小鼠内耳中表达量上的差异。方法将昆明小鼠分为2周龄、5个月龄、1年3个不同的年龄组,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测ABAD在不同龄小鼠内耳中表达的动态变化。结果ABAD在不同年龄组小鼠内耳中均有表达,每组之间差异有统计学意义（P＜0.05）,且随着年龄的增大ABAD在内耳的表达逐渐增多。结论ABAD可能参与内耳细胞的老化机制;与老年性耳聋的发生有关。     

内耳免疫反应中细胞凋亡的研究

目的探讨内耳免疫反应过程是否引起细胞凋亡以及Fas和FasL、Bcl-2和Bax的表达情况。方法选用雌性白色豚鼠16只，随机分为实验组和对照组各8只，以钥孔蛾血蓝蛋白全身免疫后，实验组以相同抗原进行内耳免疫，对照组内耳注射等量的磷酸盐缓冲生理盐水，在内耳免疫7d后处死动物，取内耳免疫侧耳蜗做石蜡切片。通过电镜和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling，TUNEL)检测内耳凋亡细胞，免疫组化检测内耳Fas和FasL以及Bcl-2和Bax的表达。结果透射电镜观察发现实验组术后7d内耳外毛细胞、血管纹细胞及螺旋神经节细胞都出现了凋亡细胞的特征性改变，而对照组未发现具有上述特征的细胞。实验组内耳Corti器毛细胞，血管纹的缘细胞和螺旋神经节细胞存在TUNEL染色阳性细胞，TUNEL染色阳性细胞具有凋亡细胞的典型形态学特征，对照组内耳的任何结构中都没发现TUNEL染色阳性细胞。免疫组化染色实验组Corti器、螺旋神经节细胞、血管纹和螺旋韧带Fas和FasL蛋白表达阳性，而对照组只有螺旋神经节细胞和血管纹有较弱的Fas蛋白表达，FasL蛋白表达阴性。实验组Corti器、螺旋神经节细胞、侧壁Bcl-2蛋白表达阴性，对照组的Corti器、侧壁和螺旋神经节细胞Bcl-2蛋白表达阳性。实验组Corti器、侧壁和螺旋神经节细胞Bax蛋白表达阳性，对照组只有螺旋神经节细胞Bax蛋白表达弱阳性，Corti器、侧壁表达阴性。结论内耳免疫反应可诱导细胞凋亡发生，Fas-FasL是此过程的信号转导途径之一，Bcl-2和Bax蛋白在其中起了重要调节作用。     

Cx26缺陷遗传性耳聋病理机制的研究进展

GJB2基因编码的缝隙连接蛋白26(Connexin26,Cx26)是耳蜗中最重要的一种缝隙连接蛋白(Cx),在耳蜗缝隙连接(Gap Junction,GJ)中高度表达。Cx26是最常见和危害人群最广的耳聋基因,该基因缺陷不仅导致先天性耳聋,也可引起迟发性耳聋。早前人们推测Cx26突变引起耳聋的原因可能是Cx26缝隙连接功能障碍致耳蜗内淋巴液K+循环障碍。近些年来研究发现,Cx26缺陷耳聋主要是因为耳蜗发育障碍致先天性耳聋,耳蜗主动放大障碍致迟发性耳聋。本文就近年来Cx26缺陷先天性耳聋和迟发性耳聋病理机制的研究进展予以综述。     

内耳免疫反应中内耳血管细胞粘附分子-1和α4-整合素的表达

目的 探讨血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)和α4-整合素(α4-Integrin)在内耳免疫反应中的作用。方法 采用钥孔戚血蓝蛋白激发已两次全身致敏的大鼠内耳，诱发其内耳免疫反应，制造迷路炎模型，然后通过免疫组织化学技术，检测内耳VCAM-1和α4-Intergrin分别在内耳中的表达。结果 内耳激发后24小时，螺旋轴静脉(spiral modiolar vein，SMVs)及其回流小静脉(collecting venules,CVs)可见有VCAM-1表达，48小时达最高峰，维持此水平1周，然后下降。α4-Intergrin在致敏后24小时即可表达于浸润于SMV8和CVs及蜗神经周围的白细胞，铝小时达高峰，然后迅速下降。结论 内耳免疫反应时VCAM-1、α4-Intergrin在炎性细胞从循环系统进入内耳的过程中发挥着重要作用。     

小鼠内耳发育的分子生物学研究进展

听基板至听泡再发育成成熟内耳的过程是一个极其复杂的过程,包括外胚层上皮的引导,听囊的初步形成和改建,感觉上皮、非感觉上皮及神经元细胞的分化等过程,最终形成精细的迷路。其间多种基因的时间、空间表达精细、准确地控制调节着这一过程。这些基因通过编码转录因子、生长因子、分泌因子或受体蛋白等重要的生物分子,以不同的机制对内耳发育起重要作用。本文综述了近年来对小鼠内耳发育的分子生物学研究状况,从内耳发育的不同阶段阐述了目前较为公认的调节小鼠内耳发育的分子生物学机制。1听基板的形成及其相关基因图1听基板的形成过程1.1…     

幼鼠内耳单个器官培养步骤及分类方法

内耳离体培养在研究内耳细胞功能、内耳组织发育再生、细胞损伤退化等方面具有重要价值。但由于内耳的组织结构微小复杂,其取材和培养具有较大难度,使该技术的普及和应用受到一定限制。本文在简要点评不同内耳离体培养方法优劣的基础上,结合本实验室多年来积累的实践经验,详细介绍了新生大鼠各个内耳终器取材及培养的具体步骤。从解剖迷路到分离终器,从凝胶制备到标本铺放,都有详细的操作指南,本文还针对各环节中的技术动作和关键事项进行了具体探讨并配以指导图例,希望这些内容能够弥补以往文献中抽象简略的条款式步骤所造成的实验困难,为开展内耳器官培养研究的初学者提供一定的帮助。     

连接蛋白43在鼻咽癌组织细胞中的表达

目的 :探讨连接蛋白 4 3(Connextion ,Cx4 3)的表达与鼻咽癌组织细胞的相关性。方法 :采用激光扫描共聚焦显微镜和荧光技术 ,对 18例鼻咽癌和 10例鼻咽慢性炎症组织细胞中 ,Cx4 3的表达进行形态观察和定量分析。结果 :Cx4 3在鼻咽癌组织细胞膜中的表达显著低于鼻咽慢性炎症组织 ,两组细胞膜的Cx4 3荧光值之间差异具有非常显著性意义 (P <0 .0 1)。结论 :Cx4 3的表达水平与鼻咽癌的发生和发展有关 ,细胞间隙连接通讯减弱或缺失是鼻咽癌形成及恶性转变的重要因素之一。     

连接蛋白突变与遗传性耳聋

1连接蛋白的结构与功能 连接蛋白是形成缝隙连接的蛋白单位,在脊椎动物细胞之间的通讯中起着关键作用,最近几年,越来越多的研究发现,连接蛋白与许多人类疾病关系密切,连接蛋白基因突变影响许多组织系统,并且同一基因突变与不同的疾病有关系,伴有β-连接蛋白突变的患者可以引起听觉系统,外周神经、皮肤以及眼部等病变[1-9].     

大鼠内耳表达蛋白质组的2-DE分离和初步鉴定

目的 通过制备、分离和鉴定正常情况下内耳表达的蛋白质，了解内耳的蛋白质组学特征。方法 本研究以正常大鼠内耳组织为起始材料，通过2-DE分离内耳表达的蛋白质组，利用MALDI-TOF质谱仪对分离的蛋白质进行分析和鉴定。结果 从20只新生大鼠内耳组织提取到800μg蛋白质，在18cm×20cm的2-DE胶上可分离到300多个蛋白质斑点，质谱仪鉴定提示这些蛋白质分别属于细胞结构、细胞分裂、代谢相关、细胞信号传导、细胞因子相关蛋白质及未知蛋白质。结论 本研究建立了大鼠内耳蛋白质组的分离和提取的方法，初步构建内耳2-DE参考图谱，并对其中的部分蛋白质进行了鉴定和分类，该图谱有助于内耳研究，尤其是不同状态下如疾病时内耳蛋白质表达变化的研究。     

GJB6基因突变与遗传性耳聋

连接蛋白(connexins,Cxs)组成缝隙连接通道,使相邻细胞离子、代谢物质和分子量小于1～1.5kDa的信使分子直接转运.缝隙连接是细胞间通讯的结构基础,对胚胎发育、形态建成、增殖分化以及细胞群的协调活动具有重要意义.     

豚鼠内耳Na,K-ATP酶α亚基异构体的表达

目的 研究豚鼠内耳组织中Na，K-ATP酶α亚基三种异构体αl、α2、α3的表达及其意义。方法 用小鼠抗大鼠Na，K-ATP酶α亚基异构体特异性单克隆抗体，采用免疫组化SP法观察豚鼠耳蜗、半规管、椭圆囊及球囊组织中Na，K—ATP酶α亚基三种异构体的表达模式。结果 αl亚基异构体广泛分布于内耳组织的各个部位，特别是上皮细胞和螺旋神经节细胞中，α2和α3亚基异构体则主要分布于螺旋神经节细胞、Corti器及血管纹。结论 Na，K—ATP酶亚基异构体在内耳不同部位的表达差异表明不同的内耳细胞转运Na^ 和K^ 的能力不同，它们共同作用参与保持内耳内环境的稳定。