Rac1在HL-60细胞中的表达及其对细胞周期和凋亡的影响

本研究旨在观察Rac1在急性白血病细胞系HL-60中mRNA的表达水平及其对细胞周期和凋亡的影响。采用半定量RT-PCR方法检测HL-60细胞及正常人外周血单个核细胞(PBMNC)中Rac1mRNA表达水平;用脂质体FuGENE6法将Rac1特异性反义寡核苷酸(ASODN)转入HL-60细胞,应用MTT试验检测细胞存活率;采用流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化、Wright-Giemsa、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)及AnnexinⅤ-FITC/PI染色检测凋亡细胞。结果表明:Rac1在HL-60细胞系中相对含量(Rac1/GAPDH)为0.84±0.13,在正常PBMNC中相对含量为0.26±0.1(P<0.01),Rac1在HL-60细胞中的表达明显高于PBMNC。与正义链(SODN)组相比,经2.0g/L Rac1特异性ASODN作用48小时后,HL-60细胞存活率降低[(73.7±5.0)%vs(93.2±3.0)%,P<0.01],G1期细胞百分数升高[(52.1±6.8)%vs(31.6±4.7)%,(P<0.05)],AnnexinⅤ阳性率升高[(19.2±2.1)%vs(4.1±1.7)%,(P<0.01)],凋亡小体明显增加。结论:白血病细胞系HL-60中高表达的Rac1可能促进白血病细胞HL-60的过度增殖并抑制其凋亡。     

抑制SDF-1活性对人急性髓性白血病HL-60细胞系增殖的影响

本研究通过观察抑制SDF-1活性对HL-60细胞增殖活性的影响，探讨趋化因子SDF-1在维持HL-60细胞生存能力中的作用。培养骨髓基质细胞，并与HL-60细胞共培养，采用SDF-1受体CXCR4单克隆抗体阻断SDF-1生物活性后，用MTT法检测HL-60细胞活力、用流式细胞术观察HL-60细胞增殖周期变化、检测细胞膜表面CXCR4表达，同时检测CXCR4单克隆抗体应用前后HL-60细胞内钙离子浓度变化。结果显示，抗CXCR4单克隆抗体可下调HL-60细胞膜表面CXCR4的表达，同时处于G0／G1期的细胞增多，处于S期的细胞减少，而白血病细胞存活率下调，细胞内钙离子浓度降低。结论：抑制SDF-1活性可在一定程度上抑制白血病细胞的增殖。     

黄芩苷对耐阿霉素白血病细胞株HL-60／ADR增殖、凋亡的影响

本研究探讨中药黄芩苷对耐阿霉素人髓系白血病细胞株HL-60／ADR增殖、凋亡的影响。应用MTT法绘制细胞生长曲线,观察黄芩苷对HL-60／ADR细胞增殖的影响;应用Annexin V FITC／PI双染流式细胞术、DNA片段化、TdT酶介导的原位缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡;RT—PCR检测黄芩苷作用不同时段后c-myc、bcl-2等凋亡相关基因mRNA的表达水平;Western blot法检测凋亡及信号通路相关蛋白C—MYC、BCL-2、pro—caspase-3、PARP、BAD等的表达变化。结果表明,黄芩苷能明显抑制HL-60／ADR细胞增殖所测得的细胞倍增时间为48小时,半数抑制率为28μmol;Annexin V FITC／PI法检测到早期凋亡细胞、DNA片段化,TUNEL法检测到晚期凋亡细胞,细胞凋亡率呈浓度依赖性（20、40、80μmol／L）。黄芩苷作用HL-60／ADR细胞不同时段（12、24、48小时）后C-myc、bcl-2基因mRNA的表达,并随着作用时间的延长而逐渐减弱,C—MYC、BCL-2、procaspase-3、PARP（116kD）蛋白的表达逐渐下降,PARP（85kD）及BAD蛋白表达逐渐增强,呈时间依赖性。结论：黄芩苷能有效抑制HL-60／ADR细胞增殖,诱导其凋亡,上述凋亡相关基因及信号通路相关蛋白可能参与了黄芩苷抑制HL-60／ADR细胞增殖和诱导凋亡的过程：     

雷帕霉素对急性髓系白血病细胞系HL-60和HL-60/VCR生长的抑制作用

为了探讨mTOR抑制剂雷帕霉素对急性髓系白血病（acute myeloid leukemia;AML）细胞的增殖和药物敏感性的影响。以AML细胞株HL-60和多药耐药HL-60/VCR细胞系为研究对象,采用MTT法测定生长曲线和流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测P糖蛋白（P-glycoprotein,Pgp）的表达。结果显示：与空白对照组细胞比较,雷帕霉素能抑制HL-60和HL-60/VCR细胞生长增殖（p〈0.05）,且随着浓度升高,增殖抑制率逐渐增高,24-72小时的细胞增殖抑制率随着时间的延长而有所增高（p〈0.05）,同时可阻滞细胞从G1期到S期的细胞周期转换。雷帕霉素抑制HL-60/VCR细胞的Pgp蛋白的表达。与柔红霉素单独应用相比,雷帕霉素50nmol/L、100nmol/L与柔红霉素联合应用使HL-60和HL-60/VCR细胞增殖抑制率明显增高（p〈0.05）,尤其是当先加雷帕霉素,而24小时后再加柔红霉素时。结论：mTOR抑制剂雷帕霉素对HL-60和多药耐药的HL-60/VCR细胞的生长均有抑制作用,除伴G0/G1期阻滞外,还增加细胞对柔红霉素的敏感性,这为临床难治性AML治疗提供新的治疗手段。     

c-myc小干扰RNA诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡

本研究探讨c-myc小干扰RNA对白血病细胞系HL-60诱导凋亡的作用。将体外合成的siRNA转染HL-60细胞,观察形态学变化,应用MTT法绘制细胞生长曲线,用细胞集落培养观察c-mycsiRNA对HL-60细胞增殖的影响;应用DNA片段化分析细胞的凋亡,RT—PCR及Western blot检测c-mycsiRNA作用前后Comyc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果表明：ComycsiRNA能明显抑制HL-60细胞增殖,半数抑制浓度（IC50）约为150nmol／L;DNA片段化的检出证实C-mycsiRNA能有效诱导HL-60细胞调亡,凋亡率与药物作用时间呈正相关。C-mycsiRNA与HL-60细胞作用后C-myc基因和蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论：C-mycsiRNA能有效抑制HL-60细胞增殖,降低C-myc基因和蛋白的表达,诱导其凋亡。     

基质细胞抑制HL-60细胞凋亡机制初探

骨髓基质细胞在造血调控方面发挥重要作用。为探讨骨髓基质细胞对骨髓白血病细胞凋亡抑制的作用机制，我们选用小鼠骨髓基质细胞系Hess-5，研究其在髓系白血病细胞HL-60抗凋亡中的作用及其抗凋亡过程中bcl—xL和bcl-2表达水平的变化。     

冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用

背景:已有研究证明,冬凌草乙素可以通过诱导许多实体肿瘤的细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用,目前,冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的作用尚未见资料报道.目的:观察冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的体外增殖抑制作用及其机制.方法:以不同浓度的冬凌草乙素(10-50 μmol/L)作用于体外培养的HL-60细胞24,48,72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹法检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)表达水平的变化,并对细胞周期调节蛋白P21、P16的表达水平进行检测.结果与结论:冬凌草乙素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系.流式细胞术检测结果表明细胞主要被阻滞在G0/G1期,50 μmol/L的冬凌草乙素作用48 h后可以出现典型的亚G1期峰(细胞凋亡峰).免疫印迹法检测结果显示Mr32 000的Caspse-3酶被活化出现Mr20 000亚单位片段,同时Caspse-3的底物PARP被裂解出现Mr89 000的亚单位片段,免疫印迹法检测结果还显示50 μmol/L的冬凌草乙素作用不同时间后,细胞周期调节蛋白P21及P16的表达水平逐渐升高.结果提示冬凌草乙素在体外对HL-60细胞具有显著的细胞周期阻滞作用,并诱导细胞发生凋亡,通过上调细胞周期调节蛋白P21及P16的表达水平及激活Caspse-3可能是冬凌草乙素引起HL-60细胞G0/G1阻滞及诱导细胞发生凋亡的重要作用机制之一.     

白血病与非白血病骨髓间充质干细胞对HL-60细胞影响的比较研究

本研究比较急性髓系白血病（AML）骨髓间充质干细胞（BMMSC）,完全缓解AMLBMMSC以及非白血病BMMSC对HL-60细胞的影响。HL-60细胞分为3组：与AMLBMMSC共培养组、与完全缓解AMLBMMSC共培养组以及与非白血病BMMSC共培养纽。在规定时间比较各组HL-60细胞计数、各纽HL-60细胞的CD11b和survivin蛋白表达、各组HL-60细胞周期分布;在光学显微镜下观察各组HL-60细胞形态并比较其分化率。结果表明：第5天和第7天各组HL-60的细胞计数无统计学差异（P值均〉0．05）;各组HL-60细胞G0／G1期细胞分布比例、survivin表达和CD11b表达无统计学差异（P值均〉0．05）;各组HL-60细胞的形态皆向成熟方向转化,分化率分别为18．0±3、17．0±1．3、19．0±2．0,比较表明无统计学差异（P=0．23）。结论：未发现各组骨髓MSC对HL-60细胞增殖分化的影响有差异。     

干扰素α-2b对HL-60细胞抑增殖与促凋亡的影响

为了研究干扰素α-2b （IFNα-2b）对HL-60细胞增殖与凋亡的影响，采用瑞氏染色观察HL-60细胞的形态变化．吖啶橙／溴化乙锭双染色观察细胞凋亡，通过CDl3测定观察细胞膜抗原表达及成熟分化，MTT实验观察增殖活性。结果显示：加入IFNα-2b 48小时后，HL-60细胞凋亡率升高，增殖活性下降，而且随着IFNα-2b浓度的升高，抑制作用更加明显。CD13表达逐渐下降，细胞形态逐渐向成熟转化。结论：IFNα-2b能促进HL-60细胞凋亡、抑制HL-60细胞增殖和促进分化成熟。     

mPGES-1抑制剂MK886对白血病HL-60细胞周期的影响

本研究探讨膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES-1)抑制剂MK886对人急性髓系白血病HL-60细胞周期的作用。采用流式细胞仪分析技术、Western blot、ELISA等方法检测不同浓度MK886(10、25、50μmol/L)对HL-60细胞周期的作用及对细胞周期调控因子周期蛋白D1、mPGES-1、PGE2、Akt、P-Akt、C-MYC蛋白的影响。结果表明:与正常人外周血单个核细胞比较,G0/G1期HL-60细胞比例减少,S期比例增多。MK886作用24 h后,被阻滞于G0/G1期的细胞增多,同时细胞mPGES-1表达下调,合成PGE2减少,P-Akt、C-MYC、周期蛋白D1蛋白表达下降。结论:MK886对白血病HL-60细胞有细胞周期阻滞作用,其机制可能与抑制mPGES-1表达,减少PGE2的合成,抑制Akt磷酸化及C-MYC表达,下调周期蛋白D1表达有关。     

鼠尾草酸联合三氧化二砷对HL-60细胞的影响

鼠尾草酸（Carnosic acid，CA）是迷迭香的天然药效成分。近年研究发现，2．5—10．0μmol／LCA显著提高1，25（OH）2D3和全反式维甲酸（ATRA）对白血病细胞HL-60和U937诱导分化能力，而CA本身诱导分化能力有限。CA增强1，25（OH）2D3诱导白血病细胞向单核系成熟分化的能力与促进1，25（OH）2D3受体的表达有关。     

塞来昔布对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制

本研究旨在探讨塞来昔布（celecoxib）对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞技术分析细胞凋亡及细胞周期分布的变化,定量RT—PCR的方法检测细胞周期蛋白DJ、EI及COX-2mRNA的表达。结果表明,不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,细胞增殖明显受抑,且呈-定的浓度依赖性（r=0．955）,24h的IC50值为63．037μmol／L。塞来昔布可诱导HL-60细胞的凋亡,也呈剂量依赖性（r=0．988）。塞来昔布可使HL-60细胞明显阻滞于G0／G1期,可下调cyclinD1、cyclinE1mRNA的表达。塞来昔布可使细胞COX-2mRNA表达水平降低。结论：塞来昔布呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖,并可能通过下调cyclinD1、cyclinE1的表达引起细胞G0／G1,期阻滞,下调COX-2的表达诱导细胞凋亡。     

沉默核干因子基因表达对HL-60白血病细胞凋亡的影响

本研究探讨靶向沉默白血病细胞的核干因子（nucleostemin,NS）基因对HL-60白血病细胞凋亡的影响。用T7启动子介导体外合成两条短发夹状干扰RNA（NS-shRNA）,以其中沉默NS基因作用强的一条NS-shRNA转染HL-60细胞,同时以与NS基因序列无关小干扰RNA转染HL-60细胞作对照,应用RT-PCR检测被转染的HL-60细胞NS-mRNA抑制效果,倒置显微镜下观察活体细胞形态变化,Wright-Giemsa染色观察细胞胞体和细胞核形态学变化,以流式细胞仪（FCM）和TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）测定凋亡细胞数并计算凋亡阳性率。结果表明：HL-60细胞被NS-shRNA转染48小时后NS-inRNA阻断率达到74．94％,凋亡率分别为（25．32±3．06）％和（27．3±3．21）％,对照组仅（3．12±0．38）％和（3．30±1．52）％,转染组与对照组比较差异显著（P〈0．01）。Wright-Giemsa染色显示细胞发生核碎裂并出现“凋亡小体”。结论：靶向沉默NS基因表达可诱发和促进HL-60白血病细胞发生凋亡,为NS基因作为恶性肿瘤治疗的候选靶基因奠定了理论基础。     

α-乳香酸对HL-60细胞株VEGF分泌及其Flt-1受体表达的影响

[目的]探索不同浓度α-乳香酸作用于白血病细胞株HL-60细胞末同时间后,细胞血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达及VEGF蛋白分泌及受体Flt-1的变化。[方法]MTT法检测乳香酸对细胞增殖的抑制作用,选择适当的药物浓度及作用时间;RT-PCR法检测α-乳香酸处理前后HL-60细胞中VEGFmRNA表达水平;流式细胞术检测α-乳香酸处理前后细胞中VEGF和受体Flt-1蛋白表达水平。[结果]α乳香酸在15．0mg／L时在体外能下调HL-60细胞VEGFmRNA的表达和VEGF蛋白的分泌并呈时间与剂量依赖性（P〈0．05）。[结论]α-乳香酸在体外可以抑制急性早幼粒细胞白血病血管新生,其作用可能与下调VEGF及Fit-1有关,具有抗白血病效应。     

姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的：探讨姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：取对数生长期人急性髓系白血病K562细胞,用MTT法测定细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法和Western blot分别检测Bax、BCL-2和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果：姜黄素10、20和40μmol/L组培养24 h和48 h细胞增殖抑制率均高于对照组（姜黄素0μmol/L）,且细胞增殖抑制率呈浓度-时间依赖性（r=0.879,r=0.914）。姜黄素10、20和40μmol/L组G0/G1细胞比例和细胞凋亡率均高于对照组,且呈药物浓度依赖性（r=0.856,r=0.782）。姜黄素10、20和40μmol/L组Bax和Caspase-3 mRNA表达高于对照组,而BCL-2 mRNA表达低于对照组,且呈药物浓度依赖性（r=0.861,r=0.748,r=-0.817）。姜黄素10、20和40μmol/L组Bax蛋白表达灰度值高于对照组,而BCL-2和Caspase-3蛋白表达灰度值低于对照组,且呈药物浓度依赖...     

慢病毒介导的CAV1过表达对HL-60细胞增殖与凋亡的影响

本研究旨在探讨慢病毒介导的CAV1过表达对HL-60细胞增殖与凋亡的影响。构建慢病毒重组表达载体pcDNA-EF1-CAV1,并与pPACK包装质粒混合物共转染至293TN细胞后,收集病毒液感染HL-60细胞,使CAV1基因在细胞中稳定转染并高表达。采用Western blot方法评价转染后HL-60 CAV1蛋白表达情况。采用CCK-8法、流式细胞术分别检测转染前后HL-60细胞的增殖活性和凋亡情况。结果表明:PCR阳性克隆筛选及核苷酸测序结果证实CAV1基因正确插入表达载体pcDNA-EF1-GFP中。重组慢病毒颗粒Lv-CAV1成功转染HL-60细胞,转染率达90%。Western blot检测结果显示,转染后48 h HL-60细胞中CAV1蛋白表达明显增高。CCK-8检测结果显示转染后48 h HL-60细胞增殖活性降低(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示转染后HL-60细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论:CAV1过表达对HL-60细胞具有抑制细胞的增殖活性、促进细胞凋亡的作用。     

脂质体转染细胞周期素A反义脱氧寡核苷酸对HL-60细胞增殖及凋亡的调控作用

目的探讨脂质体转染细胞周期素A(cyclin A)反义脱氧寡核苷酸(ASON)对HL-60细胞增殖及凋亡的影响.方法采用脂质体转染技术将cyclin A ASON与HL-60细胞共同培养,用MTT法绘制细胞生长曲线,用电镜、细胞原位凋亡检测(POD)等方法观察细胞凋亡,用流式细胞术(FACS)及RT-PCR法检测cyclin A、bcl-2表达,并通过裸鼠成瘤实验验证cyclin A在白血病发生中的作用.结果脂质体转染cyclin A ASON组和cyclin A ASON组的HL-60细胞生物抑制率分别为68.9%和24.8%(P<0.01).脂质体转染cyclin A ASON组cyclin A及bcl-2表达水平(1.1%和21.9%)较对照组(38.8%和65.0%)明显减低(P值均<0.01),并能检测出DNA断裂,观察到凋亡细胞.裸鼠实验中发现脂质体转染cyclin A ASON组与对照组相比,其成瘤率低,成瘤时间延长,同一时间成瘤的瘤体体积明显缩小.结论脂质体转染cyclin A ASON能在体外及动物体内明显抑制白血病细胞的生长,且有诱导细胞凋亡的作用,可能会成为基因治疗的一个新靶点.     

小檗碱对HL-60细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体2表达的影响

本研究旨在观察小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞的增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR2)表达的影响。选用HL-60细胞体外培养,在不同浓度的小檗碱(6-96μg/ml)作用下,应用CCK-8法检测小檗碱对HL-60细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测HL-60细胞的凋亡水平及细胞周期的分布;用RT-PCR及Western blot分别检测VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白表达的变化。结果显示,小檗碱能抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,呈浓度和时间依赖关系。随着小檗碱浓度增加,G1期细胞增多,S期细胞减少,同时VEGFR2 mRNA和VEGFR2蛋白表达减少。结论:小檗碱可抑制HL-60细胞增殖,促进细胞凋亡,改变HL-60细胞周期,下调VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白的表达。     

Embelin对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的 研究Embelin对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法 用不同浓度的Embelin处理HL-60细胞,采用MTT法绘制生长曲线,通过Annexin V/PI 复染及JC-1染色,观察Embelin对HL-60细胞凋亡的影响;通过流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD33、CD34、CD11b和CD14表达的变化.在对HL-60细胞研究的基础上,选择9例急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者的骨髓进行相应的研究.结果 Embelin对HL-60细胞具有增殖抑制作用,且作用呈时间和剂量依赖性.24 h的,IC50值为429.98 μmoL/L.33.97 μmol/L的Embelin作用HL-60细胞3 d,流式细胞术检测结果 显示CD11b、CD14阳性细胞率均升高(P值均<0.01);339.67 μmol/L Embelin作用于HL-60细胞后12、24及48 h的特异性凋亡率分别为(9.23 ±0.05)%、(25.86 ±0.30)%和(39.03±0.07)%,10.19、33.97、101.90、339.67及1019.02 μmol/L Embelin作用于HL-60细胞24 h后特异性凋亡率分别为(0.07±0.03)%、(7.43±0.30)%、(14.01±0.01)%、(25.52±0.03)%和(39.15±0.01)%,其诱导凋亡的作用呈时间及剂量依赖性.33.97 μmol/L的Embelin作用于ANLL 患者骨髓细胞3 d,3例M3患者骨髓细胞表面分化抗原出现显著性改变;339.67 μmol/L的Embelin作用患者骨髓细胞24 h,9例均发生凋亡.结论 亚细胞毒浓度的Embelin可诱导HL-60细胞向单核细胞分化;高浓度的Embelin对HL-60细胞具有增殖抑制及促进凋亡的作用.其促进凋亡的机制与线粒体凋亡途径有关.亚细胞毒浓度的Embelin对体外培养的M3患者骨髓细胞具有促进分化的作用;339.67 μmol/L的Embelin对ANLL骨髓细胞具有促进凋亡的作用.     

丙戊酸诱导白血病HL-60细胞凋亡及其对h-tert基因表达的影响

为了探讨丙戊酸（valproic acid,VPA）对白血病HL-60细胞诱导凋亡的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验（CCK-8法）观察不同浓度VPA在不同作用时间对HL-60细胞增殖的影响,采用荧光显微镜检及流式细胞术检测细胞凋亡,并观察VPA作用后HL-60细胞端粒酶亚单位h-tert基因、凋亡相关蛋白表达和caspase-3活性的变化。结果表明：VPA呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖（r=-0.87）.,诱导细胞凋亡;同时,抗凋亡蛋白BCL-2表达明显下降,促凋亡蛋白BAX表达上调,caspase-3活性增强,h-tert mRNA表达逐渐下降,HL-60细胞的凋亡率与h-tert mRNA表达呈负相关。结论：VPA可抑制白血病HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;VPA可能通过下调h-tert mRNA、BCL-2蛋白表达,上调BAX表达及增强caspase-3活性而发挥抗白血病作用。