雌激素受体β基因多态性和不明原因复发性流产的关系探讨

目的:研究雌激素受体β基因(ESR2)的多态性与不明原因复发性流产(URSA)之间的关系。方法:选择2010年8月至2015年5月我院收治的URSA女性85例作为研究组,另根据研究组受试者的年龄、体质量指数(BMI)、学历等基线资料匹配选择85例我院体检健康的有2次及以上的成功怀孕且活产的非妊娠妇女作为对照组。在月经周期的2~3天取各受试者的肘静脉血5 ml,比较两组妇女卵泡刺激素(FSH)、黄体生成激素(LH)和雌二醇(E_2)的血清水平,同时检测ESR2基因的rs1256049、rs4986938和rs1256030位点多态性,分析ESR2各基因位点多态性及其与激素水平间的关系。结果:两组妇女FSH和E2水平差异无统计学意义(P0.05)。研究组妇女LH水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。两组妇女的rs1256049、rs4986938、rs1256030位点的各基因型频率及不同位点与各基因型(野生型、杂合型、纯合型)血清FSH、E2和LH的水平间比较,差异均无统计学意义(P0.05)。对照组妇女中仅rs4986938位点与rs1256030位点多态性呈正相关(r=0.38,P=0.00),研究组妇女中仅rs1256049位点与rs4986938位点的多态性之间呈负相关(r=-0.17,P=0.02)。结论:ESR2的多态性与URSA之间无明显关系。三个位点间有一定的相关性,且在两组中是不同的,这种差异是否与URSA间存在一定的联系,还需要进一步研究。     

调节性T淋巴细胞与原因不明复发性流产的相关性研究

目的　探讨外周血中CD 4 CD 2 5调节性T淋巴细胞 (CD 4 CD 2 5Tr)在原因不明复发性流产发病中的作用。方法　用双荧光标记流式细胞分析技术 ,检测 17例原因不明复发性流产妇女 (流产组 )、2 0例正常非孕妇女 (正常非孕组 )和 2 0例正常妊娠妇女 (正常妊娠组 )外周血中CD 4 CD 2 5Tr的表达情况。结果　流产组妇女外周血中CD 4 CD 2 5Tr表达率为 (11 9± 2 7) % ,明显低于正常非孕组妇女的 (15 2± 3 0 ) % ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1)。正常妊娠组妇女外周血中CD 4 CD 2 5Tr的表达率为 (14 4± 4 8) % ,与正常非孕组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　原因不明复发性流产的发生 ,可能与患者外周血中CD 4 CD 2 5Tr数量减少有关。     

原因不明复发性流产患者蜕膜Foxp3 mRNA及蛋白质的表达

目的:探讨原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜Foxp3 mRNA及蛋白的表达。方法:分别采用免疫组化S-P法、半定量和实时定量PCR法和W estern B lot法检测25例URSA患者蜕膜组织Foxp3 mRNA及蛋白的表达与分布,并以32例正常早孕妇女为对照。结果:(1)免疫组化S-P法显示Foxp3表达于胞浆,妊娠后的蜕膜组织有Foxp3的表达;URSA患者蜕膜Foxp3的表达显著低于正常妊娠妇女(P<0.01);(2)半定量和实时定量RT-PCR法分析均显示,URSA患者蜕膜组织Foxp3 mRNA的表达显著低于正常早孕妇女(P<0.05);(3)W estern B lot法分析显示,URSA患者蜕膜组织Foxp3蛋白的表达显著低于正常早孕妇女(P<0.05)。结论:Foxp3可能在维持早期妊娠中起重要作用,其表达水平降低可能与URSA的发病有关。     

原因不明复发性流产患者调节性T淋巴细胞比例及功能的测定

目的 探讨外周血CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Tr细胞)的比例和功能在原因不明复发性流产(URSA)中的作用.方法 采用双荧光标记流式细胞分析技术检测15例URSA患者(流产组)、15例正常非妊娠妇女(正常非孕组)和13例正常妊娠妇女(正常妊娠组)外周血中CD4+CD25+Tr细胞的比例.采用磁珠分选方法从3组妇女外周血淋巴细胞中分离CD4+CD25+Tr细胞和CD4+CD25-T淋巴细胞,通过体外增殖抑制实验计算抑制率来评价CD4+CD25+Tr细胞对CD4+CD25-T淋巴细胞的抑制功能.结果 流产组妇女外周血中CD4+CD25+Tr细胞的比例为(6.9±1.8)%,明显低于正常非孕组的(10.8±1.1)%(P＜0.05)和正常妊娠组的(11.2±1.4)%(P＜0.01).流产组妇女CD4+CD25+Tr细胞的抑制率为(75±6)%,明显低于正常非孕组的(89±4)%(P＜0.05)和正常妊娠组的(90±4)%(P＜0.01).正常非孕组与正常妊娠组妇女CD4+CD25+Tr细胞的比例和抑制率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 URSA的发生可能与外周血CD4+CD25+Tr细胞的比例下降和功能降低有关.     

原因不明复发性流产患者调节性T淋巴细胞对树突状细胞的调控作用

目的 探讨原因不明复发性流产(URSA)患者外周血和蜕膜组织中CD+4CD+25调节性T淋巴细胞(Tr细胞)对树突状细胞(DC)的调控作用.方法 采集4例URSA患者(流产组)和4例正常早孕妇女(对照组)的外周血和蜕膜组织,密度梯度离心法、免疫磁珠分离法分选出Tr细胞和DC,培养6 d,培养方法分为DC单独培养和Tr细胞与Dc混合培养.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两种方法培养的细胞培养上清液中辅助性T淋巴细胞(Th)1型细胞因子--γ干扰素(IFN-γ)的Th2型细胞因子--白细胞介素10(IL-10)的蛋白含量.结果 (1)外周血:流产组细胞混合培养和单独培养后,细胞培养上清液中IFN-γ蛋白含量为(22.5±3.0)、(23.2±0.7)ng/L,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);IL-10蛋白含量分别为(35±4)、(37±7)ng/L,两者比较,差异也无统计学意义(P>0.05).对照组细胞混合培养和单独培养后,IFN-γ蛋白含量为(36±1.1)、(30.5±4.0)ns/L,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);IL-10蛋白含量分别为(36±9)、(54±20)ng/L,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).(2)蜕膜组织:流产组细胞混合培养和单独培养后,IFN-γ蛋白含量分别为(24.4±2.5)、(23.4±2.6)ng/L,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);IL-10蛋白含量分别为(25±5)、(28±7)ng/L,两者比较,差异也无统计学意义(P>0.05);对照组细胞混合培养后,IFN-γ蛋白含量为(22.6±3.8)ng/L,明显低于单独培养后的(30.7±4.6)ng/L,差异有统计学意义(P<0.01);对照组细胞混合培养后,IL-10蛋白含量为(31±9)ng/L,明显高于单独培养后的(27±6)ng/L,差异也有统计学意义(P<0.05).结论 URSA患者Tr细胞抑制性免疫功能下降,从而导致对DC调控失常,Th1/Th2平衡失调和母胎免疫耐受异常.     

Foxp3在子宫内膜、正常早孕和原因不明复发性流产患者蜕膜上的表达

目的:探讨Foxp3在增生期、分泌期内膜和正常早孕、原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜的表达。方法:用免疫组化法观察15例增生期子宫内膜, 12例分泌期子宫内膜, 32例正常早孕和25例URSA患者蜕膜组织Foxp3的表达与分布。结果:增生期子宫内膜无Foxp3表达,分泌期内膜和蜕膜组织均有表达;分泌期内膜Foxp3的表达显著低于正常早孕组(P<0 .01)和URSA组(P<0. 05);URSA患者蜕膜Foxp3的表达显著低于正常早孕组(P<0 .01);Foxp3表达于胞浆,正常早孕组和分泌期内膜主要表达在腺上皮细胞,URSA患者主要表达在间质细胞。结论:Foxp3在分泌期子宫内膜和蜕膜组织的表达可能在胚泡植入和早期妊娠的维持中起重要作用,其表达水平降低可能与URSA的发生有关。     

CD4＋T细胞在原因不明复发性流产中的研究进展

正常妊娠有赖于母体对胚胎半同种抗原的免疫耐受,一旦免疫耐受失衡,将导致免疫排斥、免疫攻击从而导致自然流产,原因不明复发性流产被认为与母胎免疫耐受失衡有关.CD4＋T在同种异体急性排斥反应中发挥重要作用,根据所分泌的细胞因子不同,CD4＋T 细胞分为Th1、Th2、调节性T细胞（Treg）及新近发现的Th17细胞.早期研究发现母体外周血、母胎界面CD4＋T细胞增高与复发性流产密切相关.随免疫耐受机制研究的不断深入,母胎免疫耐受的研究历经Th1/Th2平衡到Treg的免疫负调控作用,再到Th17/Treg平衡.综述CD4＋T细胞在原因不明复发性流产中的研究进展.     

Toll样受体2和4表达与原因不明复发性流产

母胎界面的免疫耐受对维持正常妊娠至关重要。Toll样受体2(TLR2)和TLR4是机体重要天然免疫受体分子之一,TLR2识别肽聚糖,TLR4识别内毒素脂多糖。通过信号转导机制引起核因子κB(NF-κB)等转录因子的活化并调节肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)等的产生。越来越多的证据认为,这些细胞因子与不明原因复发性流产(URSA)Th1/Th2细胞因子失衡密切相关。探讨TLR2和TLR4在胎盘中的表达,及其在URSA中的可能作用。     

白介素-12B基因多态性与原因不明复发性流产的易感性研究

目的:探讨IL-12B基因启动子区多态性与山东潍坊地区汉族育龄期妇女原因不明复发性流产(URSA)的相关性。方法:采用直接测序法检测83例原因不明复发性流产孕妇和90例正常孕妇IL-12B基因的启动子区的多态位点,并分析IL-12B基因多态性与原因不明复发性流产的关系。结果:IL-12B的启动子区检测到2个单核苷酸多态性(SNPs)(-671G/T和-405G/T)。2个SNPs紧密连锁,多态性分布符合Hardy-Weinberg平衡。URSA组和对照组的基因型和等位基因频率分布比较,差异无统计学意义(P0.05)。单体型分析显示,-671T/-405G频率在URSA组和正常对照组分别为0.65和0.41,URSA组显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:正常孕妇IL-12B基因启动子区存在多态性变异,其中-671G/T和-405G/T构成的单体型-671T/-405G可能与URSA的易感性有关。     

C型凝集素受体和Toll样受体在原因不明复发性流产患者蜕膜中的表达

目的:研究原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜中树突细胞(DC)特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素因子(DC-SIGN)和甘露糖受体(MR)及Toll样受体2(TLR-2)和TLR-4的表达情况。方法:采集URSA患者及正常妊娠人工流产妇女(对照组)的新鲜蜕膜。采用免疫组化和Western blot法检测蜕膜中DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4蛋白表达,RT-PCR检测蜕膜中DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4 mRNA表达;流式细胞检测蜕膜中DC表面表达DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的水平。结果:与对照组比较,URSA组蜕膜中及DC表面的TLR-2和TLR-4表达水平明显升高(P0.05,P0.01),DCSIGN表达水平明显降低(P0.01)。两组的MR表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:相对于正常妊娠妇女,URSA患者蜕膜中及树突细胞表面的C型凝集素受体(CLRs)弱势表达,而TLRs优势表达。CLRs与TLRs之间的免疫平衡失调可能是URSA发病机制中的重要因素之一。     

原因不明复发性流产主动免疫治疗前后CD4+ CD25+调节性T细胞表达频率的研究

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tr）在原因不明复发性流产（URSA）患者主动免疫治疗中的作用。方法上海交通大学医学院附属仁济医院对2004-03—2005-05就诊于门诊的18例URSA患者，采用双荧光标记流式细胞分析技术，检测其淋巴细胞主动免疫治疗前后外周血CD4^＋CD25^＋Tr细胞表达频率的变化。结果主动免疫治疗后URSA组外周血中CD4^＋CD25^＋种Tr较治疗前明显增加（P〈0．05），CD4^＋CD25^＋较治疗前降低（P〈0．05）。主动免疫治疗后，妊娠成功的妇女CD4^＋CD25^brightTr显著多于妊娠失败者。结论主动免疫治疗可提高外周血CD4^＋CD25^brightTr数量，CD4^＋CD25^brightTr可能是调控母胎界面局部免疫耐受形成的一个重要因素，有可能成为URSA患者主动免疫治疗的监测指标之一。     

Foxp3基因多态性与原因不明复发性自然流产易感性的关系

目的 探讨转录因子Foxp3基因多态性与原因不明复发性自然流产(URSA)易感性的关系.方法 分别采用PCR-限制性片段长度多态性技术(针对Foxp3基因的rs3761548、rs2294021位点)和PCR-等位基因特异性扩增技术(针对rs2232365、rs5902434位点),检测146例URSA患者(URSA组...     

胸腺基质淋巴细胞生成素与原因不明复发性流产的相关性研究进展

复发性流产(RSA)发病率占育龄夫妻总数的1％～2％,临床上近50％ RSA为原因不明性复发性流产(URSA),是目前临床上的难治性疾病.胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)调控免疫活性细胞相互作用和相互协调,诱导妊娠免疫耐受,在URSA的发病机制中发挥重要作用.本文就TSLP与URSA的相关性研究进展作一综述.     

TCR γδ T淋巴细胞和母胎免疫调节的关系

妊娠是一复杂的生理过程,妊娠早期母胎界面的免疫反应状态决定妊娠结局.TCRγδT淋巴细胞具有识别绒毛滋养细胞表达的人类白细胞抗原G和E,并通过某种机制调节Th1/Th2型细胞因子的平衡偏移及免疫效应细胞活性等作用,而这些因素是参与母胎界面免疫反应的关键环节,认为TCRγδT淋巴细胞在妊娠早期的母胎免疫调节中发挥重要作用.     

原因不明复发性流产患者细胞毒性T淋巴细胞抗原4基因第一外显子49位点A/G基因多态性研究

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞抗原4（CTLA-4）基因第一外显子49位点A／G基因多态性与原因不明复发性流产（URSA）发病的相关性。方法采用PCR限制性片断长度多态性方法（PCR-RFLP）,检测168例URSA患者（URSA组）和117例有正常生育史的妇女（对照组）CTLA-4基因第一外显子49位点A／G多态性,并比较等位基因G／A、基因型AA／AG／GG、表型A＋（AA＋AG）／G＋（GG＋AG）分布频率的差异。结果URSA组等位基因G的出现频率为68．4％（230／336）,对照组为59．4％（139／234）,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;基因型GG的出现频率URSA组为48．8％（82／168）,对照组为33．3％（39／117）,两组比较,差异也有统计学意义（P〈0．05）;URSA组基因型AG、基因表型A＋（AA＋AG）的频率分别为39．3％（66／168）、51．2％（86／168）,对照组分别为52．1％（61／117）、66．7％（78／117）,两组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论CTLA-4基因第一外显子49位点A／G多态性与URSA的发生存在相关性,并可能参与流产发生的免疫病理过程。     

原因不明复发性流产患者与正常早孕妇女蜕膜活化和抑制分子的比较

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)患者和正常妊娠妇女蜕膜活化和抑制分子的变化。方法2003年3月至2005年2月采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上海仁济医院25例URSA患者与32例正常妊娠妇女蜕膜组织CTLA-4、GITR、CD69、CD40L、OX40 mRNA的表达。结果URSA患者蜕膜组织CD69、CD40L、OX40 mRNA的表达较正常妊娠患者显著升高,CTLA-4、GITR mRNA的表达显著降低。结论UR-SA患者蜕膜局部的免疫环境失调,活化分子表达增强、抑制因子表达下调,可能影响了CD4 CD25 调节性T细胞的分化,导致母胎耐受形成障碍,介导了URSA的发生。     

原因不明复发性流产患者淋巴细胞主动免疫治疗前后细胞亚群的变化

目的探讨淋巴细胞主动免疫治疗对原因不明复发性流产的疗效及在主动免疫治疗前后患者微量淋巴细胞毒实验淋巴细胞亚群的变化。方法应用荧光染色法和流式细胞术,分别对2009年4月至2010年12月在安徽医科大学第一附属医院行主动免疫治疗的48例原因不明复发性流产患者治疗前后的淋巴细胞坏死率和CD3、CD4、CD8及CD16+CD56+NK细胞的比率进行测定;同时随访其预后。结果 43例成功妊娠至孕12周之后,5例患者在孕12周前流产,主动免疫治疗成功率89.6%(43/48)。治疗后患者淋巴细胞坏死率上升,CD3、CD4和CD16+CD56+NK亚群比率下降,CD8亚群比率上升,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论淋巴细胞主动免疫治疗对原因不明复发性流产治疗效果满意,CD8亚群的升高可能有利于妊娠。     

原因不明性习惯性流产患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

采用流式细胞仪对２０例原因不明性习惯性流产（ＵＨＡ组）患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群进行检测，同时观察Ｔ淋巴细胞亚群在主动免疫治疗前后的变化，并以２０例正常非妊娠妇女（ＮＮＰ组）、１０例正常妊娠期妇女（ＮＰ组）作为对照。结果：ＵＨＡ组主动免疫治疗前分化群（ｃｌｕｓｔｅｒｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎＣＤ）ＣＤ＿３细胞百分率与ＮＮＰ组相比，差异无显著性；ＣＤ＿８细胞的百分率明显低于ＮＮＰ组（Ｐ＜０．００１），而ＣＤ＿４／ＣＤ＿８比率则明显高于ＮＮＰ组（Ｐ＜０．０５）；主动免疫治疗后，ＣＤ＿８细胞的百分率较治疗前明显上升，ＣＤ＿４／ＣＤ＿８比率有明显下降（Ｐ＜０．０５），而且治疗后ＵＨＡ组妊娠时ＣＤ，细胞的百分比和ＣＤ＿４／ＣＤ＿８比率均与ＮＰ组接近。提示：原因不明性习惯性流产的免疫发病机理可能与ＣＤ＿８细胞数量的下降、ＣＤ＿４／ＣＤ＿８比率的上升有关；主动免疫疗法可以诱导ＣＤ＿８细胞增殖；ＣＤ＿４／ＣＤ＿８比率可作为主动免疫治疗临床疗效的监测指标。     

HLA-G 14bp基因多态性及HLA-G mRNA表达水平与原因不明复发性流产的关系

目的:探讨人类白细胞抗原G 14bp(HLA-G 14bp)基因缺失或插入多态性与原因不明复发性流产(URSA)的相关性,了解HLA-G mRNA在URSA患者中的表达水平和意义。方法:选择URSA患者39例(URSA组)和有1次以上正常分娩史并行人工流产的妇女52例(正常对照组)为研究对象,采用聚合酶链反应(PCR)检测14bp基因多态性和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组人群绒毛组织中HLA-G mRNA的相对表达量,并进行分析。结果:URSA组14bp基因杂合子(-14bp/+14bp)的基因频率(64.1%)明显高于正常对照组(42.3%)(χ2=6.511,P=0.039);而插入纯合子(+14bp/+14bp)的基因频率(7.7%)低于正常对照组(26.9%)(χ2=5.425,P=0.020);缺失纯合子(-14bp/-14bp)的基因频率(28.2%)与正常对照组(30.8%)比较,差异无统计学意义(χ2=0.070,P=0.791)。URSA组HLA-G mRNA表达水平(-3.018±1.005)明显低于正常对照组(-1.072±0.436)(t=9.681,P=0.000)。结...     

绒毛滋养细胞HLA-C基因多态性与不明原因早期复发性流产的关系

目的:探讨绒毛滋养细胞HLA-C基因与不明原因早期复发性流产(URSA)的关系.方法:留取早期URSA患者33例(早期URSA组)及正常早孕妇女29例(对照组)的绒毛组织,提取基因组DNA,DNA测序法分析绒毛滋养细胞HLA-C1、HLA-C2基因,Fisher精确概率法计算两组间差异.结果:①两组的HLA-C1、HLA-C2基因在绒毛组织中呈不平衡表达,均以HLA-C1基因占明显优势.早期URSA组HLA-C1基因频率(66.67%)与对照组(81.03%)比较,差异无统计学意义(P=0.657);早期URSA组HLA-C2基因频率(33.33%)高于对照组(19.07%)(P=0.007).②在早期URSA组中HLA-C1/C2基因型(66.67%)占明显优势;对照组中HLA-C1/C1基因型占明显优势(65.52%);早期URSA组的HLA-C1/C1和HLA-C1/C2基因型频率与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.039;P=0.001).结论:早期URSA患者HLA-C1/C1基因型频率降低、HLA-C1/C2基因型增加,导致单倍型HLA-C1频率降低,HLA-C2基因频率升高,HLA-C1、HLA-C2失衡可能与早期URSA的发病相关.