TDO2基因对鼻咽癌细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响及其机制

目的 探讨色氨酸-2,3-双加氧酶2(tryptophan-2,3-dioxygenase2,TDO2)对鼻咽癌细胞系CNE-2Z和HNE-1细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法 通过TIMER2数据库分析TDO2基因在不同癌症或特定癌症亚型中的表达状态。培养人正常鼻咽黏膜上皮细胞系NP69、鼻咽癌细胞系5-8F、CNE-2Z和HNE-1。实验中对CNE2Z和HNE-1细胞分别转染TDO2干扰序列和阴性对照序列，分别命名为si-TDO2组和NC组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测TDO2的mRNA相对表达水平；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率，细胞集落克隆实验检测集落数量；Transwell法和细胞划痕实验检测细胞迁移能力；蛋白质印迹实验(Western blot)检测鼻咽癌细胞中上皮间充质化(EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin及Vimentin及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2相对表达量。结果 与正常鼻咽黏膜上皮细胞NP69相比，在CNE-2Z和HNE-1细胞中TDO2的mRNA相对表达量明显上调(P<0.001)。与NC组...     

miRNA-143对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miRNA-143对鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响.方法 利用荧光定量PCR检测人永生化鼻咽上皮细胞(NP69)、高分化鼻咽癌细胞(CNE-1)、低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平.利用感染慢病毒的方式建立稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞,并用荧光定量PCR法进行检测.通过CCK-8法检测过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞增殖的影响,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞迁移和侵袭的影响.结果 低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平显著低于CNE-1和NP69细胞(P<0.01).稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞(CNE-2Z/miR-143)中miRNA-143的表达水平显著高于CNE-2Z细胞(P<0.01)和慢病毒对照组细胞(CNE-2Z/miR-NC)(P<0.01).细胞增殖能力检测显示,与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比,CNE-2Z/miR-143组在72 h和96 h时细胞活力显著降低(P<0.05,P<0.01).Transwell迁移和侵袭试验结果显示,CNE-2Z/miR-143组与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01).结论 miR-143能够抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖、迁移和侵袭能力,提示其可能对鼻咽癌的诊断、治疗及预后评价有重要意义.     

长链非编码RNA MIAT通过miR-124促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探究长链非编码RNA MIAT是否通过miR-124调节鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭。方法：采用荧光定量PCR检测鼻咽癌细胞中MIAT水平,通过检测荧光素酶活性评估MIAT和miR-124之间的相互作用。随后将si-MIAT与miR-124 inhibitor分别或同时转染鼻咽癌细胞,检测其对鼻咽癌细胞生长、迁移与侵袭的影响。采用Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达情况。结果：与正常鼻咽上皮细胞NP-69相比,鼻咽癌细胞HONE-1中MIAT的表达水平显著提高。在线软件与双荧光素酶活性实验分析证实MIAT与miR-124之间存在相互作用。进一步实验表明,si-MIAT可上调miR-124水平,从而抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭。Western blot分析显示si-MIAT通过miR-124抑制Wnt/β-catenin信号通路在鼻咽癌细胞中发挥促癌作用。结论：MIAT通过miR-124调节Wnt/β-catenin信号通路进而影响鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭。MIAT靶向调控miR-124,可作为鼻咽癌诊断与治疗的一个潜在靶点。     

circRNA-ITCH通过TET1基因抑制Wnt/β-catenin 信号通路对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察环状RNA(circRNA)-ITCH在鼻咽癌组织和细胞系中的表达,探讨circRNA-ITCH对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法 qPCR分别检测circRNA-ITCH在49例鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达。选取circRNA-ITCH表达最低的细胞系,分别转染阴性质粒或过表达circRNA-ITCH的质粒,定义为对照组和实验组。CCK-8法和Transwell侵袭实验分别检测过表达circRNA-ITCH对细胞增殖和侵袭能力的影响。qPCR和Western blot法分别检测过表达circRNA-ITCH对10-11转位酶1(ten-eleven translocation1,TET1)基因和Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。结果 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01)。circRNA-ITCH在鼻咽癌细胞系中表达水平明显低于人永生化鼻咽上皮细胞(P<0.05),在CNE-2Z细胞中的表达水平最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),细胞侵袭能力明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞中TET1在mRNA和蛋白水平的表达明显增加(P<0.01),Wnt1、PLC、PKC和β-catenin蛋白表达明显降低,Wnt/β-catenin信号通路被抑制。结论 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织及细胞系中表达降低,过表达circRNA-ITCH可明显抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖和侵袭能力,其分子机制可能是促进TET1基因的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路。     

干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体4基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨干扰性小核糖核酸(siRNA)靶向抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体4(CXCR4)基因表达对癌细胞增殖、侵袭的影响及机制。方法收集新乡医学院第一附属医院2014年1月至2016年12月保存的鼻咽癌及相应的癌旁组织标本各42例,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4 mRNA及蛋白表达。将人鼻咽癌细胞系CNE-2Z分为空白对照组(细胞未做任何处理)、阴性对照组(细胞转染无义siRNA序列)和CXCR4转染组(细胞转染CXCR4的靶向siRNA序列),转染48 h后采用Western blot法检测各组细胞中CXCR4、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;应用细胞计数试剂盒和Transwell小室分别检测细胞的增殖和侵袭能力。结果鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4 mRNA表达分别为5.526±0.143、0.953±0.091,蛋白表达分别为0.522±0.047、0.053±0.011,鼻咽癌组织中CXCR4 mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.05)。CXCR4转染组细胞中CXCR4、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达及细胞存活率、细胞侵袭数均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),但空白对照组和阴性对照组细胞中CXCR4、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达及细胞存活率、细胞侵袭数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞中CXCR4基因表达可显著降低肿瘤细胞的增殖与侵袭能力,其机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

长链非编码RNA JPX对鼻咽癌增殖和侵袭的影响及机制研究

目的 探讨长链非编码RNA JPX(lncRNA JPX)在鼻咽癌细胞系中的表达及对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其机制.方法 采用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测人鼻咽上皮细胞系NP69及鼻咽癌细胞系(6-10B、5-8F、C666-1、CNE-1、CNE-2、HNE-1、HONE-1)中lncRNA JP...     

miR-34a通过靶向FOXM1对鼻咽癌细胞增殖和上皮间质转化的影响

  目的  研究miR-34a通过靶向FOXM1对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并从上皮间质转化方向研究侵袭和迁移的机制。  方法  体外培养人鼻咽癌细胞HNE-1、CNE-2Z,每株细胞分3组,即空白对照组(control组)、阴性对照组(miR-34a nc组)和过表达miR-34a组(miR-34a mimics组)。荧光定量PCR检测转染后各组细胞miR-34a表达水平。生物信息软件预测miR-34a和FOXM1的靶向关系,荧光定量PCR和Western blotting分析靶向关系。上调miR-34a后,CCK-8法测细胞增殖能力,Transwell、实验测细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法测上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、Vimentin相对表达水平。  结果  生物信息软件预测miR-34a和FOXM1可能存在靶向关系。在HNE-1、CNE-2Z细胞中,与control组和miR-34a nc组比较,miR-34a mimics组FOXM1的表达下调(HNE-1:0.570±0.041、1.127±0.129、1.125±0.145,F=23.672, P=0.001;CNE-2Z:0.689±0.114、1.966±0.164、1.924±0.087,F=99.599, P＜0.001),增殖、迁移和侵袭能力被显著抑制(P < 0.01),E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调(P < 0.01)。Control组和miR-34a nc组差异无统计学意义(P>0.05)。  结论  miR-34q通过靶向FOXM1抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制与抑制上皮间质转化有关。      

Wnt/β-catenin通路在鼻咽癌分化中的作用

[目的]探讨Wnt/β-catenin通路的枢纽分子β-catenin和β-catenin/Tcf复合体在不同分化程度鼻咽癌中的表达,进而阐明Wnt/β-catenin通路对鼻咽癌分化的作用.[方法]采用免疫组化方法检测13例鼻咽粘膜慢性炎症和74例不同分化类型的鼻咽癌组织中β-catenin的表达;转染野生型和突变型Tcf荧光素酶报告质粒,检测β-catenin/Tcf复合体在高低分化鼻咽癌细胞株中的含量.[结果]β-catenin在鼻咽癌中的异常表达主要出现在细胞浆内过表达.在角化性鳞癌、分化型非角化性癌中β-catenin胞浆内的过表达相对少,而在未分化癌中胞浆内累积明显增多.未分化癌与角化性癌、未分化癌与分化型非角化性癌相比较,β-catenin的表达有统计学差异,P值分别为0.0195和0.0003.通过检测转染后荧光素酶活性发现β-catenin/Tcf复合体在低分化鼻咽癌细胞株(CNE-2和HONE-1)中的表达是高分化鼻咽癌细胞株(CNE-1)的80～123.6倍.[结论]低分化鼻咽癌细胞比高分化鼻咽癌细胞有更高水平的胞浆内β-catenin和核内β-catenin/Tcf的表达,说明前者的Wnt/β-catenin通路比后者明显地处于更高的活化状态中,提示Wnt/β-catenin通路可能在抑制鼻咽癌细胞的分化中起重要作用.     

Wnt／β-catenin通路在鼻咽癌分化中的作用

【目的】探讨Wnt/β-catenin通路的枢纽分子β-catenin和β-catenin/Tcf复合体在不同分化程度鼻咽癌中的表达，进而阐明Wnt/β-catenin通路对鼻咽癌分化的作用。【方法】采用免疫组化方法检测13例鼻咽粘膜慢性炎症和74例不同分化类型的鼻咽癌组织中β-catenin的表达：转染野生型和突变型Tcf荧光素酶报告质粒，检测β-catenin/Tcf复合体在高低分化鼻咽癌细胞株中的含量。【结果】β-catenin在鼻咽癌中的异常表达主要出现在细胞浆内过表达。在角化性鳞癌、分化型非角化性癌中β-catenin胞浆内的过表达相对少．而在未分化癌中胞浆内累积明显增多。未分化癌与角化性癌、未分化癌与分化型非角化性癌相比较．β-catenin的表达有统计学差异，P值分别为0．0195和0．0003。通过检测转染后荧光素酶活性发现β-catenin／Tcf复合体在低分化鼻咽癌细胞株(CNE-2和HONE-1)中的表达是高分化鼻咽癌细胞株(CNE-1)的80—123．6倍。【结论】低分化鼻咽癌细胞比高分化鼻咽癌细胞有更高水平的胞浆内β-catenin和核内β-catenin/Tcf的表达，说明前者的Wnt/β-catenin通路比后者明显地处于更高的活化状态中，提示Wnt/β-catenin通路可能在抑制鼻咽癌细胞的分化中起重要作用。     

MiR-3200-3p调控Wnt/β-catenin通路影响肝癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-3200-3p对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法 采用RT-qPCR方法检测miR-3200-3p在正常肝细胞系HL-7702与肝癌细胞系Bel-7402中的表达;构建miR-3200-3p的慢病毒低表达载体,转染Bel-7402细胞,倒置荧光显微镜及RT-qPCR检测敲低效果;根据转染病毒质粒的不同将Bel-7402细胞分为2组：LV-control组及LV-inhibitor组。Transwell迁移和侵袭实验检测2组细胞的迁移和侵袭能力;Western blot法检测2组细胞中β-catenin、MMP2、E-cadherin蛋白的表达水平。结果 与HL-7702细胞比较,Bel-7402细胞中miR-3200-3p的相对表达量显著升高(P<0.001);成功建立miR-3200-3p低表达的Bel-7402稳转细胞系;与LV-control组比较,LV-inhibitor组肝癌细胞迁移和侵袭能力均明显受到抑制(均P<0.001),β-catenin(总、胞核和胞质)和MMP2蛋白表达均显著下调,E-cadherin的表达明显上调(均P<0.05)。结论 miR-3200-3p在肝癌细胞中发挥促癌作用,敲低其表达可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能是通过影响Wnt/β-catenin通路的活化而下调MMP2表达,上调E-cadherin而实现的。     

长非编码MALAT1基因在人鼻咽癌细胞株的表达及生物学意义

目的探讨MALAT1在鼻咽癌细胞细胞株中的表达及生物学功能。方法通过Real-time PCR检测MALAT1基因在鼻炎
癌细胞株5-8F、C666-1、CNE-1、CNE-2、HONE-1、6-10B及永生化鼻咽上皮细胞NP69株中的表达;采用RNAi技术和RNA激活
技术,构建MALAT1慢病毒干扰载体和激活载体载体并稳定转染鼻咽癌细胞株CNE-1,采用CCK8、平板克隆、划痕等试验分析
MALAT1基因对CNE-1细胞生物学行为的影响。结果MALAT1在高转移的鼻咽癌细胞株中高表达,在正常鼻咽上皮细胞低
表达;经激活过表达MALAT1 后,CNE-1 细胞的上皮性标志物E-Cadherin 的表达显著下调,间质细胞标志物Vimentin 表达上
调,侵袭转移能力明显增强（P<0.05）。结论MALAT1基因上调能够促进鼻咽癌CNE-1细胞的增殖、侵袭和转移能力。
     

slfn5基因在卵巢癌上皮-间质转化中的作用及机制

目的 探讨slfn5基因在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 收集杭州市第一人民医院确诊的卵巢癌患者手术切除标本,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测卵巢癌组织中slfn5 mRNA的相对表达量。采用Western blot法检测并比较卵巢癌细胞系A2780、SKOV3、OVCAR3、HO8910中SLFN5蛋白的相对表达量;选取表达高的SKOV3、OVCAR3细胞株转染沉默slfn5基因,分为si-NC组,si-slfn5^#1组、si-slfn5^#2组。Transwell和细胞划痕实验比较各组细胞侵袭、迁移能力。Western blot法考察各组细胞SLFN5及E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和Snail等EMT相关蛋白和Wnt/β-链环蛋白(β-catenin)信号通路关键蛋白β-catenin的相对表达量。结果 相比正常组织,卵巢癌组织slfn5 mRNA相对表达量明显增高,差异有统计学意义(P<...     

长链非编码RNA-UFC1通过GSK-3β/β-catenin信号轴促进肝癌细胞的侵袭和转移

目的探讨长链非编码RNA-UFC1在肝癌侵袭和转移中的作用及机制。方法应用lincRNA-UFC1慢病毒载体转染人肝 癌细胞株Huh7 构建lincRNA-UFC1 过表达组和对照组;应用lincRNA-UFC1 干扰载体转染人肝癌细胞株BEL-7402 构建 lincRNA-UFC1 干扰组和干扰对照组（scramble）,通过实时定量PCR实验分析两种肝癌细胞中lincRNA-UFC1 的表达水平。 Transwell 及划痕实验检测lincRNA-UFC1 过表达组及干扰组相比对照组侵袭迁移能力的变化。Western blot 检测lincRNAUFC1 过表达组及干扰组相比对照组中GSK-3β/β-catenin蛋白的表达变化。利用GSK-3β/β-Catenin信号通路抑制剂XAV939阻 断后,观察Transwell 及划痕实验中lincRNA-UFC1 过表达对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响。结果在肝细胞癌中,过表达 lincRNA-UFC1 相较于对照组,肝癌细胞的侵袭转移能力明显增加（P<0.001）,而沉默lincRNA-UFC1 的表达相较于scramble 组,肝癌细胞侵袭转移能力明显减弱（P<0.001）。Western blot结果显示,过表达lincRNA-UFC1与对照组相比较,侵袭转移相关 蛋白β-catenin和p-GSK-3β表达明显上调（P<0.001）,而lincRNA-UFC1沉默表达后,结果相反。利用GSK-3β/β-Catenin信号通 路抑制剂XAV939 处理肝癌细胞可以逆转lincRNA-UFC1 促进肝癌细胞侵袭转移的功能（P<0.001）。结论在肝细胞癌中 lincRNA-UFC1通过上调磷酸化GSK-3β及β-catenin促进肝癌细胞侵袭转移。     

β-catenin/Tcf复合体、cyclinD1、c-myc在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨Wnt/β-catenin通路中β-catenin/Tcf复合体和下游主要靶基因cyclinD1、c-myc在不同分化程度鼻咽癌中的表达,进而阐明Wnt/β-catenin通路在鼻咽癌分化中的作用。方法转染野生型和突变型Tcf荧光素酶报告质粒,检测β-catenin/Tcf复合体在高低分化鼻咽癌细胞株中的含量;采用免疫组化方法检测79例不同分化类型的鼻咽癌组织中cyclinD1、c-myc的表达。结果通过检测转染后荧光素酶活性发现β-catenin/Tcf复合体在低分化鼻咽癌细胞株（CNE-2和HONE-1）中的表达是高分化鼻咽癌细胞株（CNE-1）的80.12-123.6倍。在角化性鳞癌与分化型非角化癌、分化型非角化癌与未分化型非角化癌中,cyclinDl表达有统计学差异（均P〈0.05）。c-myc的表达在未分化型非角化癌和分化型非角化癌之间比较,同样有统计学差异（P〈0.01）。结论低分化鼻咽癌细胞比高分化鼻咽癌细胞有更高水平的核内β-catenin/Tcf复合体c、yclinD1和c-myc的表达,说明前者的Wnt/β-catenin通路比后者明显地处于更高的活化状态中,提示Wnt/β-catenin通路可能在抑制鼻咽癌细胞的分化中起重要作用。     

CSF-1R在鼻咽癌细胞株中的表达情况及对细胞增殖、凋亡、侵袭转移能力的影响

目的 研究集落刺激因子1 受体(colony-stimulating factor 1 receptor,CSF-1R)在鼻咽癌中的表达,并对其功能进行初步探讨。方法 培养5-8F、6-10B、CNE-2、NP69细胞株,用实时荧光定量PCR 和Western blot法检测4种细胞株中CSF-1R的表达情况,通过比较5-8F、6-10B、CNE-2 鼻咽癌细胞株与NP69 正常鼻咽上皮细胞株中CSF-1R 的表达,筛选出CSF-1R 高表达细胞株和低表达细胞株;通过实时荧光定量PCR 检测两种细胞株的增殖因子Cyclin D1、凋亡因子Bcl-2和Bax、侵袭转移因子MMP-2 的mRNA 表达情况,分析CSF-1R 的表达与鼻咽癌预后的关系。结果 5-8F 鼻咽癌细胞株中CSF-1R 呈现高表达水平(P=0.000),6-10B 鼻咽癌细胞株中CSF-1R 呈现低表达水平(P=0.000、P=0.370),CNE-2鼻咽癌细胞株中CSF-1R 的表达与正常鼻咽上皮细胞株差异无统计学意义(P=0.057、P=0.481)。CSF-1R 高表达细胞株5-8F 的增殖、侵袭转移能力明显强于CSF-1R 低表达细胞株6-10B(P均=0.000),而凋亡能力则弱于6-10B细胞株(P=0.000)。结论 鼻咽癌细胞与正常鼻上皮细胞株之间CSF-1R的表达差异有统计学意义。CSF-1R 的表达与细胞增殖因子Cyclin D1、凋亡因子Bcl-2 及BAX、侵袭转移因子MMP-2 的表达有一定的相关性,CSF-1R 表达水平越高,细胞的增殖、侵袭转移能力越强,凋亡能力越弱。     

卷曲蛋白8在胃癌BGC823细胞中的表达及其对胃癌细胞迁移、侵袭的影响

目的:探讨卷曲蛋白8(FZD8)在胃癌BGC823细胞中的表达及其对胃癌细胞迁移、侵袭的影响.方法:利用实时荧光定量PCR和Western blot检测FZD8在胃癌细胞BGC823和胃黏膜上皮细胞GES1中的表达.利用慢病毒介导的shRNA转染BGC823细胞,建立稳定的敲减FZD8基因的BGC823细胞株(shFZ...     

GNA12通过激活ERK信号通路促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭迁移

目的 探讨鸟嘌呤核苷酸结合蛋白α亚基12(G protein subunit α 12,GNA12)对鼻咽癌细胞生物学行为的影响。方法 利用GEPIA2、Human Protein Altas数据库预测GNA12在头颈部肿瘤中的表达情况,利用Keplan-Meier plotter数据库分析GNA12表达与头颈部肿瘤预后的关系。采用qRT-PCR实验检测正常鼻咽黏膜上皮细胞系(NP69)和鼻咽癌细胞系(CNE-2、5-8F、HK-1)中GNA12的表达水平。用携带si-GNA12和NC的干扰序列分别转染鼻咽癌细胞CNE-2和5-8F细胞系,构建敲低的细胞株(si-GNA12组)和对照细胞株(NC组)。采用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力,CCK-8和集落克隆实验检测细胞的增殖能力。采用Western blot实验检测上皮-间质转化中N-cadherin、E-cadherin、Snail以及Vimentin蛋白和ERK信号通路中ERK及p-ERK蛋白表达情况。结果 数据库结果显示,头颈部肿瘤组织中GNA12表达高于正常头颈部组织(P<0.05)。GNA12表达越高,...     

miR-513a-3p在结肠癌中高表达并诱导细胞生长和迁移的机制研究

目的 观察miR-513a-3p在结肠癌组织与癌旁正常组织的表达差异,探讨miR-513a-3p诱导结肠癌(CRC)细胞生长和迁移的机制.方法 收集CRC患者30例作为研究对象,原位杂交和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测CRC组织与癌旁组织miR-513a-3p的表达水平.取人CRC细胞株HT-29和SW480培养后,转染miR-513a-3p类似物作为促进表达组,设置阴性对照组,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法实验两组细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭情况,细胞划痕实验检验细胞迁移能力,Western blot法检测NF-κB和Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平.结果 原位杂交检测结果显示,CRC组织miR-513a-3p阳性表达高于癌旁组织.qRT-PCR检测结果显示,CRC组织和癌旁组织miR-513a-3p 相对表达量分别为(0.37±0.09)和(1.01±0.16),差异有统计学意义(P＜0.01).与阴性对照组比较,促进表达组细胞活力在3、4 d中均升高(P＜0.01),促进表达组的HT-29和SW480细胞侵袭细胞比例升高(P＜0.01),促进表达组HT-29和SW480的细胞迁移能力增强.Western blot结果显示,与阴性对照组比较,促进表达组的HT-29细胞和SW480细胞 p-p65、p-IκBα、Wnt3a、Wnt5a 和 β-catenin 蛋白相对表达量均升高(P＜0.01).结论 CRC组织miR-513a-3p表达异常升高,过表达的miR-513a-3p促进CRC细胞生长、迁移和侵袭作用,其作用机制可能与NF-κB通路和Wnt/β-catenin通路激活有关.     

miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路促进非小细胞肺癌特性肿瘤干细胞及上皮间质转化

目的 研究miR-183在非小细胞肺癌中的表达情况及影响非小细胞肺癌的作用机制。方法 收集10例新鲜非小细胞肺癌及癌旁正常组织，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组miR-183表达差异。同时，qRT-PCR检测miR-183在非小细胞肺癌细胞系中的表达情况。通过转染技术，抑制miR-183表达。通过Transwell小室实验检测对非小细胞肺癌细胞侵袭、迁移的影响。通过Western Blot探索miR-183对非小细胞肺癌的作用机制。结果 miR-183在非小细胞肺癌组织及癌细胞系中相比于正常组织或上皮细胞表达水平显著上升。Transwell小室实验结果显示，抑制miR-183表达后，非小细胞肺癌细胞侵袭、迁移能力受到抑制。Western Blot实验结果显示，在抑制miR-183表达后，上皮间质转化标志物蛋白N-cadherin、Vimentin、肿瘤干细胞标志物CD133、CD44表达显著下降。对Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白检测，发现下调miR-183表达后，WNT1、p-β-catenin蛋白水平明显下降。结论 miR-183在非小细胞肺癌中高表达，并且可...