应用RNA干扰下调多药耐药蛋白4表达对结直肠癌细胞照射敏感性的影响

目的探讨多药耐药蛋白4（MRP4）表达对结直肠癌细胞照射敏感性的影响。方法应用慢病毒感染RNA干扰技术（RNAi）稳定下调人结直肠癌细胞株HCT116中MRP4的表达。将HCT116细胞分为未感染任何病毒的细胞株（CON）、加阴性对照病毒感染的细胞株（NC）和加RNAi靶点病毒感染的细胞株（KD）3组,应用实时定量RT-PCR和Western blot分别从RNA和蛋白水平检测MRP4表达变化,以验证RNAi的有效性。4Gy剂量照射后24h,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT检测细胞增殖,比较RNAi后HCT116细胞株照射敏感性的差异。结果成功构建并转染慢病毒质粒,获得稳定沉默MRP4表达的HCT116-KD细胞株,HCT116-KD细胞株MRP4mRNA和蛋白表达水平较对照均明显下调（P〈0．05）。照射后24h,KD细胞株凋亡率为（71．7±0．8）％,明显高于CON组[（56．1±0．9）％]和NC组[（59．8±0．8）％]（P〈0．05）。照射后48h和72h,KD细胞增殖能力较对照组明显下降（火0．05）。结论MRP4在结直肠癌细胞中的表达水平与照射耐受显著相关,应用慢病毒感染RNA干扰下调MRP4表达可以增强结直肠癌细胞照射敏感性。MRP4有可能成为预测放疗敏感性的分子标志物。     

RNA干扰沉默EZH2基因增强人肝癌多药耐药Bel/Fu细胞对氟尿嘧啶的敏感性

目的 研究沉默人肝癌多药耐药Bel/Fu细胞的EZH2基因表达是否影响癌细胞对氟尿嘧啶( fluorouracil,5-Fu)的敏感性.方法 体外培养肝癌多药耐药Bel/Fu细胞;EZH2 siRNA干扰沉默EZH2基因表达;RT-PCR和Western blot检测干扰后EZH2 mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测细胞生长抑制率;Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率;流式细胞仪分析细胞周期;Western blot检测多药耐药相关蛋白MDR1的表达水平.实验设对照组、5-Fu处理组、EZH2 siRNA处理组、5-Fu和EZH2 siRNA联合处理组.结果 EZH2 siRNA干扰24h后,EZH2 mRNA和蛋白的表达水平明显降低.在联合处理组中,MTF法检测其细胞凋亡抑制率为43.17％±3.81％,明显高于其他3组;流式检测联合处理组细胞凋亡率,其细胞凋亡值为30.4％±1.77％,明显高于其他3组.流式检测联合处理组细胞周期,发现联合组G1期细胞的百分比为69.16％±2.31％,明显高于其他3组,S+G2 +M期细胞的百分比为30.76％±1.29％,明显低于其他3组,细胞周期被阻滞于G1期.检测MDR1在联合组中的表达水平,发现MDR1蛋白的表达水平明显低于其他组别.结论 RNA干扰沉默EZH2基因可以增强Bel/Fu细胞对5-Fu的敏感性,其机制可能与MDR1蛋白表达降低有关.     

硫化型反义寡核苷酸逆转乳腺癌多药耐药的研究

多药耐药 (MDR)是恶性肿瘤化疗中经常遇到的现象 ,我们通过合成互补于多药耐药基因 1(Mdr 1)cDNA起始密码区的反义寡核苷酸 (ASODN ) ,以不同的浓度转染乳腺癌耐药细胞株 ,研究转染后 7d内实验细胞Mdr 1mRNA及其表达的P gp每天的变化情况 ,探讨A SODN转染肿瘤细胞的理想作用浓度和转染后出现最大逆转效果的时段。一、材料和方法1.细胞培养 :耐阿霉素的人乳腺癌细胞株MCF 7/ADR来自美国国立癌症研究所 ,常规方法进行培养 ,取对数生长期细胞进行实验。2 .ASODN的合成及修饰 :针对Mdr 1cDNA的起始密码区合成ASODN ,其碱基序…     

反义硫代磷酸寡核苷酸逆转肝癌细胞多药耐药的实验研究

目的 观察反义硫代磷酸寡核苷酸（ASOND）逆转耐药肝癌细胞的多药耐药作用。方法 用人工合成互补于mdrl基因5′端AUG起始密码子的反义20聚硫代磷酸寡核苷酸,以Lipofectamine为载体,转梁人耐药肝癌细胞SMMC－7721,MTTI测定细胞对化疗药物的敏感性,通过RT－PCR检测mRNA的表达,流式细胞仪分析P－170的表达。结果 ASOND可抑制SMMC－7721细胞mRNA及P－170的表达,增加耐药细胞对化疗药物的敏感性,最佳ASOND作用浓度为0．5μmol/L。结论 ASOND可增加耐药细胞对化疗药物的敏感性,部分逆转耐药肝癌细胞耐药。     

短发夹RNA干扰质粒与粉防己碱对结肠癌耐药细胞多药耐药性的逆转作用

目的 比较短发夹RNA干扰质粒与粉防已碱对结肠癌LoVo/5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用.方法 用粉防己碱和靶向MDR1的短发夹RNA干扰质粒分别对结肠癌LoVo/5-FU耐药细胞进行处理,实验分为对照组(空白对照)、粉防己碱组和转染组(短发夹RNA干扰质粒).应用MTT法检测细胞对5-FU的敏感性;流式细胞仪检测细胞周期变化、凋亡情况及P-糖蛋白的阳性表达率;RT-PCR法检测MDR1 mRNA的表达情况;Western blot检测P-糖蛋白的表达情况.多组间的比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q检验.结果 (1)细胞对5-FU的敏感性:对照组、粉防己碱组、转染组的药物半数抑制浓度( IC50)分别为(7.3±0.3)、(4.4±0.7)、(2.4±0.4) mmol/L,3组比较,差异有统计学意义(F =65.27,P＜0.05);粉防己碱组与转染组比较,差异有统计学意义(q=6.67,P＜0.05).(2)细胞周期的变化:对照组、粉防己碱组、转染组G1期和S期细胞所占比例分别为38.13％±3.75％、51.36％±2.76％、59.24％±4.31％和20.46％±2.23％、14.32％±1.91％、9.40％±1.65％,3组比较,差异有统计学意义(F =25.23,24.37,P＜0.05);粉防己碱组与转染组比较,差异有统计学意义(q=3.67,4.35,P＜0.05).(3)细胞凋亡情况:对照组、粉防己碱组、转染组细胞凋亡率分别为1.32％±0.47％、3.24％±0.26％、5.88％±0.44％,3组比较,差异有统计学意义(F=99.26,P＜0.05);粉防己碱组与转染组比较,差异有统计学意义(q=11.48,P＜O.05).(4)P-糖蛋白的表达:对照组、粉防己碱组、转染组细胞P-糖蛋白的阳性表达率分别为96.9％±2.3％、61.6％±4.9％、76.6％±3.6％,3组比较,差异有统计学意义(F =67.83,P＜0.05);粉防己碱组与转染组比较,差异有统计学意义(q=6.97,P＜0.05).(5)MDR1 mRNA表达情况:对照组、粉防己碱组、转染组细胞MDR1 mRNA的相对表达量分别为1462±161、570±85、233±81,3组比较,差异有统计学意义(F=90.59,P＜0.05);粉防己碱组与转染组比较,差异有统计学意义(q=5.12,P＜0.05).结论 粉防己碱和靶向MDR1的短发夹RNA干扰质粒均能逆转LoVo/5-FU耐药细胞的MDR,且后者逆转作用更强,逆转机制与抑制P-糖蛋白表达及下调MDR1 mRNA表达有关.     

小干扰RNA沉默多药耐药相关蛋白基因2对人肝癌细胞HepG2多药耐药的逆转作用

目的 检测小干扰RNA(siRNA)对肝癌耐药细胞株HepG2/阿霉素(ADM)多药耐药相关蛋白基因2(MRP2)及其蛋白产物的抑制作用,观察对多药耐药性的影响.方法 使用浓度梯度法制作HepG2耐ADM细胞株(HepG2/ADM),ADM浓度从0.1～2.0 m/L:设计合成针对MRP2的siRNA小片段,转染HepG2/ADM耐药细胞,24 h后通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测siRNA对MRP2基因mRNA和蛋白的抑制效果;噻唑蓝(MTT)比色法观察抑制MRP2基因表达后,HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性变化,并计算各药物的半数抑制浓度(IC50).结果 HepG2/ADM对ADM、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱和奥沙利铂的IC50值分别为0.3204、3.8002、0.2014和0.1221;siRNA明显抑制了HepG2/ADM细胞MRP2基因mRNA和蛋白的表达(P＜0.05);转染MRP2-siRNA后,HepG2/ADM细胞对ADM、5-Fu、长春新碱和奥沙利铂的IC50值明显减小,分别为0.1023、1.4417、0.0452和0.0268.结论 用siRNA沉默MRP2基因能够逆转HepG2/ADM细胞对化疗药物的耐药性,MRP2基因与HepG2/ADM肝癌细胞的多药耐药性相关,可通过沉默MRP2基因提高耐药细胞对化疗药物的敏感性.     

反义人类端粒酶 RNA逆转录病毒载体构建及其对结直肠癌细胞的抑制作用

目的 研究反义人类端粒酶RNA逆转录病毒载体对结直肠癌HT29细胞端粒酶活性及细胞生长的抑制作用。探讨以端粒酶为酸点的结直肠癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义重组病毒，感染结直肠癌HT29细胞，采用RT-PCR检测hTR表达。端粒酶重复扩增法（telomerase repeat amplification protocol,TRAP)检测端粒酶活性，绘制生长曲线了解细胞生长状态，倒置显微镜观察和DNA片段电泳检测细胞凋亡。结果 反义hTR作用后的结直肠癌细胞hTR表达下降，端粒酶活性和细胞生长受到明显抑制，细胞出现凋亡。结论 反义hTR对结直肠癌HT29细胞的生长和端粒酶活性具有明显的抑制人舰艇可能以hTR为靶点对结直肠癌进行基因治疗。     

AP-1反义寡聚脱氧核苷酸逆转人膀胱癌耐药细胞多药耐药的实验研究

目的 观察以激活剂蛋白-1(AP-1)位点为靶序列的特异性反义寡聚脱氧核苷酸(a-sODNs)对人膀胱癌耐药细胞株多药耐药性的逆转作用。方法 设计针对谷胱甘肽(GSH)生物合成的限速酶γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因启动子区域AP-1序列的特异性asODNs，用阳离子脂质体包被后转染人膀胱癌细胞株BIU87及其多药耐药(MDR)亚株BIU87／A，然后分别用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法[以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照]、荧光分光光度法、MTT法等检测AP-1-asODNs对两株细胞γ-GCSmRNA表达、细胞内GSH水平及其对6种抗癌药物肿瘤细胞抑制率的变化。结果 AP-1-asODNs转染72h后，BIU87和BIU87／A细胞的γ-GCS mRNA的表达和细胞内GSH的水平均出现下降。同时6种抗癌药物对反义转染后的两株细胞的抑制率大部分都有所提高。结论 γ-GCS特异的AP-1-asODNs可通过降低细胞内的GSH水平增强膀胱癌细胞对化疗的敏感性，逆转肿瘤细胞的耐药。     

携带反义多药耐药相关蛋白的重组腺病毒的构建及其应用的初步研究

目的　构建携带反义多药耐药相关蛋白 (MRP)的重组腺病毒并转染人肝癌耐药细胞株 ,为肝癌耐药的基因治疗提供实验研究基础。方法　将MRP基因片段反向克隆到腺病毒载体质粒pAdTrack CMV上 ,与骨架质粒在细菌体内进行同源重组 ,经 2 93细胞包装、扩增后得到携带反义MRP的重组腺病毒AdEasy GFP ASmrp ,再用其转染人肝癌耐药细胞株SMMC 772 1 /ADM。结果　成功地构建了携带反义MRP的重组腺病毒 ,病毒滴度为 2 .5× 1 0 9efu/ml,多重感染复数为 1 0 0时对SMMC 772 1 /ADM细胞株转导效率可达 90 %以上。结论　构建的重组腺病毒AdEasy GFP ASmrp可望有效地将反义MRP导入人肝癌耐药细胞株 ,为肝癌耐药机理及其逆转方式的研究提供实验基础。     

小干扰RNA逆转人乳腺癌移植瘤多药耐药的在体研究

目的探讨以多药耐药相关蛋白(MRP)为靶标的小干扰RNA(siRNA)抑制相应基因的表达,观察其对裸鼠人乳腺癌移植瘤化疗敏感性的影响。方法将以MRP基因为靶标的siRNA电穿孔转入裸鼠人乳腺癌模型中,用RT-PCR方法和免疫组化法检测乳癌组织MRP mRNA和蛋白的表达水平,并检测乳腺癌组织对抗肿瘤药物的敏感性。结果 RT-PCR显示转染siRNA 24 h后MRP mRNA表达降低,为空白对照组的(63.7±8.9)%,两者差异有统计学意义(P0.05);免疫组化检测显示siR-NA转染移植瘤48 h后,MRP蛋白的表达降低,为空白对照组的(54.3±6.4)%,两者差异有统计学意义(P0.05);经MRPsiRNA转染后,表柔比星的抑瘤率为42.2%,而空白转染组的表柔比星抑瘤率仅为11.9%(P0.05)。结论以MRP基因为靶标的siRNA能抑制裸鼠人乳腺癌移植瘤中MRP mR-NA和MRP蛋白的表达,从而使移植瘤对化疗药物表柔比星的敏感性明显增加,部分逆转了肿瘤的多药耐药性。     

短发夹RNA干扰表达质粒逆转人大肠癌细胞LOVO／5-Fu多药耐药的研究

目的：探讨短发夹RNA（shRNA）沉默多药耐药MDR）基因对大肠癌多药耐药细胞株LO-VO/5-Fu生长的影响。方法：构建靶向MDR1的shRNA干扰质粒转染人大肠癌多药耐药细胞株LO-VO/5-Fu,MTT法检测各组细胞对5-Fu的敏感性,流式细胞术检测细胞周期变化、凋亡情况及P-糖蛋白（P-gp）的表达,Realtime-PCR检测各组细胞MDR1 mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞P-gp表达的变化。结果：与对照组质粒组和未转染组相比,转染含shRNA干扰质粒细胞的实验组IC50明显降低,为（2.304±0.232）μmol/L,且差异有统计学意义（P〈0.05）,敏感性的相对逆转率为73.8%;凋亡率明显升高为（5.767±0.694）%（P〈0.05）;MDR1 mRNA表达明显下调（P〈0.05）;P-gp的表达水平降低（P〈0.05）。结论：靶向MDR1的shRNA干扰质粒有效抑制了MDR1的表达,使P-gp的表达降低,从而增强了LOVO/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性,有可能为临床上克服大肠癌化疗过程中出现的耐药提供新的作用靶点和治疗途径。     

小干扰RNA引发多药耐药乳腺癌细胞内MDR1基因沉默的研究

目的　研究小干扰RNA(siRNA)抑制耐药乳腺癌细胞系MDR1基因表达的可行性。方法　选用耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF7/ADR及其药物敏感细胞系MCF7作为研究对象。将预先设计的siRNA包装入质粒载体 ,然后转化质粒到大肠杆菌中 ,经过克隆、扩增、纯化后转染到MCF7/ADR细胞中 ,10 0mg/L潮霉素筛选 2周 ,用流式细胞术从蛋白水平检测P gp的表达率 ,及作实时定量聚合酶链式反应从基因转录水平检测MDR1基因的表达率。结果　流式细胞术检测结果显示 ,MCF7/ADR细胞经特异性siRNA作用后P gp的表达率由99.8%下降到 12 .3 % ;作为阳性对照的转染过GFP基因的LA795细胞的GFP蛋白表达率由 74.8%下降到 10 .6%。实时相对定量PCR检测结果显示 ,MCF7/ADR细胞经特异性siRNA作用后其Ct值由 2 5 .2 2增加到 3 0 .64。结论　siRNA能抑制人乳腺癌多耐药细胞系MCF7/ADR内MDR1基因表达 ,从而为逆转肿瘤细胞的耐药性提供了一种新的方法。     

Survivin反义核酸治疗人大肠癌裸鼠皮下种植瘤的实验研究

目的探讨Survivin反义寡核苷酸对裸鼠人大肠癌皮下种植瘤体生长的抑制作用及其机制。方法接种人大肠癌细胞制作裸鼠皮下大肠癌种植瘤模型,分别用Survivin反义寡核苷酸、正义核苷酸和生理盐水对皮下瘤体内直接进行注射治疗,检测肿瘤的生长状况、瘤体体积及瘤重变化,计算抑制率。病理切片免疫组化检测瘤体E-CD表达。结果经Survivin硫代反义寡核苷酸治疗组裸鼠皮下移植瘤生长受到抑制,肿瘤重量明显小于对照组,肿瘤体积明显小于对照组和正义组(P<0.05),裸鼠皮下移植瘤E-CD表达增强。结论Survivin反义核酸可以抑制大肠癌裸鼠移植瘤的生长,Survivin反义核酸抑制大肠癌裸鼠移植瘤生长的机理可能与E-CD基因表达变化有关。     

VEGF-C反义核酸对结直肠癌LoVo细胞体内生长的影响

目的：探讨VEGF-C反义核酸对结直肠癌LoVo细胞体内生长的影响。方法：20只裸鼠随机均分为实验组与对照组,实验组接种转染反义VEGF-C核酸的LoVo细胞,而对照组接种转染空白质粒的LoVo细胞。观察两组肿瘤的生长情况,21 d后处死动物取移植瘤标本,用免疫组化法检测移植瘤组织中的微淋巴管密度（MLD）和微血管密度（MVD）。结果： 两组的成瘤率均为100%;实验组与对照组接种14 d后的肿瘤体积分别为（382.0±152.8）mm3和（454.2±148.7）mm3,21 d后为（745.0±250.9）mm3和（1 574.4±506.2）mm3,差异均有统计学意义（均P<0.05）;实验组肿瘤组织中MLD与MVD计数均较对照组明显减少[（11.75±2.22）/0.72 mm2 vs. （28.50±2.65）/0.72mm2,（47.75±2.99）/0.72 mm2 vs. （53.73±3.50）/0.72 mm2]（均P<0.05）。结论：转染VEGF-C反义核酸可抑制结直肠癌LoVo细胞移植瘤在裸鼠的体内生长,并抑制移植瘤淋巴管与血管的生成。

     

Fas/FasL基因转染联合顺铂对直肠癌细胞杀伤作用的研究

目的探讨Fas/FasL基因转染联合顺铂对直肠癌细胞的杀伤作用。方法构建pcDNA3.1-Fas/FasL真核表达载体,将人Fas/FasL基因通过脂质体导入直肠癌8348细胞中,并利用RT-PCR方法检测直肠癌8348细胞的Fas/FasL基因mRNA表达。用MTT法分析顺铂对转染前后的8348细胞抑制增殖和诱导凋亡的能力。结果Fas/FasL基因转染可明显增强直肠癌8348细胞的Fas/FasL表达。分别加入不同浓度顺铂(1、5、10、20、40μg/ml),Fas转染组8348细胞抑制率分别为47.2%、51.8%、57.2%、65.4%、71.0%;后者细胞抑制率分别为29.6%、33.0%、37.8%、41.4%、47.0%,其差异有显著性意义(t=15.33,P<0.01);FasL转染组8348细胞抑制率分别为11.0%、25.4%、31.2%、37.8%、42.4%;对照组8348细胞抑制率分别为26.1%、34.4%、37.6%、42.9%、53.2%,其差异有显著性意义(t=4.43,P<0.05)。结论转染的Fas/FasL基因可显著上调直肠癌8348细胞的Fas/FasL表达;Fas基因转染联合顺铂对直肠癌细胞有更强的杀伤作用;FasL基因转染可减弱顺铂对8348细胞的细胞毒作用,因此为直肠癌的基因治疗和化疗提供了理论依据。     

RNA干扰逆转肝癌多药耐药

目的 研究siRNA对肝癌耐药细胞系HepG2/mrp1中多药耐药相关蛋白基因(multidrug-resistant-associated 1,mrp1)及其蛋白产物MRP1表达的抑制作用和逆转其耐药性的效果.方法 设计合成针对mrp1启动子区域的RNA干扰小片段,转染肝癌耐药细胞HepG2/mrp1.通过RT-PCR和流式细胞仪,在mRNA和蛋白质水平评估RNA干扰对mrp1表达的影响;MTT法检测RNA干扰逆转HepG2/mrp1细胞多药耐药性的变化,按照实验组和亲本组细胞的半数抑制剂量(ICso)评估RNA干扰对细胞耐药倍数的改变.结果 在耐药细胞HepG2/mrp1中,RNA干扰明显抑制了 mrp1 mRNA和蛋白产物MRP1的表达水平,在相同浓度药物作用下实验组细胞耐药性显著下降.结论 我们设计的siRNA对肝癌耐药细胞HepG2/mrp1中的mrp1基因有显著的抑制作用,具有良好的逆转多药耐药性的效果.

Abstract：

Objective To investigate the suppression of mrp1 and MRP1 induced by small interfering RNA and the restoration of sensitivity to chemotherapeutic drugs in the multidrug-resistant hepatocellular carcinoma cell lines HepG2/mrp1. Methods mrp1-targeted small interfering RNA duplexes were designed and composed and introduced into multidrug-resistant hepatocellular carcinoma cell lines HepG2/mrp1. The suppression of mrp1 mRNA and its gene product MRP1 was examined by RT-PCR and flow cytometry (FCM), respectively. MTT assay was performed to measure the reverse effect of small interfering RNA based on the results of ICs0. Results The overexpression of mrp1 mRNA and MRP1 was effectively suppressed by small interfering RNAs. The level of mrp1 mRNA in the transfected HepG2/mrp1 cells was reduced to (86.36±2.76)% and MRP1 to (89.38±3.76)%compared with those of the controls. The resistance to ADR was reversed five-fold, which indicated the restoration of sensitivity to drugs. Conclusion Small interfering RNA can inhibit mrp1 expression effectively and reverse the multidrug resistance mediated by MRP1.     

奥沙利铂联合5-FU术前动脉化疗对进展期胃癌的临床疗效

目的：探讨进展期胃癌患者术前用奥沙利铂（OXA）联合5-氟尿嘧啶（5-FU）行区域性动脉灌注化疗的临床效果。
方法：48例Ⅱ期以上胃癌患者,术前行区域性动脉灌注化疗（A组）,方案为OXA 130 mg/m+ 5-FU 750 mg/m,经股动脉插管行区域冲击化疗1次,8～12 d后接受手术。同期另48例相同临床分期的胃癌患者直接行手术治疗（B组）。两组术后均接受OXA /甲酰四氢叶酸钙/5- FU方案化疗6个周期,观察两组的毒副反应、手术并发症和临床疗效。
结果：A组有38例（79.2%）获得根治性切除;镜检32例（66.7%）出现组织病理学改变,如肿瘤组织坏死、淋巴细胞炎性浸润、癌细胞凋亡、以及间质水肿纤维组织增生等。B组有30例（62.5%）行根治性切除,根治切除率显著低于A组,两组间差异有统计学意义（P<0.05）,且B组病理检查未出现上述变化。A组术前化疗的毒性反应均限于Ⅰ～Ⅱ级;两组的术后并发症无统计学差异。A组患者的中位生存期为36.0个月;1,2,3年总生存率分别为79.2%,62.5%和52.1%。B组中位生存期为21.5个月;1,2,3年总生存率分别为66.7%,45.8%和35.4%。A,B组比较,2年和3年总生存率差异有统计学意义（P<0.05）。
结论：术前应用OXA/5-FU方案行区域性动脉灌注化疗可使肿瘤组织产生显著的组织病理学改变,有利于提高进展期胃癌根治性手术切除率及2,3年生存率。     

长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1对肾癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1(lncRNA OSER1-AS1)对肾癌ACHN细胞的增殖、迁移、侵袭的影响及其对微小RNA(microRNA,miR)-612的调控作用。方法2017年1月至2020年3月,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肾癌组织、癌旁组织中OSER1-AS1、miR-612的表达量;体外培养肾癌细胞ACHN,分别将OSER1-AS1小分子干扰RNA(si-OSER1-AS1)及其阴性对照(si-NC)、miR-612寡核苷酸模拟物(miR-612 mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂的阴性对照(anti-miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-612)转染至ACHN细胞;采用RT-qPCR法检测细胞中OSER1-AS1、miR-612的表达量;采用噻唑蓝(MTT)、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测OSER1-AS1、miR-612的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21蛋白表达量。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果肾癌组织OSER1-AS1的表达水平(1.00±0.08比3.37±0.28)高于癌旁组织(t=52.113,P<0.05),miR-612的表达水平(1.00±0.06比0.47±0.04)低于癌旁组织(t=47.062,P<0.05);si-OSER1-AS1组细胞活力(0.66±0.05比0.31±0.03)与Cyclin D1(0.63±0.05比0.25±0.02)、MMP-2(0.82±0.07比0.35±0.03)、MMP-9(0.76±0.06比0.28±0.03)蛋白水平低于si-NC组(t=18.007、21.169、18.514、21.466,P<0.05),si-OSER1-AS1组迁移细胞数[(115.56±9.52)个比(55.99±5.59)个]、侵袭细胞数[(93.41±6.09)个比(46.05±4.35)个]低于si-NC组(t=16.188、18.984,P<0.05),si-OSER1-AS1组p21蛋白水平(0.15±0.02比0.57±0.05)高于si-NC组(t=23.398,P<0.05);miR-612组细胞活力(0.68±0.05比0.39±0.03)与Cyclin D1(0.66±0.05比0.28±0.03)、MMP-2(0.85±0.06比0.46±0.03)、MMP-9(0.78±0.05比0.34±0.02)蛋白水平低于miR-NC组(t=14.920、19.551、17.441、24.512,P<0.05),miR-612组迁移细胞数[(118.76±9.87)个比(64.39±4.65)个]、侵袭细胞数[(99.65±9.12)个比(53.57±3.67)个]低于miR-NC组(t=14.950、14.062,P<0.05),miR-612组p21蛋白水平(0.14±0.02比0.51±0.04)高于miR-NC组(t=24.820,P<0.05);双荧光素酶报告实验证实OSER1-AS1可靶向结合miR-612;抑制miR-612表达可明显逆转干扰OSER1-AS1对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论干扰OSER1-AS1可通过上调miR-612的表达从而抑制肾癌ACHN细胞增殖、迁移及侵袭。     

姜黄素对直肠癌CD133+肿瘤干细胞样细胞群体放疗增敏作用的研究

目的 探讨姜黄素对体外、体内直肠癌CD133+肿瘤干细胞样细胞群放疗敏感性的影响.方法 采用免疫磁珠分选法对直肠癌HRT-18细胞进行干细胞分选后随机分成姜黄素组、放疗组、姜黄素联合放疗组,应用MTT法检测24、48和72 h各组细胞生长抑制情况;采用Annexin V/PI双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况.将分选的CD133+直肠癌细胞移植于裸鼠右脚垫建立移植瘤模型,将模型鼠分为姜黄素组、放疗组、姜黄素联合放疗组,每组8只,观察瘤体动态生长情况并用原位末端标记技术检测瘤体内细胞凋亡情况.结果 低剂量姜黄素联合放疗对直肠癌CD133+肿瘤干细胞样细胞群(24 h生长抑制率:18.7％±1.7％)较放疗组(14.6％±1.0％)具有明显的生长抑制作用(P＜0.01);姜黄素联合放疗组细胞凋亡率(28.8％±3.7％)与放疗组(13.1％±1.4％)比较差异有统计学意义(P＜0.01);治疗6d时,姜黄素联合放疗组的瘤体体积为(521 ±79) mm3,与放疗组的(717 ±134) mm3比较差异有统计学意义(P＜0.01);姜黄素联合放疗组瘤体细胞凋亡指数(26.1％±3.3％)较放疗组(12.0％±2.1％)明显增高,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 姜黄素可显著提高CD133+肿瘤干细胞样细胞群的放疗敏感性.