丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体酶中的代谢动力学

目的研究丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体酶中的代谢,以及选择性细胞色素P450(CYP)酶抑制剂对其代谢的影响。方法超速离心法制备大鼠肝微粒体,采用高效液相-质谱联用方法测定孵育液中丹参酮ⅡA原形药物的浓度。研究丹参酮ⅡA的酶促动力学,推导出药物米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax);并计算体外酶对药物的清除率(CLint)。同时观察不同浓度和不同种类的CYP酶特异性抑制剂对丹参酮ⅡA代谢的影响。结果丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体酶中的Vmax为(1.20±0.18)nmol/(min·mg);Km为(4.35±0.67)nmol/mL;CLint为(0.28±0.06)mL/(min·mg)。噻氯匹啶和酮康唑能够显著抑制丹参酮ⅡA的代谢,奎尼丁对丹参酮ⅡA的代谢也有一定的抑制作用,而其他CYP酶抑制剂对丹参酮ⅡA的代谢无明显影响。结论CYP2C19和CYP3A1主要参与了丹参酮ⅡA的代谢,CYP2D6也起到了部分代谢作用;这些CYP酶的抑制剂可能使丹参酮ⅡA的代谢受到抑制,造成药物药效或毒性的增加。     

钩吻素子在人和猪、大鼠、猴、犬肝微粒体的酶促动力学及CYP450酶亚型分析

目的 研究和比较钩吻素子(KM)在人与各种实验动物肝微粒体体外代谢的酶促动力学及选择性CYP450酶抑制剂对其代谢的影响.方法 采用优化的反应体系和UPLC检测方法,测定系列浓度的KM与各种属肝微粒体孵育的降解曲线,以底物消除法计算酶动力学参数;共孵育方法考察选择性CYP450酶抑制剂对KM在各种属肝微粒体代谢的影响.结果 在人肝微粒体,KM的米氏常数(Km)、最大反应速率(Vmax)、半哀期(T1/2)、固有清除率(CLint)分别为(0.135±0.067)mmol/L、(1.89±0.19)μmol·min-1·g-1pro、(712±23)min和(15.7±5.2)mL·min-1·g-1pro.与人相比,犬、猪的Km值较大,大鼠及猴的CLint较高,4种实验动物的Vmax值均较大、T1/2均较短.酮康唑在各种属均可显著抑制KM代谢,在人、猪、犬IC50<1 μmol/L,在大鼠、猴IC50为1~10 μmol/L,可见CYP3A为主要代谢酶.噻氯匹定、奎尼丁和磺胺苯吡唑仅对大鼠,噻氯匹定仅对猴和犬的KM代谢为弱抑制(抑制率20.43%~44.31%),说明在体情况下,CYP2B、CYP2D和CYP2C与KM的代谢可能无关.结论 KM在人与猪、大鼠、犬、猴肝微粒体中的主要代谢途径相同,均由CYP3A酶催化,但酶活性和代谢动力学特征有一定差异.     

细胞色素P450介导的补骨脂酚代谢减毒

目的:分析补骨脂酚代谢的细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)表型,并在体外研究人肝微粒体(hu-man liver microsomes,HLM)对补骨脂酚代谢减毒的机制。方法:用HLM与化学抑制剂合用法以及人源重组CYP酶法分析代谢补骨脂酚的CYP酶亚型。用HPLC-MS法分析CYP亚型酶特异底物的代谢产物生成量,研究CYP酶广谱抑制剂1-氨基苯并三唑(1-aminobenzotriazole,ABT)对HLM中CYP亚型酶活性的抑制作用。用HPLC法分析补骨脂酚在HLM孵育液中的浓度,研究ABT对其代谢的影响。应用MTT法检测人肾近曲小管上皮细胞(human kid-ney-2,HK-2)的存活率来评价补骨脂酚对HK-2的毒性作用以及HLM中CYP酶和ABT对其毒性的影响。结果:HLM中的CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4参与了补骨脂酚的代谢,其中以CYP2C19的代谢转化率最高;2.5 mmol/L ABT能明显抑制0.5 g/L HLM中上述4种CYP同工酶活性,抑制率达到90%以上;2.5 mmol/L ABT对补骨脂酚在HLM的代谢抑制率为83.24%±2.13%。在HK-2细胞存活率实验中,ABT能显著降低HLM对30～90μmol/L补骨脂酚的代谢减毒作用(P0.05)。结论:HLM减低补骨脂酚HK-2细胞毒性的作用与HLM中CYP酶将补骨脂酚代谢转化为无毒或毒性较小的代谢产物有关,应用CYP酶广谱抑制剂能逆转HLM对补骨脂酚的代谢解毒作用。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂S25的代谢稳定性和表型研究

目的:探讨抗癌药物组蛋白去乙酰化酶抑制剂S25在不同种属中代谢稳定性差异并确定S25药物的代谢表型。方法:将S25置于人、小鼠、大鼠、犬和猴的肝微粒体中孵育,运用超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)方法检测经过孵育代谢后S25剩余浓度,分析其代谢稳定性并推导出其在体内的半衰期及清除率;通过肝微粒体中细胞色素P450酶(CYP450)同工酶特异性抑制剂的化学抑制剂方法鉴定S25在小鼠肝微粒体中的代谢表型。结果:S25在人、小鼠、大鼠、犬和猴5个种属肝微粒体中半衰期(t1/2)分别为45.00、187.30、43.31、130.75、198.00 min;肝微粒体中固有清除率CLint分别为30.8、7.4、32、10.6、7/m L·min-1·mg-1;在人肝微粒体中S25主要通过CYP2E1、CYP2C9、CYP2C19催化代谢。结论:在肝微粒体研究体系中,S25通过多种酶催化而迅速代谢降解;该药在人和小鼠的代谢动力学无差异,小鼠肝微粒体代谢系统可用于S25在人体内发生不良反应的风险评估。     

CYP2D6基因多态性对阿托伐他汀代谢的影响

目的研究中国人群CYP2D6基因多态性对阿托伐他汀(A)在体外人肝微粒体代谢的影响,探讨CYP2D6基因在阿托伐他汀代谢过程的作用。方法收集肝胆手术患者手术旁正常肝组织样本,并提取人肝微粒体(HLM)及肝组织DNA。使用Taqman基因分型技术测定CYP2D6*3、*4、*5、*6、*9、*10和*41这7个位点多态性。采用HLM孵育A使其代谢,并用LC-MS/MS方法测定A及其代谢产物2-羟基阿托伐他汀(2A)和4-羟基阿托伐他汀(4A)的浓度,分析CYP2D6基因多态性对A体外代谢的影响。按照相关文献及分型结果将样本的CYP2D6代谢表型分为强代谢型(EMs)和中等代谢型(IMs)表现型。结果 A在人肝微粒体中生成2A和4A的酶反应速率常数分别为53.7及48.5μmol/L;最大反应速率分别为140.2及181.7 pmol/(mg·min)。A在55例人肝微粒体中的代谢呈现多态性,最小和最大速率分别为109.9和9.3 pmol/(mg·min)。本研究中CYP2D6*3、*4、*5、*6、*9、*10、*41等位基因突变频率分别为0%、1.82%、2.73%、0%、0%、69.09%、2.73%。CYP2D6*4、*5、*10、*41等位基因突变对阿托伐他汀在人肝微粒体反应体系中的代谢无明显影响。A的减少速率在EMs组比在IMs组高,但差异无统计学意义(P0.05)。2A的生成速率在EMs和IMs组分别为(14.68±7.62)vs.(8.70±3.50)pmol/(mg·min),P=0.06。4A的生成速率在EMs和IMs组分别为(20.32±13.10)vs.(11.04±4.88)pmol/(mg·min),P=0.07。结论 CYP2D6*4、*5、*10、*41等位基因突变对阿托伐他汀代谢影响较小,而CYP2D6*4、*5、*10、*41多等位基因突变引起的代谢表型的差异对阿托伐他汀体外代谢生成2-羟基阿托伐他汀、4-羟基阿托伐他汀有一定的影响。     

紫杉醇对食蟹猴和人CYP1A2、CYP3A4及CYP2A6酶代谢的影响

目的探讨紫杉醇对食蟹猴和人肝微粒体CYP1A2、CYP2A6和CYP3A4酶活性的影响。方法采用食蟹猴和人肝脏微粒体,分别以非那西汀、睾丸酮和香豆素分别作为CYP1A2、CYP2A6、CYP3A4的底物,建立CYP1A2、CYP2A6和CYP3A4体外代谢体系。采用不同浓度的紫杉醇分别与上述3种底物共同孵育于肝微粒体代谢体系中。用HPLC法分别测定各底物的代谢产物扑热息痛、6β-羟基睾丸酮、7-羟基香豆素的产生量,计算IC50值,以评估紫杉醇对CYP1A2、CYP2A6和CYP3A4代谢的影响。结果紫杉醇对食蟹猴肝微粒体3种酶的IC50值分别为570±5.9μmol/L、140±2.9μmol/L和无影响;紫杉醇对人肝微粒体3种酶的IC50值分别为193±6.6μmol/L、253±3.6μmol/L和24±1.6μmol/L。结论紫杉醇对食蟹猴肝微粒体CYP1A2和CYP3A4活性具有一定的抑制作用,但对CYP2A6酶的活性几乎没有影响。紫杉醇对人肝微粒体CYP1A2和CYP3A4活性的抑制作用较弱,但对CYP2A6酶的活性抑制作用较强,提示临床上紫杉醇与作为上述酶底物的药物联合用药时应慎重,以避免因中西药物相互作用所导致的不良反应发生。     

白藜芦醇在大鼠肝微粒体中的代谢动力学研究

目的研究白藜芦醇在大鼠肝微粒体中的代谢特征和参与代谢的细胞色素P450(CYP)亚型。方法将白藜芦醇与地塞米松(DEX)、苯巴比妥(PB)诱导的大鼠肝微粒体进行体外共孵育,并且用不同浓度的CYP3A1特异性抑制剂酮康唑(Ket)在空白肝微粒体中共孵育,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)方法测定孵育后白藜芦醇的浓度。观察Ket对白藜芦醇代谢的影响及参与其代谢的CYP酶。结果白藜芦醇在DEX、PB诱导组的代谢明显加快(P<0.01),Ket能够显著抑制白藜芦醇代谢,并呈剂量依赖性。结论白藜芦醇具有酶促动力学代谢特性,CYP3A主要参与白藜芦醇的代谢,CYP2B可能参与其部分代谢。     

灯盏生脉胶囊有效组分对大鼠细胞色素P450酶同工酶作用的体外研究

目的 探讨灯盏生脉胶囊6种有效组分对细胞色素P450酶(CYP450酶)4种主要亚型(同工酶)的作用.方法 采用大鼠肝微粒体体外孵育的方法和液质联用(LC/MS/MS)技术,通过体外cocktail高通量筛选,选择不同的CYP450酶同工酶特异性探针底物与灯盏生脉有效组分共同孵育,比较灯盏生脉有效组分对大鼠肝微粒体中CYP450酶同工酶抑制作用.结果 五味子甲素对大鼠肝微粒体CYP3A1、2C6及2C11有弱抑制作用,五味子酯甲对CYP3A1及2C11有弱抑制作用,IC50值均在10～50 μmol/L之间.结论 本研究初步界定参与灯盏生脉胶囊有效组分代谢的大鼠CYP450酶同工酶,及其有效组分对大鼠CYP450酶同工酶的抑制作用,为灯盏生脉胶囊与其他药物的联合使用提供科学依据.     

慢性乙型肝炎病毒感染对人肝细胞色素酶P450 3A4的影响

目的 探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染对人肝脏细胞色素酶3A4(CYP3A4)的影响,为慢性HBV感染患者安全用药提供指导.方法 收集慢性HBV感染患者和正常人的肝组织标本,匀浆后以差速离心法制备成微粒体.以睾丸酮为探针底物,用高效液相色谱(HPLC)方法建立体外检测CYP3A4酶代谢活性的技术平台,检测两组肝组织样本中CYP3A4的酶活性.以Western印迹法测定了两组肝组织样本中CYP3A4蛋白的表达差异.结果 HPLC检测显示,反映酶活力的指标Vmax慢性HBV感染组为(493±297)pmol·min-1·mg-1,正常对照组为(741±189)pmol·min-1·mg-1,两组差异有统计学意义(P=0.03),而酶系特征性常数Km值两组分别为(0.142±0.057)μmol/L,(0.121±0.024)μmol/L,差异无统计学意义(P=0.103).Western印迹测定CYP3A4蛋白表达两组差异有统计学意义(P=0.003),慢性HBV感染组CYP3A4蛋白表达为3.0±1.6,低于正常组的表达量(5.7±1.5).各样本酶活性和蛋白表达的相关系数为0.7683(P＜0.01),表明酶活性与蛋白表达呈现良好的相关性.结论 慢性HBV感染可降低肝脏CYP3A4酶蛋白的表达,导致酶活性下降,但是对酶的结构未产生影响.提示慢性HBV感染者在使用由CYP3A4代谢的药物时,要重视由于代谢变化导致的副作用.     

丹参酮对大鼠细胞色素P-450酶系和谷胱甘肽转移酶的作用

目的探讨丹参有效成分丹参酮 (Tan)对大鼠肝、肾组织内的细胞色素P 450酶 (cytochromeP 450,CYP)系和谷胱甘肽转移酶(GT)的影响。方法给予SD雄性大鼠丹参酮 (100mg·kg-1 )灌胃,每日 1次,连续10天后,选用CYP1A1、1A2、2B1、2E1及 3A特异性代谢底物,检测它们在肝和肾微粒体中的活性,同时检测肝、肾微粒体中的GT水平变化。结果实验表明,丹参酮可诱导肝微粒体内的CYP1A1、CYP1A2和CYP2B1活性显著升高(均P<0. 01),同时显著抑制CYP2E1的活性 (P<0. 01),也可诱导肝微粒体中GT的活性升高 (P<0.05)。结论丹参酮对CYP亚型的不同调节作用可能会影响与其合用药物在体内的代谢消除,丹参酮对GT的影响也具有一定的临床意义。     

芦荟大黄素对兔髂动脉损伤后内膜增生及血管重塑反应的在体研究

目的探讨芦荟大黄素对兔髂动脉损伤后内膜增生及血管重塑反应的影响。方法将14只纯种日本大耳白兔随机分为髂动脉球囊损伤用药组和非用药组,于手术前后分别给予芦荟大黄素〔40mg/(kg·d)×7d〕或等体积的生理盐水肌肉注射。14d后,取出左右髂总动脉,用计算机图像分析仪对其切片进行形态测量分析。结果用药组与未用药组比较,最大内膜厚度均值稍低〔(0.043±0.013)mm比(0.048±0.015)mm,P>0.05〕;新生内膜面积减小〔(0.025±0.005)mm2比(0.035±0.008)mm2,P<0.05〕;管腔面积增大〔(0.098±0.011)mm2比(0.08±0.013)mm2,P<0.05〕;管腔面积和内膜面积及外弹力膜面积之比升高(用药组为0.793±0.036、0.617±0.054;非用药组为0.699±0.063、0.538±0.057,P<0.05)。用药组与未用药组比较,外弹力膜面积稍增大〔(0.160±0.010)mm2比(0.152±0.01)mm2,P<0.2〕,但与未受损伤的正常髂动脉外弹力膜面积〔(0.134±0.023)mm2〕相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论芦荟大黄素可以抑制球囊损伤后内膜的增生,并有可能对损伤后的血管重塑产生有利的影响。     

乳腺肿瘤CT灌注成像价值研究

目的:探讨乳腺肿瘤CT灌注的诊断价值。方法:对17例钼靶检查发现乳腺肿块性病变(21个病灶)行CT灌注扫描,使用电影模式,0.5s/圈,5mm层厚×4,120kV,60mA延迟时间10s,总扫描时间50s,使用GEAW4.2工作站和Perfusion3软件包,对生成的动态图像数据和图像强度随时间变化的相关信息进行分析,考察各种与灌注相关的参数情况,并进行统计学分析。结果:乳腺癌组血流量(BF):(36.46±17.62)ml/(min·100g),血容量(BV):(13.76±8.59)ml/100g,平均通过时间(MTT):(28.23±15.75)s;血管表面通透性(PS):(16.45±12.36)ml/(min·100g),良性肿块组BF:(17.35±10.67)ml/(min·100g);BV:(4.63±3.47)ml/100g;MTT:(25.52±12.91)s;PS:(3.57±3.36)ml/(min·100g),两组BF、BV、PS之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CT灌注成像提供了乳腺肿块的血流动力学信息,在显示形态学变化的同时反映生理功能的改变,在乳腺肿块性病变的良恶性鉴别诊断中有较高的参考价值。     

引流熊胆对小鼠肝脏药物代射酶系活力及肝脏解毒能力的影响

[目的 ]揭示引流熊胆灌胃对小鼠肝脏谷胱甘肽S 转移酶及细胞色素P 45 0体系活力的影响及其与小鼠肝脏解毒能力的关系 .[方法 ]给昆明种小鼠灌胃引流熊胆水溶液后 ,分别在 1,4,8d测定了肝脏胞浆及微粒体中谷胱甘肽S 转移酶、细胞色素P 45 0体系的活力及蛋白质含量 ,并对 2 4h前灌胃引流熊胆水溶液的小鼠腹腔注射环磷酰胺 .[结果 ]引流熊胆水溶液可降低胞浆谷胱甘肽S 转移酶以 1 氯 2 ,4 二硝基苯为底物时的比活力 ,胞浆谷胱甘肽S 转移酶比活力由 (2 2 36± 312 )mmol/ (min·g)降至(10 0 4± 136 )mmol/ (min·g) .每 g组织活力由 (15 2 6 6± 1883)nmol/ (min·g)降至 (6 788± 10 13)nmol/ (min·g) ;微粒体谷胱甘肽S 转移酶比活力、细胞色素P 45 0活力、胞浆及微粒体蛋白质含量无显著变化 .受试小鼠在 7d内无 1只死亡 ,对照组小鼠 7d内死亡数为 8只 .[结论 ]引流熊胆可降低胞浆内谷胱甘肽S 转移酶的活力 ,但不影响微粒体内谷胱甘肽S 转移酶及细胞色素P 45 0的活力 ,并可增强小鼠对环磷酰胺的耐受能力 .     

正常成人多层螺旋CT灌注成像的脑血流动力学研究

目的:探讨多层螺旋CT灌注成像结合去卷积算法在成人脑血流动力学中的应用。方法:选择13例正常成年人行常规头颅CT平扫后,再行CT灌注成像检查。在常规轴面CT扫描后选取基底节及其相邻层面,经肘静脉团注对比剂,同时开始连续50s的四层动态扫描,重建的198幅动态图像使用CT脑灌注软件包进行处理,获得灌注图像,测量所选脑内感兴趣区的血流量、血容量及平均通过时间,并对其进行定量分析。结果:多层螺旋CT灌注成像显示正常成年人脑灰质灌注高于脑白质,脑灰质的平均血流量、平均血容量、平均通过时间分别为(54.7±11.3)ml/(min·100g)、(2.9±0.5)ml/100g、(3.4±0.6)s;脑白质的平均血流量、平均血容量、平均通过时间分别为(27.9±6.9)ml/(min·100g)、(2.4±0.4)ml/100g、(3.9±0.5)s。结论:多排螺旋CT灌注成像结合去卷积算法较其他模式更具有重要的实用价值及优势,同时多层螺旋CT灌注成像结合去卷积技术为测量正常人脑血流动力学指标提供了一种新的影像学方法。     

上海市浦东城乡老年人估算肾小球滤过率及危险因素分析

目的 探讨城乡结合部老年人群估算肾小球滤过率(eGFR)的异常情况及其发生的危险因素,为延缓慢性肾脏病(CKD)的病程进展提供依据。 方法 采用横断面调查的方式,在2016年3-5月普查本社区60岁以上的户籍居民5 097名,收集相关体检指标,以2009年慢性肾病流行病学协作组(CKD-EPI)方程计算eGFR,并以eGFR ≤ 60 ml/(min·1.73 m2)为切点判断慢性肾脏病,应用SPSS 18.0统计软件进行统计,计算人群患病率并分析不同危险因素与疾病的关系。 结果 60岁以上老年人平均eGFR为(77.44±19.16) ml/(min·1.73 m2),同年龄段的性别间的eGFR_CKD-EPI水平比较,男性的eGFR_CKD-EPI平均值均低于女性,差异有统计学意义(P<0.01);CKD患病数为888人,患病率为17.42%,其eGFR均值为(49.40±9.92) ml/(min·1.73 m2)。以10岁为间隔进行分组,结果显示,随着年龄上升,eGFR_CKD-EPI逐渐降低(P<0.01)。年龄、男性、高血压病和高尿酸是eGFR异常的危险因素(P<0.001)。 结论 60岁以上老年人群的CKD患病率较高,尤其是高龄老人,需要关注社区老年人的肾脏疾病和相关危险因素。      

不同程度慢性乙型肝炎患者肾功能评估及危险因素分析

目的 对不同程度慢性乙型肝炎(CHB)患者肾功能进行评估,分析正规抗病毒治疗对CHB患者肾功能的影响,分析CHB患者肾功能损伤的危险因素.方法 收集2015年1月至2016年4月于安徽医科大学第一附属医院379例CHB患者,按照CHB临床分度将患者分为轻度组(191例)、中度组(123例)、重度组(65例)3组,采用简化MDRD方程计算CHB患者肾小球滤过率(eGFR).分析不同程度CHB患者肾功能有无差异,正规抗病毒治疗对不同程度CHB患者肾功能的影响及年龄、性别、HBeAg、HBV DNA等对CHB患者肾功能的影响.结果 轻度组患者eGFR水平为(73.10±14.42)mL/(min·1.73m2),中度组患者eGFR水平为(65.17±11.42)mL/(min·1.73m2),重度组患者eGFR水平为(59.72±18.59) mL/(min·1.73m2),3组间eGFR水平差异具有统计学意义(F=25.200,P=0.000);CHB患者肝炎病情程度和年龄是引起CHB患者出现肾功能损伤的危险因素(P<0.05).结论 CHB患者eGFR水平与病情程度相关,轻度和中度正规抗病毒治疗的CHB患者eGFR水平较未正规抗病毒治疗者eGFR水平高,肝炎病情程度与年龄是引起CHB患者出现肾功能损伤的危险因素.     

芦荟气雾剂的制备与质量控制

目的：制备芦荟气雾剂,建立其质量控制方法。方法：以喷射总量、稳定性等为指标,通过正交试验筛选芦荟气雾剂的处方。用等吸收点双波长分光光度法测定芦荟气雾剂中芦荟苷含量。结果：筛选得到优化处方为：芦荟50%、乙醇40%、甘油5%混合后,压入二甲醚用量25%。芦荟苷线性范围0.8×10-24.4×10-2mg/ml,回收率为98.3%101.5%,RSD为0.50%0.71%,芦荟大黄素对测定不影响。结论：所筛选的处方稳定可行。芦荟苷测定方法简便可靠,重现性好,对芦荟气雾剂质量控制提供方法。