Fmoc固相合成生长激素释放肽-2

生长激素释放肽(GHRP)于20世纪70年代末、80年代初依据蛋氨酸-亮氨酸脑啡肽的结构首次合成[1],之后又合成了数种类型的GHRP[2]。研究发现,结构改造后的GHRP-2(又名KP-102,药品名为Pralmorelin,氨基酸序列为D-Ala-(D-β-naphthyl)-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2)具有更强的刺激生长激素释放和改善儿童生长激素缺乏症的作用[3-4]。2004年,Pralmorelin用于治疗身材矮小症的Ⅱ期临床试验已在日本开始进行[5]。GHRP造价低廉,给药简便,在下丘脑生长激素释放激素无效时仍可产生作用,不影响或少影响生长素的内源节律性释放,具有明显的药物发展前景[2,5]。     

一种合成H2N—Gly—王氏树脂的新工艺

目的：本研究旨在建立一种制备H2N－Gly-王氏树脂的新工艺，提高其结合率。方法：采用Fmoc-甘氨酸：DCC：DMAP：王氏树脂的摩尔比为10：5：1：1，反应时间1.5h.Fmoc-甘氨酸首先与DCC反应，然后加入DMF使反应中产生的沉淀溶解，再加入DMAP催化，使活化的Fmoc-甘氨酸与羟基树脂缩合，生成Fmoc-甘氨酸－王氏树脂。当合成产物结合率低于60％，可重复这一工艺。结果：第一轮制备产物的交换当量为0.15mmol/g，结合率为31．7％；第二轮产物结合率低于60％，可重复这一工艺。结果：第一轮制备产物的交换当量为0.15mmol/g，结合率为31．7％；第二轮产物的交换当量和结合率分别为0.27mmol/g和57．08％；第三轮产物的交换当量及结合率分别是0.32mmol/g和67．6％。结论：结果表明，该工艺反应时间短，第一轮产物的结合率较为满意，第二轮，第三轮反应可显著提高产物的结合率。     

Fmoc固相直接法合成Aβ1-15肽疫苗及其免疫活性

 【目的】探讨实验室合成Aβ1-15肽疫苗的方法，并对其进行鉴定。【方法】选取Aβ42主要包含B细胞抗原决定簇的片段Aβ1-15，采用8分支多重抗原肽系统，以Fmoc固相直接法合成MAP Aβ1-15；用MAP Aβ1-15疫苗免疫接种C57BL／6小鼠，ELISA检测血清特异性抗Aβ抗体。【结果】用Fmoc法直接合成方法成功制备MAP Aβ1-15疫苗，质谱检测其主要离子峰的相对分子质量为15458，与理论相对分子质量15451十分接近。但还有其它不同分子质量的离子峰存在。以合成的MAP Aβ1-15免疫C57BL／6小鼠后。可产生高滴度的特异性抗Aβ越抗体，第3次接种后抗体平均滴度为1：467±196，第5次免疫接种后。平均滴度为1：4367±1120。对照组的血清抗体检测基本无明显变化。【结论】Fmoc固相直接法可成功合成出MAP Aβ1-15，合成出的MAP Aβ1-15具有很好免疫活性。     

氯化高铁血红素对血红蛋白合成及红细胞生成素受体的诱导作用

目的研究氯化高铁血红素（Ｈｍ）对红系细胞（Ｋ５６２细胞）血红蛋白合成及红细胞生成素（ＥＰＯ）受体表达的诱导作用。方法采用不同剂量Ｈｍ对体外培养Ｋ５６２细胞进行诱导，用联苯胺染色对诱导细胞血红蛋白进行定性测定，通过放射性标记配基结合实验测定Ｈｍ诱导后Ｋ５６２细胞膜ＥＰＯ受体的变化。结果诱导组血红蛋白阳性细胞比例由对照组的３．５％增加到３４．３％（Ｐ＜０．０５）。Ｋ５６２细胞对ＥＰＯ的诱导作用不敏感，而经Ｈｍ体外诱导４８ｈ后，其对ＥＰＯ的敏感性明显增加。诱导后Ｋ５６２细胞膜ＥＰＯ受体的数量由对照组的３～８个／细胞，诱导组为６～２５个／细胞（Ｐ＜０．０１）。结论Ｈｍ能增加Ｋ５６２细胞血红蛋白合成及细胞膜ＥＰＯ受体的表达     

巨细胞病毒抗原分支肽的合成与鉴定

目的: 探讨人巨细胞病毒(HCMV)抗原分支肽人工合成方法. 方法: 用固相合成方法分别合成HCMV抗原表位的线性多肽和分支多抗原肽,经HPLC进行纯化后质谱检验其分子质量,并用质控血清鉴定抗原活性. 结果: 合成的线性肽分子质量为793.87 ku,八分支肽的分子质量为7127.77 ku,均与其理论分子质量相符,分支肽经ELISA初步鉴定对质控血清具有较好的分辨效果. 结论: HCMV抗原分支肽的人工合成大大简化了以往HCMV抗原的制备方法,且制备成本低,无潜在生物危害.     

人心房肽Ⅲ的固相合成及生物活性测定

本文报告以氯甲基聚苯乙烯树脂作为固相载体、按顺序用逐步合成法固相合成了人心房肽Ⅲ。产物经高压纸电泳、分子量测定和酸水解后氨基酸组成分析,证明为化学均一的单体分子。成品经生物活性测定,显示有很强的利钠、利尿以及降低动脉压的作用。     

可卡因-苯丙胺调节转录肽（CART）及其突变体的表达纯化及生物活性观察

目的:表达纯化可卡因-苯丙胺调节转录肽（CART）及其突变体,观察其对大鼠进食行为的影响。方法:PCR扩增CART活性片段CART55-102 cDNA,构建表达CART55-102原核表达载体,并对其68位和94位半胱氨酸残基突变,构建表达CART55-102（Cys68Ser）和CART55-102（Cys94Ser）原核表达菌株,经IPTG诱导表达后,亲和层析纯化3种小肽;行为学技术检测原核表达小肽对大鼠进食行为的影响。结果:获得的重组CART55-102及其突变体的纯度在95%以上,产物得率约75%;CART55-102可显著抑制饥饿大鼠的进食行为,而68和94位突变体对饥饿大鼠的进食行为无明显影响。结论:原核表达系统可以成功制备高纯度CART活性小肽和突变体,68位和94位突变导致CART抑制进食的作用消失。     

肌巨蛋白PEVK片段中模型分子EVPK的合成及结构测定

【目的】合成肌巨蛋白PEVK片段中模型四肽分子EVPK[Glu-Val-Pro-Lys],并测定其结构。【方法】采用Fmoc固相合成法合成四肽EVPK,利用电喷雾质谱法测定其分子量,并通过多级质谱和二维核磁共振谱,对该四肽分子进行序列和结构确认。【结果】分子量测定结果为471.4,与计算值471.3基本吻合;序列分析表明合成四肽的一级结构为Glu-Val-Pro-Lys,其在D2O/H2O溶液中Pro残基的构象以反式结构为主。【结论】成功合成了目标四肽化合物。