CrkⅡ表达水平对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨CrkⅡ表达水平对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及侵袭的影响。方法采用免疫组化法检测CrkⅡ在108例喉癌患者喉癌组织及癌旁正常组织中的表达情况,分析不同临床特征喉癌患者喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达情况。构建并验证CrkⅡRNA干扰质粒,将培养后的Hep-2细胞分为空白对照组(未转染质粒)、阴性对照组(转染阴性对照质粒)和实验组(转染CrkⅡ干扰质粒),细胞转染后行实时聚合酶链反应(PCR)扩增。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后Hep-2细胞中CrkⅡ的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移情况。结果喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01)。临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、组织分化程度为中低分化、有淋巴结转移喉癌患者喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达率均高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、组织分化程度为高分化、无淋巴结转移的喉癌患者(P﹤0.05)。实验组喉癌细胞Hep-2中CrkⅡmRNA和蛋白的相对表达量均低于阴性对照组、空白对照组(P﹤0.05)。实验组穿过基质膜至下室的细胞数目低于阴性对照组和空白对照组(P﹤0.05)。转染48 h时,实验组细胞的迁移率低于阴性对照组、空白对照组(P﹤0.05)。细胞培养24、48、72 h时,实验组Hep-2细胞的光密度(OD)值均低于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05)。结论喉癌细胞Hep-2中CrkⅡ的表达下调可降低细胞的增殖、迁移和侵袭能力,CrkⅡ有可能成为喉癌临床治疗的新靶点。     

微小RNA-206通过干扰CDK4和GAK的表达对前列腺癌细胞生长的影响

目的 探讨微小RNA-206(miR-206)对前列腺癌细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期素G相关蛋白激酶(GAK)表达的干扰作用及对前列腺癌细胞生长的影响.方法前列腺癌细胞株DU-145和PC-3为转染对象,转染miR-NC为对照组,转染miR-206为实验组.荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测CDK4和GAK mRNA的表达水平.Western blotting检测CDK4和GAK蛋白的表达水平.流式细胞术检测细胞周期分布.EdU增殖实验和集落形成实验检测细胞增殖能力.结果在DU-145和PC-3细胞株中,miR-NC组CDK4 mRNA表达量分别为1.00±0.09、1.00±0.10,GAK mRNA表达量为1.00±0.05、1.00±0.06;与之相比,两细胞株miR-206组中CDK4 mRNA表达明显下降,分别为0.36±0.18(t=6.572,P=0.001)、0.43±0.17(t=5.794,P=0.001),GAK mRNA表达量亦明显下降,分别为0.23±0.04(t=22.420,P<0.001)、0.32±0.08(t=14.500,P<0.001).Western blotting实验结果与qRT-PCR结果一致.流式细胞术检测结果显示,分别与两细胞株miR-NC组比较,转染miR-206后前列腺癌细胞在S期(23.60%±5.68%∶32.53%±4.52%,t=2.462,P=0.049;22.09%±4.35%∶30.96%±4.86%,t=2.720,P=0.035)和G2-M期(16.28%±7.12%∶26.63%±4.33%,t=2.484,P=0.048;14.60%±1.62%∶24.68%±7.13%,t=2.758,P=0.033)的细胞比例下降,在G0-G1期(60.13%±5.82%∶40.84%±5.37%,t=4.872,P=0.003;63.31%±3.27%∶44.36%±3.82%,t=7.533,P<0.001)的细胞比例升高.EdU增殖实验结果显示,转染miR-206的细胞增殖能力明显减弱(22.56±3.81∶38.90±8.51,t=3.503,P=0.013;25.12±6.42∶48.45±8.92,t=4.244,P=0.005).集落形成实验结果显示,两细胞株miR-NC组形成的集落数分别为218.66±44.59、177.35±24.49,miR-206组形成的集落数分别为125.38±32.80(t=3.370,P=0.015)、82.65±14.05(t=6.708,P=0.001),提示miR-206组细胞增殖能力降低.结论 miR-206可通过干扰CDK4和GAK的表达显著抑制前列腺癌细胞的生长,提示miR-206可能成为前列腺癌的分子靶向治疗工具.     

抑制miR-21表达对结肠癌HCT116细胞生物学行为的影响

目的：探讨抑制 miR-21 表达对结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。方法：实验分为3组,以miR-21抑制剂转染HCT116细胞为转染抑制组（IN）,另设阴性对照组（NC）、空白对照组（MOCK）,以Real-time PCR检测转染后HCT116细胞中miR-21的表达,应用MTT法、流式细胞术、Transwell侵袭和迁移实验检测转染后HCT116细胞的增殖、周期、凋亡、侵袭、迁移;以Western blotting检测转染后HCT116细胞PTEN的表达,荧光素酶报告实验检测转染后HCT116细胞PTEN的活性。结果：miR-21抑制剂转染后,HCT116细胞中miR-21的表达较NC和MOCK组细胞明显降低。下调miR-21后,HCT116细胞的增殖能力明显降低\[72 h时：（1.05±0.45） vs （1.43±0.02）,（1.45±0.01）;t=13.83,P=0000 159;t=14.88,P=0.000 119\],细胞凋亡率显著增加\[（16.30±1.00）% vs（1.87±0.53）%,（1.86±0.12）%;t=25.01,P=0.000 015 2;t=24.985,P=0.000 015 2\],细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞的侵袭\[（50±2.0） vs （115±3.0）,（111±3.0）个;t=29.09,P=0.000 008 31;t=31.23,P=0.000 006 27\]和迁移能力\[（22±2.0） vs （52.3±2.5）,（53.0±1.0）个;t=2401,P=0.000 017 8;t=16.34,P=0.000 082 0\]明显下降。miR-21抑制剂转染的HCT116细胞中PTEN的表达及其荧光素酶相对活性均显著增加。结论：miR-21可能通过抑制PTEN进而调控大肠癌细胞生物学行为,PTEN可能是miR-21的靶基因之一。     

MiR-125a靶向调节P53表达对人喉癌细胞增殖、凋亡以及放射治疗敏感性的影响

摘 要：［目的］ 探究miR-125a通过靶向调节p53的表达对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡以及放射治疗敏感性的影响。［方法］ 培养人喉癌Hep-2细胞系,利用慢病毒分别转染miR-125a与空白质粒,RT-PCR法检测转染后各组细胞中miR-125a水平,采用MTT法检测细胞增殖情况。X线照射各组细胞后,行克隆形成实验、微核检测和流式细胞检测法检测转染细胞凋亡水平及放射敏感性,通过在线软件预测p53基因为miR-125a直接调控的靶基因,Western blot检测凋亡相关蛋白水平并进一步验证miR-125a与p53的关系,及在喉癌细胞放射治疗中的作用。［结果］ MTT实验结果示,转染miR-125a后Hep-2细胞增殖能力明显下降（P<0.05）。克隆形成实验与微核检测结果表明高表达miR-125a可使Hep-2细胞放射敏感性显著提高。流式细胞仪检测结果0Gy下Hep-2-miR-125a、Hep-2-con220组,10Gy下Hep-2-miR-125a、Hep-2-con220组凋亡率分别为(6.30%±0.11%),(0.09%±0.02%),(18.15%±2.49%),(1.95%±0.08%)(P<0.01)。TargetScan软件预测TRIAP1（TP53 regulated inhibitor of apoptosis 1）为miR-125a的直接调控的靶基因,Western blot实验结果显示高表达miR-125a可正向调控p53的表达,从而增强Hep-2细胞对X线的放射敏感性。［结论］ MiR-125a表达上调后可能通过上调p53的表达使Hep-2细胞增殖受到抑制,诱使其发生凋亡,并提高放射敏感性。     

siRNA抑制cortactin基因表达对Hep-2细胞增殖和侵袭的影响

背景与目的:皮层肌动蛋白(cortactin)是一种微丝肌动蛋白结合蛋白,其主要参与细胞骨架系统的调控,细胞外信号转导以及细胞黏附等过程,研究表明cortactin与肿瘤的侵袭和转移有关.因此,本研究旨在探讨siRNA(small interfering RNA)抑制cortactin基因表达对喉痛Hep-2细胞增殖和侵袭的影响.方法:构建含有cortactin基因的siRNA表达载体,转染Hep-2细胞,同时以转染空载体和空白细胞组作为对照(3组细胞分别命名为psilencer3.1-cortactin-siRNA/Hep-2、psilencer3.1/Hep-2和Hep-2),G418筛选稳定转染的细胞;Western blot检测siRNA对cortactin蛋白表达的影响;MTT和平皿隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞迁移侵袭能力.结果:成功构建获得cortactin缺陷型稳定转染细胞系pSilencer3.1-cortactin-siRNA/Hep-2;与Hep-2细胞比较,pSilencer3.1-cortactin-siRNA/Hep-2组细胞中cortaetin含量为11.22%(P<0.01),增殖被抑制,克隆形成率降低为21.47%(P<0.01),迁移、侵袭能力显著降低(p<0.01).结论:cortactin表达下调能抑制喉癌Hep-2细胞的增殖和侵袭.     

冈田酸对喉鳞癌细胞系PP2A活性及迁移的影响

目的：探讨冈田酸（OA）对喉鳞癌细胞系（Hep-2）活性和迁移能力的影响及其可能的作用机制。方法：采用四甲基噻唑蓝（MTT）比色实验确定OA作用于Hep-2的最大浓度;酶活性实验检测不同浓度（0、50、100 nmol/L） OA对Hep-2蛋白磷酸酶2A （PP2A）活性的影响;划痕实验检测Hep-2在不同浓度（0、50、100 nmol/L） OA作用下迁移能力的变化。结果：50、100、200 nmol/L OA作用24 h后Hep-2的相对活力分别为96.7%±1.8%、82.9%±12.6%和57.2%±7.7%,与对照组（100%）比较均明显下降（P均<0.05）。50和100 nmol/L OA作用24 h后PP2A的相对活性分别为30.90%±12.01%和8.98%±4.96%,与对照组（100%）相比明显下降（P<0.05）。划痕试验中,经OA作用24及48 h后Hep-2细胞的迁移能力与对照组相比均明显减弱（P<0.05）,并且100 nmol/L OA处理组迁移能力的减弱程度较50 nmol/L OA处理组更明显（P<0.05）。结论：100 nmol/L冈田酸明显抑制Hep-2细胞PP2A活性并降低了细胞的迁移能力。     

BTG1对喉癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

背景与目的：在多种细胞中B细胞易位基因1(B-cell translocation gene 1,BTG1)能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,调节细胞周期进程及分化。该研究通过体外实验探讨BTG1高表达对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及其相关作用机制。方法：构建pEGFP-N1-BTG1,培养并转染喉癌Hep-2细胞,分为实验组(转染pEGFP-N1-BTG1的Hep-2细胞)和对照组(转染pEGFP-N1空质粒的Hep-2细胞)。采用蛋白［质］印迹法(Western blot)检测两组细胞中BTG1蛋白的表达水平;应用MTT法检测细胞的增值活性;使用流式细胞术检测细胞周期分布和磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin Ⅴ-FITC/PI)检测细胞凋亡;采用Western blot法检测细胞周期调控蛋白Cyclin D1、凋亡相关蛋白Bcl-2表达情况。结果：成功构建pEGFP-N1-BTG1,Western blot检测结果显示,实验组细胞中BTG1蛋白表达水平明显高于对照组细胞(0.921±0.091 vs 0.308±0.047,P<0.05)。实验组与对照组细胞相比,从第24 h实验组细胞生长速度减慢,细胞增值能力降低,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);实验组细胞中Cyclin D1蛋白表达水平下降(0.436±0.023 vs 0.916±0.092,P<0.05),细胞周期的G₀/G₁期细胞比例升高［(85.1±5.2)% vs (63.8±3.1)%,P<0.05)］;S期细胞比例降低［(8.3±1.1)% vs(23.1±1.5)%,P<0.05］;实验组细胞Annexin Ⅴ增多,细胞早期凋亡率升高［(10.3±1.1)% vs (2.8±0.3)%,P<0.05］,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低(0.167±0.009 vs 0.834±0.084,P<0.05)。结论：BTG1高表达能明显抑制喉癌Hep-2细胞的生长增殖、诱导凋亡,其可能的机制与BTG1参与细胞周期调控、诱导细胞凋亡相关。     

miR-135a 通过下调SOX2 抑制喉癌Hep-2 细胞的恶性生物学行为和增强对奥沙利铂的敏感性

[摘要] 目的：探讨敲降miR-135a 对人喉癌上皮Hep-2 细胞的恶性生物学行为和奥沙利铂敏感性的影响。方法：收集2018年1 月至2018 年6 月郑州大学附属南阳医院南阳市中心医院行喉癌切除术10 例患者的喉癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测喉癌组织和Hep-2 细胞中miR-135a 的表达水平。miR-135 inhibitor 转染喉癌Hep-2 细胞后,采用CCK-8 检测Hep-2 细胞活性,集落形成实验检测Hep-2 细胞集落形成能力,Transwell 实验检测Hep-2 细胞的侵袭及迁移能力,WB实验检测Hep-2 细胞中SOX2蛋白的表达水平。0.5、1.0、1.5、2.0 μmol/L的奥沙利铂处理已转染miR-135 inhibitor 的Hep-2 细胞,CCK-8 实验检测Hep-2 细胞的增殖活性,Annexin-V-FITC/PI 染色流式细胞术检测Hep-2 细胞的凋亡率。采用miR-135a inhibitor 质粒、对照pcDNA 空载体（SOX2-Con）质粒、pcDNA-SOX2（SOX2-OE）质粒共转染Hep-2 细胞,构建miR-135a inhibitor+SOX2-Con 组和miR-135a inhibitor+SOX2-OE组,检测此2 组细胞的增殖活性、集落形成能力、侵袭及迁移能力。结果：与癌旁组织比较,喉癌组织中miR-135a表达水平显著升高（P<0.01）;与正常NHP细胞比较,miR-135a 在Hep-2 细胞中表达水平明显上调（P<0.01）;转染miR-135a inhibitor导致Hep-2 细胞中miR-135a 表达水平明显降低（P<0.01）。敲降miR-135a 明显降低Hep-2 细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移、侵袭和SOX2 表达（均P<0.01）;明显增强细胞对奥沙利铂敏感性（P<0.01）;与miR-135a inhibitor+SOX2-Con 组比较,miR-135a inhibitor+SOX2-OE 组的Hep-2 细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移与侵袭能力均明显增加（均P<0.01）;同时,用不同浓度的奥沙利铂处理此2 组细胞,相对于miR-135a inhibitor+SOX2-Con组,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2 细胞存活率显著升高（P<0.01）。结论：敲降miR-135a 可能通过下调转录因子SOX2 的表达抑制Hep-2 细胞的恶性生物学行为,并增强其对奥沙利铂的敏感性。     

miRNA-145在卵巢癌组织中的表达及其对增殖、迁移与侵袭的影响

摘 要：［目的］ 检测不同卵巢组织中miRNA-145的表达,并探讨miRNA-145在卵巢细胞SKOV-3增殖、迁移与侵袭的作用。［方法］ 采用定量聚合酶链反应（qPCR）测定正常卵巢组织、卵巢癌旁组织与卵巢癌卵巢组织的miRNA-145表达水平,随机将SKOV-3细胞分为正常对照组、空白病毒组和病毒转染组,分别采用MTT法测定各组细胞的增殖情况,采用qPCR测定miRNA-145的表达水平,采用划痕实验测定迁移能力,采用Transwell小室法测定侵袭能力。［结果］ 卵巢癌组织miRNA-145表达水平为0.56±0.23,较卵巢癌旁组织和正常卵巢组织显著性降低（P<0.05）。卵巢癌组织miRNA-145表达水平与患者国际妇产科联合会分期和组织分化程度相关（P<0.05）,但与年龄无关（P >0.05）。病毒转染组细胞的miRNA-145表达水平为4.63±0.47,较正常对照组和空白病毒对照组显著性增加（P<0.05）。病毒转染组细胞在培养24h、48h和72h时OD值分别为0.68±0.15、1.17±0.23和1.62±0.26,均较正常对照组和空白病毒对照组显著性降低（P<0.05）。病毒转染组细胞的划痕宽度为675±46μm,较正常对照组和空白病毒对照组显著性增大（P<0.05）。病毒转染组穿膜细胞数量为36±6个,较正常对照组和空白病毒对照组显著性降低（P<0.05）。［结论］ miRNA-145低表达可能与卵巢癌的发生发展有关,过表达miRNA-145能够抑制卵巢癌细胞株的增殖、迁移和侵袭。miRNA-145可以作为治疗卵巢癌的新作用靶点。     

转录因子sox4在宣威女性肺腺癌XWLC-05细胞生长和转移中的作用

目的:研究RNA干扰抑制宣威女性肺癌细胞XWLC-05中转录因子sox4的表达对细胞生长、侵袭和迁移能力的影响.方法:从不同类型肺癌细胞株中,通过实时荧光定量PCR法筛选出高表达sox4的宣威女性肺癌细胞XWLC-05作为研究细胞.将sox4-siRNA转染入XWLC-05细胞后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测sox4表达水平的变化.分别采用MTS法、细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验分析抑制sox4表达对XWLC-05细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响.FCM评估抑制sox4表达对细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:转染sox4-siRNA的实验组细胞在转染后24 h时与空白对照组和阴性对照组相比,sox4 mRNA及蛋白表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05);转染后48 h和72 h时与空白对照组和阴性对照组相比,sox4 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).转染sox4-siRNA的XWLC-05细胞的增殖活性与空白对照组和阴性对照组相比,差异均无统计学意义(P值分别为0.059和0.113),而其迁移能力和侵袭能力却明显低于空白对照组(P值均为0.000)和阴性对照组组(P值分别为0.023和0.000).转染sox4-siRNA的XWLC-05细胞的凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P值均为0.000),但sox4-siRNA转染组的细胞增殖指数与空白对照组和阴性对照组相比,差异均无统计学意义(P值分别为0.168和0.225).结论:转录因子sox4可能通过抑制凋亡并促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,在宣威女性肺癌的生长和转移中发挥作用.     

Pyk2基因对肝癌He p3 B细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的：探讨沉默富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（Pyk2）基因对人肝癌Hep3 B细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法构建Pyk2基因RNA干扰（RNAi）载体,脂质体转染至肝癌Hep3B细胞,实验分3组,Pyk2 RNA干扰组（siRNA组）：转染携带Pyk2基因RNAi的质粒;阴性对照组：转染不携带Pyk2基因RNAi的空载质粒;空白对照组：未转染任何质粒。应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blotting鉴定Pyk2基因和蛋白表达;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）、Transwell侵袭和划痕实验分别检测细胞增殖、侵袭及迁移等生物学特性。结果 Pyk2基因干扰后肝癌 Hep3B 细胞 Pyk2 mRNA 的表达（0．16±0．03）较阴性对照组（0．74±0．13）和空白对照组（0．77±0．16）均明显下降,差异均有统计学意义（t＝51．46,P＝0．000;t＝53．21,P＝0．000）。Pyk2基因干扰后肝癌 Hep3B 细胞 Pyk2蛋白的表达（0．24±0．06）较阴性对照组（0．83±0．05）和空白对照组（0．91±0．06）均明显下降,差异均有统计学意义（t＝57．29,P＝0．000;t＝68．53,P＝0．000）。siRNA组48 h细胞增殖抑制率（26．17％±0．28％）较阴性对照组（9．28％±0．22％）和空白对照组（6．47％±0．31％）明显提高,差异均有统计学意义（t ＝31．45,P＝0．004;t＝34．64,P＝0．002）。siRNA组细胞的穿膜细胞数（32．5±8．5）／10 HP明显低于阴性对照组（98．4±12．3）／10 HP和空白对照组（112．6±11．3）／10 HP,差异有统计学意义（t＝95．64,P＝0．000;t＝105．17,P ＝0．000）。siRNA 组的划痕愈合率（28．17％±1．46％）显著低于阴性对照组（77．38％±2．24％）和空白对照组（79．41％±3．17％）,差异有统计学意义（t ＝85．86,P＝0．000;t ＝89．37,P＝0．000）。结论 Pyk2基因参与肝癌Hep3B细胞的增殖、侵袭及迁移,与肿瘤发展、侵袭、转移等密切相关,Pyk2有望成为肝癌诊断和治疗的分子靶标。     

miR-7抑制喉鳞癌Hep-2细胞增殖及迁移的研究

目的 探讨上调microRNA-7（miR-7）表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖与迁移的作用及可能机制。方法 通过脂质体转染miR-7模拟物（miR-7 mimics）及随机序列（miR-Scramble）,将喉鳞癌Hep-2细胞分成miR-7组、Scramble组和空白对照（Mock）组,实时定量PCR（qPCR）检测转染48 h后各组细胞中miR-7表达,CCK-8法检测转染48 h后的各组细胞的增殖抑制情况,Transwell试验观察转染24 h后细胞迁移能力,qPCR及Western blotting检测PI3K（p110）、AKT及pAKT 的mRNA和蛋白表达情况。结果 miR-7组Hep-2细胞转染miR-7 mimics后miR-7表达水平明显上调,与其余两组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;与Scramble组和Mock组相比, miR-7组Hep-2细胞的增殖抑制率升高,迁移能力降低,且PI3K、AKT及pAKT 的mRNA和蛋白水平均降低（P＜0.05）。结论 上调喉鳞癌Hep-2细胞中miR-7表达能够抑制肿瘤细胞的增殖与迁移,其机制可能与抑制PI3K／Akt信号通路有关。     

外源性dsRNA对肾透明细胞癌细胞中p21表达的影响

目的 探讨dsP21-555转染对肾透明细胞癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的影响.方法 肾透明细胞癌细胞分别使用脂质体Lipofectamine 3000转染dsControl和dsP21-555.荧光实时定量PCR(RT-qPCR)及Western blotting分别检测分析p21 mRNA及蛋白的表达情况.流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布,使用细胞活力实验(MTS法)和集落培养实验分析细胞活力和增殖能力.结果 在ACHN和786-O细胞株中,dsP21-555组p21 mRNA的表达(2.86±0.33、1.96±0.35)相比dsControl组(1.05±0.34、1.01±0.14),分别升高至2.72倍(t=7.640,P<0.001)和1.95倍(t=5.058,P=0.002).Western blotting实验证明两种细胞株中P21蛋白表达水平的上升与p21 mRNA上调相一致.FCM结果显示,转染dsP21-555后,细胞周期被阻滞在G0-G1期(57.08%±5.66%∶46.06%±4.60%,t=3.023,P=0.023;61.58%±6.23%∶42.25±6.08%,t=4.444,P=0.004).MTS结果显示,转染dsP21-555后两种细胞的活力较dsControl组明显下降,其吸光度分别为0.85±0.20∶1.27±0.13,t=3.410,P=0.014;1.04±0.25∶1.55±0.10,t=3.758,P=0.009.集落培养实验显示,两细胞株dsControl组形成的集落数分别为110.91±26.21、129.89±22.87,dsP21-555组形成的集落数分别为59.37±14.23(t=3.456,P=0.014)、71.26±21.38(t=3.745,P=0.010),表明dsP21-555组细胞增殖能力明显降低.结论 dsP21-555可明显上调肾透明细胞癌细胞中p21基因的表达,并显著抑制癌细胞的生长,提示dsP21-555可能成为一种新型的基因治疗工具.     

白细胞介素-8沉默对喉鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的探讨白细胞介素-8(IL-8)沉默对喉鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响及相关机制。方法将IL-8小干扰RNA(siRNA)和Lipofectamine 2000转染试剂转染至喉鳞状细胞癌Hep-2细胞作为实验组和NC组仅转染Lipofectamine 2000转染试剂的细胞作为,未做处理的细胞作为空白组。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测IL-8、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、cleaved caspase 3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(B AX)的相对表达量。结果实验组喉鳞状细胞癌Hep-2细胞中IL-8蛋白的相对表达量明显低于NC组和空白组细胞,OD值明显低于NC组和空白组细胞(P<0.01)。实验组喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的凋亡率明显高于空白组和NC组细胞(P<0.01)。实验组Hep-2细胞中p-AKT和抑制凋亡蛋白Bcl-2的相对表达量均低于空白组和NC组细胞,而促凋亡蛋白B AX和cleaved caspase 3的相对表达量均高于空白组和NC组细胞(P<0.05)。3组Hep-2细胞AKT蛋白的相对表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论IL-8可通过对磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/AKT相关信号通路的调控,抑制喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的增殖能力,并促进其凋亡,为喉鳞状细胞癌的诊断和治疗提供了新的靶点及可能的治疗策略。     

mTOR siRNA对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生物学行为的影响

目的观察mTOR siRNA对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖能力的影响。方法选取45例喉鳞状细胞癌组织和45例正常喉黏膜组织,采用免疫组织化学法检测mTOR蛋白的表达;将喉鳞状细胞癌Hep-2细胞分为空白对照组、空载体组和mTOR siRNA组,及正常对照组、溶剂对照组和雷帕霉素组,分别利用mTOR siRNA和雷帕霉素进行治疗,采用Western bloting法检测不同浓度的mTOR siRNA和雷帕霉素分别处理细胞后对mTOR蛋白表达的影响,并采用CCK-8试剂盒分析mTOR蛋白表达下调对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖能力的影响。结果 mTOR蛋白在喉鳞状细胞癌组织中表达的阳性率显著高于正常喉黏膜组织(P<0.05)。3种不同浓度mTOR siRNA分别转染Hep-2细胞24、48、72 h,各组与空白对照组、空载体组相比,mTOR蛋白表达均有所降低(P<0.05),且mTOR蛋白表达随mTOR siRNA浓度的增加、作用时间的延长而降低(P<0.05)。3种不同浓度雷帕霉素处理Hep-2细胞24、48、72 h,各组与溶剂对照组及正常对照组相比,mTOR蛋白表达量均有所降低(P<0.05);且mTOR蛋白表达随雷帕霉素浓度的增加、处理时间的延长而降低(P<0.05)。与空白对照组、空载体组相比,各mTOR siRNA组的Hep-2细胞增殖在转染后24、48、72 h均受到明显抑制(P<0.05)。结论 mTOR siRNA均能降低喉鳞状细胞癌Hep-2细胞中mTOR蛋白的表达,有效抑制细胞的生长,为喉鳞状细胞癌的分子治疗提供了理论依据。     

Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和促凋亡作用

目的 探讨Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和促凋亡作用。方法 利用脂质体将真核表达载体pIRES2-EGFP-Noxa瞬时转染至乳腺癌MCF-7细胞,通过RT-PCR检测转染后Noxa基因mRNA的表达,Western blot检测转染后蛋白的表达,MTT 比色法测定细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,Hoechst 33342染色检测细胞的凋亡情况。结果 Noxa基因转染后在乳腺癌MCF-7细胞中成功表达。转染后mRNA及蛋白表达持续上升,其转染后24h、48h、72h mRNA的相对灰度值分别为(0.347±0.031)、(0.703±0.041)、(1.044±0.033),差异具有统计学意义（P<0.05）。转染24h、48h、72h后蛋白表达的相对灰度值为(1.171±0.086)、(1.013±0.088)、(0.886±0.063),差异具有统计学意义（P<0.05）。Noxa基因的表达使得乳腺癌MCF-7细胞出现增殖抑制,其24h、48h、72h抑制率分别为（23.9±4.2）%、（36.6±3.0）%、（47.0±3.3）%,差异具有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪检测显示MCF 7细胞DNA合成受到抑制,细胞周期主要抑制在G0/G1 期。其转染24h、48h、72h的G0/G1期分别为（68.1±2.5）%、（72.6±1.5）%、（75.6±0.9）%,与阴性对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）;其24h、48h、72h凋亡率分别为（11.5±0.9）%、（19.6±0.8）%、（25.4±0.7）%,组间差异有统计学意义（P<0.05）。Hoechst 33342染色显示Noxa基因转染后细胞出现凋亡,其24h、48h、72h凋亡率分别为（7.3±4.1）%、（16.8±3.3）%、（23.8±2.3）%,与阴性对照组相比,其差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后能够抑制细胞增殖并促进其凋亡。