纳米羟基磷灰石对人骨肉瘤细胞U2OS增殖和凋亡的影响

目的:探索纳米羟基磷灰石（Nano-HAP）对人骨肉瘤细胞U2OS增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度的Nano-HAP处理人骨肉瘤细胞U2OS后,通过FDA染色检测Nano-HAP对细胞黏附的影响;CCK8实验和克隆形成实验检测Nano-HAP对细胞生长增殖的影响;最后利用Annexinv-FITC凋亡检测试剂盒检测Nano-HAP对细胞凋亡的影响。结果:不同浓度的Nano-HAP对U2OS的黏附没有显著影响,但是对U2OS的克隆形成具有显著抑制作用,同时在50 μg/ml 和800 μg/ml时,可以显著抑制骨肉瘤细胞U2OS的增殖。结论:Nano-HAP对骨肉瘤细胞具有显著的抑制增殖促进凋亡作用,但效应与纳米粒子浓度并无直接的线性关系。     

FHL2沉默对骨肉瘤U2OS细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨沉默FHL2表达对骨肉瘤U2OS细胞的增殖和凋亡的影响及其相关机制的研究。方法 通过构建FHL2的shRNA干扰载体pLKO.1,制备慢病毒并感染U2OS细胞,分为shFHL2目的基因干扰组（shFHL2）和无关序列对照组（SCR）;感染96 h后采用实时定量PCR（QPCR）和Western blotting检测两组FHL2 mRNA和蛋白水平。采用MTT方法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期的变化,Western blotting检测FHL2干扰后U2OS细胞相关信号通路的蛋白表达变化。利用双荧光素酶报告基因系统检测FHL2对p53下游基因转录调控的影响。结果与SCR组比较,shFHL2组感染96 h后FHL2 mRNA和蛋白水平均降低（P＜0.05）。shFHL2组感染24、48、72、96 h的细胞增殖比分别为1.73±0.08、2.49±0.38、3.26±0.45和4.28±0.29,其中96 h的细胞增殖比低于SCR组（P＜0.05）;shFHL2组感染96 h的细胞凋亡率为（17.55±1.05）％,高于SCR组的（7.73±1.12）％,差异有统计学意义（P＜0.05）;shFHL2组感染96 h的G0／G1期细胞为（68.18±0.78）％,高于SCR组的（59.73±2.28）％,差异有统计学意义（P＜0.05）。干扰FHL2表达能够显著上调p53、p21和Bax的表达水平并能增强p53对Bax启动子的促转录活性。结论 沉默FHL2表达可明显抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖并促进细胞凋亡,使细胞阻滞于G0／G1期;FHL2介导了p53对Bax启动子的转录调节作用。FHL2可能会成为新的肿瘤治疗靶点,其机制与p53／Bax和p53／p21通路相关。     

微小RNA-126和微小RNA-7在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨微小RNA-126（miR-126）和微小RNA-7（miR-7）在食管鳞状细胞癌（ESCC）中的表达情况及其与ESCC临床病理特征、预后之间的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测116例ESCC组织和癌旁正常组织中miR-126和miR-7的表达差异,并对miR-126和miR-7表达情况与ESCC患者临床病理特征、预后的相关性进行统计学分析。结果miR-126不同程度低表达病例数为73（62．9％）,正常表达病例数为35（30．2％）,高表达病例数为8（6．9％）;miR-7不同程度低表达病例数为52（44．8％）,正常表达病例数为35（30．2％）,高表达病例数为29（25．0％）。miR-126和miR-7表达降低组无瘤生存期均较非降低组短（r=4．268,P〈0．05;x2=4．993,P〈0．05）;miR-126低表达与ESCC肿瘤位置、家族史和饮酒相关（Xz=14．564,P〈0．05,x2=5．691,P〈0．05;X2=4．971,P〈0．05）,与性别、年龄、分化程度、浸润程度、淋巴转移、吸烟不相关（均P〉0．05）;miR-7低表达与ESCC的临床病理特征均不相关（均P〉O．05）。结论miR-126和miR-7的低表达可能与ESCC患者预后相关,具有一定的临床检测意义。     

微小RNA-449在肿瘤中的作用及其调控机制

超过50％的微小RNA (miRNA)定位于肿瘤相关的基因组扩增区域或脆性位点,可具有癌基因或抑癌基因的功能.近年来研究显示,在人类胃癌、肺癌、卵巢癌等恶性肿瘤中miR-449表达降低,被认为是一个抑癌miRNA.miR-449表达异常可能与肿瘤的发生和发展过程密切相关,研究其功能及调控机制,可为肿瘤诊断、治疗和预后判断提供重要线索.     

微RNA-429调控人乳腺癌Bcap37细胞系的增殖和迁移能力

目的通过在人乳腺癌Bcap37细胞系中过表达miRNA-429,检测miRNA-429对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法用miRNA-429过表达慢病毒及无miRNA-429过表达作用的空白慢病毒分别感染人乳腺癌Bcap37细胞后,建立稳定转染细胞株作为实验组和对照组,利用实时PCR探针法检测两组miRNA-429的表达水平;运用MTT法检测miRNA-429对乳腺癌Bcap37细胞增殖的影响;利用划痕实验及Transwell细胞迁移实验检测miRNA-429对人乳腺癌Bcap37细胞迁移能力的影响。两组以上的数据采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验;两组数据采用t检验;具有多个时间点的组间比较采用重复测量资料的方差分析。结果感染miRNA-429过表达慢病毒后,实验组细胞株中的miRNA-429表达水平较之于对照组细胞株明显上调(2.88±0.02比1.00±0.05,t=10.33,P=0.009);过表达miRNA-429后,实验组细胞增殖能力较之于对照组增强(t=11.95,P=0.000),划痕实验和Transwell实验均显示实验组细胞的迁移能力较之于对照组明显增强[(605±23)个比(365±21)个,t=13.30,P=0.001]。结论过表达miRNA-429可显著增加人乳腺癌Bcap37细胞的增殖和迁移能力。     

白花丹素对骨肉瘤细胞系U2OS的作用及其机制

目的研究白花丹素对骨肉瘤细胞系U2OS的作用,并初步探讨其作用机制。方法用CCK-8法检测白花丹素对骨肉瘤细胞的促凋亡作用;用HOECHST 33342染色研究白花丹素对骨肉瘤细胞作用后的形态学变化;用Western blot法检测白花丹素作用后骨肉瘤细胞MDM2和p53蛋白表达情况。结果CCK-8结果显示白花丹素对骨肉瘤细胞有明显的抑制作用,而且呈浓度依赖性;HOECHST 33342染色结果显示白花丹素对骨肉瘤U2OS 细胞的抑制作用主要是通过促进凋亡来实现;Western blot结果显示白花丹素能够改变p53/MDM2基因表达比例。结论白花丹素通过细胞凋亡途径抑制骨肉瘤细胞系U2OS细胞的生长。     

微小RNA-296在肿瘤演进中的作用

肿瘤演进是一个多步骤、多因素参与的复杂过程.微小RNA-296(miR-296)在肿瘤演进中扮演重要角色,涉及肿瘤细胞的增殖、分化、血管新生、侵袭、迁移、凋亡以及耐药性等一系列过程.     

siRNA抑制骨肉瘤U2OS细胞系中SIRT6的表达及其生物学作用研究

背景与目的：sirtuin6(SIRT6)蛋白是对人体细胞生长、代谢调控及应激反应等具有重要作用的一种核蛋白,常在细胞核中发挥多种调控作用。但该蛋白在骨肉瘤中的作用还不清楚,本研究通过下调人骨肉瘤U2OS细胞系中SIRT6的表达,观察其对U2OS细胞的作用。方法：设计合成SIRT6的siRNA序列,通过Lipofectamine^TM2000转染U2OS细胞系,通过蛋白质印迹法（Western blot）检测SIRT6蛋白的表达情况,利用流式细胞术检测细胞凋亡,细胞计数试剂盒（cellcounting kit-8,CCK-8）法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,CCK-8法分析对紫杉醇的敏感性。结果：成功构建SIRT6 siRNA序列,Western blot检测转染后24、48和72 h的蛋白水平,实验组较对照组明显降低。流式细胞术检测细胞凋亡也显示实验组凋亡增加（P＜0.05）。Transwell法检测结果显示,实验组侵袭与迁移能力较对照组下降（P＜0.05）。CCK-8法检测细胞生长情况,可见经紫杉醇处理后实验组生长较对照组下降明显,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：下调骨肉瘤U2OS细胞中SIRT6的表达可以抑制骨肉瘤细胞侵袭,促进凋亡,并增强骨肉瘤细胞对紫杉醇的化疗敏感性。     

蟾酥水提取物抗骨肉瘤作用的体外研究

目的　探讨蟾酥水提取物对骨肉瘤细胞系U2 OS的生长抑制和诱导凋亡作用 ,及其作用的机制。方法　应用MTT法 ,测定蟾酥水提取物对U2 OS细胞株活性的影响 ,检测其抑制骨肉瘤细胞的时间效应和剂量效应 ;应用形态学观察、FCM ,测定蟾酥水提取物对U2 OS细胞的凋亡作用 ,并进行细胞周期的分析。结果　蟾酥水提取物对U2 OS细胞具有生长抑制及诱导凋亡作用 ,且呈时间依赖和剂量依赖。表现为细胞G0 /G1期阻滞、出现明显的凋亡峰 ;有核碎裂、染色体凝集 ,对U2 OS细胞的IC5 0值为 97 96±8 2 3 μg/ml(P <0 0 5 )。结论　蟾酥水提物对骨肉瘤U2 OS细胞株的增殖有凋亡和抑制作用     

蟾毒灵诱导骨肉瘤U-2OS和U-2OS/MTX300细胞系的凋亡

目的 研究蟾毒灵对人骨肉瘤细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 以不同浓度的蟾毒灵分别作用于骨肉瘤细胞U-2OS和甲氨蝶呤(MTX)耐药骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期,DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder凋亡条带,Western blot法检测凋亡相关蛋白p53、bax和bcl-2的表达.结果 蟾毒灵能明显抑制骨肉瘤细胞的增殖,其对U-2OS和U-2OS/MTX300细胞的IC50值分别为(8.49±2.1)ng/ml和(10.19±1.7)ng/ml(P＞0.05).蟾毒灵处理U2OS和U-2OS/MTX300细胞48 h后,细胞均出现明显的染色质凝集,有典型的凋亡小体产生.同时,蟾毒灵能诱导骨肉瘤细胞凋亡,其作用机制是通过阻滞细胞周期于G2/M期、上调p53、bax表达和下调bcl-2的表达来实现.结论 蟾毒灵能显著抑制人骨肉瘤细胞U-2OS和U-2OS/MTX300的生长,并诱导细胞凋亡,其抗骨肉瘤作用不受MTX耐药的影响.     

TRAIL增强低剂量阿霉素高效诱导人骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与阿霉素(ADM)联用是否存在协同性杀伤人骨肉瘤细胞的作用以及分子机制。方法TRAIL、ADM或两药联用24h,MTT法测试细胞毒作用,吖啶橙染色荧光显微镜和透射电镜下观察细胞及亚细胞结构形态,流式细胞术检测细胞凋亡比例。RT-PCR和Westernblot分别检测药物作用前后cFLIPmRNA和cFLIP蛋白的表达。结果(1)人骨肉瘤U2OS细胞对TRAIL不敏感,IC50>1mg/L。U2OS细胞对ADM相对敏感,存在剂量依赖性细胞毒效应。(2)TRAIL与ADM联用呈现高效协同作用,表现为亚毒性浓度TRAIL(0.1mg/L)与亚毒性浓度ADM(1.0μmol/L)联用可杀伤49.54%±2.79%的U2OS细胞。(3)流式细胞术、透射电镜及荧光显微镜观察证实,协同性杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现。(4)cFLIPmRNA和cFLIP蛋白的表达下调促进了药物协同诱导凋亡的发生。结论TRAIL与亚毒性浓度ADM联用表现出的高效杀灭肿瘤细胞作用主要由凋亡介导实现,cFLIPmRNA下调和cFLIP蛋白的表达减少可能参与这一过程。     

SMYD3在骨肉瘤U2OS细胞增殖和转移中的作用及其机制

目的:探究组蛋白甲基化酶SMYD3对骨肉瘤U2OS细胞增殖和侵袭的作用及其具体机制。方法:通过使用CRISPR-Cas9技术沉默U2OS细胞中的SMYD3基因;通过CCK-8技术检测SMYD3对于U2OS细胞增殖的影响;通过细胞Transwell实验观察SMYD3对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot实验检测EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）的蛋白水平变化。结果:SMYD3的表达下调可以抑制骨肉瘤U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭能力;同时Western Blot检测发现在骨肉瘤U2OS细胞中敲除SMYD3后E-cadherin的蛋白表达量上升,而N-cadherin和Vimentin的蛋白表达量下降。结论:SMYD3与骨肉瘤的发生、转移密切相关,有可能成为骨肉瘤潜在的生物标志物和治疗靶点。     

The proteome profile of the human osteosarcoma U2OS cell line

The human osteosarcoma U2OS cell line is one of the first generated cell lines and is used in various areas of biomedical research. Knowledge of its protein expression is limited and no comprehensive study on the proteome of this cell line has been reported to date. Proteomics technology was used in order to analyse the proteins of the U2OS cell line. Total protein extracts were separated by two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) and analysed by matrix-assisted laser desorption ionisation-mass spectrometry (MALDI-MS) and MALDI--MS-MS following in-gel digestion with trypsin and, finally, protein identification was carried out by peptide mass fingerprint (PMF) and post source decay (PSD), respectively. Approximately 3,000 spots were excised from two 2-DE gels and were analysed, resulting in the identification of 237 different gene products. The majority of the identified proteins were enzymes, regulatory proteins and RNA-associated proteins, while leukocyte markers and oncogenes were also present. Our findings include 11 protooncogenes (FKBP4, SRC8, PSD10, FUBP1, PARK7, NPM, PDIA1, OXRP, SET, TCTP and GRP75) related to the cancerous state of the U2OS cell line. The U2OS 2-DE database provides the basis for future protein studies.     

N端截短的视网膜母细胞瘤基因对人骨肉瘤细胞株SaOS-2生长的影响

目的研究N端截短的视网膜母细胞瘤基因(Rb^66)对骨肉瘤细胞Saos-2生长的影响。方法构建携带Rb^66cDNA片段的真核细胞表达载体pcDNA3-1-Rb，用脂质体LIPOFECTAMIME^TM2000将真核表达载体pcDNA3-1-Rb、空载体对照pcDNA3-1转染至SaOS-2细胞中。RT—PCR及免疫细胞化学检测转染后SaOS-2中Rb^66mRNA及蛋白的表达；观察细胞形态的改变；测定细胞倍增时间及生长曲线的改变；流式细胞仪检测对细胞周期的影响。结果成功地将N端截短的Rb^66cDNA导入骨肉瘤细胞SaOS-2中，并在mRNA及蛋白水平获得了表达。转染后的SaOS-2细胞胞浆展开，细胞核浆比例变小；Rb^66导入后，SaOS-2细胞生长减慢，群体倍增时间延长，细胞周期呈现G．期阻滞。结论Rb^66可通过阻止细胞G1→S期进展而抑制骨肉瘤细胞SaOS-2的增殖。     

反义c-myc重组腺病毒的构建及其抗骨肉瘤细胞的作用

背景与目的:c-myc原癌基因在细胞的增殖调节中发挥重要作用,研究表明c-myc在骨肉瘤中常常扩增和过表达,而且具有促进细胞转化和诱导转移的特性。本文构建表达反义c-myc的重组腺病毒,并探讨其对不同p53基因型的骨肉瘤细胞系MG-63(P53缺失型)、U2OS(p53野生型)的影响。方法:应用基因重组技术构建表达反义c-myc的重组腺病毒(Ad-As-c-myc),并在体外转染MG-63、U2OS细胞,采用蛋白免疫印迹(Westernblot)、吖啶橙染色、RT-PCR、流式细胞仪(FCM)等方法检测或观察其对细胞c-mycmRNA表达、瘤细胞体外增殖、凋亡及细胞周期的影响。结果:成功构建Ad-As-c-myc,滴度可达2×109pfu/ml,体外转染MG-63、U2OS细胞后可明显抑制细胞的体外增殖,而且对携带野生型p53的U2OS更敏感。Ad-As-c-myc转染48h后可降低c-mycmRNA表达。吖啶橙染色及FCM检测证实,转染Ad-As-c-myc可诱导骨肉瘤细胞凋亡,细胞周期分析显示转染Ad-As-c-myc的MG-63细胞出现G2/M期阻滞,而U2OS细胞出现G1期阻滞。结论:腺病毒介导反义的c-myc能以p53依赖或非依赖性途径诱导骨肉瘤细胞凋亡,并抑制骨肉瘤细胞的增殖。