表皮生长因子促进肺癌细胞在直流电场中定向移行的实验研究

目的:研究表皮生长因子(EGF)对人肺癌细胞系A549细胞在体外直流电场中定向移行的促进作用.方法:按A549肺癌细胞是否暴露于直流电场及是否给予EGF分为A、B、C、D 4组.显微摄像系统每15min连续记录2h内细胞移行的变化图像,测量细胞移行距离及细胞移行方向与电场方向问夹角cosine γ值,Image-Pro Plus 5.0软件处理结果;Western blot检测各组细胞中p-Akt及p-Stat3的表达量.结果:未暴露于直流电场中的A、B组细胞无序随意的布朗运动,暴露于直流电场中的C、D组细胞在观察期间呈现向阴极方向定向移行,D组细胞的定向移行cosine γ值最大0.83±0.03,P<0.05;2h后D组细胞定向移行距离更大(63±16.9)μm, P<0.05.Western blot检测提示电场及EGF均促进p-Akt及p-Stat3的表达,电场及EGF共同作用组其表达最强.结论:体外直流电场可诱导人肺癌细胞系A549细胞朝向阴极的定向移行,EGF可以促进这种定向移行,肺癌细胞在直流电场中定向移行可能与Akt及Stat通路有关.     

肺癌A549细胞在直流电场中定向移行的研究

目的:观察体外直流电场对人肺癌细胞系A549细胞的定向移行作用.方法:实验组将A549肺癌细胞暴露于强度分别为2V/cm、4V/cm、6V/cm及8V/cm的直流电场中,未暴露于电场的A549肺癌细胞作为对照.观察记录每5min该细胞移行的方向和变化,测量其移行的移行轨迹总长度、位移距离、速率及方向共3h.数据结果用SAS8.0及Image-Pro Plus5.0软件处理.结果:未暴露于直流电场中的A549细胞在观察期间无明显移动,3h后细胞形态未见明显改变.而暴露于不同强度电场中的各组细胞则呈现有规律的两种变化:大部分细胞长轴趋向垂直于场线方向排列;细胞向阴极方向定向运动,且这种运动速度随电场增大而加快(P＜0.05),细胞移行的方向系数(cosγ)随暴露时间的延长而增大(P＜0.05).结论:体外直流电场可诱导人肺癌细胞系A549细胞朝向阴极定向移行,此作用与电场强度有关,长时问暴露于电场中其移行速率与时间无关.     

直流电场对肺癌细胞移行及Integrin β1的影响

背景与目的目前关于直流电场对细胞影响已引起广泛关注,并认为癌症的转移及转移能力可能与趋电性有关。本研究探讨肺癌A549细胞在体外直流电场中的趋电移行,及直流电场对Integrinβ1及其信号通路的影响。方法按A549细胞是否暴露于5V/cm直流电场及暴露时间分为A,B,C,D4组,显微摄像系统每5min连续记录各组细胞移行的变化图像,观察细胞在直流电场中的移行趋势;细胞免疫荧光法观察4组细胞内Integrinβ1位置的变化,Westernblot检测各组细胞中Integrinβ1下游的p-FAK及p-ERK的表达量变化。结果暴露于直流电场中的细胞胞体形态由扁平形逐渐转变为垂直于电场的纺锤形,观察期间细胞呈现朝阴极定向移行,而未暴露于直流电场的细胞则未发生胞体形态改变及定向移行运动。细胞免疫荧光示在直流电场中A549细胞膜表面上的Integrinβ1向阴极方向边集,Westernblot结果显示Integrinβ1下游信号转导通路中p-FAK及p-ERK的表达量增多。结论人肺癌细胞系A549细胞具有趋电性,体外直流电场可诱导其朝阴极定向移行,Integrinβ1在电场中定向重排并激活其通路下游转导信号可能在肺癌细胞趋电移行中起关键作用。     

生理范围直流电场对肺癌细胞凋亡及细胞周期影响的观察

目的:研究生理范围直流电场对人肺腺癌细胞系A549细胞的凋亡及细胞周期的影响。方法:按A549肺癌细胞是否暴露于1.5 V/cm直流电场及暴露时间分为A,B,C 3组,A组为未暴露电场的对照组,B组暴露于电场12 h,C组暴露于电场24 h。Hochest33258荧光染色及流式细胞仪检测各组细胞凋亡值及凋亡比率。流式细胞仪检测各组细胞周期,Western blot检测各组细胞中ERK、AKT及两者矿磷酸化水平pERK、pAKT的量,同时检测各组细胞中细胞周期蛋白Cyclin D1与Cyclin E,细胞周期抑制蛋白p21与p27的表达量。结果:荧光染色结果显示A、B、C 3组凋亡细胞比率分别为0.89%、1.15%及0.98%,差异无统计学意义,P>0.05。流式细胞结果显示A、B、C 3组凋亡细胞比率分别为1.06%、1.18%及0.92%,差异无统计学意义,P>0.05;与A组细胞相比,B、C 2组细胞周期S期和G2期的比例升高明显B组两者和升高9.72%,C组升高20.08%。Western blot检测提示电场促进ERK与AKT蛋白磷酸化水平,同时促进细胞周期蛋白Cyclin D1与CyclinE的表达,抑制了细胞周期抑制蛋白p21与p27的表达。结论:肺癌A549细胞暴露于1.5 V/cm大小的体外直流电场后,凋亡比率无变化,细胞周期明显改变,且细胞增生更为活跃,此变化可能是由于电场激活了ERK与AKT信号通路,从而影响细胞周期相关蛋白有关。     

脑胶质瘤诊疗进展

尽管目前脑胶质瘤的诊断随着WHO诊断指南的更新在不断改变,但是目前的治疗方法依然以手术治疗为主、辅以放疗和化疗。高级别脑胶质瘤的治疗效果仍不如人意,如何改善患者预后是目前医学探索脑胶质瘤领域的重点问题。目前脑胶质瘤的诊疗研究涌现出许多新思路、新方法,其中以电场治疗为代表的一部分临床试验取得了较好的效果,此外,免疫治疗领域和靶向治疗领域也有了一定的进展。本文旨在分享、探讨这些新方法,总结脑胶质瘤诊疗进展。     

端粒酶反义寡核苷酸及顺铂对恶性脑胶质瘤治疗的协同作用

目的观察端粒酶反义寡核苷酸(ODN)及顺铂对恶性脑胶质瘤治疗的协同作用.方法用15例Ⅲ、Ⅳ级端粒酶活性阳性表达的脑恶性胶质瘤制备单细胞悬液并原代培养,以5μmol/L端粒酶反义ODN抑制恶性胶质瘤细胞端粒酶活性后,用不同浓度顺铂处理细胞.流式细胞仪检测处理前后胶质瘤细胞PCNA、TUNEL阳性百分率变化情况.结果端粒酶反义ODN作用于恶性胶质瘤细胞72h后,TRAP法检测端粒酶活性转为阴性,此时0.3μg/mL顺铂即可对胶质瘤细胞有明显抑制增殖、促进凋亡作用.结论端粒酶反义ODN能抑制端粒酶活性,增加恶性胶质瘤细胞对顺铂的敏感性,与顺铂在治疗恶性胶质瘤细胞过程中有协同作用.     

巨噬细胞/小胶质细胞在胶质瘤微环境中的研究进展

胶质瘤作为最常见的中枢神经系统肿瘤,经手术、放疗及化疗等综合方案治疗后,患者预后仍然欠佳。肿瘤的发生发展、侵袭和治疗抵抗等与肿瘤微环境中的免疫浸润细胞关系密切。巨噬细胞/小胶质细胞是胶质瘤微环境中主要的免疫浸润细胞,近年来对其研究取得了很大的进展,为胶质瘤的治疗提供了新的思路。本文对巨噬细胞/小胶质细胞在胶质瘤微环境中的研究进展进行综述。     

肿瘤代谢在胶质瘤诊治中的研究进展

胶质瘤是一种异质性的中枢神经系统肿瘤,尽管包括手术、放化疗以及电场治疗在内的综合手段已经取得了极大的进步,但患者的预后仍然极差。代谢重编程是肿瘤细胞的标志之一,在胶质瘤中,异柠檬酸脱氢酶1的突变已经成为肿瘤分类的依据,同时在肿瘤细胞内存在明显的糖、脂质、氨基酸等代谢异常。此外。利用肿瘤代谢的诊断成像及治疗已经开始改善患者的预后。对胶质瘤的代谢重编程的研究进展进行综述,说明驱动胶质瘤发生发展的代谢变化,并对代谢在诊断及治疗的进展进行总结,以期为胶质瘤的诊断、治疗和预后提供帮助。     

胶质瘤干细胞及其相关信号通路的研究进展

胶质瘤是颅内常见的原发肿瘤,高级别的胶质瘤治疗效果不佳,对放化疗抵抗.目前认为在胶质瘤组织中存在着胶质瘤干细胞,此种细胞具有自我更新和分化的能力,是高级别胶质瘤放化疗失败的主要原因,针对胶质瘤干细胞的靶向治疗可能相对于传统放化疗能更好地改善高级别胶质瘤的预后.一些新的治疗手段通过作用于胶质瘤干细胞信号通路可靶向治疗胶质瘤.     

人类胶质瘤的免疫生物学

胶质瘤是人类最常见的中枢神经系统原发性肿瘤,主要来自星形细胞,也可来自少突胶质细胞和室管膜细胞,尽管采用了包括外科手术、放疗、化疗和免疫疗法的综合治疗,但在过去20年中,胶质瘤患者的存活率几无提高。就恶性度最高的多形性成胶质细胞瘤而言,即使采用综合疗法,平均生存时间也只有11个月,几与30年前相同。疗效不佳的原因,除药物质量、手术彻底程度等因素外,胶质瘤细胞的低免疫原性、胶质瘤细胞的异质性、胶质瘤患者免疫功能低下等免疫生物学性质亦起着决定性作用。因此,要对胶质瘤的治疗手段作进一步的设想和改进,应考虑胶质瘤细胞的免疫生物学特性。     

肿瘤电场治疗原理及疗效影响因素研究进展

随着交流电场在医学领域的研究和应用逐步深入, 研究人员发现低强度和中频交变电场对肿瘤具有良好的治疗作用, 此类治疗方法被称为肿瘤电场治疗(tumor-treating fields, TTFields)。研究表明TTFields的直接作用机制包括干扰微管和隔膜蛋白的形成与定位, 形成介电电泳导致细胞结构破坏, 间接作用包括抑制肿瘤细胞的迁移、侵袭和肿瘤血管的生成, 影响肿瘤免疫微环境、细胞膜的通透性和抑制DNA修复等。同时影响TTFields效果的相关因素有很多, 如电场频率、强度、作用时间和交变电场的方向以及治疗对象的解剖结构等。本文就TTFields的作用原理及影响疗效的相关因素进行综述, 以期为临床诊治提供参考。      

Recurrent Malignant Gliomas

In almost all patients, malignant glioma recurs following initial treatment with maximal safe resection, conformal radiotherapy, and temozolomide. This review describes the many options for treatment of recurrent malignant gliomas, including reoperation, alternating electric field therapy, chemotherapy, stereotactic radiotherapy or radiosurgery, or some combination of these modalities, presenting the evidence for each approach. No standard of care has been established, though the antiangiogenic agent, bevacizumab; stereotactic radiotherapy or radiosurgery; and, perhaps, combined treatment with these 2 modalities appear to offer modest benefits over other approaches. Clearly, randomized trials of these options would be advantageous, and novel, more efficacious approaches are urgently needed.     

Intracellular Hyperthermia for Cancer Using Magnetite Cationic Liposomes: Ex vivo Study

Heating properties of magnetite cationic liposomes (MCL) were investigated in ex vivo experiments using implanted cell pellets. The cell pellets, which consisted of rat glioma T9 cells into which MCL had been incorporated in a petri dish, were implanted subcntaneously in the left femoral region of female F344 rats. The rats were placed in a magnetic field generating coil and irradiated with an alternating magnetic field (384 Oe, 118 kHz) for 60 min. The cell pellets were heated to over 43°C by MCL in the magnetic field, hut other body parts of the rats were not heated. After 3 cycles of magnetic heating, all glioma cells were killed and no tumor take was observed.     

Antitumor Immunity Induction by Intracellular Hyperthermia Using Magnetite Cationic Liposomes

Induction of antitumor immunity to T-9 rat glioma by intracellular hyperthermia using functional magnetic particles was investigated. Magnetite cationic liposomes (MCLs), which have a positive surface charge, were used as heating mediators for intracellular hyperthermia. Solid T-9 glioma tissues were formed subcutaneously on both femurs of female F344 rats, and MCLs were injected via a needle only into the left solid tumors (treatment side). The rats were then divided into two groups, which received no irradiation, or irradiation for 30 min given three times at 24-h intervals with an alternating magnetic field (118 kHz, 384 Oe). On the treatment side, the tumor tissue disappeared completely in many rats exposed to the magnetic field. The tumor tissue on the opposite side also disappeared completely, even though MCLs were not injected into the right solid tumors. To examine whether a long-lasting and tumor-specific immunity could be generated, the rats that had been cured by the hyperthermia treatment were rechallenged with T-9 cells 3 months later. After a period of transient growth, all tumors disappeared. Furthermore, immuno-cytochemical assay revealed that the immune response induced by the hyperthermia treatment was mediated by both CD8⁺ and CD4⁺ T cells and accompanied by a marked augmentation of tumor-selective cytotoxic T lymphocyte activity. These results suggest that our magnetic particles are potentially effective tools for hyperthermic treatment of solid tumors, because in addition to killing of the tumor cells by heat, a host immune response is induced.     

热疗在胶质瘤治疗中的研究进展

胶质瘤是很常见的恶性脑肿瘤,目前主要治疗方法包括手术、放疗与化疗,但患者生存率较低、预后较差。上述方法的一些局限性促使人们寻找更有效、更安全的治疗方法。热疗是一种局部或全身加热,利用高温杀灭肿瘤细胞,从而达到治疗效果的方法。在胶质瘤治疗中有着如创伤性小、精确性高等优点,与放化疗联用可以改善预后。目前已作为一种具有极大潜在优势的胶质瘤治疗手段。本文主要介绍应用于胶质瘤治疗的热疗方法,热疗在胶质瘤治疗中的应用前景与应用现状,以及研究相对成熟且已上市的、可应用于胶质瘤热疗的设备及操作方法。     

Glioma stem cells: evidence and limitation

Gliomas, in particular the high-grade anaplastic glioma and glioblastoma multiforme (GBM), are manifested by morphological, genetic and phenotypic heterogeneity. Most of the studies hitherto have been performed on bulk glioma cells, with limited understanding on the origin and the relative contribution of particular glioma cell populations to glioma growth and progression. Recent studies have demonstrated the existence of a small fraction of glioma cells endowed with features of primitive neural progenitor cells and tumor-initiating function. Such cells have been defined as glioma stem cells. However, questions remain as to whether the currently identified glioma stem cells are the cell-of-origin for glioma initiation and progression, or the results of such processes. In this review, we discuss the current evidence and limitation in identifying glioma stem cells and the potential origin of glioma stem cells in the context of post-natal neural cell regeneration and their transformation mechanisms. The implication of these findings for glioma diagnosis and treatment will also be reviewed.     

电场治疗肿瘤的生物学机制研究进展

电场因其热效应和非热效应而产生特殊的生物学效应,热效应主要指电场射频热疗和微波热疗技术,非热效应主要指交变电场和脉冲电场,这几种形式的电场在肿瘤治疗中发挥着重要的作用.     

中频交变微电流联合替莫唑胺对U251细胞的影响

目的:研究中频交变微电流(ACIF)联合替莫唑胺(TMZ)对胶质瘤U251细胞的作用。方法:将对数生长期的U251细胞分别暴露于ACIF组、TMZ组、联合组（ACIF+TMZ）作用下,采用CCK-8法检测细胞存活率,并运用流式细胞技术分析各组细胞的凋亡/死亡和细胞周期状态。结果:本实验将ACIF（50 kHz,150 mA,30 min）作用U251细胞后,细胞存活率为(86.49±0.23)% (P＜0.01),联合TMZ（IC50）干预后,细胞存活率为（33.28±1.67）%(P＜0.01);ACIF联合TMZ能够增加细胞凋亡率,阻滞细胞于G2/M期。结论:ACIF对U251细胞的增殖有一定的抑制作用,与TMZ联合应用时能表现出协同抗肿瘤作用。     

C6胶质瘤细胞培养上清诱导神经干细胞迁移的初步研究

背景与目的:研究发现胶质瘤细胞中存在着诱导神经干细胞迁移的物质,本实验旨在观察体外培养的胶质瘤细胞在体外能否引起神经干细胞的迁移,从而为研究胶质瘤细胞中存在促进神经干细胞迁移的物质打下基础;并进一步分离、纯化该物质。方法:分别培养神经干细胞、星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞。以星形胶质细胞为对照,做细胞迁移实验,观察其结果;将C6胶质瘤细胞、星形胶质细胞的无血清培养上清分别浓缩,并行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,观察其结果;转膜,测序,初步测定这种能诱导神经干细胞迁移的信号物质。结果:(1)C6胶质瘤细胞的培养上清引起神经干细胞迁移的数目明显多于星形胶质细胞的培养上清和新鲜无血清培养基(P<0.05)。(2)将无血清培养的等浓度的C6胶质瘤细胞、星形胶质细胞的上清浓缩蛋白进行SDS-PAGE,可见二者蛋白条带存在明显差异。结论:(1)从新生大鼠大脑皮层组织可以培养出神经干细胞和星形胶质细胞。(2)C6胶质瘤细胞无血清培养的上清中存在着能够诱导神经干细胞迁移的物质。