补肾活血方中5种黄酮类成分的体外抗炎活性

目的:观察补肾活血方中槲皮素、儿茶素、淫羊藿次苷II、金丝桃苷、淫羊藿苷等5种黄酮类成分对肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)及一氧化氮(NO)等炎症介质释放浓度的影响作用,探讨复方治疗骨关节炎的初步机制。方法:采取LC-MS技术进行定性分析,选取补肾活血方水提液中存在的具有潜在治疗骨关节炎活性的槲皮素等5种黄酮类化合物(槲皮素、儿茶素、淫羊藿次苷Ⅱ、金丝桃苷、淫羊霍苷),采用体外脂多糖(LPS)刺激的RAW 264.74小鼠巨噬细胞为模型,随机分为空白组,模型组,槲皮素低、高剂量组(20,100 mg·L-1),儿茶素低、高剂量组(20,100 mg·L-1),淫羊藿次苷Ⅱ低、高剂量组(20,100 mg·L-1),金丝桃苷低、高剂量组(20,100 mg·L-1),淫羊藿苷低、高剂量组(20,100 mg·L-1),利用酶联免疫法(ELISA)测定细胞释放TNF-α,IL-6及NO的抑制作用。结果:结合LC-MS分析,确定补肾活血方水提液中确实存在槲皮素、儿茶素、淫羊藿次苷Ⅱ、金丝桃苷以及淫羊藿苷等黄酮类化合物。与空白组比较,模型组TNF-α,IL-6,NO含量明显升高(P0.01);与模型组比较,槲皮素与淫羊藿苷在100 mg·L-1,以及淫羊藿次苷II在20,100 mg·L-1对TNF-α的释放具有显著的抑制作用(P0.01),儿茶素与淫羊藿次苷II在100 mg·L-1,槲皮素与淫羊藿苷在20,100 mg·L-1均对IL-6水平具有显著的抑制(P0.01),金丝桃苷在100 mg·L-1,槲皮素、儿茶素、淫羊藿次苷II以及淫羊藿苷在20,100 mg·L-1均对NO的释放具有显著抑制(P0.01)。结论:补肾活血方的治疗骨关节炎活性可能是通过抑制炎症介质释放,降低TNF-α,IL-6,NO等含量发挥作用,这对验证复方药效活性,探究效应物质基础具有重要意义。     

祖师麻质量控制研究

祖师麻为民间常用中草药,收载于1977年版<中国药典>,为瑞香科植物黄瑞香Daphne giraldii Nitsche.、甘肃瑞香Daphne tangutica Maxim.或凹叶瑞香Daphne retusa Hemsl.的干燥茎皮及根皮.临床用于治疗风湿痹痛,关节炎,类风湿性关节炎痛等.但目前对祖师麻的质量标准研究较少,尚缺乏系统的研究.为了进一步完善其质量标准,保证用药安全有效,本实验以祖师麻有效成分祖师麻甲素(Daphnetin)和祖师麻对照药材为对照,建立了祖师麻的薄层色谱鉴别方法,同时建立了祖师麻中祖师麻甲素的HPLC含量测定法.     

补肾活血方有效组分及部分化合物的体外抗炎活性研究

目的:观察补肾活血方水提取部位、醇提取部位、总多糖部位以及大黄酸、大黄酚等有效组分与化合物对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及一氧化氮(NO)等炎症介质释放浓度的影响作用,探讨复方治疗骨关节炎的初步机制。方法:选取补肾活血方不同提取分离部位,以及复方水提液中存在的具有潜在治疗骨关节炎活性的大黄酸、大黄酚化合物,采用体外脂多糖(LPS)刺激的RAW264.74小鼠巨噬细胞为模型,利用酶联免疫法(ELISA)测定试药对模型细胞释放TNF-α、IL-6及NO的抑制作用。结果:复方水提取部位与醇提取部位在100μg/ml,以及大黄酚在20μg/ml和100μg/ml对TNF-α的释放具有显著的抑制;复方醇提取部位在100μg/ml,大黄酸在20μg/ml,以及大黄酚在20μg/ml和100μg/ml对IL-6水平具有显著的抑制;复方水提取部位在100μg/ml、醇提取部位在20μg/ml和100μg/ml、大黄酸在20μg/ml,以及大黄酚在20μg/ml和100μg/ml对NO的释放具有显著抑制。结论:补肾活血方的治疗骨关节炎活性可能是通过抑制炎症介质释放,降低TNF-α、IL-6、NO等含量发挥作用,这对验证复方药效活性,探究效应物质基础具有重要意义。     

祖师麻化学和药理活性研究进展

目的 :对中药祖师麻的有效成分和药理作用进行综述。方法 :查阅近 30年有关文献。结果 :中药祖师麻主要含有香豆素类、二萜类、木质素类、黄酮类、蒽醌类等化合物 ;药理研究证明其具有镇痛、抗炎、抑菌、抗血栓、抗肿瘤和抗生育等作用。结论 :中药祖师麻具有广泛的药理活性 ,且我国植物资源非常丰富 ,对其进行进一步的研究和开发具有重要意义。     

祖师麻中的双黄酮类成分研究

目的 分离并鉴定祖师麻Daphne giraldii中的黄酮类化合物。方法 利用硅胶柱色谱和Sephadex LH-20凝胶色谱分离双黄酮类成分，用核磁和质谱等谱学方法确定化合物的结构。结果 分离并鉴定了4个双黄酮类化合物daphnodorins A-D1(Ⅰ-Ⅳ）。结论 首次从祖麻中得到化合物daphnodorins A-D1，这类结构的黄酮化合物目前仅发现于该属植物。     

祖师麻醋酸乙酯提取物体外抗炎作用及其机制

目的研究祖师麻醋酸乙酯提取物(EAEDGC)的体外抗炎作用及其机制。方法用γ-干扰素(IFN-γ)和脂多糖(LPS)协同制备小鼠RAW264.7细胞炎症模型,Griess反应测定细胞上清液中NO生成量,MTT法测定细胞活力,三价铁还原抗氧化能力测试(FRAP assay)测定细胞总抗氧化能力,RT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达;Western blotting检测iNOS、COX-2、HO-1、p-ERK蛋白表达水平。结果 EAEDGC以剂量依赖方式抑制细胞上清液中NO的生成,提高细胞总抗氧化能力,下调iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA及iNOS、p-ERK蛋白的表达,上调HO-1 mRNA和蛋白表达,同时不影响细胞生长;但对COX-2 mRNA和蛋白表达影响不大。结论 EAEDGC部分通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)中的细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路抑制iNOS基因和蛋白的表达,从而抑制NO的生成,提高细胞总抗氧化能力,同时下调IL-1β、IL-6、TNF-α炎症介质和上调抗炎介质HO-1的表达,进而发挥抗炎作用。     

祖师麻膏药质量标准的提高研究

目的提高祖师麻膏药的质量标准。方法采用薄层色谱法对祖师麻膏药中祖师麻甲素和7-羟基香豆素进行定性鉴别。采用高效液相色谱法对祖师麻膏药中祖师麻甲素和7-羟基香豆素进行含量测定,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(15∶85,V/V),流速为1 m L/min,检测波长为327 nm,柱温为30℃。结果样品中检出祖师麻甲素和7-羟基香豆素的特征斑点,图谱斑点清晰、专属性强,阴性对照无干扰。祖师麻甲素和7-羟基香豆素分别在0.180~1.800μg和0.100~1.00μg范围内与其峰面积呈良好线性关系(r=0.999 1,r=0.999 2),平均加样回收率分别为98.99%、101.48%,RSD分别为1.43%、1.32%(n=9)。结论所建立的提高标准方法简便准确,专属性强,可用于该制剂的质量控制。     

高效液相色谱法测定祖师麻胶囊中祖师麻甲素的含量

目的建立祖师麻胶囊质量标准。方法高效液相色谱(HPLC)法。Krom asil-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相:甲醇-0.5%醋酸溶液(32∶68),流速0.5m.lm in-1,检测波长327 nm。结果祖师麻甲素在0.0353 0~0.423 6μg间呈很好的线性关系,r=0.999 9,回收率为101.75%,RSD=2.21%。结论该法操作简便,准确,可作为该制剂的含量测定方法。     

HPLC法测定祖师麻药材中祖师麻甲素的含量

目的:建立高效液相色谱法测定祖师麻药材中祖师麻甲素的含量。方法:采用高效液相色谱法测定。ODS色谱柱(250mm×4.6mm),流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(22:78),流速为1mL·min-1,检测波长为327nm。结果线性回归方程Y=3611300x-2049,r=0.9999,线性范围为:0.115～0.920μg,平均回收率为98.61%,RSD为1.9%。结论:采用高效液相色谱法测定祖师麻药材中祖师麻甲素的含量,操作简便,结果准确。     

不同透皮促进剂对祖师麻体外透皮吸收的影响

目的研究不同促渗剂对祖师麻体外透皮促渗作用的影响。方法采用ZTY智能透皮试验仪,以离体雄性大鼠腹部皮肤为模型,通过高效液相色谱法测定接受液中祖师麻甲素和7-羟基香豆素的量,计算不同时段药物的累积渗透量和渗透速率。结果 4%冰片、4%油酸、5%氮酮、1%⁵%丙二醇、1∶15%丙二醇、1∶1¹∶4氮酮-丙二醇均能促进祖师麻有效成分的吸收,其中氮酮和丙二醇促渗效果明显;采用4%氮酮时促渗效果最佳。结论可选择4%氮酮作为祖师麻经皮给药制剂的最佳透皮吸收促进剂。     

紫芫花化学成分研究

 目的 研究瑞香科植物紫芫花(Daphne genkwa Sieb.et Zucc.)干燥花蕾的化学成分。方法 对紫芫花的体积分数95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位采用硅胶、凝胶Sephadex LH-20等色谱手段进行化学成分的分离纯化,通过理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果 分离得到12个化合物,鉴定了其中10个化合物,分别为芹菜素(apigenin, 1)、芫花素(genkwanin, 2)、刺槐素(4′-O-methylapigenin, 3)、椴苷[kaempferol,3-O-β-D-(6-O-trans-p-coumaroyl)- glucopyranoside,4]、对羟基苯甲醛(4-hydroxybenzaldehyde, 5)、对羟基桂皮酸甲酯(trans-p-hydroxy cinnamic methyl ester, 6)、对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid, 7)、对羟基桂皮酸(p-hydroxy cinnamic acid, 8)、苄基葡萄糖苷（benzyl-glucopyranoside, 9）和苯乙基葡萄糖苷（phenylethyl-glucopyranoside,10）。结论 化合物5~10为首次从该植物中分离得到。     

Calcarea carbonica treatment rescues lipopolysaccharide-induced inflammatory response in human mononuclear cells via downregulation of inducible cyclooxygenase pathway

ObjectiveProlonged use of nonsteroidal anti-inflammatory drugs is associated with severe side effects and toxicity. Therefore, we studied the anti-inflammatory role of Calcarea carbonica which had minimal toxicity at the low doses.MethodsTHP-1 human mononuclear cells were treated with C. carbonica to evaluate the 50% cytotoxicity concentration (CC₅₀) and 50% effective concentration (EC₅₀). Cell survival was evaluated in lipopolysaccharide-stimulated C. carbonica-treated cells. Nitric oxide (NO) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) were measured to evaluate the anti-inflammatory activity of C. carbonica. Cyclooxygenase-2 (COX-2) protein expression was determined by Western blotting analysis, and the interaction of C. carbonica with the COX-2 protein was evaluated using molecular docking simulation.ResultsThe CC₅₀ and EC₅₀ of C. carbonica were found to be 43.26 and 11.99 µg/mL, respectively. The cell survival assay showed a 1.192-fold (P = 0.0129), 1.443-fold (P = 0.0009) and 1.605-fold (P = 0.0004) increase in cell survival at 24, 48 and 72 h after initiating C. carbonica treatment, respectively. C. carbonica-treated cells showed a reduction in NO levels by 2.355 folds (P = 0.0001), 2.181 folds (P = 0.0001) and 2.071 folds (P = 0.0001) at 24, 48 and 72 h, respectively. The treated cells also showed a reduction in TNF-α levels by 1.395 folds (P = 0.0013), 1.541 folds (P = 0.0005) and 1.550 folds (P = 0.0005) at 24, 48 and 72 h, respectively. In addition, a 1.193-fold reduction (P = 0.0126) in COX-2 protein expression was found in C. carbonica-treated cells. The molecular docking showed interaction of C. carbonica with the phenylalanine 367 residue present in active site of Cox-2.ConclusionC. carbonica exhibited anti-inflammatory properties in lipopolysaccharide-stimulated cells by significantly reducing NO production and TNF-α level through downregulation of the COX-2 protein. This effect is probably mediated through interaction of C. carbonica with the phenylalanine 367 residue present in active site of Cox-2.     

芫花枝条木脂素化学成分研究

目的：研究芫花枝条中木脂素类化学成分。方法：采用硅胶、凝胶、反相硅胶、制备薄层色谱等方法对芫花枝条中的木脂素类成分进行分离纯化,通过谱学分析技术进行化合物结构鉴定。结果：分离鉴定了8个木脂素类化合物,分别鉴定为：芝麻脂素（1）、紫丁香树脂酚（2）、落叶松脂醇（3）、左旋松脂醇（4）、荛花酚（5）、salicifoliol（6）、vladinol D（7）、异落叶松脂醇（8）。结论：化合物8为首次从芫花枝条中分离得到,化合物1、5、6、7为首次从瑞香科植物中分离得到。     

祖师麻抗类风湿性关节炎有效部位的药效学研究

目的 研究祖师麻抗类风湿性关节炎的有效部位.方法 采用系统溶剂提取法对祖师麻进行提取、分离得到不同部位的提取物.以抗炎镇痛、刺激性等为指标,通过动物实验确定了祖师麻治疗类风湿性关节炎的有效部位及不良反应的部位.结果 乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物为祖师麻抗类风湿关节炎的有效部位,刺激性主要来源于石油醚部位.结论 初步确定...     

泻心汤有效组分及其配伍配比对大鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响

目的:观察泻心汤有效组分对巨噬细胞释放NO的影响,并对有效组分进行最佳配伍配比研究。方法:采用MTT法观察有效组分对巨噬细胞生长的影响,采用G riess法观察有效组分及其配伍配比对LPS诱导巨噬细胞产生NO的影响。结果:各组分在0.01~0.1 mg/ml剂量能明显抑制NO分泌,在LPS刺激细胞前1 h加入有效组分对NO的抑制作用弱于同时加药和LPS刺激后1 h加药;有效组分配伍后对NO分泌的抑制作用增强。结论:有效组分及其配伍配比均能抑制LPS诱导的巨噬细胞释放NO,且有效组分配伍后具有协同增效的特点。     

芫花总黄酮的抗炎机制研究

目的研究芫花总黄酮（TFDG）对脂多糖（LPS）协同干扰素γ（IFN-γ）诱导鼠RAW264.7巨噬细胞炎症模型中亚硝酸盐含量、诱导型合酶和细胞因子表达的影响,并从ERK/MAPK通路探讨其抗炎机制。方法细胞随机分为芫花总黄酮处理组,阳性药物组（I-NIL50μM）、炎症模型组和正常对照组;Griess反应测定TFDG25、50、100mg/L3个剂量和预刺激、同时加入、预处理3个处理时间及I-NIL对激活细胞上清液中亚硝酸盐的影响,并测定TFDG3个剂量及I-NIL对静息细胞上清液中亚硝酸盐产量的影响;MTT法测定TFDG3个剂量和I-NIL分别对激活细胞和静息细胞的细胞活力的影响;RT-PCR检测TFDG50、100mg/L预处理1h对激活细胞中诱导型合酶iNOS、COX-2、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达的影响;Western blot检测TFDG50、100mg/L预处理1h对激活细胞中诱导型合酶iNOS、COX-2和p-ERK蛋白表达的影响。结果模型组中一氧化氮（NO）产物亚硝酸盐含量、诱导型合酶iNOS和COX-2基因和蛋白表达,细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达,ERK蛋白磷酸化水平均明显高于正常对照组（P〈0.01,P〈0.05）,细胞活力显著下降（P〈0.01）;TFDG呈剂量和时间依赖性抑制激活细胞上清液中亚硝酸盐含量（P〈0.01）,提高炎症损伤的细胞活力（P〈0.01）;TFDG对静息细胞上清液中亚硝酸盐含量无影响,无细胞毒性且于100mg/L剂量促进细胞增殖（P〈0.05）。阳性药物I-NIL于50μM剂量的抑制率为35.20%（P〈0.01）,提高炎症损伤后的细胞活力（P〈0.01）,但对静息细胞呈细胞毒性（P〈0.05）。与模型组比较,芫花总黄酮下调iNOS基因和蛋白表达（P〈0.01,P〈0.05）,抑制COX-2基因表达（P〈0.01）,对COX-2蛋白表达仅在高剂量100mg/L具抑制效果（P〈0.01）;下调细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的基因表达（P〈0.01）,同时能抑制ERK蛋白的磷酸化水平（P〈0.05）。结论芫花总黄酮抑制激活细胞中iNOS基因和蛋白的表达从而降低NO稳定产物亚硝酸盐的产量,抑制COX-2基因和蛋白的表达,同时抑制细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的基因表达,部分机制为抑制ERK/MAPK信号通路中ERK蛋白磷酸化而达到多靶点抗炎效果。     

Isolation of flavonoids, a biscoumarin and an amide from the flower buds of Daphne genkwa and the evaluation of their anti-complement activity

As part of an ongoing study aimed at identifying the anti-complement active compound from the flower buds of Daphne genkwa, ten flavonoids, one biscoumarin and one amide were isolated. Their structures were identified from spectroscopic and physicochemical data as genkwanin 5-O-beta-d-primveroside (1), apigenin 7-O-beta-d-glucuronide (2), genkwanin 5-O-beta-d-glucopyranoside (3), apigenin 5-O-beta-d-glucopyranoside (4), genkwanin (5), apigenin (6), luteolin 7-methyl ether (7), luteolin (8), daphnoretin (9), velutin (10), 7-methoxyacacetin (11) and aurantiamide acetate (12). Among them, compounds 9, 10 and 12 were isolated from this plant for the first time. The anti-complement activity of these compounds was tested against the classical pathway of the complement system. Among the compounds, daphnoretin (9) exhibited significant anti-complement activity with an IC(50) value of 11.4 microm, whereas the other compounds were not active in the assay.     

甘草与芫花对P-糖蛋白底物罗丹明123经 空肠黏膜透过性的影响

目的：观察甘草与芫花合用前后对P-糖蛋白(P-gp)的调控作用，探讨甘草、芫花及其合用影响药物经胃肠道渗透的可能作用机制。方法：将25只Wistar大鼠分为5组，分别给大鼠口服甘草液、芫花液、甘草芫花合煎液、合并液以及生理盐水，1周后用体外扩散池法(ussing chamber)评价各种药液对罗丹明123(R123)和荧光素钠(CF)经空肠黏膜透过性的影响，用荧光分光光度法测定R123和CF的浓度，并分析各组表观渗透系数(Papp)差异。结果：4种药液均具有增加R123经吸收方向的透过性，与生理盐水组比较，P<0.05，且芫花液、合煎液以及合并液还可减少分泌方向的透过(P<0.05，与生理盐水组比较)，甘草对分泌方向透过影响无统计学意义。甘草对CF透过无影响，而其他3组药液则可减少CF吸收和分泌方向的透过性。结论：甘草和芫花对P-gp均有抑制作用，但后者作用较强。芫花某些化学成分抑制P-gp，而另一些成分可能使细胞之间紧密连接加强，引起旁细胞途径药物CF渗透的降低。甘草与芫花合用后对P-gp抑制作用增强，可能是甘草对芫花有协同作用，使一些毒性成分吸收增加，这可能是两者配伍产生毒性的机制之一。     

板蓝根有效成分对脂多糖刺激小鼠体内组织moesin mRNA表达的影响

 目的：研究板蓝根有效成份对低密度脂蛋白(LPS)刺激组织内moesin mRNA表达的影响。方法：用不同剂量的板蓝根给予小鼠灌胃0.5 h后，尾静脉注射LPS，9 h后运用原位杂交法观察各组肝、肾、脾内moesin mRNA表达，并检测血中TNF-α，NO水平。结果：当板蓝根液为0.8,0.4 mL时，moesin表达计分分别为(21.4±18.4)，(29.1±22.2)，明显低于只用LPS组（113.8±31.4）（P<0.01）。当剂量达0.2 mL时，表达抑制程度不大（85.8±26.7）。moesin mRNA表达计分值与同期所测的TNF-α，NO水平呈正相关。结论：板蓝根可影响LPS刺激的moesin mRNA表达程度。     

芫花对P-糖蛋白底物罗丹明123肠内转运和吸收的影响

 目的 研究芫花水煎液对P-糖蛋白(P-gp)的底物罗丹明123(R123)在空肠内转运和吸收的影响,探讨芫花对肠黏膜P-gp的调控作用。方法 大鼠分组制模,利用体外扩散池法(Ussing chamber)评价芫花对R123和荧光素钠(CF)经空肠黏膜透过性的影响;利用在体实验测定R123和CF在血浆中药物浓度的变化和各种药动学参数。结果 一方面,0.5 g·mL-1的芫花水煎液降低了R123分泌方向的转运,同时提高了吸收方向的转运,而且对CF吸收和分泌方向的转运都有抑制作用;另一方面,在体实验芫花组R123的生物利用度和曲线下面积都显著大于对照组,CF则与对照组无明显差异。结论 实验表明,芫花某些化学成分抑制P-gp,另一些成分可能使细胞之间紧密连接加强,引起旁细胞途径药物CF渗透的降低。因此芫花是肠黏膜P-gp的一种抑制剂,但是哪种化学成分发挥作用有待于进一步研究。