Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用

背景与目的:雷帕霉素是从吸水性链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)发酵液中提取,最近研究发现雷帕霉素具有免疫抑制作用和广泛的抗肿瘤作用。本研究主要探讨Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用。方法:以不同浓度(5、10、20、30、40、50nmol/L)的雷帕霉素作用于BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化,采用Caspase-3试剂盒和Westernblot蛋白电泳测定Caspase-3活性。结果:雷帕霉素可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,具有量-效与时-效关系;雷帕霉素作用BEL-7402细胞48h后,Hoechst33258荧光染色可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征;凋亡过程中Caspase-3酶原蛋白的激活,出现20ku亚单位,Caspase-3特异性抑制剂z-DEVD-FMK能阻断凋亡的发生。结论:雷帕霉素能抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞凋亡发生,Caspase-3酶的激活在雷帕霉素诱导细胞凋亡机制中起到重要作用。     

雷帕霉素诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡中Bcl-2作用研究

目的探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)体外对肝癌BEL-7402细胞生长抑制及诱导细胞凋亡中的作用及Bcl-2变化在凋亡机制中的意义。方法以5、10、20、30、40和50nmol/L不同浓度的RAPA作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化,Westernblot观察Bcl-2、Bcl-xl和bax等凋亡相关表达变化。结果RAPA可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。RAPA作用肝癌细胞BEL-740248h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,凋亡过程中伴有抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表达的降低和促凋亡蛋白bax上调。结论RAPA可能通过诱导抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表达的降低和促凋亡蛋白bax表达上调而诱导凋亡发生,抑制BEL-7402细胞的生长。     

冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用研究

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用。方法:以8、16、24和32μmol/L不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。结果:16~32μmol/L的冬凌草甲素可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48~60h后Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征。结论:冬凌草甲素能通过诱导细胞发生凋亡,抑制BEL-7402细胞的生长而发挥抗增殖作用。     

干扰素α对BEL-7402细胞生长与端粒酶活性影响的观察

目的:探讨干扰素α(IFN-α)对肝癌BEL-7402细胞的生长抑制作用及其对肝癌细胞端粒酶hTERT-mRNA表达水平和端粒酶活性的影响。方法:以不同浓度的IFN-α作用于体外培养的肝癌BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及ho-echst33258荧光染色法观察细胞凋亡;并对细胞凋亡前后的端粒酶hTERT-mRNA表达水平及端粒酶活性进行检测。结果:IFN-α可显著抑制肝癌BEL-7402细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系。在细胞凋亡过程中端粒酶hTERT-mRNA的表达水平及端粒酶活性均显著下降。结论:IFN-α能抑制BEL-7402细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低端粒酶hTERT-mRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制。     

雷帕霉素抑制胆囊癌GBC-SD细胞的生长和转移

目的：研究雷帕霉素 (rapamycin) 对胆囊癌GBCSD细胞生长和转移的影响,探讨雷帕霉素治疗胆囊癌的临床应用前景。方法:采用MTT法检测不同浓度（12.5、25、50 nmol/L）的雷帕霉素对胆囊癌细胞增殖的影响,以流式细胞术检测不同浓度的雷帕霉素对细胞凋亡和细胞周期的变化,Transwell小室检测雷帕霉素对细胞迁移能力的影响,利用Western blotting检测胆囊癌细胞中雷帕霉素哺乳动物靶标（mammalian target of rapamycin,mTOR）及其磷酸化pmTOR水平。结果:雷帕霉素可显著抑制胆囊癌GBCSD细胞中mTOR的磷酸化,但对mTOR表达无影响。雷帕霉素显著抑制胆囊癌细胞的生长,并呈剂量依赖性抑制(P<0.01)。雷帕霉素可引起胆囊癌细胞周期G1/S阻滞和细胞凋亡;可显著抑制胆囊癌细胞的转移(P<001)。结论:雷帕霉素能显著抑制胆囊癌细胞生长及转移,其机制可能与抑制pmTOR通路、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。     

miR-16对人肝癌细胞BEL-7402增殖与凋亡的影响

背景与目的：miR-16和miR-15a基因复合体位于人13q14区域的DLEU2基因内含子内,是目前公认的抑癌基因之一。该基因区域的缺失与多种实体肿瘤有关,miR-16同时促进肿瘤细胞的凋亡。该研究旨在探讨miR-16对BEL-7402肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法：人肝癌细胞BEL-7402分为miR-16感染组(加入LV-hsamiR-16-1慢病毒)和阴性对照组(加入阴性对照病毒),采用倒置荧光显微镜观察细胞绿色荧光的强度;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测miR-16对BEL-7402肝癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术分析miR-16对人肝癌细胞BEL-7402的细胞周期与凋亡的影响。结果：CCK-8检测结果显示,感染组细胞增殖能力明显降低(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,阴性对照组BEL-7402细胞周期中G₁期细胞百分率数值明显下降,但S及G₂/M期细胞的百分率均明显上升(P<0.05)。miR-16促进BEL-7402肝癌细胞凋亡。结论：miR-16抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖并促进其凋亡,miR-16有望成为临床肝癌靶向治疗的新靶点。     

冬凌草甲素对NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制(英文)

目的探讨冬凌草甲素对白血病 NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的 NB4细胞,应用 MTT 法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Ho-echst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA 法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果 8μmoL/L 以上的冬凌草甲素可显著降低 NB4细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。药物(16μmol/L)作用48～60h 在 Hoechst 染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变。结论冬凌草甲素能抑制 NB4细胞的生长并诱导细胞发生调亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一;这为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供了有力的试验依据。     

冬凌草甲素对NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制

目的 探讨冬凌草甲素对白血病NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法 以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的NB4细胞,应用MTF法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果 8μmol／L以上的冬凌草甲素可显著降低NB4细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。药物(16μmol／L)作用48～60h在Hoechst染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变。结论 冬凌草甲素能抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生调亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一;这为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供了有力的试验依据。     

力达霉素对人肝癌bel 7402细胞凋亡基因表达和细胞骨架的影响

背景与目的：力达霉素是我所分离的烯二块类抗肿瘤抗生素,因其独特的化学结构和对体内外肿瘤的强烈抑制作用,而倍受关注。除了断裂DNA外,力达霉素对细胞凋亡基因表达和细胞骨架的影响,可能与其高活性有关。本文通过观察力达霉素对人体肝癌bel-7402细胞多指标的影响,进一步阐明其分子机制。方法：用Northern blot印迹法和dot印迹法检测癌基因表达,间接免疫荧光法检测微丝和微管,线粒体特异染料Mitosensor^tm检测细胞凋亡。结果：低浓度的力达霉素（0.1nmol/L)处理人肝癌bel-7402细胞8h,明显促进c-myc、c-fos基因表达,而抑制N-ras表达。10nmol/L力达霉素处理细胞8h后,细胞伸展,微丝排列整齐,向非恶性细胞转变,但对微管没有影响。用线粒体特异凋亡染料Mitosensor^TM检测发现,力达霉素处理8h后的细胞未出现凋亡,说明力达霉素引起肿瘤凋亡首先需要诱导c-myc基因表达。结论：低浓度的力达霉素明显影响人肝癌bel-7402细胞的有关凋亡基因表达和细胞骨架的分布,这些结果有助于解释力达霉素高活性地作用肿瘤细胞的分子机制。     

冬凌草甲素对THP-1细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的 探讨冬凌草甲素对急性单核细胞白血病THP-1细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法 以不同浓度的冬凌草甲素(16～56 μmol/L)作用于体外培养的THP-1细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化,用免疫印迹法(Western Blotting)检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP[(poly(ADP-ribose)polymerase)]表达水平的变化.结果 32 μmol/L以上的冬凌草甲素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量效与时效关系,在Hoechst 33258荧光染色后,细胞出现核浓缩及核碎裂等典型的凋亡特征.Western Blotting检测结果表明,Caspase-3被活化出现相对分子质量为20×103的裂解片段,PARP被裂解后出现相对分子质量为89×103的亚单位片段.结论 冬凌草甲素能显著抑制THP-1细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,通过激活Caspase-3途径可能是冬凌草甲素诱导细胞发生凋亡的重要作用机制;这为冬凌草甲素用于白血病的辅助治疗提供了有力的实验依据.     

Anti-hepatoma cells function of luteolin through inducing apoptosis and cell cycle arrest

The aim of this study is to explore the apoptotic induction and cell cycle arrest function of luteolin on the liver cancer cells and the related mechanism. The liver cancer cell line SMMC-7721, BEL-7402, and normal liver cells HL-7702 were treated with different concentrations of luteolin. Cell proliferation ability was tested. Morphological changes of the apoptotic cells were observed under inverted fluorescence microscope after Hoechst33342 staining. We investigated the effect of luteolin on cell cycling and apoptosis with flow cytometry. The mitochondrial membrane potential changes were analyzed after JC-1 staining. Caspases-3 and Bcl-2 family proteins expression were analyzed by real-time PCR. Cell proliferation of SMMC-7721 and BEL-7402 were inhibited by luteolin, and the inhibition was dose–time-dependent. Luteolin could arrest the cells at G1/S stage, reduce mitochondrial membrane potential, and induce higher apoptosis rate and the typical apoptotic morphological changes of the liver carcinoma cells. Q-RT-PCR results also showed that luteolin increased Bax and caspase-3 expression significantly and upregulated Bcl-2 expression in a dose-dependent manner in liver carcinoma cells. However, the normal liver cells HL-7702 was almost not affected by luteolin treatment. Luteolin can inhibit SMMC-7721 and BEL-7402 cell proliferation in a time- and dose-dependent manner. And the mechanism maybe through arresting cell cycle at phase G1/S, enhancing Bax level, reducing anti-apoptotic protein Bcl-2 level, resulting in activating caspase-3 enzyme and decrease of mitochondrial membrane potential, and finally leading to cell apoptosis.     

布洛芬抑制人肝癌细胞BEL-7402生长及机制的初步研究

背景与目的：近来发现,临床上常用的非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)可以降低多种癌症的发病率。布洛芬(ibuprofen)作为一种常用的NSAIDs,对肝癌是否具有抑制作用,国内外鲜有报道。本研究初步探讨布洛芬抑制肝癌细胞BEL-7402的作用,并研究其相关机制。方法：肝癌细胞BEL-7402分为对照组和不同浓度布洛芬处理组,药物处理0、24、48和72 h后用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组细胞的周期分布;细胞分析仪检测各组细胞活力及细胞凋亡;蛋白[质]印迹(Western blot)检测各组细胞增殖性核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中前列腺素E₂(PGE₂)蛋白表达水平。结果：布洛芬组中BEL-7402细胞增殖受到抑制,且抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。2.0 mmol/L布洛芬组48 h细胞活力明显低于对照组［(47.87±5.23)% vs (88.93±5.49)%］,G₀/G₁期细胞比例明显高于对照组［(80.04±3.61)%vs (62.36±8.33)%］,细胞早期凋亡率明显高于对照组［(36.65±10.07)% vs (9.81±6.80)%］,差异有统计学意义(P<0.05)。布洛芬作用于细胞48 h后,PCNA、Cyclin D1、Bcl-2以及COX-2蛋白表达与对照组相比显著减少(P<0.05);细胞培养上清液中PGE₂蛋白表达量与对照组［(23.98±4.89) ng/L vs (68.70±9.43) ng/L］相比,显著降低(P<0.01)。结论：布洛芬能够抑制肝癌细胞BEL-7402增殖与活力,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制COX-2及PGE₂表达有关。     

甲基乙二醛对卵巢癌HO8910细胞生长及增殖的影响

目的:探讨甲基乙二醛(methylglyoxal,MGO)对卵巢癌HO8910细胞生长和增殖的影响。方法:培养卵巢癌HO8910细胞,不同浓度的甲基乙二醛分别处理HO8910细胞不同时间后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MGO对其生长和增殖的影响,Hoechst33258染色细胞后,荧光显微镜下观察细胞形态学改变;分别以不同的MGO处理HO8910细胞24h,用Anexxin V/PI双染试剂盒染色后经流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:MTT检测发现MGO可抑制细胞生长及增殖,在一定时间和浓度范围内,其抑制率具有浓度依赖性(P<0.01)及时间依赖性(P<0.05);当处理时间大于24h时,其抑制率在浓度为1.5mmol/L时最高,浓度超过1.5mmol/L后抑制率减弱;经MGO处理过的细胞在Hoechst染色后荧光显微镜下呈现典型的凋亡核固缩表现;流式细胞仪检测细胞凋亡率随浓度增高而升高(P<0.001)。结论:甲基乙二醛可显著抑制HO8910细胞增殖并诱导其凋亡,该制剂可能成为卵巢癌新的治疗手段。     

蜂毒肽突变体Melittin-K1抑制人肝癌细胞BEL-7402生长的作用

目的:为了提高蜂毒肽Melittin的抗肿瘤活性,我们设计出新型多肽并将其命名为Melittin-K1。并对多肽Melittin-K1抑制人肝癌细胞BEL-7402生长的作用进行研究。方法:采用CCK-8法检测细胞活力。扫描电镜拍照结合培养基上清中乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）的表达水平来评价细胞膜的损伤水平。构建BEL-7402细胞裸鼠异种移植瘤模型来评价Melittin-K1、Melittin体内对肝癌生长的影响以及毒性。结果:与Melittin相比,Melittin-K1抑制BEL-7402细胞生长的作用更显著;与L02细胞相比,BEL-7402对Melittin-K1的杀伤作用更敏感;Melittin-K1体外抑制BEL-7402细胞生长呈时间、剂量依赖性。扫描电镜以及LDH检测结果均显示Melittin-K1处理组细胞膜的破损情况严重。BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型结果表明,Melittin-K1体内显著抑制肿瘤生长,其抗肿瘤作用明显高于同剂量Melittin。Melittin-K1和Melittin体内毒性小,主要表现在,与模型组相比,体重曲线、肝功指标均未发生明显改变。结论:Melittin-K1能够明显抑制肝癌细胞BEL-7402的增殖,是一种极具潜力的抗肝癌药物。     

Growth arrest and apoptosis of the human hepatocellular carcinoma cell line BEL-7402 induced by melittin

OBJECTIVE: The aim of this study was to investigate the cellular effects of melittin on the growth and apoptosis of human hepatocellular carcinoma (HCC) cells and to provide the molecular mechanism for potential application of a recombinant adenovirus carrying the melittin gene (Ad-rAFP-Mel) in the treatment of liver cancer. METHODS: Human HCC cells (BEL-7402) were infected with Ad-rAFPMel at different times. In vitro cell growth was determined by MTT assay. Cellular apoptosis was evaluated quantitatively and qualitatively by phase-contrast microscopy, transmission electron microscopy, DNA ladder electrophoresis, TUNEL staining and flow cytometry. RESULTS: Ad-rAFP-Mel infection had an inhibitory effect on the proliferation of BEL-7402 cells. The morphological changes of apoptosis were confirmed by microscopy and DNA electrophoresis. The ultrastructural characteristics of apoptotic cells, such as chromatin condensation and nuclear fragmentation, were also observed by electron microscopy in the Ad-rAFP-Mel-infected cells. Ad-rAFPMel infection markedly induced cellular apoptosis, and Fas expression on Bel-7402 cells infected by Ad-rAFPMel was up-regulated. CONCLUSION: The fact that melittin can induce apoptosis of the HCC cell line BEL-7402 leads us to consider adenovirus-mediated delivery of melittin as a promising approach for the treatment of HCC. However, the underlying mechanism needs to be further investigated.     

雷氏大疣蛛蛛毒对人肝癌BEL-7402 细胞增殖的抑制作用及其机制的研究

背景与目的蜘蛛毒素抗肿瘤的研究迄今还是未知领域。本研究探讨雷氏大疣蛛(Macrotheleraveni)蛛毒对BEL-7402细胞增殖的抑制作用,进一步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定了雷氏大疣蛛蛛毒(10、20、40、80滋g/ml)对BEL-7402细胞增殖作用的影响;采用[3H]-TdR掺入法检测蛛毒加入前后BEL-7402细胞DNA的变化;利用流式细胞光度术(FCM)探讨雷氏大疣蛛蛛毒对BEL-7402细胞凋亡率和细胞周期的影响;利用Westernblot方法进一步检测雷氏大疣蛛蛛毒对细胞周期相关基因c-myc的变化。结果雷氏大疣蛛蛛毒对BEL-7402细胞增殖有较强的抑制作用(P<0.05),IC50为20滋g/ml,时效和量效关系良好。雷氏大疣蛛蛛毒可以抑制BEL-7402细胞DNA的合成。流式细胞仪检测发现经过雷氏大疣蛛蛛毒作用下的BEL-7402细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期。Westernblot方法进一步检测表明雷氏大疣蛛蛛毒作用于BEL-7402细胞72h后,c-myc基因表达减弱。结论雷氏大疣蛛蛛毒就可以抑制人肝癌BEL-7402细胞的增殖和DNA的合成。其药理作用机制可能是除了诱导凋亡外,主要是使细胞周期相关基因c-myc表达减弱,导致细胞周期的变化。     

The role of RhoC in the proliferation and apoptosis of hepatocellular carcinoma cells

In this study, we examined the effects of RhoC expression on the growth and apoptosis of human hepatocellular carcinoma cells (HCCs) in vitro in order to gain more understanding of its potential as a therapeutic target gene. We knocked down the endogenous expression levels of RhoC in human HCCs, BEL-7402, using siRNA and ectopically expressed RhoC in untransformed hepatocytes, HL7702. Stable cell lines were established, and cell growth was examined by MTT and colony formation assays, cell proliferation examined by silver nitrate staining of AgNORs, and cell cycle distribution examined by flow cytometry. RT-PCR analysis was performed to determine the mRNA expression levels of RhoC and cell cycle-related genes. Finally, the effect of RhoC expression on apoptosis was also examined by flow cytometry, agarose gel electrophoresis of fragmented DNA, Wright staining, and RT-PCR analysis for genes regulating apoptosis. Compared to the parental and control siRNA (siCtrl)-transfected BEL-7402 cells, the siRhoC-transfected cells exhibited significantly reduced cell growth, cell proliferation, percentage of cells in the S-G2/M phase, and expression of Cyclin D1, CDK4, and Bcl2. Knockdown of RhoC expression in BEL-7402 cells also significantly increased the percentage of cells in the G0/G1 phase, cellular apoptosis, and expression of p21, p16, and Bax. Furthermore, ectopic expression of RhoC in HL7702 cells led to a significant increase in cell growth compared to parental or siCtrl-transfected cells. These data suggest that RhoC is a key regulator of cell growth and apoptosis in HCC cells, making it a potential target for gene therapy.