骨髓单核巨噬细胞的分离及悬浮培养

单核-巨噬细胞在体内发挥着重要的生物功能。本文就骨髓单核-巨噬细胞的分离及培养方法、培养细胞的生物学及形态特点及影响的细胞生长的因素等进行综述。     

CTLL_2细胞增殖检测单核/巨噬细胞ADCC效应方法的应用研究

探讨ＣＴＬＬ２细胞增殖检测单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应方法的应用价值，利用此方法检测比较了健康志愿者外周血单核细胞ＡＤＣＣ效应和非特异杀伤效应，ＬＰＳ刺激单核细胞前后其ＡＤＣＣ效应变化。结果表明检测单核细胞ＡＤＣＣ效应和非特异杀伤效应不存在相关性（Ｐ＞０．０５），活化后单核细胞ＡＤＣＣ效应较活化前明显增强（Ｐ＜０．０１），提示ＣＴＬＬ２细胞增殖检测单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应方法是特异、灵敏的实验方法，为临床广泛研究单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应提供一种可靠的检测手段。     

MACS法分选早孕期外周血和蜕膜组织单核巨噬细胞

目的:探寻有效,简捷的分选出纯度较高,生物活性保存良好的外周血和蜕膜组织单核巨噬细胞,用以研究妊娠早期单核巨噬细胞功能特征及其调控因素。方法:比较运用MACS法和传统方法分离、纯化妊娠早期外周血和蜕膜组织单核巨噬细胞的效果。结果:经台盼兰染液检测细胞活性,传统贴壁法获得的单核细胞活性率为(92.50±0.57)%,MACS法获得的单核细胞活性率为(92.70±0.62)%,两者没有显著差异。传统贴壁法获得的巨噬细胞活性率为(82.40±0.64)%,MACS法获得的巨噬细胞活性率为(82.60±0.61)%,两者没有显著差异。经流式细胞仪检测细胞纯度,贴壁法获得的单核细胞纯度为(85.83±1.50)%,显著低于MACS法获得的单核细胞纯度(91.89±1.37)%。贴壁法获得的巨噬细胞纯度为(35.25±1.38)%,显著低于MACS法获得的巨噬细胞纯度(76.40±2.02)%(P<0.05)。结论:MACS方法分选得到的妊娠早期外周血单核细胞和蜕膜组织巨噬细胞纯度高,生物活性保存良好。MACS方法是一种有效,简捷的分离、纯化单核巨噬细胞的方法,运用此方法,有益于更确切的描述妊娠早期参与母胎界面免疫调控的职能细胞的作用及其调节方式。     

肾小管间质纤维化与单核巨噬细胞的关系

目的：探讨肾小管间质纤维化与单核巨噬细胞(MC／MP)的关系。方法：结扎大鼠一侧肾静脉，连续饲养25d，制作大鼠肾小管间质纤维化模型。每5天杀检取材。HE、PAS、PASM、Masson等染色方法观察MC／MP的聚集和肾小管间质纤维化病变；免疫组化和双重免疫组化观察。肾间质MC／MP的聚集与增生；原位杂交、免疫组化观察单核细胞化学吸引蛋白质1(MCP-1)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)在肾内的表达分布。Western blot检测病变肾脏MCP-1的表达。对不同时间点。肾小管变性、肾小管间质纤维化程度、肾间质MC／MP聚集的数量及其中的增生比例、MCP-1和M-CSF的表达进行评估分析。结果：肾静脉结扎侧表现为。肾小管变性萎缩、间质中MC／MP浸润、细胞外基质沉积等肾小管间质纤维化的典型病变。病变早期肾间质中有明显的MC／MP聚集。后期减少。表达增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)的单核细胞占一定比例，单核细胞的增生比例与聚集高度相关。原位杂交、免疫组化和Western blot显示，病变肾组织中MCP-1、M-CSF mRNA的表达主要位于变性的。肾小管上皮细胞胞浆中，病变早期强，后期减弱。肾小管上皮细胞MCP-1和M-CSF的表达与肾间质MC／MP的聚集高度相关。肾间质MC／MP的聚集与肾小管变性高度相关。结论：肾小管间质纤维化早期，间质中有明显的MC／MP聚集，来源于浸润和局部增生。肾小管上皮细胞通过表达MCP-1、M-CSF在MC／MP浸润和增生中起了重要的调控作用。肾间质MC／MP的聚集与肾小管变性高度相关。MC／MP通过分泌多种细胞因子和促增殖因子促进。肾小管间质纤维化，并进一步损伤肾小管。     

急、慢性乙肝患者肝内单核巨噬细胞的原位研究

应用免疫组化技术研究了38例急、慢性乙肝患者肝内OKM_1~+细胞的分布.结果表明,急性肝炎和慢性小叶性肝炎的OKM_1~+细胞仅散在于门管区和小叶内,其占单个核细胞(MNC)的平均百分率低于8％。慢性活动性肝炎的OKM_1~+细胞则明显增多,且主要分布于门管周围区和桥接坏死区的边缘,并与肝内病变的程度密切相关。提示OKM_1~+细胞与肝细胞的重度坏死有关.此外,所有病例肝内OKM_1~+细胞数及占MNC的百分率均与血清转氨酶水平不相平行,也与血清HBeAg/抗HBe状态及肝内HBsAg存在状态无关。     

雷公藤红素对舌癌中单核/巨噬细胞的影响

【】：目的：探讨雷公藤红素(Tripterine,Tri)对人单核/巨噬细胞系(THP-1细胞)分泌VEGF、VEGF-C的影响。方法：在酸性微环境中,加入不同浓度的Tri分别与Tca8113细胞、THP-1细胞+ Tca8113细胞、THP-1细胞一起培养24h、48h、72h后,通过ELISA法检测细胞上清液中的血管内皮生长因子-c(VEGF-C)、血管内皮生长因子(VEGF)的含量,以分析雷公藤红素对这两种生长因子的影响。结果： THP-1细胞、Tca8113细胞分泌VEGF、VEGF-C的数量与培养时间、雷公藤红素浓度、pH值呈负相关(P<0.05)。3.结论：随雷公藤红素浓度的增加和时间的延长,雷公藤红素对单核/巨噬细胞分泌VEGF、VEGF-C因子的抑制作用逐渐增强,从而抑制了舌癌的生长和转移。     

单个核细胞和单核源性巨噬细胞生长特性的体外实验研究

目的研究人外周血单个核细胞、单核源性巨噬细胞在体外培养环境中的生长曲线情况。方法以密度梯度离心法和贴壁法分离、纯化正常人的外周血单个核细胞。以佛波醇酯促进单核源性巨噬细胞的分化成熟。用MTT法检测单个核细胞、单核源性巨噬细胞的生长曲线。采用单因素方差分析进行统计学检验。结果单个核细胞接种第1天的细胞数量明显多于第3、5、6、7天（P〈0.05）,但接种后第2~7天的细胞数量相对稳定（P〉0.05）。单核源性巨噬细胞分化成熟后第1~6天的OD,细胞数量较稳定。但第7天的细胞数量明显少于前6天（P〈0.05）。结论体外培养第2~7天的外周血单个核细胞处于生长平台期。体外培养的单核源性巨噬细胞在分化成熟后的第1~6天处于生长平台期。     

人疱疹病毒6型感染单核／巨噬细胞

本通过PCR及RT-PCR证实人疱疹病毒6型（HHV-6）感染单核/巨噬细胞并影响其增殖功能 ，DNA和mRNA动力学研究发现HHV-6感染后早早期（IE）和主要壳体蛋白（MCP）基因仅表达12天，而其DNA持续50天仍然可见，提示单核/巨噬细胞是HHV-6长期潜伏感染位点之一，探讨细胞因子对HHV-6IE基因表达的影响，观察到IL-10抑制、TNF-α增强其表达，IL-1β和IL-6无明显影响，推测HHV-6诱导的内源性IL-10是导致其潜伏感染的重要因素。     

维拉帕米对人单核巨噬细胞蛋白质DNA,RNA合成的影响

目的；观察维拉帕米对人单核巨噬细胞ＤＮＡ，ＲＮＡ及蛋白质合成过程的影响，方法：维拉帕人单核细胞孵育２４ｈ或４ｄ，测定细胞＾３Ｈ－ＴｄＲ，＾３Ｈ－ＵＲ，＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入人单核巨噬细胞状态及细胞内蛋白质含量，结果：维拉帕米在低浓度对ＤＮＡ，ＲＮＡ合成有抑制作用，呈浓度依赖性，高浓度时作用明显，对ＲＮＡ作用较ＤＮＡ显著（Ｐ〈０．０５），对蛋白质合成在高浓度时有抑制作用，维拉帕米与成熟过程中人单核巨噬细     

单核-巨噬细胞在正常成人真皮内分布形式的研究

目的　观察正常真皮内的单核 巨噬细胞的分布、形态和密度。方法　正常人 8例 ,每例均取面部、躯干、四肢近端、四肢远端、手掌和足跖 6个部位皮肤 ,进行铺片和纵行与水平切片。CD1a和CD6 8单克隆抗体染色 ,观察朗格汉斯细胞和单核 巨噬细胞。结果　真皮浅层CD6 8阳性细胞密度为 :四肢远端 5 6 2± 2 30个 /mm2 ,腹部 5 17± 16 2个 /mm2 ,面部 5 0 9± 2 35个 /mm2 ,手掌 5 0 7± 192个 /mm2 ,四肢近端 4 72± 138个 /mm2 ,足跖 36 1± 78个 /mm2 。真皮深层CD6 8阳性细胞密度低 ,多为树枝状 ,散在于胶原纤维间。真皮内CD6 8阳性细胞分为 3种 :树枝状及非树枝状 ,其中树枝状CD6 8阳性细胞又分为深染及淡染两种。结论　在真皮浅层形成CD6 8阳性单核 巨噬细胞网 ,此网在真皮浅层较致密 ,而真皮深层较稀疏。单核 巨噬细胞在真皮内的这种网状分布形式说明其有明确的防御方向性 ,其方向是穿透表皮进入真皮的入侵物 ,是皮肤免疫系统的一道重要防线。     

血源性单核巨噬细胞在兔动脉粥样硬化发生中的作用

本实验对雄性新西兰白兔的实验性动脉粥样硬化进行超微结构及组织化学研究。结果证明,血源性单核细胞为早期斑块内泡沫细胞的主要来源;单核巨噬细胞源性泡沫细胞可返回血流,起清除病灶内脂质的作用。非特异性酯酶及酸性磷酸酶染色是判断泡沫细胞来源的可靠方法。     

MTT法进行活菌计数的方法学探讨

目的 :建立一种快速、稳定、灵敏并可反映细菌活性的细菌计数方法。方法 :以大肠杆菌为研究对象 ,探讨MTT法用于细菌计数的可行性及反应时间、测量细菌数量的范围、MTT的用量、是否加入溶解剂等实验条件。结果 :细菌数在 3.8× 10 7～ 1.2× 10 9 ml范围内测出的OD值与细菌浓度呈良好的正相关 ,反应时间为 2 0分钟 ,MTT10 μl、2 0 μl均可 ,2 0 μl效果更佳。可不用溶解剂。 结论 :MTT比色分析法可用于检测活菌数量     

脾切除对单核巨噬细胞系统功能的影响

观察Ｗｉｓｔａｒ大鼠脾切除后在伴和不伴脓毒血症情况下，单核巨噬细胞系统（ＭＰＳ）清除＾９９ｍＴｃ亚锡植酸钠的功能及血浆纤维连结蛋白（ＰＦＮ）和透明质酸（ＨＡ）的变化。结果脾切除后（尤其合并感染时），Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞吞噬力减弱，血中清除半衰期延长，肝脏器官和每克组织ｃｐｍ值百分率减少，这与ＰＦＮ相对降低、ＨＡ急剧增加（Ｐ〈０．０５）有关。提出，ＨＡ增高参与了脾切除后ＭＰＳ的机能改变、免疫功能受抑和     

免疫制剂对肝癌大鼠单核巨噬细胞抑人肝癌细胞增殖作用的影响

以ＥＤＮ诱发大鼠实验性肝癌，同时连续１２周分别腹腔注射干扰素α－２ｂ，卡介苗，济南假单胞菌苗和ＩＦＮ和ＢＣＧ二者联用，对照组给予生理盐水。在诱癌过程第８，１２，１６周从同只大鼠体内分离出高纯度的腹腔巨噬细胞，血单核细胞，肺巨噬细胞和脾巨噬细胞，并分别与人肝癌细胞联合培养，采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定免疫制剂在４种效应细胞抑人肝癌细胞增殖作用的影响。     

丹参素对单核I巨噬细胞功能影响的体外实验

丹参素是丹参水溶性有效成份，本实验了丹参素对单核巨噬细胞产生细胞因子功能的体外调节作用，结果表明，丹参素能激活单核巨噬细胞产生ＴＮＦα，ＩＬ－１，ＩＬ－６，ＩＬ－８，但较由内毒素刺激单核巨噬细胞产生细胞因子的能力差，另外，丹参素还能抑制由内毒素诱导的细胞因子的产生，从而说明，丹参素具有双相调节作用，一方面增强机体的防御能力，另一方面具有抗炎等作用。     

单核巨噬细胞在慢性阻塞性肺疾病中的作用

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是呼吸系统常见的慢性非特异性炎症,目前认为有包括单核巨噬细胞在内的多种炎性细胞的参与。单核巨噬细胞能够分泌、调节多种炎性介质和蛋白,并和其他炎性细胞相互作用,形成一个复杂的炎性网络,使COPD患者肺组织中大量炎性细胞聚集、浸润,肺内损伤与修复交替出现,引起肺泡壁破坏和肺纤维化。单核巨噬细胞在COPD的发病过程中发挥关键的作用。