新型结核病疫苗与传统疫苗的效力比较研究

作者将表达和分泌结核杆菌 30 k Da主要分泌型蛋白的重组卡介苗 ( r BCG30 Conn、r BCG30 Tice)的效力与亲代 BCG进行比较。　　将 2 50～ 30 0 g雄性豚鼠分成 5组 ,每组约 2 0或 2 1只 ,对照组皮内接种 PBS,4组实验组分别皮内接种 1 0 3CFU 亲代 BCGConn、 BCGTice及 r BCG30 Conn、 r BCG30 Tice。亲代 BCGConn和 BCGTice表达低水平的内源性 30 k Da分泌型蛋白 ,分别为1 .0 0和 1 . 1 0单位 ,而 r BCG30 Conn 和r BCG30 Tice高表达的蛋白水平分别为其亲代株的 2倍和 6倍 ,即分别为 2 .0 3和 5.98单位。接种后 9周 ,…     

分泌功能性白细胞介素2的重组卡介苗促进脾细胞产生γ干扰素

作者通过大肠杆菌-卡介苗(BCG)穿梭质粒pMV261将鼠白细胞介素2(IL-2)基因引入BCG细胞中,并通过加入BCGa抗原信号序列使表达的IL-2分泌到细胞外.重组BCG与鼠脾细胞共同培养,明显地刺激脾细胞分泌γ干扰素.在试验中,作者构建了两组质粒:一组在质粒pMV261上插入小鼠IL-2基因;另一组在质粒pMV261上插入大鼠IL-2基因.为使表达产物分泌到细胞外及区分BCG产生的重组IL-2与哺乳动物细胞产生的IL-2,在每组重组质粒IL-2基因前加入BCGα抗原信号序列或/和流感病毒血凝素表位标记序列.所有新构建质粒都使用 BCG HSP60启动子进行表达.     

EB病毒基因Z2A原核表达载体的构建及表达

目的 构建能分泌性表达EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)融合基因Z2A的BCG重组质粒并导入BCG.方法 分别以BCG和EBV融合基因cDNA为模板,通过PCR扩增得到139 bp的BCG-Ag85B信号肽序列和2291 bp的Z2A基因序列.将BCG-Ag85B信号肽序列与大肠杆菌-BCG穿梭表达载体pMV261重组,得到重组质粒pMVS.再将EBV融合基因序列Z2A亚克隆至pMVS中,得到重组质粒pMVZ2A,电转化导入BCG,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳对表达产物进行分析.结果 构建的重组质粒pMVZ2A经双酶切、PCR扩增及序列测定证实,克隆基因BCG-Ag85B信号肽和Z2A正确插入载体pMV261.重组质粒pMVZ2A电转化导入BCG后能在BCG中有效表达相应蛋白.结论 构建的重组质粒pMVZ2A能在BCG中表达相应蛋白.这一结果为改造BCG及发展新型抗EBV和结核杆菌的双价疫苗奠定了基础.     

EB病毒基因Z2A原核表达载体的构建及表达

目的 构建能分泌性表达EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)融合基因Z2A的BCG重组质粒并导入BCG.方法 分别以BCG和EBV融合基因cDNA为模板,通过PCR扩增得到139 bp的BCG-Ag85B信号肽序列和2291 bp的Z2A基因序列.将BCG-Ag85B信号肽序列与大肠杆菌-BCG穿梭表达载体pMV261重组,得到重组质粒pMVS.再将EBV融合基因序列Z2A亚克隆至pMVS中,得到重组质粒pMVZ2A,电转化导入BCG,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳对表达产物进行分析.结果 构建的重组质粒pMVZ2A经双酶切、PCR扩增及序列测定证实,克隆基因BCG-Ag85B信号肽和Z2A正确插入载体pMV261.重组质粒pMVZ2A电转化导入BCG后能在BCG中有效表达相应蛋白.结论 构建的重组质粒pMVZ2A能在BCG中表达相应蛋白.这一结果为改造BCG及发展新型抗EBV和结核杆菌的双价疫苗奠定了基础.     

重组卡介苗

卡介苗 (BCG)已成为可同时表达多种病原体重组抗原的新疫苗载体。本文概述了重组BCG研究进展 ,分别介绍了抗病毒、细菌、寄生虫病重组BCG的构建和在动物中的免疫应答 ,分泌细胞因子的重组BCG用于抗肿瘤免疫治疗 ,重组BCG也可发展为抗分枝杆菌感染的新疫苗 ,并提出了今后研究方向。     

重组卡介苗

卡介苗（BCG）已成为可同时表达多种病原体重组抗原的新疫苗载体。本文概述了重组BCG研究进展，分别介绍了抗病毒、 细菌、寄生虫病重组BCG的构建和在动物中的免疫应答，分泌细胞因子的重组BCG用于抗肿瘤免疫治疗，重组的BCG也可发展为抗分枝杆菌感染的新疫苗,并提出了今后研究方向。     

鼻粘膜接种单剂卡介苗的抗肺结核保护作用强于皮下免疫

肺结核仍是引起全球死亡的主要传染病之一。传统的卡介苗(BCG)保护率为0%～80%不等,不能产生有效的免疫保护作用,特别对于成人肺结核。加拿大McMaster大学Chen研究了皮下和鼻粘膜免疫接种BCG产生的免疫应答和保护作用。6～8周龄无特定病原体BALB/c小鼠分别皮下(SC)或鼻粘膜(IN)免疫5×104、1×105或5×105CFU的BCG。SC组每只小鼠两侧髂骨下区各皮下接种50μlBCG;IN组每只小鼠鼻腔滴注30μl BCG;每种接种途径均以PBS为对照。3周后,取小鼠脾细胞以分枝杆菌抗原刺激测定γ干扰素(IFN-γ)水平。结果显示,SC组3种剂量BCG接种鼠…     

对重组BCG-HIV活疫苗的体液和细胞介导免疫应答

作者用电钻孔法将重组质粒插入到BCG菌株中。在分枝杆菌hsp70启动子的控制下,1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)三种不同的多肽能在BCG重组体内表达。这些在BCG内产生的外源性多肽能在小鼠体内诱生抗体和T细胞应答。     

重组hIFN-α-2b-卡介苗激活杀伤细胞抗膀胱肿瘤作用的体外研究

目的:研究重组hIFN-α-2b-卡介苗(hIFN-α-2b-BCG)对人外周血单个核细胞(peripheralbloodmonocytes,PBMC)活化增殖,以及BCG激活杀伤细胞(bacilliCalmette-Guérinactivatedkillercell,BAK细胞)对膀胱肿瘤细胞的杀伤效应。方法:分别利用野生型BCG、野生型BCG 干扰素作为对照诱导活化PBMC,比较重组BCG对PBMC的活化增殖效应,采用噻唑兰比色分析法(MTT法),分别在不同时间点检测上述各成分对PBMC增殖活化效果;采用乳酸脱氢酶释放试验(LDH法)研究不同浓度重组BCG活化PBMC后对膀胱肿瘤细胞的不同杀伤效果。结果:MTT测定表明,重组BCG诱导PBMC活化增殖的能力明显强于同浓度的对照组刺激效果(P<0.05),且重组BCG在72h仍保持较强的活化能力;乳酸脱氢酶释放试验显示,不同浓度重组BCG诱导的BAK细胞抗癌效应均高于对照组诱导的抗癌效果(P<0.05)。结论:重组BCG对人PBMC具有较强的活化增殖作用,增强PBMC对肿瘤细胞的杀伤效应。     

产生霍乱毒素B亚单位的重组卡介苗诱导的免疫应答

经粘膜途径接种的抗原的免疫原性通常弱于全身途径接种,因此粘膜抗原接种后需要粘膜佐剂以获得有效水平的免疫应答。已知五聚体形式的霍乱毒素B亚单位( CTB)是有效的粘膜佐剂,当经粘膜途径与抗原一起给予时能增强抗原特异性分泌性Ig A( SIg A)应答,但口服CTB会被粘膜局部的酶和正常菌群快速清除,为延长CTB在呼吸道粘膜的持续时间,作者将含CTB编码基因的p ENCTB转入卡介苗( BCG) 1 1 73P2株,构建出能分泌和产生CTB的重组( r) BCG。用免疫印迹法检测r BCG表达的CTB,用GM1神经节苷脂连接试验检测已装配的CTB的亚单位数。结果…     

对BCG的细胞应答的免疫化学分析

作者用荷兰制造的冻干卡介苗(BCG)和80℃加热杀死的BCG给C57BL/10ScSnCpb无特定病原体小鼠作静脉内注射,每只小鼠接受6×10~6个活BCG,未免疫组和接受6×10~6死BCG组为对照组.定期杀死小鼠,观     

基因重组卡介苗高效电转化条件的实验研究

目的探讨卡介苗(BCG)电转化中影响转化效率的因素。方法利用电转化仪将穿梭质粒pYL-hB7-2转入BCG中,考察其影响因素并优化转化条件。转化子利用卡那霉素抗性筛选和聚合酶链反应(PCR)及酶链免疫吸附试验(ELISA)鉴定。结果重组BCG获得较高的转化效率,最高可达8/9。外加电场强度和质粒浓度是决定电转化效率的关键因素,感受态细胞的状态,如生长期和冰浴时间均可影响转化效率。结论成功解决了基因重组BCG构建过程中电转化的问题。     

基因重组卡介苗

长期以来,BCG作为一种预防结核病的活菌苗而备受青睐,如今BCG作为外源抗原和生物活性蛋白的重组菌苗载体而再次受到研究人员的重视。重组BCG可诱发长期特异性体液免疫和细胞免疫,有望发展成为一种经济有效的新型疫苗以预防传染病和一些肿瘤。     

BCG新应用研究进展

近年来人们围绕BCG开展了新应用研究.此文对重组BCG抗结核病、抗寄生虫病和抗肿瘤,BCG多糖核酸与临床药物联合应用以及BCG作为佐剂的研究进展做一综述.     

菌苗载体和卡介苗

生物技术的最近进展给疫苗（尤其是重组疫苗）的开发提供了新方法。菌苗载体优于病毒载体的地方是前者能够表达大量不同的抗原。尽管目前尚没有重组菌苗载体投入应用,卡介苗（BCG）、沙门菌和大肠杆菌作为菌苗载体正在研制之中,本文综述了用于表达外源抗原的质粒系统和突变株（着重于与BCG有关的质粒系统和突变株）的建立,还介绍了抗原表达系统方面的进展,以及重组BCG菌株诱导的对细菌抗原和人类免疫缺陷症病毒（HIV）抗原的免疫应答,并提出能稳定维持重组DNA（rDNA）的改良的重组BCG载体的选择。     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对小鼠免疫性肝损伤的抑制作用

目的探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对免疫性肝损伤的抑制作用及其机制。方法设正常对照、脂多糖(LPS)、卡介苗(BCG)、BCG+LPS、PDTC和BCG+PDTC+LPS组。除正常对照、LPS和PDTC组外,其余各组小鼠经尾静脉注射BCG(每只2.5mg)。10d后,LPS和BCG+LPS组分别给予LPS(0.2mg·kg-1,ip),PDTC和BCG+PDTC+LPS组在给予LPS前24和2h分别给予PDTC(100mg·kg-1,ip),对照组给予等体积生理盐水。每组15只小鼠用于观察LPS处理后72h的死亡率;每组6只小鼠于LPS处理后1.5h处死,取肝脏,用RT-PCR检测肝脏组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达水平,用凝胶电泳迁移率分析法测定肝脏核因子κB(NF-κB)结合活性;每组12只小鼠于LPS处理后6h取血,处死,留取肝脏,测定血清谷丙转氨酶(GPT)活性、一氧化氮(NO)水平和肝组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量,制备肝组织切片进行HE染色,观察组织病理变化。结果与正常对照组比较,BCG和LPS组小鼠肝脏炎症细胞明显增加,血清GPT活性升高,肝脏GSH含量显著下降,肝脏TNF-α与IL-1β mRNA表达增强,各组均未见小鼠死亡;PDTC组除血清GPT活性升高外,上述其他指标均未发生明显改变。与BCG和LPS组比较,BCG+LPS组血清GPT活性进一步升高,并伴有大面积肝脏坏死和大量炎症细胞浸润,肝脏NF-κB结合活性显著升高,TNF-α和IL-1β表达进一步增强,GSH水平下降,血清NO水平增加,小鼠死亡率40%。与BCG+LPS组比较,PDTC预处理明显抑制BCG+LPS引起的肝脏NF-κB活性、TNF-α及IL-1β mRNA表达增强,升高肝脏GSH含量,降低血清GPT活性和NO水平,减轻BCG+LPS引起的肝脏炎症和坏死,未见小鼠死亡。结论PDTC可抑制BCG+LPS引起的小鼠免疫性肝损伤,其机制可能与其抗炎和抗氧化作用有关。     

结核病疫苗新策略

当今使用的结核病 (TB)疫苗卡介苗 (BCG)不足以提供保护作用 ,急需新的疫苗策略。Agger等将 BCG的免疫学缺陷与分枝杆菌的遗传学新知识结合起来为新疫苗的研制铺平了道路。新疫苗包括重组修饰的 BCG、结核杆菌减毒株及 DNA和亚单位疫苗等各种非活候选疫苗。了解到BCG在第三世界国家接种失败以及疫苗与环境分枝杆菌的相互作用后 ,决定将转化技术应用于新型 TB疫苗的策略是该研究的最新进展     

结核病疫苗新策略

当今使用的结核病(TB)疫苗卡介苗(BCG)不足以提供保护作用，急需新的疫苗策略。Agger等将BCG的免疫学缺陷与分枝杆菌的遗传学新知识结合起来为新疫苗的研制铺平了道路。新疫苗包括重组修饰的BCG、结核杆菌减毒株及DNA和亚单位疫苗等各种非活候选疫苗。了解到BCG在第三世界国家接种失败以及疫苗与环境分枝杆菌的相互作用后，决定将转化技术应用于新型TB疫苗的策略是该研究的最新进展。     

腺苷提高小鼠接种卡介苗后抗结核杆菌效力的研究

目的通过观察小鼠肺组织结核病理改变,探讨腺苷(ADO)能否提高卡介菌(BCG)接种效果.方法将BALB/C小鼠随机分为BCG组、ADO组和对照组.实验开始时BCG组、ADO 2组均皮内注射BCG 0.1 ml,接种BCG当天起,ADO组腹腔注射ADO 30 mg·kg-1·d-1,BCG组和对照组腹腔注射生理盐水0.1 ml/d,共5 d.6周后以人型结核分枝杆菌标准毒力株经血液途径攻击每组小鼠.BCG组、ADO组于结核杆菌感染后第10、20、30 d取肺HE染色和抗酸染色观察,对照组于第30天取材.结果对照组结核杆菌感染后第30天,肺组织大部分实变,以中性粒细胞浸润为主,结核结节多,肺内弥漫分布大量菌体;BCG组于感染后第10～30 d肺组织实变面积逐渐增大,结核结节较少,间质内浸润单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞,单核细胞破损较多,肺内大量菌体.而ADO组于感染后第10～30 d小鼠肺实变面积小,结核结节很少,间质内以单核细胞和淋巴细胞浸润为主,大多数单核细胞完整,肺内菌体明显减少.结论腺苷减轻了肺组织结核病变,增加能够杀灭结核杆菌的单核-巨噬细胞数量,其能增强卡介苗抗结核杆菌的免疫效力.     

雾化吸入BCG对预防哮喘小鼠气道炎性反应的初步研究

目的探讨卡介苗(BCG)雾化吸入对变应性哮喘的预防作用及其与支气管肺泡灌洗液(BALF)中γ-干扰素(IFN-γ)的关系。方法昆明小鼠40只,随机分成3组,正常对照组、哮喘模型组及预防组。预防组又分为致敏前BCG预防组,激发时BCG预防组和地塞米松预防组。预防组经处理后,与哮喘模型组期制作哮喘模型。观察小鼠气道壁炎症变化,并收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定BALF中细胞总数,嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数,用酶联免疫法测定BALF中IFN-γ的含量。结果哮喘模型组BALF中细胞总数和嗜酸细胞数显著高于正常对照组(P<0.01),BALF中IFN-γ水平显著低于正常组(P<0.01);致敏前BCG预防组、地塞米松预防组BALF中细胞数、EOS细胞数显著低于哮喘组,而IFN-γ水平显著高于哮喘组(P<0.01-0.05)。激发时BCG预防组各项指标与哮喘组相比无明显变化。结论雾化吸入BCG能明显抑制哮喘小鼠气道的炎性反应,早期吸入BCG对哮喘小鼠有预防作用。