乙肝患者158例血清HBV DNA含量变化对比分析

目的：比较实时荧光PCR法与COBAS Amplicor法定量检测血清HBV DNA的准确性。方法：本研究参比血清来自国家药品生物制品鉴定所与国家临检中心,临床血清标本共158例。比较了两种方法的线性范围、准确度、重复性、实验时间及成本。结果：实时PCR的批内差和批间差分别为0.3%～3.8%和1.4%～8.1%。实时荧光PCR法与COBAS Amplicor法具有良好的相关性（r=0.948）,实时荧光PCR法成本低且检测范围更宽。结论：实时PCR是监测慢性乙肝患者HBV DNA水平的有效方法。     

两种HBV—DNA荧光定量PCR检测试剂比较

目的比较及评价两种HBV—DNA荧光定量PCR试剂特异性、灵敏度、重复性及检测结果的相关性。方法用深圳匹基生物工程有限公司生产的两种HBV—DNA荧光定量PCR试剂（试剂A,试剂B）对已知结果的质控血清、标准品及本院154份HBsAg阳性的临床标本进行平行检测,比较两种试剂检测结果的特异性、灵敏度、重复性及结果的相关性。结果试剂A与试剂B的特异性均为100％,灵敏度分别为90．91％和95．45％,符合率分别为93．33％和96．67％;对强阳性、临界阳性标本,试剂A重复性试验批内CV值为3．16％、5．61％,批间为3．18％、6．32％。试剂B批内CV值为2．11％、5．36％,批间CV为3．58％、4．59％;两种试剂对临床标本的检测结果相关性良好（r=0．93、P〈0．01）,但试剂A检测的灵敏度和符合率均低于试剂B（P〈0．01）。结论试剂B总体性能优于试剂A,适于临床使用;试剂A有待校准及（或）改进。实验室必须选择质量好且符合自己实验室要求、与本实验室仪器相匹配的试剂以保证检验质量。     

临床研究3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙型肝炎患者血清中HBV DNA的比较

目的 比较3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV) DNA的灵敏度和特异度,初步探讨其用于HBV DNA检测的临床价值.方法 用3种免核酸提取PCR试剂盒分别检测30例慢性乙型肝炎患者及30例阴性参比血清标本中的HBV DNA,以荧光定量PCR结果为标准,比较3种试剂检测灵敏度和特异度.结果 3种试剂盒的HBV DNA阳性检出率分别为93.3%(28/30)、96.7%(29/30)、100%(30/30);3种试剂检测HBV阴性的特异度均为100%;3种试剂检测灵敏度A公司为103 IU/mL,B、C公司均为102 IU/mL.结论 使用免核酸提取PCR试剂检测HBV快速、简便、高效,可用于临床HBV DNA快速检测.     

3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙肝患者血清中HBV的比较

目的 比较3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙肝患者血清中HBV的灵敏度和特异性,初步探讨其用于乙肝病毒检测的临床价值。 方法 用3种免核酸提取PCR试剂盒分别检测30例慢性乙型肝炎病人及30例阴性参比血清标本中的HBV,以荧光定量PCR结果为标准,比较三种试剂检测灵敏度和特异性。结果 3种试剂盒的HBV检出率分别为93.3%（28/30）、96.7%（29/30）、100%（30/30）;3种试剂检测HBV的特异度均为100%;3种试剂检测灵敏度A公司为103 IU/ml,B、C公司均为102 IU/ml。结论 本研究使用免核酸提取PCR试剂检测HBV快速、简便、高效,可用于临床HBV快速检测。     

3种国产丙型肝炎病毒核酸定量与罗氏试剂检测性能的初步评价

目的评价3种国产丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）定量试剂检测性能。方法应用已批准上市占国内市场50%以上的3种国产HCV RNA定量检测试剂,瑞士Roche公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Test定量试剂,分别检测经Ortho和DiaSorin公司抗-HCV EIA试剂,CHIRON公司RIBA HCV 3.0SIA及MP Biomedicals Asia Pacific Pte公司确证试剂检测判定的139份抗-HCV阳性及165份抗-HCV阴性血浆样本。采用SPSS 16.0统计学软件,用χ2检验对4种HCV RNA定量试剂阳性检出率进行分析。结果 304份临床样本检测中,3种（A、B、C）国产HCV RNA定量试剂的阳性检出率显著低于瑞士Roche公司的HCV RNA定量试剂阳性检出率（11.51%、12.83%、14.80%vs 26.97%,χ2值分别为23.38、19.08、13.63,P〈0.01）,国产A、B、C试剂的阳性检出率较为一致（χ2值为1.47,P〉0.05）。国产HCV RNA定量试剂漏检样本的HCV RNA载量小于50IU/ml。以罗氏试剂检测HCV RNA水平为依据,国产试剂检测抗-HCV阴性样本的检出与HCV RNA水平不相关（即高值和低值均有检出）。结论应提高国产HCV RNA定量试剂的灵敏度和线性检测范围。     

两种HCVRNA载量检测试剂相关性分析

目的：分析进口与国产试剂在HCV RNA定量检测中的相关性,评价国产HCV RNA荧光定量PCR试剂在不同病毒载量时的检测能力。方法：以美国Roche公司COBAS Amplipreo/cobas TaqMan HCV test试剂（Roche试剂）对标本的HCV RNA定量为标准,评价某国产HCV荧光定量PCR试剂（DA试剂）对不同病毒滴度标本的检测性能。分析两种试剂检测HCV RNA结果的相关性,对DA试剂在不同病毒载量时的检测能力进行评价。结果：两种试剂检测结果存在线性相关（R2=0.916,P〈0.01）,Roche试剂检测结果[（5.68±1.22）IU/ml,lg]高于DA试剂检测结果[（4.16±1.24）IU/ml,lg],差别有统计学意义（P〈0.01）;对检测HCV高病毒载量[（≥5~〈7）IU/ml,lg和≥7IU/ml,lg]组,两种试剂相关性较高（R2分别为0.781、0.729,P〈0.01）对低HCV病毒载量（≥3~〈5）IU/ml,lg组,两种试剂相关性较低（R2=0.483,P〈0.01）;病毒载量在（≥3~〈4）IU/ml,lg组,DA试剂假阴性为45.4%（5/11）;病毒载量（≥1.18~〈3）IU/ml,lg组及〈1.18 IU/ml,lg组,DA试剂均未检出。结论：与Roche试剂相比,DA试剂在高病毒载量标本的相关性较好,低病毒载量标本的相关性低于高病毒载量标本。DA试剂检测HCV RNA的线性范围较窄,与Roche试剂相比存在一定差距。     

荧光探针定量PCR在检测HBV-DNA的应用

目的　用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)方法准确地定量检测血清中的HBV DNA数量和免疫指标 ,以指导临床。方法　用FQ PCR方法和酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法分别检测 184份临床血清标本的HBVDNA和免疫指标。结果　用 (ELISA)作对照 ,经FQ PCR检测 ,HBeAg(+)组 (82份 )的阳性率为 10 0 % ,HBV DNA阳性拷贝数范围在 10 5～ 10 10 /ml;HBeAb(+)组 (5 2份 )的阳性率为 5 5 8% ,HBV DNA阳性拷贝数范围在 10 4～ 10 7/ml;HBsAb(+)组 (2 0份 )的阳性率为 15 % ,HBV DNA阳性拷贝数范围在 10 4～ 10 5/ml;对照组 (30份 )的阳性率为 0。HBeAg(+)组血清中HBV DNA含量 (10 7 2± 1 13 )显著高于HBeAb(+)组 (10 5 8± 1 4)和HBsAb(+)组 (10 4 67± 0 58)。结论　FQ PCR检测HBV DNA具有较高的灵敏度和特异性 ,且能准确定量 ,FQ PCR可以检测HBV的真实感染和复制情况 ,对乙型肝炎临床诊断 ,治疗及疗后观察有重要意义。     

荧光定量PCR检测石蜡组织中结核杆菌的临床应用

目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测石蜡包埋组织结核分枝杆菌DNA（TB—DNA）在结核病诊断中的应用价值。方法33例石蜡包埋组织标本采用FQ—PCR技术检测TB—DNA,同时进行组织病理学检查,分别计算FQ—PCR和病理学检查的灵敏度和准确度。结果29例临床诊断为结核病的组织标本中,FQ—PCR检测阳性26例,病理学拟诊为结核阳性20例,4例临床诊断非结核病的标本中,FQ—PCR检测和病理学检查都为阴性,两者的灵敏度和准确度分别为89．66％、90．91％和68．97％、72．73％。结论FQ—PCR技术检测石蜡包埋组织的TB—DNA用于结核病的诊断具有较高的灵敏度和准确度,与病理学检查相结合可以大大提高结核病的检出率。     

一种HBV DNA 定量检测试剂的准确性分析

目的 评价一种新型HBV DNA 定量检测试剂的准确性。方法 将第3 代HBV DNA WHO 国 际标准品稀释为6 种不同梯度浓度样本,8.5×105、8.5×104、8.5×103、8.5×102、85 及42.5 IU/ml,用待评价 试剂careHBV PCR Assay V3.0 检测,并对实测值和理论值进行相关性分析;以Cobas Taqman HBV V2.0 为参 比试剂,用careHBV PCR Assay V3.0 检测93 份HBV 感染者标本和30 份健康者标本HBV DNA 含量,并对2 种试剂定量检测结果进行相关性和一致性分析;采用巢式PCR 扩增漏检标本的HBV S 区,直接测序法测定 其基因型。结果 careHBV PCR Assay V3.0 检测WHO 国际标准品的实测值和理论值具有线性相关;2 种定 量试剂检测93 份HBV 感染者标本结果均阳性共68 份,检测结果呈线性相关,差异无统计学意义（P >0.05）, 但careHBV PCR Assay V3.0 检测值相对偏低;careHBV PCR Assay V3.0 检测有14 份标本漏检,其中13 份标 本Cobas Taqman HBV V2.0 检测结果位于30 ～ 2 000 IU/ml 间;对1 份漏检标本的基因型检测结果为C 型。 结论 careHBV PCR Assay V3.0 与Cobas Taqman HBV V2.0 试剂检测结果有较好的相关性,但对基因型C 型 的标本可能存在漏检现象。     

乙型肝炎病毒不同基因型 DNA聚合酶对病毒复制水平的影响

目的：研究不同基因型聚合酶（polymerase,pol）复制乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）DNA的能力是否存在差异。方法：采用不依赖酶切和连接的克隆（restriction digestion and ligation-independent cloning,RLIC）方法和HBV聚合酶反式互补技术表达并检测A、B、C、D 4种基因型聚合酶复制HBV DNA的情况。结果：（1）反式互补技术可使 A、B、C、D型 HBV 重新获得表达,HBV DNA量分别为A=（63.03±8.03）×105 copies/μl,B=（23.23±3.53）×105 copies/μl,C=（17.63±1.25）×105 copies/μl,D=（75.73±9.43）×105 copies/μl。（2）HBV不同基因型聚合酶之间复制HBV能力存在差异,F（4,10）=91.88,P＝0.000。（3）A型和D型聚合酶复制HBV能力强于B型和C型聚合酶,差异有统计学意义,P（A,B）=0.001,P（A,C）=0.00１,P（B,D）=0.00１,P（C,D）=0.00１。结论：HBV不同基因型聚合酶之间复制HBV能力存在差异;为深入研究不同基因型在地理分布、所致疾病严重性等方面提供了有用信息并奠定了坚实的基础。     

外周血乙型肝炎病毒核酸水平与丙氨酸氨基转移酶关系的探讨

目的　探讨血清中乙型肝炎病毒核酸 (HepatitisBvirus -DNA ,HBV -DNA)含量与丙氨酸氨基转移酶 (Alanineaminotransferase ,ALT)的关系。方法　用荧光实时定量聚合酶链反应 (Fluorescencereal-timequantita tivepolymerasechainreaction ,FQ -PCR)和连续监测法分别检测了 5 2 8例乙型肝炎病毒感染者及非病毒感染者血清中HBV -DNA和ALT水平。结果　当血清中HBV -DNA含量在 10 6拷贝 /毫升以下时 ,随着血清中HBV -DNA含量的增加 ,血清ALT水平升高 ;但当HBV -DNA含量超过 10 6拷贝 /毫升后 ,ALT水平反而随着血清中病毒数量的增加而呈减弱趋势。结论　血清中乙型肝炎病毒数量与ALT之间存在一定的关系 ,但不能只依据血清ALT水平来推断乙型肝炎病毒在体内的复制活跃程度     

乙型肝炎血清学标志物与HBV-DNA含量关系的探讨

目的:为了进一步探讨乙型肝炎患者血清中HBV-DNA含量与HBV血清学标志物之间的关系,了解荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒的应用价值。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测510例来自我院门诊就诊者和住院患者血清标本中的特异性抗原抗体,并同时应用荧光定量PCR分析系统测定血清标本中HBV-DNA的含量进行分析。结果:经ELISA法与FQ-PCR法检测的510例血清标本中,51例"大三阳"(HBsAg+HBeAg+HBcAb)的血清标本,其HBV-DNA检出数均呈阳性,阳性率为100%,其HBV-DNA的拷贝数范围为105~109/ml;76例"小三阳"(HBsAg+HBeAb+HBcAb)的血清标本,其HBV-DNA检出的阳性率为47.4%,HBV-DNA的拷贝数范围为104~107/ml。结论:HBV-DNA是乙型肝炎病毒感染和复制的特异性指标,应用FQ-PCR技术检测乙型肝炎病毒,具有较高的灵敏度和特异性,其操作简便,定量准确,结果可靠,它比HBV血清学标志物更能反映乙型肝炎病毒在体内的存在和真实复制状况,在HBV-DNA感染诊断,特别是药物疗效的观察中,具有良好的应用价值。因此,HBV-DNA与血清学标志物的相互关系是本文研究的课题。     

乙肝病毒血清标志物模型与HBV—DNA定量的相关性

目的：探讨乙肝病毒血清标志物模型与HBV-DNA定量的相关性。方法：应用酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量聚合酶链反应技术（FQ-PCR）,对865例乙型肝炎病毒携带者血清标本分别进行乙肝病毒血清标志物模型与HBV．DNA定量测定。结果：模式A（大三阳）的检出率最高,为96．1％,模式B（小三阳）的HBV—DNA检出率为79．0％,模式CHBV-DNA检出率为63．5％。结论：HbeAg是反映HBV复制活跃的可靠指标;血清HBeAg阴性,病毒并未停止复制;联合检测乙肝标志物和HBV-DNA水平有助于疾病的诊断、疗效提高及预后判断。     

HBV-M与HBV-DNA的定量关系探讨

目的:探讨时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测乙型肝炎患者血清免疫标志物(HBV-M)与实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)定量检测乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)含量之间的关系。方法:采用FQ-PCR技术检测239例患者血清中HBV-DNA含量,同时用TRFIA检测乙型肝炎病毒五项标志物及含量,并对各项检测结果进行统计学分析,同时以HBV-DNA拷贝数的对数为横坐标,HBV-M含量的对数为纵坐标,求线性回归及相关系数(r)。结果:239例乙肝患者血清中,HBV-DNA的阳性率与HBV-M不同组合之间有差异,HBsAg+/HBeAg+/HBcAb+组HBV-DNA的阳性检出率明显高于其它组,达96.33%(105/109),HBsAg+/HBeAb+/HBcAb+组为43.90%(54/123),HBsAg+/HBcAb+组为42.86%(3/7)。并且随HBsAg、HBeAg含量增高,HBV-DNA含量也增高,存在一定的相关性(r=0.364,r=0.536)。抗-HBs,抗-HBe及抗-HBc与HBV-DNA之间,无明显相关性。结论:HBeAg阳性是病毒复制的重要指标;抗-HBe的出现不能作为HBV复制停止的指标;HBsAg、HBeAg浓度与HBV-DNA之间有良好的相关性,HBsAg和HBeAg浓度变化可以作为临床评价乙肝病毒复制程度和抗病毒疗效的参考指标;联合采用TRFIA检测HBV-M与FQ-PCR定量检测HBV-DNA能更早的诊断HBV感染,了解病毒的复制情况和观察疗效及判断预后。     

慢性乙肝患者血清标志物、基因型与病毒载量关系的研究

目的:采用化学发光的方法对718例患者乙肝血清标志物进行定量检测,并采用序列特异性引物多重PCR。方法:对所有慢性乙肝患者的乙型肝炎病毒进行基因分型,乙型肝炎病毒DNA水平应用实时荧光定量PCR方法进行检测。结果:56.7%的HBsAg阳性患者HBV-DNA阳性,84.8%的HBeAg阳性患者HBV-DNA阳性。乙型肝炎病毒B型395例,C型229例,BC混合型62例,未分型32例,所占比例分别为55.01%,31.89%,8.64%,4.46%。不同基因型之间乙型肝炎病毒DNA载量无明显差别。结论:HBeAg与HBV-DNA高度相关;慢性乙肝患者中,C型是乙型肝炎病毒基因型的主体,感染的乙型肝炎病毒基因型与血清病毒载量之间没有明显的相关性。     

HBV-DNA与其病毒免疫标志物的关系

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV-DNA与病毒免疫标志物的关系。方法:采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)对568份HBV感染者血清中HBV-DNA含量进行检测,同时用ELISA法检测其HBV免疫标志物。结果:HBsAg、HBeAg和HBcAb阳性组HBV-DNA阳性率约为98.9%;HBsAg、HBcAb和HBeAb阳性组HBV-DNA阳性率约为65.4%;HBsAb、HBcAb和HBeAb阳性组HBV-DNA阳性率约为13.9%;三组间HBV-DNA阳性率有明显差异(P<0.01)。HBeAg阳性标本中HBV-DNA阳性率最高,达92.0%;HBsAg与HBV-DNA的符合率最高,为77.6%。结论:检测HBV-DNA含量结合血清病毒标志物对乙型肝炎的临床诊断治疗以及病情判断有重要意义。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎的临床研究

目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测乙型肝炎的临床价值。方法:应用FQ-PCR技术对1562例乙型肝炎阳性血清标本和无症状健康者血清进行HBV-DNA检测并对不同血清型的HBV-DNA进行比较。结果:经FQ-PCR检测,380例HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)其HBV-DNA阳性率100%;246例HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)其HBV-DNA阳性率88.6%;210例HBsAg(+)、HBeAg(+)其HBV-DNA阳性率98.1%;190例HBsAg(+)、HBcAb(+)其HBV-DNA阳性率69.5%;146例HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)其HBV-DNA阳性率22.6%;66例HBsAb(+)其HBV-DNA阳性率6.1%;20例HBsAb(+)、HBcAb(+)其HBV-DNA阳性率60.0%;18例HBsAb(+)、HBeAb(+)其HBV-DNA阳性率55.5%;286例“两对半”五项全阴性的病例中有4例HBV-DNA阳性,其阳性率为1.4%。结论:血清中HBV-DNA水平反映了体内HBV是否复制及复制的程度,定量PCR是鉴别HBV感染各期有价值的工具,是评价传染性的可靠方法。定量PCR测定灵敏度高,对乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择和疗效观察有重要意义。     

两种HBV DNA定量试剂在慢性乙型肝炎医疗决策点的比较研究

目的比较两种实时荧光定量HBV-DNA检测试剂对慢性乙型肝炎（CHB）患者管理的一致性。方法选取某国产试剂H和Roche公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan（CAP/CTM）高灵敏核酸检测系统作为比较对象,分别检测133例CHB患者血清HBV-DNA。选择HBV-DNA〈500 IU/mL、500～2000 IU/mL、〉2000 IU/mL等三个浓度进行两检测系统的一致性监测。结果 （1）两系统检测结果比较,试剂H组HBV-DNA浓度为500～2000 IU/mL时,其结果的Log值为2.84±0.27,相应标本在CAP/CTM组的检测结果为3.48±0.54,两种系统检测结果差异有统计学意义（P=0.000）。试剂H组HBV-DNA浓度为〉2000 IU/mL时,其结果的Log值为4.74±1.06,相应标本在CAP/CTM组的检测结果为5.32±1.01,两种系统检测结果差异有统计学意义（P=0.000）。（2）以CAP/CTM为标准,试剂H在HBV-DNA〈500 IU/mL、500～2000 IU/mL、〉2000 IU/mL时的敏感度分别为100%、81.5%和75.9%;特异度分别为87.5%、95.3%和100%。结论国产试剂H系统和CAP/CTM系统在对CHB患者的抗病毒治疗筛选上以及停药的关键医疗决策浓度监测上有较大差异。     

干扰素治疗慢性乙型肝炎病人HBV-DNA的实时FQ-PCR检测及其意义

①目的 探讨实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）定量检测乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）对干扰素（IFN）治疗慢性乙型肝炎（CHB）疗效预测及评价的价值。②方法 21例CHB病人，在治疗前、治疗过程中第1～6个月、疗程结束后随访6和12个月共9个时间点分别取血，用FQ-PCR定量检测HBV-DNA、放免法定量检测HBeAg。③结果 用药后第1～5个月，HBV-DNA载量逐月下降（H=137．50，q=4．68～14．04，P均〈0．01）;其后不再下降。治疗前血清HBV-DNA与HBeAg和谷丙转氨酶（ALT）呈高度正相关（r=0．719、0．492，P〈0．05），治疗期间及随访过程中各时间点HBV-DNA与ALT呈负相关（r=-0．259～-0．057，P〈0．05），与HBeAg呈低度正相关（r=0．014～O．138，P％0．05）。④结论 FQ-PCR以其高度的敏感性及简便、快速、准确而成为目前HBV-DNA定量检测的首选方法；在应用IFN治疗CHB前，应根据血清HBV-DNA拷贝数和其他预测因子慎重选择病例，可以明显提高疗效。