脊髓损伤对生精细胞bcl-2和Bax基因表达的影响

目的 :探讨脊髓损伤后生精细胞减少的原因。方法 :应用链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶 (S P)免疫组织化学法检测脊髓损伤大鼠术后第 2周、第 4周睾丸生精细胞bcl 2 ,Bax蛋白表达的情况。结果 :术后第 2周 ,手术组大鼠睾丸生精细胞bcl 2 ,Bax基因蛋白表达与假手术组比较差异无显著性意义。术后第 4周 ,手术组大鼠与假手术组比较 ,睾丸生精细胞bcl 2基因蛋白表达显著性减少 (P <0 0 5 ) ,Bax基因蛋白表达则显著性增高 (P <0 0 5 )。结论 :bcl 2及Bax基因蛋白表达的改变是脊髓损伤后睾丸生精细胞显著减少的原因之一。     

bcl-2基因在急性髓系白血病细胞中的表达及意义

采用链霉亲和素过氧化酶免疫组织化学方法 (S -P法 )检测 30例初发成人急性髓系白血病(AML)患者的骨髓细胞bcl - 2蛋白表达 .结果 :( 1)AML患者骨髓细胞中bcl - 2蛋白阳性表达率为( 55 12± 2 3 78) % ( 19%～ 93% ) ,显著高于正常对照 (P <0 0 1) . ( 2 )AML按FAB分型各亚型间比较 :bcl- 2蛋白表达在M1,M2 型阳性率较高 ( 60 58± 19 0 5) % ;M3 型则较低 ( 2 1 50± 6 2 2 ) % ;M4 ,M5型最高( 69 64± 14 96) % . ( 3)经标准诱导治疗后 ,完全缓解 (CR)组的bcl- 2蛋白表达显著低于未缓解 (NR)组 (P <0 0 5) .提示 :bcl- 2蛋白在AML细胞中呈高表达 ,并为白血病化疗耐药的预后指标之一 .     

成人急性白血病患者bcl-2的基因表达及临床意义

目的探讨bcl-2基因在成人急性白血病(AL)患者中的表达与临床预后的关系.方法采用半定量RT-PCR法检测65例成人AL患者和20例正常人的bcl-2及mdr1基因的表达.结果①初治组及复发组AL患者bcl-2的表达水平较正常对照组明显增高(P＜0.01);②耐药组AL患者bcl-2表达水平较敏感组高(P＜0.01);③在bcl-2高表达的AL患者中,其完全缓解(CR)率明显低于bcl-2低表达患者(P＜0.01 );④全部65例AL患者中bcl-2与mdr1之间有低度正相关性(r=0.268,P=0.031);两者同时高表达的12例患者仅2例CR,但两者同时低表达的9例患者全部CR.结论bcl-2高表达是判断AL耐药的指标也是引起AL患者不良预后的因素.     

急性白血病细胞 C-myc和Bcl-2蛋白表达的意义

目的研究bcl-2和c-myc基因在急性白血病细胞(AL)中的表达及其与AL的分型、临床特征、疗效及预后的关系.方法采用免疫组化法分别检测54例初治AL骨髓细胞的bcl-2和c-myc蛋白表达情况,分析其与FAB分型、临床特征、疗效及预后的关系.结果AL骨髓细胞中bcl-2及c-myc基因的表达显著高于正常对照组(P<0.05).bcl-2,c-myc基因表达在急性髓系白血病(AML)与急性淋巴细胞性白血病(ALL)无显著差异;在AML的亚型中,bcl-2在M4及M5中的表达高于M1,M2和M3(P<0.05);而c-myc的表达在各亚型中无显著性差异(P>0.05).bcl-2的表达与初诊时的白细胞数呈正相关(R=0.44,P<0.05),与疗效呈负相关(R=-0.40,P<0.05),与 c-myc的表达呈正相关(R=0.51,P<0.05);c-myc 的表达与初诊时的白细胞数呈正相关(R=0.50,P<0.05).结论bcl-2和c-myc基因的紊乱在AL的发病中起着重要作用,还与AL的某些临床特征、疗效及预后密切相关.     

急性白血病患者p53和bcl-2表达的临床意义

目的;探讨急性白血病患者骨髓细胞Ｐ５３,ｂｃｌ－２基因表达水平与化疗预后的关系。方法;用免疫组化法测定了４２例急性白血病初发患者的骨髓细胞Ｐ５３,ｂｃｌ－２表达水平,并分析随访组（２７例）两者表达水平与化疗预后的关系。１０例务液系统良性疾病患者作为对照。结果;４２例患者Ｐ５３和ｂｃｌ－２总体表达水平显著高于对照组。在２７例可随访疗效的急性白血病患者中,Ｐ５３、ｂｃｌ－２均为阳性者完全缓解（ＣＲ）率     

急性白血病bcl-2和bax mRNA比值及其临床意义

目的 研究凋亡调控基因ｂｃｌ－２和ｂａｘ在ＡＬ中的表达、相互关系和临床意义。方法应用半定量逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和Ｓｏｒｔｈｅｒｎｂｏｌｔ技术检测３２例ＡＬ患儿ｂｃｌ－２和ｂａｘ ｍＲＮＡ水平及其比值。结果 ＡＬ患儿骨髓细胞中ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的表达明显高于对照组（Ｐ〈０．０１），ｂａｘ的表达明显降低（Ｐ〈０．０１）。分析ｂｃｌ－２／ｂａｘ ｍＲＮＡ表达比值显示，高比值组ＮＲ率明显     

人参对大鼠缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡及bcl-2基因表达的影响

采用结扎大鼠左冠状动脉前降支 (L AD)建立心肌缺血再灌注动物模型 ,应用原位末端标记法检测心肌凋亡细胞 ,并进行细胞计数。原位杂交和免疫组化检测 bcl- 2 m RNA和基因表达产物的蛋白质 ,通过图像分析系统测量阳性染色区域的平均光密度值进行量化分析 ,以观察人参对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及基因表达。结果显示 :心肌细胞凋亡数单纯结扎组为 (37.5± 9.2 )个 /视野 ,人参治疗组为 (6 .5± 3.6 )个 /视野 ,假手术组为 0～ 1个 /视野 ,各组间差异非常显著 (P<0 .0 0 1)。人参治疗组 bcl- 2 m RNA光密度值为 0 .11± 0 .0 2 ,较单纯结扎组 (0 .0 7±0 .0 2 )和假手术组 (0 .0 6± 0 .0 1)明显升高 (P<0 .0 0 1) ;人参治疗组 Bcl- 2蛋白光密度值为 0 .15± 0 .0 2 ,与单纯结扎组 (0 .0 9± 0 .0 2 )比较有非常显著性差异 (P<0 .0 0 1) ,但与假手术组 (0 .14± 0 .0 1)比较差异不显著 (P>0 .0 5 )。心肌缺血再灌注可使心肌细胞凋亡数显著增加 ,人参治疗可明显地抑制缺血再灌注时所诱导的心肌细胞凋亡的发生 ,提示人参具有防治心肌缺血再灌注损伤 ,抑制心肌细胞凋亡的作用。其机制可能是通过增强 bcl- 2基因表达而实现的     

反义bcl-2基因抗白血病作用的研究

目的 研究反义bcl-2基因抗白血病作用及其特点,探讨反义基因或联合药物体外净化和治疗白血病可行性。方法 （1）RT－PCR和蛋白印迹方法检测HL－60、U937、K562、CEM白血病细胞株以及常见白血病类型的bcl-2 mRNA和P26蛋白表达情况。（2）选择高表达bcl-2基因的HL－60细胞株作为靶细胞,用人工合成bcl-2正反义硫代寡聚脱氧核苷酸（PS－ODN）体外培养处理。检测bcl-2 mRNA和P26蛋白的变化;DNA梯形分析细胞凋亡,锥虫蓝拒染法和克隆培养观察细胞生长;同时将HL－60细胞与PS－ODN培养孵育7天后的活细胞腹腔接种Scid鼠,半巢式RT－PCR和病理分析该HL－60细胞在体内生物学行为改变。（3）建立三种白血病细胞株CEM、K562、HL－60 Scid鼠白血病模型和有效监测与追踪白血病细胞株的方法,掌握体内白血病细胞株生物学行为;用bcl-2正反义PS－ODN腹腔给药治疗HL－60 Scid鼠白血病模型,观察治疗后体内白血病进展变化。（4）用RT－PCR方法克隆bcl-2基因和构建其两种不同的反义RNA逆转录病毒表达载体。（5）转染高表达bcl-2的HL－60细胞,比较两种反义RNA在对抗bcl-2的作用与降低内源性bcl-2蛋白水平上的异同性。观察两种反义RNA介导的靶基因抑制对烷化溶血磷脂（ALP）和四种化疗药物诱导的HL－60细胞凋亡的影响。（6）RT－PCR检测基因转染HL－60在化疗药物作用下FGFβ1表达。结果 （1）白血病细胞株表达bcl-2有差异,bcl-2 mRNA和它的P26蛋白不平行。（2）三种白血病细胞株HL－60,K562,CEM可在Scid鼠增殖,产生典型白血病浸润模型特征,白血病增殖和浸润程度与白血病细胞生物特性有关,其顺序为CEM＞K562＞HL－60。（3）人工合成的bcl-2反义硫化寡脱氧核苷酸（ASPO）能够下调HL－60细胞bcl-2表达,诱导凋亡,抑制增殖和克隆形成;同时使其失去在体内的致白血病能力。（4）bcl-2反义硫代寡脱氧核苷酸,腹腔给药能够抑制肿块增长,白血病扩张,延长Scid鼠生存期,呈剂量依赖性。（5）部分编码区的反义RNA能够降低HL－60细胞内源性Bcl-2蛋白水平,提高ALP和四种化疗药物对HL－60杀伤率,促进它们诱导的HL－60细胞凋亡。（6）反义基因转染的HL－60细胞在化疗药物作用下负调控因子TGFβ1基因表达增加。结论 bcl-2反义基因可有效对抗bcl-2原癌基因表达,发挥明显的抗白血病作用,为体外净化白血病细胞和体内治疗白血病提供依据。     

羟基喜树碱对结肠癌LoVo细胞凋亡及 bcl-2、p53基因表达的影响

目的 探讨羟基喜树碱治疗结肠癌LoVo细胞的作用机制。方法 应用四唑盐比色试验、琼脂糖凝胶电泳、DNA末端原位标记染色法研究羟基喜树碱对结肠癌LoVo细胞生长及诱导凋亡的作用，采用Western Blot法分析羟基喜树碱处理结肠癌细胞前后bcl-2、p53基因的表达情况。羟基喜树碱对结肠癌LoVo细胞生长具有较强的抑制作用，可诱导结肠癌细胞凋亡，且其凋亡一浓度及时间依赖性。羟基喜树碱处理结肠癌LoVo细胞后，bcl-2基因表达下降，p53基因表达上升。结论 羟基喜树碱可诱导结肠癌细胞凋亡，可能与下凋bcl-2基因及升高p53基因表达有关。     

青蒿琥酯对K562细胞bcl-2基因表达的影响

【目的】研究青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡过程中bcl-2表达的改变。【方法】培养K562细胞,倒置光显微镜和荧光显微镜观察青蒿琥酯处理的K562细胞形态,RT-PCR检测bcl-2的表达。【结果】K562细胞经青蒿琥酯处理48h后,倒置光显微镜：细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降,细胞出现发泡现象,细胞内可见多个折光性较强的圆形小泡样结构。荧光显微镜：染色质高度浓缩、边缘化,凝集成明亮的团块。RT-PCR显示青蒿琥酯处理的K562细胞的bcl-2的表达下调。【结论】青蒿琥酯抑制K562细胞生长的机制可能与bcl-2基因的表达下调有关。     

阿糖胞苷对HL60细胞增殖和凋亡及bcl-2基因表达的影响

目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)对急性早幼粒白血病细胞HL60增殖、凋亡及bcl-2基因表达的影响。方法 Ara-c与HL60细胞共同孵育后,应用光学显微镜和透射电子显微镜观察细胞的形态学变化,通过四唑盐(MTT)法分析不同剂量Ara-C对细胞增殖的抑制作用,应用流式细胞术分析Ara-C对细胞凋亡和Bcl-2蛋白的影响,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究bcl-2基因表达的影响。结果 250μg／ml Ara-C对HL60细胞作用48 h后,光学显微镜下可见细胞呈核固缩、深染及染色质边集等多种形态改变,透射电子显微镜下可见典型的凋亡细胞,MTT检测显示Ara-C能明显抑制细胞的生长。流式细胞仪分析结果显示,细胞凋亡百分率随作用时间的延长而增加,而Bcl-2蛋白则随之下降。RT-PCR结果显示,bcl-2 mRNA的表达亦随着药物作用时间的延长而下降。结论 Ara-C能诱导HL60细胞凋亡,下调Bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA水平。     

252锎中子放疗对宫颈癌细胞凋亡及bcl-2、bax的影响

目的探讨中子放疗前后宫颈癌细胞凋亡、凋亡相关基因bcl-2、bax表达的变化及意义.方法应用TUNEL法、免疫组化检测宫颈鳞癌放疗前后的细胞凋亡、凋亡相关基因bcl-2、bax表达变化.结果20例患者宫颈癌细胞凋亡阳性率和凋亡指数(AI)分别由放疗前的35%和(4.22±4.14)%增加至放疗后的85%和(34.64±24.36)%,差异显著(P＜0.01).放疗前后bcl-2表达无明显变化(P＞0.05),且与凋亡无明显相关(P＞0.05).bax表达阳性率和平均标记指数分别由放疗前的25%和(8.35±3.06)%增加至放疗后的80%和(16.43±6.05)%,差异显著(P＜0.01),且放疗后与凋亡呈正相关(r=0.852 0,P＜0.01).结论 252锎中子射线诱导了肿瘤细胞的凋亡,可能是其治疗作用的重要机制之一;bax表达是252锎中子射线诱导细胞凋亡的途径之一,其机制可能与bcl-2/bax间的平衡改变有关.     

bcl-2 shRNA表达载体的构建及其在K562细胞中的干扰作用研究

目的构建bcl-2shRNA表达载体，观察其在人白血病K562细胞系中对bcl-2基因的干扰作用。方法设计合成有短发夹结构靶位bcl-2基因的65个碱基的寡核苷酸，连接到载体pSIREN-Shuttle（pSS），构建了bcl-2shRNA表达载体，得到重组质粒pSS-shbcl-2-1、pSS-shbcl-2-2、pSS-shbcl-2-3和一个阴性对照，将其稳定转染K562细胞，分别用RT-PCR、Western-blot法检测转染后K562细胞bcl-2mRNA及蛋白质表达水平。结果成功构建了bcl-2shRNA的表达载体，并筛选到转染后K562细胞在pSS-shbcl-2-3组bcl-2基因的mRNA和蛋白质表达水平明显抑制。结论特异性的bcl-2shRMA可以干扰K562细胞中bcl-2基因的表达，针对bcl-2基因不同位点的不同shRNA也有干扰效果的差异。     

外源bax基因表达对人视网膜色素上皮细胞bcl-2表达的影响

０引言视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞是视网膜重要的功能细胞之一，其异常增生或退行性变，都会引起感光细胞结构或功能障碍而致盲，详细机制尚不清楚［１，２］．我们的前期实验证实，ｂａｘ表达增强、或ｂｃｌ－２／...     

siRNA对K562和K562/ADM细胞耐药和凋亡的调节

目的 研究联合转染以MRP和bcl-2基因为靶标的siRNA,对白血病细胞株K562和耐药的K562/ADM细胞药物敏感性和凋亡的影响.方法 体外化学合成以多药耐药相关蛋白(MRP)和bcl-2为靶标的siRNA,分别或联合用脂质体转染人阿霉素处理的K562和K562/ADM以单纯化疗处理组和未处理组为对照.转染后24、48、72 h,MTT法检测各组细胞生长抑制率,计算IC50值.转染24 h后RT-PCR检测各组细胞相应靶基因mRNA表达水平,48 h后流式细胞仪检测细胞MRP和bcl-2蛋白表达率和细胞凋亡率.结果 K562/ADM细胞ADM的IC50为12.81 μg/ml,ADM MRP-siRNA组降为3.74 μg/ml,ADM bcl2-siRNA组降为6.82 μg/ml ADM MRP-siRNA bcl2-siRNA组降至2.51 μg/ml;K562细胞ADM的IC50为6.75 μg/dml,ADM MRP-siRNA组降为3.22 μg/ml,ADM bcl2-siRNA组降为3.56 μg/ml,ADM MRP-siRNA bcl2-siRNA降至1.84 μg/ml,有统计学意义(P<0.01).转染以MRP和bcl-2为靶标的siRNA后,细胞相应靶基因的mRNA及蛋白的表达明显减低,细胞凋亡率显著升高,联合转染两种siRNA,细胞的IC50进一步下降,细胞凋亡率进一步升高,与分别转染组相比有统计学差异(P<0.05);结论联合转染以MRP和bcl-2基因为靶标的siRNA,通过降低靶基因蛋白表达,产生协同作用,明显增加耐药和亲本肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率.     

bcl-2基因表达与小细胞肺癌对抗机体免疫所致细胞凋亡的关系

目的 观察小细胞肺癌细胞株bcl-2基因表达与其耐受肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫攻击的关系,探索应用bcl-2硫代反义寡核苷酸(bcl-2SON)治疗肺癌的途径。方法 bcl-2SON处理小细胞肺癌细胞株NCI-H69,Westernblotting检测其对bcl-2表达作用;分别把bcl-2表达不同的小细胞肺癌细胞株与肺癌标本分离出来的TIL共同培养,并通过JAM试验观察TIL诱导肺癌细胞凋亡的情况。结果 经bcl-2SON处理后NCI-H69细胞的bcl-2表达明显受抑制。JAM试验结果显示,bcl-2SON处理的H69细胞及无bcl-2表达的NCI-H82细胞在与TIL混合培养中,随着TIL浓度增加,凋亡细胞也增加;对照的NCI-H69可见bcl-2表达,JAM试验中随着TIL浓度增加,凋亡细胞的量无明显变化。结论 表达bcl-2的肺癌细胞可对抗肿瘤浸润淋巴细胞的免疫攻击,bcl-2SON可作为治疗肺癌的新途径。     

Survivin、bcl-2蛋白在白血病中的表达及相关性探讨

目的：探讨急性白血病骨髓细胞中Survivin、bcl-2蛋白的表达及相关性。方法：采用免疫组化S-P法检测70例白血病患者骨髓细胞Survivin、bcl-2蛋白表达情况。结果：病例组、ANLL、ALL、CML组Survivin、bcl-2蛋白阳性表达率明显高于对照组，差异有显著性（P〈0．01）；ANLL、CML组Survivin、bcl-2蛋白阳性表达率明显高于ALL组，差异有显著性（R0．01）；而ANLL与CML组之间差异无显著性（P〉0．05）；Spearman秩和相关分析显示，Survivin、bcl-2蛋白表达呈显著正相关（rs=0．32，P〈0．01）。结论：Survivin、bcl-2均与白血病发生、发展密切相关，且两者有一定的协同效应。     

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注神经元凋亡、bcl-2和bax表达的影响

目的观察促红细胞生成素(Epo)对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白bc l-2、bax表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为6组,缺血再灌注治疗A组、B组、C组、D组(分别在缺血前30 m in及再灌注后2 h、6 h、12 h腹腔注射Epo 3 000 IU.kg-1)、缺血再灌注组(E组)和假手术组(F组)。观察Epo对大鼠脑缺血再灌注后脑组织的病理变化,Epo、bc l-2、bax的表达及神经细胞凋亡情况。结果(1)A组、B组、C组及F均未见明显病理性改变,D组及E组显示梗死区神经元缺血改变;(2)各组均可见不同程度Epo阳性表达细胞,且A组、B组、C组较D组、E组表达明显增多(P<0.05);(3)TUNEL法见A组、B组、C组、F组凋亡阳性细胞较D组、E组明显减少(P<0.05);(4)A组、B组、C组bc l-2蛋白表达较D组、E组、F组明显增多(P<0.05),而bax蛋白表达较D组、E组及F组明显减少(P<0.05)。结论Epo通过调控凋亡相关基因bc l-2/bax的比率而发挥抗神经元凋亡的脑保护作用。     

靶向bcl-2基因的shRNA对肝星状细胞凋亡的影响

目的研究短发夹RNA(shRNA)重组载体介导抑制大鼠肝星状细胞(HSCs)bcl-2基因的表达,观察其对HSCs凋亡的影响。方法重组质粒载体pGPU6-GFP-shRNA由脂质体介导转染HSC-T6细胞株。荧光定量PCR和Western blotting鉴定bcl-2表达;CCK-8法观察质粒转染对HSCs生长和增殖的影响;Hoechst 33258染色观察细胞形态学改变;流式细胞术及caspase-3和caspase-9酶活性检测分析转染后细胞凋亡情况。结果pGPU6-GFP-shRNA能抑制bcl-2 mRNA和蛋白表达;转染后HSC-T6体外生长明显受到抑制;转染后72 h时细胞凋亡率为33.34%,caspase-3和caspase-9酶活性显著增高。结论shRNA重组载体pGPU6-GFP-shRNA能有效地抑制HSC-T6中bcl-2的表达,抑制细胞生长并促进凋亡。实验为进一步探索肝纤维化基因治疗提供了实验依据。