烫伤后金葡菌脓毒症大鼠组织CD14 mRNA表达的改变

业已证明,CD14作为G-菌脂多糖的重要受体,与脂多糖结合蛋白(LBP)共同构成内毒素增敏系,在G-菌脓毒性休克中具有重要地位.新近体外观察发现CD14也可作为G+菌细胞壁成份(如肽聚糖和脂磷壁酸)的功能受体,在介导G+菌所致的单核/巨噬细胞活化和细胞因子的产生中可能具有一定作用.但迄今为止,对于G+菌脓毒症时CD14在体内的变化规律及其意义尚缺乏了解.为此,本实验进行了初步探讨,旨在明确CD14在严重烫伤后金葡菌脓毒症病理生理过程中的作用.采用大鼠20％总体表面积Ⅲ°烫伤复合金葡菌攻击造成脓毒症模型,将42只大鼠随机分为三组：正常对照组(n=6),于麻醉后活杀;烫伤对照组(n=6),于烫伤后24 h活杀;烫伤复合金葡菌感染组(n=30),分别于0.5、2、6、12、24 h活杀,各时间点动物数均为6只.动态检测动物心、肝、肺、肾等重要器官中CD14 mRNA表达的改变,同时观察内毒素在动物循环及主要脏器内的分布特点.烫伤复合金葡菌脓毒症早期,各脏器及血浆中内毒素含量即明显高于正常对照组,并于2～6 h达峰值,其中以肝、肺组织内毒素水平升高幅度最为显著(P＜0.05).同时,小肠组织中二胺氧化酶的活性降低,且与肝组织内毒素水平呈显著负相关(r=-0.94796,P＜0.05).烫伤复合金葡菌攻击后,各组织中CD14 mRNA的表达亦呈不同程度升高,其中肺脏CD14 mRNA表达上调尤为显著,伤后6、24 h肺脏CD14 mRNA表达显著高于正常对照组(P＜0.05).但肝、肾组织中CD14 mRNA的改变在统计学上无显著性意义.烫伤复合金葡菌攻击可导致内毒素易位和组织CD14mRNA表达不同程度升高,CD14基因表达的上调可能与易位内毒素的刺激作用有关.     

高迁移率族-1 蛋白在烫伤后金葡菌脓毒症中的改变与意义

目的 探讨高迁移率族－1（HMG－1）蛋白在烫伤后金黄色葡萄球菌（简称金葡菌)脓毒症中的变化规律及其调控机制。方法 采用大鼠20％体表面积Ⅲ度烫伤复合金葡菌攻击所致脓毒症模型。70只动物随机分为正常对照组（n=10）、烫伤对照组（n＝10）和烫伤后金葡菌感染组（n＝50）,留取肝、肺组织检测HMG－1及脂多糖结合蛋白（LBP）mRNA表达 ,同时测定组织中金葡菌肠毒素B（SEB）和内毒素含量。结果 烫伤后金葡菌感染可导致动物肝、肺组织HMG－1基因表达明显升高,于伤后6－12h达峰值（P＜0．05－0．01）,至24h仍持续于较高水平。相关分析显示,肝、肺组织LBP基因表达与相应脏器HMG－1mRNA表达呈显著正相关（分别为r＝0．800,P＝0．031和r＝0．942,P＝0．002）,但内毒素与之无明显相关性。结论 烫伤后金葡菌感染可导致动物体内HMG－1基因表达上调,后者作为“晚期炎症介质”可能参与了脓毒症的发病过程。     

烫伤脓毒症大鼠细胞因子信号转导抑制因子基因表达的改变与意义

目的观察烫伤后金黄色葡萄球菌(金葡菌)脓毒症大鼠重要脏器细胞因子信号转导抑制(SOCSs)基因表达的规律及其与细胞因子变化的关系.方法采用大鼠20%体表面积Ⅲ°烫伤后金葡菌攻击致脓毒症模型,检测动物肝、肺组织中SOCS1、SOCS2和SOCS3 mRNA表达,并测定组织中干扰素-γ(INF-γ)水平.结果烫伤后金葡菌感染大鼠肝、肺组织IFN-γ产生均显著增多,分别于伤后0.5 h和6 h达峰值(P＜0.01).同时,动物肺组织SOCS1、SOCS2和SOCS3 mRNA表达均明显上调,其中SOCS2和SOCS3 mRNA表达改变较为迅速,伤后0.5 h即明显高于对照组,2h达峰值.肝组织SOCS1 mRNA表达于伤后2 h明显增强,24 h仍维持于较高水平;而肝脏SOCS2和SOCS3 mRNA表达仅呈现升高趋势.金葡菌肠毒素B单抗早期干预后,随着肺脏IFN-γ产生减少,肺组织SOCS1、SOCS2和SOCS3基因表达亦明显降低.结论烫伤后金葡菌感染可诱导体内SOCSs表达上调,其改变与IFN-γ的"消涨"密切相关,提示它们可能参与了金葡菌脓毒症时炎症反应平衡的调节过程.     

金葡菌肠毒素B在烧伤脓毒症大鼠中的分布特点及意义

目的　探讨金葡菌肠毒素在烧伤后G 菌脓毒症发生、发展过程中的意义。　方法　采用大鼠 2 0 %TBSAⅢ度烫伤复合金葡菌攻击造成脓毒症模型 ,观察金葡菌肠毒素B(SEB)在动物血浆及心、肝、肺、肾等重要器官中的分布 ,同时动态检测相关器官功能指标的改变。　结果　烫伤脓毒症早期 ,动物血浆中SEB含量呈一过性升高 (P <0 .0 1) ,继而逐渐下降。心、肝、肺、肾等组织中SEB含量于金葡菌攻击后 2h即明显升高 (P <0 .0 1) ,且持续上升。烫伤后 2 4h动物多器官功能明显受损 ,金葡菌的攻击可进一步加重多脏器功能损害 ,且肝、肾等器官损害程度与组织SEB含量呈显著正相关 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。　结论　金葡菌肠毒素在烫伤脓毒症诱发的多器官功能损害中具有一定作用     

烫伤大鼠肝脏脂多糖结合蛋白和脂多糖受体CD14 mRNA表达的意义

目的　观察烫伤后肠源性内毒素移位与肝组织内毒素增敏系统———脂多糖结合蛋白/脂多糖受体CD14(LBP/CD14)的相互关系及其意义。　方法　采用大鼠 35 %TBSAⅢ度烫伤模型 ,动物随机分为正常对照组、烫伤和重组杀菌 /通透性增加蛋白治疗组。烫伤组和rBPI2 1　治疗组动物于伤后 12h活杀。留取肝组织和血标本分别检测组织LBP、CD14、肿瘤坏死因子α(TNFα)mR NA表达及肝脏功能指标。　结果　烫伤后肝组织内毒素含量显著降增高 (P <0 .0 1) ,且肝组织LBP/CD14、TNFαmRNA表达亦明显增多。给予rBPI2 1　治疗可显著降低肝组织内毒素水平 ,并不同程度抑制组织LBP/CD14、TNFα基因表达。同时 ,rBPI2 1　治疗组动物血清谷丙转氨酶水平显著降低 (P <0 .0 1)。　结论　烫伤后移位内毒素聚积于肝脏 ,可明显刺激机体局部组织LBP/CD14mRNA的表达 ,而组织LBP/CD14表达上调可能是严重烫伤增敏内源性内毒素作用的主要分子生物基础     

细胞外信号调节激酶抑制剂对烫伤脓毒症大鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响及意义

目的　观察细胞外信号调节激酶 (ERK)抑制剂对烧伤后金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )脓毒症动物组织肿瘤坏死因子 (TNF) α表达及多器官功能损害的影响。方法　采用SD大鼠 2 0 %总体表面积Ⅲ度烫伤后金葡菌攻击所致脓毒症模型 ,34只动物随机分为正常对照组 (n =6 )、烫伤对照组 (n=6 )、烫伤后金葡菌感染组 (n =12 )和ERK抑制剂AG12 6拮抗组 (n =10 ) ,检测动物肝、肾、肺组织中ERK磷酸化和TNF α基因 /蛋白表达的改变。结果　烫伤脓毒症后 0 5～ 2 0h肝、肺、肾组织ERK均呈现不同程度的活化 ,其中 2 0h分别为正常对照组的 1 94倍 (P <0 0 5 )、2 86倍 (P <0 0 1)、1 4 1倍。AG12 6拮抗组肺组织磷酸化ERK水平在 2 0h下降 70 6 % (P <0 0 1) ,而肝、肾组织其磷酸化水平不同时相点几乎完全抑制 ,同时各组织中TNF α基因及蛋白表达水平明显下调 (P<0 0 5或 0 0 1)。与烫伤脓毒症组相比 ,AG12 6拮抗组 2 0h肝、肾功能指标明显改善 ,肺组织髓过氧化物酶活性下降 4 0 3% (P <0 0 5 )。结论　ERK信号通路参与了严重烧伤后金葡菌感染所致炎症反应与急性组织损伤的病理过程 ,针对该环节进行早期干预可有效缓解多器官功能异常改变。     

脓毒症大鼠高迁移率族蛋白-1基因表达及其与内毒素血症的关系

目的观察脓毒症时高迁移率族蛋白 1(HMG 1)基因表达的变化及其与内毒素血症的关系。方法采用大鼠盲肠结扎穿孔 (CLP)造成脓毒症模型。 10 0只动物随机分为正常对照组 (10只 )、假手术组 (10只 )、CLP组 (6 0只 )及重组杀菌 /通透性增加蛋白 (rBPI2 1)治疗组 (2 0只 )。留取肝、肺及肾组织标本分别检测HMG 1mRNA表达及内毒素水平。结果CLP术后 6～ 72h肝、肺及肾组织HMG 1mRNA表达均不同程度增强 (P <0 0 5 )。rBPI2 1治疗后 12h肝、肺及肾组织内毒素水平分别为3 1± 0 8、2 6± 0 3、2 4± 0 4EU/g ,均明显低于CLP组 (5 2± 0 8、5 0± 0 8、14 2± 4 0EU/g ,P <0 0 5 ) ;同时 ,12h肝、肺、肾组织和 2 4h肝组织HMG 1mRNA表达明显受抑制 (P <0 0 5 )。CLP后肝、肺、肾组织HMG 1mRNA表达分别与相应组织内毒素水平呈显著正相关 (r =0 2 90 ,P <0 0 5 ;r =0 4 5 5 ,P <0 0 5 ;r=0 2 87,P <0 0 5 )。结论脓毒症时细菌内毒素持续侵入血循环 ,并蓄积于局部组织 ,参与了HMG 1的诱生 ,并可在基因水平调控其表达     

内毒素受体Tlr4及CD14基因在脓毒症大鼠肺、肝组织中的表达及其意义

目的 采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制备脓毒症模型，探讨脓毒症时大鼠肺、肝组织内毒素受体Th4及CD14mRNA的改变及其意义。方法 50只SD大鼠，随机分为正常对照组（10只）、CLP组（40只），CLP后24、48、72和96h处死动物，留取肺、肝、肾及空肠组织，分别检测Tlr4、CD14mRNA的表达。CLP组24、48、72和96h肺、肝组织Tlr4及CD14mRNA的表达升高，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），而肾、空肠组织Tlr4及CD14mRNA的表达与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 提示肺、肝组织中Tlr4及CD14基因的表达改变与脓毒症的发生发展过程有密切的关系。     

肠内免疫营养对烫伤大鼠内毒素和CD14/肿瘤坏死因子-α mRNA表达的影响

目的研究肠内免疫营养物对烫伤大鼠内毒素和CD14 mRNA、肿瘤坏死因子 (TNF)-α mRNA表达的影响及机制。方法致64只SD大鼠总体表面积(TBSA)30％Ⅲ度烫伤, 随机分为肠内免疫营养组(EIN组,32只)和标准肠内营养组(EN组,32只),另取8只大鼠作为伤前正常对照组(N组)。EIN组和EN组均给予等热量(125 Kcal／dl)肠内营养液。分别于伤前、伤后 1、4、7、10 d抽取静脉血和肝组织,检测血清内毒素和TNF-α浓度,RT-PCR检测肝组织CD14 mR- NA、TNF-α mRNA。结果烫伤后EN、EIN组血清内毒素、TNF-α浓度比伤前血清内毒素 (0．125±0．050)和TNF-α浓度(0．85±0．27)显著升高(P<0．01),且肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达明显增多;在伤后4、7、10 d,EIN组血清内毒素和TNF-α浓度以及肝组织CD14 mR- NA、TNF-α mRNA的表达均比EN组显著降低(P<0．05或P<0．01)。结论肠内免疫营养与标准肠内营养相比,可明显降低烫伤后血清内毒素水平,减少肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达,从而降低血清TNF-α浓度,改善烫伤后机体炎症反应。     

烫伤延迟复苏大鼠组织白细胞介素18mRNA表达的变化

目的 探讨烫伤延迟复苏后不同组织白细胞介素18（IL－18）mRNA的动态表达规律。方法 采用大鼠TBSAⅢ度烫伤延迟复苏模型,54只大鼠随机分为正常对照组、烫伤延迟复苏组、选择性消化道脱污染（SDD）预防组,分别在伤前及伤后2、8、16、24h,采用逆转录聚合酶链式反应,检测肠、肺、肝、肾等组织IL－18 mRNA含量。结果 烫伤延迟复苏后体循环内毒素水平显升高,8、24h达高峰（P＜0．01）,给予SDD预防治疗可显降低内毒素峰值（P＜0．05）;另一方面,烫伤后2h,肺、肝、肾等组织IL－18 mRNA含量表达较伤前值有显升高,烫伤后8h达高峰（P＜0．01）,且一直持续至伤后24h,给予SDD预防后可不同程度抑制IL－18 mRNA的表达（P＜0．05－0．01）。相关分析显示,体循环内毒素水平同肠、肺、肝组织IL－18 mRNA呈显正相关（r值分别为0．298、0．290、0．365,P＜0．05－0．01）。结论 肠、肺、肝、肾等组织IL－18 mRNA表达在烫伤早期即显增多,并呈逐渐升高的趋势,创伤后内毒素血症对机体多种组织IL－18 mRNA基因表达具有重要影响。     

The effect of 2,4-diamino-6-hydroxy-pyrimidine on postburn Staphylococcus aureus sepsis in rats

GTP-cyclohydrolase I (GTP-CHI) is the first and rate-limiting enzyme for the de novo biosynthesis of biopterin. The present study was to observe the effect of 2,4-diamino-6-hydroxy-pyrimidine (DAHP),an inhibtor of GTP-CHI, on the development of postburn Staphylococcus aureus sepsis. Methods: 56 male Wistar rats were randomly divided into four groups as follows: normal control group (n= 10), scald control group(n= 10),pos tburn sepsis group (n= 20) and DA HP treatment group (n= 16). In the scald control group, rats were subjected to a 20% total body surface area (TBSA) Ⅲ° scald injury, then sacrificed at 24 hrs. In the postburn sepsis group (n=20), rats were inflicted with 20% TBSA Ⅲ° scald followed by Staphylococcus aureus challenge, and they were further divided into 2 and 6 hrs groups. In the DAHP treatment group (n= 16), animals were intraperitoneally injected with a dose of 1g/kg DAHP prior to Staphylococcus aureus challenge, and then further divided into 2, 6 hrs groups. Tissue samples from liver, kidneys, lungs and heart were collected to determine GTP-CHI, inducible nitric oxide synthase (iNOS) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) mRNA expression. Meanwhile, biopterin and nitric oxide (NO) levels in these tissues were also measured. Results: After the scald injury followed by Staphylococcus aureus challenge, GTP-CHI mRNA expression and biopterin levels significantly elevated in various tissues such as liver, heart, kidneys and lungs, so did the values of iNOS mRNA expression and NO formation (P＜0.01). Pretreatment with DAHP could significantly reduce GTP-CHI/biopterin induction (P＜0. 05～0. 01), and the up-regulation of iNOS/NO was also suppressed. Furthermore, DAHP administration could also inhibit the gene expression of TNF-α. 2 hrs after septic challenge, TNF-α mRNA expression in liver, kidneys and lungs in DAHP-treated group were 35.7%, 37.3% and 33.0% of those in postburn septic group, respectively. Additionally, in animals without DAHP treatment, the 6-hour mortality was 55.6% (20/36), while it was only 25.0% in DAHP-treated animals (4/16, P=0. 08). Conclusions: Early treatment with DAHP might be a potential strategy to prevent the development of postburn Staphylococcal sepsis, which appears to be associated with down-regulation of biopterin and NO formation by DAHP.     

Significance of biopterin induction in rats with postburn Staphylococcus aureus sepsis

Objective: It has been demonstrated that biopterin, an essential cofactor of nitric oxide synthase (NOS), plays an important role in the pathogenesis of endotoxin-induced shock, yet its biological significance in gram-positive sepsis remains unclear. In this study, we adopted a rat model of postburn Staphylococcus aureus (S.aureus) sepsis to observe the time course and tissue distribution of biopterin in postburn S. aureus infection, and to investigate its potential role in the pathogenesis of gram-positive sepsis. Wistar rats were inflicted with a 20% total body surface area (TBSA) full-chickness scald injury followed by S. aureus challenge, then guanosine triphosphatecyclohydrolase I (GTP-CHI) mRNA expression and biopterin levels in liver, kidneys, lungs and heart were determined at 0. 5, 2, 6, 12 and 24 hours after S. aureus challenge. We found that after S. aureus challenge, GTP-CHI gene expressions and biopterin levels were markedly up-regulated in various tissues, and remained at high values up to 24 hours (P＜ 0. 05-0.01). Meanwhile, the organ function indexes, including serum alanine amimotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), creatinine (Cr), MB isoenzyme of creatine kinase (CK-MB), levels and pulmonary myeloperoxidase (MPO) activities significantly increased at 24 hours postburn, and the multiple organ dysfunction was aggravated by S. aureus challenge. Moreover, it was shown that cardiac GTP-CHI mRNA expression and renal BH4levels were positively correlated with CK-MB and Cr (r=0. 892, P=0. 0012 and r=0. 9423,P=0.0015, respectively). Conclusion: These results suggested that thermal injury combined with S. aureus challenge could induce de novo biosynthesis of biopterin, which acts as the most important cofactor of iNOS, might play a role in the development of multiple organ dysfunction syndrome secondary to postburn sepsis.     

生物喋呤合成酶抑制剂对烫伤大鼠金葡菌脓毒症的保护效应及机制

目的　探讨生物喋呤合成限速酶抑制剂 - 2 ,4 二胺 6 羟基嘧啶 (DAHP)对金黄色葡萄球菌 (简称金葡菌 )脓毒症的保护效应及机制。　方法　 5 6只Wistar大鼠随机分为正常对照组、2 0 %TBSAⅢ度烫伤对照组、烫伤后金葡菌感染组和DAHP拮抗组。无菌留取大鼠心、肝、肺、肾组织检测三磷酸鸟苷环水解酶I(GTP CHI)、诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)及肿瘤坏死因子α (TNFα )基因表达 ,同时测定组织中四氢生物喋呤 (BH4)和一氧化氮 (NO)的水平。　结果　烫伤后金葡菌感染可导致组织GTP CHI基因表达广泛上调、BH4合成显著增加。同时 ,组织iNOSmRNA表达和NO水平亦明显升高 ,其中肝、肺改变尤为显著。给予DAHP不仅可显著抑制各组织GTP CHImRNA表达和BH4的产生 (P<0 .0 5～ 0 .0 1) ,iNOSmRNA表达和NO的生成亦明显受抑 ,同时TNFα表达也明显降低。此外 ,DAHP拮抗组动物 6h死亡率有所降低 (分别为 2 5 .0 %和 5 5 .6 % ,P =0 .0 8)。　结论　DAHP早期干预可在一定程度上改善革兰阳性菌脓毒症动物的预后 ,其机制可能与DAHP抑制体内BH4和NO的产生有关。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B单克隆抗体对烫伤脓毒症大鼠急性肺损伤的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)肠毒素B(SEB)单克隆抗体(单抗)对烫伤脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用。方法雄性Wistar大鼠56只随机分为正常对照组(n=10)、烫伤对照组(n=10)、烫伤后金葡菌感染组(n=20)和SEB单克隆抗体(单抗)拮抗组(n=16)。测定肺组织SEB水平、髓过氧化物酶(MPO)活性、肿瘤坏死因子(TNF)-α和干扰素(IFN)-γ表达的改变。结果烫伤后金葡菌脓毒症动物肺脏SEB含量明显升高,伤后2、6h分别为66.85ng/g组织和92.46ng/g组织,与正常对照组(14.26ng/g组织)和烫伤对照组(17.32ng/g组织)相比均为P＜0.01;同时,肺组织MPO活性显著增强,峰值可达7.39U/g组织,与正常对照组(2.09U/g组织)相比P＜0.05。与之相应,肺组织MPO活性显著增强(P<0.05)。同时,局部组织IFN-γ和TNF-α基因及其蛋白质表达明显上调(P<0.05),并与肺脏SEB含量呈高度正相关(分别为r=0.9207、P=0.0033和r=0.8142、P=0.0258)。SEB单抗早期干预可有效降低肺组织中SEB含量,并显著抑制IFN-γ和TNF-α的产生,肺脏病理改变亦明显减轻。结论SEB单抗干预可抑制IFN-γ和TNF-α等炎症介质的产生,从而显著减轻烫伤后金葡菌对机体的损害。     

CD14基因多态性对严重烧伤后CD14表达的影响及其临床意义

目的探讨内毒素受体CD14C-159T基因多态性对烧伤后CD14合成与释放的影响及其与脓毒症易感性、患者预后的关系。方法26例烧伤面积大于30％的患者,采用聚合酶链反应及限制性内切酶HaeuI对PCR产物的消化作用检测CD14基因多态性。同时,对患者白细胞CD14、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达,血清sCD14浓度与CD14-159位点基因型以及烧伤患者预后的关系进行了分析。结果Tr、TC、CC三种基因型患者白细胞CD14mRNA、TNF—amRNA表达,血清sCD14浓度存在明显差异。其中Tr、TC基因型CDl4mRNA表达均明显高于CC纯合子（P＜0．05或P＜0．01）,伤后第7天CC基因型血浆sCDl4水平显著低于TC基因型（P＜0．05）;同时,TT纯合子的TNF-αmRNA表达强度明显高于CC纯合子（P＜0．05）。此外,伤后第7、21天死亡组CDl4mRNA表达量显著高于存活组（P＜0．05）。结论CD14C-159T基因多态性可显著影响严重烧伤后CDl4的合成与释放,并与烧伤患者脓毒症易感性有关,T等位基因可能是患者预后不良的高危基因标志物。     

烫伤后脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-α基因表达的变化规律

目的 观察烫伤后机体主要脏器脂多糖受体ＣＤ１４（ＣＤ１４）和肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）ｍＲＮＡ的表达的变化规律及二者的相互关系。方法 采用大鼠３５％Ⅲ度烫伤模型,分别于伤前,伤后１２,２４,４８,７２小时活杀动物,留取组织标本或分离腹腔巨噬细胞,检测组织或巨噬细胞ＣＤ１４,ＴＮＦ－αｍＲＮＡ表达。结果 烫伤后肝,肺,肾,肠等组织ＣＤ１４ｍＲＮＡ水平均有不同程度增高,分别于伤后１２小时和４８小时     

烫伤大鼠组织肿瘤坏死因子mRNA表达与内毒素血症的关系

目的 探讨烫伤后不同组织肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）ｍＲＮＡ的动态表达及其与内毒素血症的关系。方法 采用大鼠３５％体表面积Ⅲ度烫伤模型,实验随机分为正常对照组、烫伤组、多粘菌素Ｂ治疗组。血浆内毒素水平采用改良过氯酸预处理血浆偶氮显色法鲎试验定量测定;组织ＴＮＦ－αｍＲＮＡ含量采用逆转录聚合酶链反应检测。结果 烫伤后门静脉及体循环内毒素水平均显著升高,８ｈ达高峰,２４ｈ则逐渐下降。给予低剂量多粘菌素Ｂ