β-榄香烯逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

目的　探讨 β 榄香烯 (β ELE)逆转人乳腺癌MCF 7/ADM细胞对阿霉素 (ADM)的耐药性。方法　采用MTT法测定β ELE对人乳腺癌MCF 7/ADM细胞药物敏感性的影响。经荧光分光光度法检测 β ELE对细胞内化疗药物ADM积累的影响 ,应用流式细胞术观察耐药细胞的凋亡抑制蛋白bcl 2改变。结果　β ELE对MCF 7/ADM的耐药性有明显逆转作用 ,非细胞毒性剂量 (6 μg/ml)及低毒剂量 (13μg/ml)的 β ELE逆转倍数分别为 1.4倍及 2 .2倍。β 榄香烯作用后 ,MCF 7/ADM的细胞内ADM浓度明显增加 (P <0 .0 1) ,bcl 2由 90 .2 %降至 70 .0 % (P <0 .0 5 )。结论　β ELE可部分逆转MCF 7/ADM细胞的耐药性 ,逆转机制与增加细胞内药物积累及降低bcl 2的表达有关。     

褪黑素逆转人乳腺癌细胞MCF-7／ADM对阿霉素耐药的作用机制

目的:探讨生理浓度(10-9 mol/L)和药理浓度(≥10-5 mol/L)褪黑素对耐阿霉素乳腺癌细胞系MCF-7/ADM 耐药的逆转作用及其机制.方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测经不同浓度的褪黑素孵育后,阿霉素对MCF-7/ADM 细胞系半数抑制浓度IC50的改变.在电镜下观察单用阿霉素(20ug/ml)以及药理浓度的褪黑素(10-5mol/l)孵育后再应用阿霉素(20ug/ml)后MCF-7/ADM 细胞超微结构的变化.应用分光光度法测定MCF-7/ADM 和MCF-7/s细胞内GSH水平及褪黑素孵育后MCF-7/ADM和MCF-7/s细胞内GSH水平变化.结果:褪黑素孵育前阿霉素作用于MCF-7/ADM的IC50值为24.41ug/ml.经生理浓度(10-9mol/l)的褪黑素孵育后阿霉素IC50值为20.92ug/ml,两者经比较未见显著性差异(P=0.356).经浓度为10-5mol/L 和10-3mol/L的褪黑素孵育后阿霉素作用于MCF-7/ADMIC50值分别成为12.25ug/ml和10.46ug/ml,与孵育前阿霉素作用于MCF-7/ADM的IC50(24.41ug/ml)相比差异均具有显著性(P＜0.01).在电镜下均可观察到,经药理浓度(10-5mol/l)的褪黑素孵育后,阿霉素(20ug/ml)对细胞的损伤更为严重.经分光光度法测得MCF-7/ADM细胞内GSH水平明显高于MCF-7/s,生理浓度褪黑素并不能使MCF-7/ADM和MCF-7/s细胞内GSH水平明显降低(P=0.965),而药理浓度的褪黑素可以显著降低MCF-7/ADM和MCF-7/s细胞内GSH水平且具有一定的浓度依赖性(P＜0.01).结论:生理浓度的褪黑素对MCF-7/ADM的耐药未见明显影响,药理浓度的褪黑素对MCF-7/的ADM耐药性具有较明显逆转作用,其逆转机制可能与褪黑素对细胞内CSH水平调控有关.     

乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM的上皮间质化现象及机制

目的:建立乳腺癌阿霉素耐药细胞株,命名为MCF-7/ADM,探讨耐药细胞的上皮间质化(EMT)现象及机制,为耐药乳腺癌的治疗奠定基础.方法:中等浓度间歇法建立乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM.采用MTT和Transwell实验分别检测耐药对细胞增殖、迁移与转移能力的影响;荧光定量PCR检测MCF-7/ADM细胞EMT相关分子标志物E-钙黏蛋白及间质细胞分子标记N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维连接蛋白等的表达.ELISA检测TGF-β的表达,Western blot检测TGF-β及Smad2/3在蛋白水平的表达.结果:乳腺癌阿霉素耐药细胞MCF-7/ADM的耐药指数为32.2,对5-氟脲嘧啶、顺铂、环磷酰胺产生交叉耐药性.与MCF-7细胞相比,MCF-7/ADM细胞迁移和转移能力明显增强,E-cadherin表达降低而N-cadher-in表达显著增高,细胞上清中TGF-β1表达增加,细胞内TGF-β及磷酸化Smad2/3在蛋白水平表达升高.结论:乳腺癌阿霉素耐药细胞MCF-7/ADM发生EMT现象,可能与经典TGF-β通路激活有关.     

黄芩素对卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM逆转作用实验研究

目的探讨黄芩素对卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM耐药逆转作用及机制.方法MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用;免疫组化法检测细胞P-糖蛋白(P-Gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)的表达;采用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内ADM的浓度.结果卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM对多种化疗药物产生多药耐药性,耐药细胞P-Gp和MRP的阳性率显著高于亲本细胞(P＜0.01);黄芩素在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转A2780/ADM对ADM的耐药性;ADM与黄芩素合用时,其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高.结论卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM对多种化疗药物具有多药耐药性,其多药耐药性与P-Gp和MRP过量表达有关;黄芩素在非细胞毒剂量时能逆转A2780/ADM对ADM的耐药性,其逆转作用可能与降低P-Gp药物外排功能、增加细胞内药物浓度有关.     

大黄素对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/Adr的耐药逆转作用

目的：探讨中药成分大黄素(Emodin，EMD)对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7／Adr的耐药逆转作用。方法：药物敏感试验采用四唑氮盐(MTT)比色法，P糖蛋白以Western-blot法检测。结果：EMD在0～20μmol／L浓度时作用14天后对MCF-7／Adr未见明显毒性作用；EMD在10μmol／L浓度时，其耐药逆转倍数为1．7倍。EMD在20μmol／L浓度时，处理MCF-7／Adr2、4、6和11天后，检测P糖蛋白发现自第4天起P糖蛋白表达下降，至第11天无法检测到P糖蛋白的表达。结论：EMD具有逆转MCF-7／Adr多药耐药性的作用，可明显下调P糖蛋白的表达，且逆转作用持久。     

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转

目的研究甲基莲心碱逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性(MDR)的作用及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞毒性;PI 染色流式细胞计数测定细胞凋亡;间接免疫荧光流式细胞术检测细胞 P-gp 的表达;HPLC 检测细胞内药物浓度。结果 Nef(1、5、10μmol·L~(-1))对人乳腺癌细胞(MCF-7/S)和耐阿霉素人乳腺癌细胞(MCF-7/ADM)无显著毒性作用。阿霉素(ADM)对敏感株 MCF-7/S 的 IC_(50)为0.13μg·mL~(-1)而对 MDR 细胞株 MCF-7/ADM 的 IC_(50)为11.63μg·mL~(-1),MCF-7/ADM 细胞较MCF-7/S 细胞对 ADM 耐药88倍,1、5、10μmol·L~(-1) Nef 能使 ADM 对 MCF-7/ADM 细胞的 IC_(50)从11.63μg·mL~(-1)依次下降至4.59、2.44、0.27μg·mL~(-1)。MCF-7/ADM 细胞对 ADM 具有凋亡抗性,Nef(1、5、10μmol·L~(-1))能克服 MCF-7/ADM 细胞对 ADM 的凋亡抗性。MCF-7/ADM 细胞较 MCF-7/S 细胞高表达 P-gp,Nef(10μmol·L~(-1))处理24h 后,MCF-7/ADM 细胞 P-gp 表达明显下降。ADM 作用3h 后,MCF-7/ADM 细胞内 ADM 的浓度比 MCF-7/S 细胞少2.8倍,Nef(10μmol·L~(-1))可使 MCF-7/ADM 细胞内 ADM 的浓度增加3.2倍,但并不增加 MCF-7/S 细胞内 ADM 的浓度。结论 Nef 具有逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞 MDR 的作用,其作用机理与促进 MDR 细胞内 ADM 积累和下调 MDR 细胞 P-pg 表达有关。     

甲基莲心碱对人乳腺癌细胞阿霉素多药耐药性的逆转

目的:研究甲基莲心碱对人乳腺癌细胞阿霉素耐药株MCF7/Adr多药耐药multidrugresistanceMDR性的逆转作用及其机制。方法:采用MTT法检测药物细胞毒性作用,高效液相色谱法检测细胞内阿霉素ADR的浓度,流式细胞术测定细胞P糖蛋白Pgp的表达。结果:甲基莲心碱1～10μmol·L-1能不同程度地降低ADR对MCF7/Adr细胞的IC50。10μmol·L-1甲基莲心碱能显著提高ADR在MCF7/Adr细胞内的浓度,降低MCF7/Adr细胞Pgp的表达。结论:甲基莲心碱能逆转MCF7/Adr细胞的MDR,其机理与抑制Pgp的功能及其表达,增加细胞内ADR的积累有关。     

乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADR外泌体传递tTG参与MCF-7细胞耐药的研究

目的:研究乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADR通过外泌体传递tTG参与敏感细胞MCF-7耐药的过程。方法:本实验首先培养MCF-7、MCF-7/ADR细胞,然后检测MCF-7、MCF-7/ADR细胞中外泌体的含量,并将外泌体提取后备用。MCF-7/ADR细胞外泌体(EXO/ADR)与MCF-7细胞共培养建立MCF-7的外泌体耐药细胞(MCF-7+EXO/ADR)。使用Western blot法检测MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR细胞中的tTG蛋白的表达水平,使用流式细胞术分别检测敏感细胞株外泌体(EXO/S)、耐药细胞株外泌体(EXO/ADR)中tTG的表达水平。使用CCK-8法分别检测MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR细胞对阿霉素的敏感性情况。结果:实验结果显示,在EXO/S、EXO/ADR中均可以表达CD63、TSG101,但是较低表达Calnexin。经过流式细胞术检测发现,EXO/S、EXO/ADR中的tTG表达水平分别为(18.3±3.63)%、(46.07±8.31)%,二者tTG的表达有明显差异。经过Western blo...     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性机制研究

目的 研究汉防己甲素(TTD)对慢性粒细胞白血病急性变白血病细胞株K562／ADM多药耐药(MDR)逆转的机理。方法 采用流式细胞仪检测细胞内化疗药物的浓度及细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达；荧光定量PCR法检测MDR1 mRNA；通过流式细胞仪检测Anexin—V判断凋亡细胞的数量。结果 10μmol/L的TTD处理K562／ADM细胞后，细胞内阿霉素(ADM)的浓度明显提高；K562／ADM细胞MDR1 mRNA／P-gp的表达下降；TTD能增强ADM致细胞凋亡的作用。结论 汉防己甲素的耐药逆转机制除了下调MDR1 mRNA／P-gp的表达引起细胞内抗癌药物的积聚外，增加抗癌药物致细胞凋亡也是耐药逆转的重要原因。．     

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转

Objective: To study the reversal effect of neferine on adriamycin (ADM) resistant human breast cancer cell line MCF-7/ADM. Methods: The cytotoxic effect of Nef or ADM was determined by 3-[4, 5-dimethylthiazol-2.-yl], 5-diphenyl tetraxolium bromid (MTT) assay. Apoptosis and the expression of P-glycoprotein (P-gp) were detected by flow cytometry (FCM). The intracellular ADM concentration was measured by HPLC. Results: Nef at 1, 5, 10 mol/L decreased the IC₅₀ of ADM to MCF-7/ADM from 11.63 g/mL to 4.59, 2.44, 0.27 g/mL respectively. MCF-7/ADM could resist the apoptosis induced by ADM while Nef (1-10 mol/L) could augment ADR-mediated apoptosis. Nef (10 mol/L) increased the accumulation of ADM up to 2.88 fold in MCF-7/ADM but not in sensitive cells MCF-7/S and reduced the expression of P-gp in MCF-7/ADM cells. Conclusion: Nef can circumvent multidrug resistance (MDR) of MCF-7/ADM cells and the mechanism was associated with the increase of intracellular accumulation of ADM and the reduced expression of P-gp in MCF-7/ADM cells.     

人肺腺癌多药抗药细胞系LC—3／CDDP细胞内阿霉素聚集量变化

多药抗药细胞系ＬＣ—３／ＣＤＤＰ为人肺腺癌细胞系ＬＣ—３经顺铂选择培养８个月建立的细胞系，对顺铂及其他几种抗肿瘤药物具有抗药性。对细胞内阿霉素聚集量测定发现，该细胞系细胞内阿霉素聚集量较亲代细胞明显减少。二性霉素Ｂ、芳香维甲酸乙酯可使细胞内阿霉素聚集量增加，两者联合应用基本可使抗药性逆转。细胞内药物聚集减少可能为ＬＣ—３／ＣＤＤＰ细胞系对多种抗肿瘤药物产生交叉抗药性的机制之一。     

本芴醇衍生物LY980503对多药耐药肿瘤细胞株的耐药调节作用

目的:研究本芴醇衍生物LY980503对肿瘤多药耐药的逆转作用。方法:采用MTT法检测细胞毒作用,采用流式细胞术测定细胞内阿霉素浓度。结果:细胞毒实验显示,4μmol·L-1LY980503能大部分逆转多药耐药细胞株MCF/ADM和K562/ADM对阿霉素的耐药性,10μmol·L-1LY980503能完全逆转MCF/ADM和K562/ADM细胞对阿霉素的耐药性;药物蓄积实验表明,LY980503能显著增加MCF/ADM细胞内阿霉素蓄积。结论:LY980503在体外能有效逆转多药耐药细胞对阿霉素的耐药性。     

屈洛昔芬逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF7/ADR多药耐药性的研究

目的:研究屈洛昔芬(DRO)对乳腺癌耐药细胞株(MCF7/ADR)多药耐药性(MDR)的影响。方法:应用MTT、半定量RT-PCR和免疫细胞化学染色,研究DRO对MCF7/ADR药物敏感性、耐药相关基因MDR1、谷胱甘肽S转移酶Pi(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)和多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响。流式细胞技术观察细胞内药物积累。结果:在20、10和5μmol/L浓度时DRO对MCF7/ADR耐药性的逆转倍数分别为16、8和3倍,逆转强度与同类化合物三苯氧胺相当。DRO处理后,MDR1和GSTπ基因表达水平明显降低。DRO使ADR在细胞内的积累分别增加到2.5(20μmol/L)、2.0(10μmol/L)和1.5(5μmol/L)倍。结论:DRO具有较强的逆转MCF7/ADR耐药性的作用,其逆转机制是多途径的。     

MiR-34a对乳腺癌Mcf-7／ADR细胞株多柔比星敏感性影响研究

目的：探讨乳腺癌细胞株MCF7和耐药株MCF7／ADR中miR-34a的表达差异及miR-34a对于多柔比星化疗敏感性的影响。方法：采用实时定量PCR技术检测MCF-7细胞及MCF-7／ADR细胞中miR-34a的表达差异。采用转染技术,以脂质体为载体,在MCF_7／ADR细胞株中过表达miR-34a后,检测其对于多柔比星耐药活性的影响,同时采用实时定量PCR技术和蛋白质印迹法技术检测靶基因的表达变化。结果：MCF-7细胞株和耐药株MCF-7／ADR中miR-34a的相对表达量分别为1．01±0．03和0．76±0．04,在耐药细胞株中呈现下调表达,P=0．007。MTT结果显示,MCF7及其耐药株MCF-7／ADR细胞多柔比星半数抑制浓度Ic5。分剐为（0,22±0．02）和（18．7±0．09）ftmol／L。对耐药株MCF-7／ADR过表达miR34a后,MCF-7／ADR细胞对多柔比星的ICso降低为（10．7士0．11）mol／L,明显增强此细胞株对于多柔比星的耐药敏感性。实时定量PCR结果显示,与转染阴性对照RNA相比,于耐药株MCF7／ADR细胞中转染miR--34a后耐药相关靶基因Bcl-2和CCNDl的mRNA水平分别降低了0．46±0．02（P=0．002）和0．33±0．02（P=0．008）。蛋白质印迹结果显示,过表达miR-34a后,可明显下调靶基因Bcl-2和CCNDl的表达。结论：上调表达miR34a可以增加耐药细胞株MCF-7／ADR对于多柔比星的耐药敏感性。     

米非司酮逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR耐多柔比星机制的探讨

目的 探讨米非司酮对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR的逆转耐药作用.方法 以亲本乳腺癌细胞MCF-7和耐多柔比星(阿霉素)乳腺癌细胞MCF-7/ADR为研究对象,分别应用MIF进行干预后,流式细胞仪检测MIF作用前后瘤细胞P-gp的表达、细胞内阿霉素蓄积量的变化以及细胞周期的分布.结果 (1)10 μmol/L MIF作用72小时后,MCF-7/ADR细胞P-gp表达率[(23.21±1.80)％]明显高于MCF-7细胞[(19.37±2.37)％,P＜0.05].(2)5 μmol/L ADR处理后,MCF-7/ADR细胞内ADR蓄积量为(47.13±4.11)％,低于MCF-7细胞[(60.24±2.61)％,P＜0.05].(3) 10 μmol/L MIF联合5 μmol/L ADR处理细胞,MCF-7/ADR和MCF-7细胞内ADR的蓄积量分别为(82.72±2.42)％及(88.63±2.75)％ (P ＞0.05);但均较单用ADR时升高(均P＜0.01).(4) MIF作用前,MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例[(77.21±3.10)％]高于MCF-7细胞G0/G1期比例[(59.05±2.16)％,P＜0.05];MCF-7/ADR细胞S期比例明显低于MCF-7细胞(P＜0.05).经10 μmol/L MIF作用后,MCF-7细胞G0/G1期比例(75.28±2.53)％较MIF作用前明显升高(P＜0.05);S期比例则较MIF作用前显著降低(P＜0.05);MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例和S期比例分别为(80.13±2.72)％及(13.52±1.03)％,与MIF作用前比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);两种瘤细胞的G2/M期比例与MIF作用无关(P＞0.05).结论 (1)MIF可以逆转MCF-7/ADR的耐药性,其作用机制与降低细胞P-gp含量、增加细胞内ADR蓄积量有关.(2) 10 μmol/L浓度的MIF对MCF-7/ADR细胞周期分布影响不大.