霍乱沾棒一步诊断法由杨正时研究员等研制成功

1996年2月,杨正时研究员等在美国研制成功命名为“沾棒一步法”的霍乱快速诊断试剂.这种方法以免疫色层原理,以沾棒为载体;定量地检测人粪中的O_1群霍乱弧菌,方法简易,不需仪器设备,10分钟内即获结果.经印度国立霍乱与肠道病研究所世界卫生组织中心、孟加拉国际腹泻病研究中心各自独立的现场考核比较,敏感性与特异性均为100%.     

免疫沾棒与其一步法快速诊断霍乱

霍乱是一种具有国际流行倾向的急性肠道传染病，主要由01群霍乱弧菌所引起。传统的方法是分离细菌和血清学检定[1]。虽然曾报道过不少快速的检测方法，但均由于存在敏感性或特异性或使用技术上的种种弊端而不适宜作为常规应用。本文报道的免疫沾棒与其一步法可能为快速而实用的霍乱常规检验开辟一条新的途径。一。材料与方法沾棒制备：沾棒以膜片为载体，在试验区上具有抗霍乱抗原的捕获抗体，对照区上为第二抗体。在测定时，经提取液处理过的＄。便液中，如含有OI群霍乱弧菌抗原，能与胶体金标记的单克隆抗体［‘］起反应，形成抗原抗体胶…     

厦门市2004-2013年霍乱监测情况和流行特征分析

目的了解厦门市外环境水体中霍乱弧菌的存在和水产品污染状况,及时发现霍乱病例,为指导防治提供依据。方法根据《全国霍乱监测方案》及《霍乱防治手册(第5版)》的规定,于2004—2013年在全市六个区选择监测点,对外环境水体、水产品及腹泻病人标本进行监测,监测数据由各区疾控中心每月汇总上报,由市疾控中心统一整理分析。结果 2004—2013年共采集外环境各类标本15 351份,检出O1群霍乱弧菌165份(1.01%),未检测O139群霍乱弧菌;共采集食品标本20 545份,检出O1群霍乱弧菌248份(1.21%),未检测O139群霍乱弧菌;共对45 284粪便标本进行检测,粪检率为82.09%,共发现霍乱病人2例和带菌者2例。结论厦门市外环境水体及水产品存在O1群霍乱弧菌,是外环境水体中的正常菌群,应继续加强监测,及时发现致病菌及传染源,以采取相应防控措施。     

一起 O139群霍乱疫情的实验室检测方法探讨

目的寻求适合 O139群霍乱疫情的病原学检测方法,以便为 O139群霍乱疫情的防控提供及时可靠的科学依据。方法用实时荧光定量PCR仪进行 O139群霍乱弧菌的核酸检测、常规分离培养、 O139群霍乱弧菌快速检测（胶体金法）。结果O。群霍乱弧菌的核酸检测阳性结果9份,且从这9份标本中分离到阳性菌株9株,有7份试样第一次增菌液胶体金法呈阳性反应,2份试样经过第二次增菌后胶体金法才呈阳性反应。结论实时荧光定量PCR法和胶体金法作为辅助检测 O139群霍乱弧菌的方法,可以较快得到初步结果,将两种方法与传统的分离培养鉴定相结合,可以保证结果的及时性和准确性。     

微量板培养法在O139群霍乱疫情中的应用与比较

目的：通过采用霍乱弧菌常规培养法与微量板培养法,对一起O139群霍乱疫情现场疫源标本进行比对检测研究,以探讨微板法替代常规法的可能性。方法：用霍乱弧菌常规培养法口与霍乱弧菌微量板培养法心,对某地O139群霍乱疫情现场采集的442份疫源检索样品,同时进行病原学检测,对比观察检测结果。结果：两种方法同时检测442份样品,共检出O139群霍乱弧菌18株,其中常规法检出16株,微板法多检出2株为18株。阳性检出率分别为3．62％和4．07％,阳性符合率为88．89％,检出率之间差别无统计学意义。结果显示微板法稍好于常规法,并且微板法还具有以下优点：1）灵敏度高;2）抗原凝集性好;3）培养板体积小、培养基量少（每孔仅1ml）、容量大（每板可做24份样品）;4）操作简便,不需要特殊设备;5）微量板使用后,经消毒清洗可回收再利用,节约成本,在工作量大时,其实用、简便的优点更为突出。结论：微板法可以用于霍乱弧菌病原检测,可靠性较高,且检测霍乱的特异性和敏感性已达到卫生部《霍乱防治手册》的要求。     

一起缅甸输入性霍乱疫情调查处置

目的总结一起输入性O1群小川型霍乱疫情的应对经验,为霍乱防控提供借鉴。方法对瑞丽市发生的一起缅甸输入性O1群小川型霍乱疫情进行流行病学分析。结果对现场采集的患者呕吐物、排泄物和肛拭子标本进行细菌培养和复核,为O1群小川型霍乱弧菌;采集密切接触者肛拭子标本5份和辖区医疗机构肠道门诊腹泻病例及外环境标本205份进行检测,均未检出霍乱弧菌。由于疫情发生后处置及时,未发生二代病例和死亡病例,1周内疫情完全控制。结论应加强跨国边境地区的霍乱防制工作,建立与周边国家和地区的跨境疾病防控的联防联控长效机制,有效防止和及时处置疫情的跨境传播十分必要和紧迫。     

实时荧光PCR法、胶体金法和培养法检测甲鱼中霍乱弧菌

目的优化水产品甲鱼中霍乱弧菌的检测程序,提高甲鱼中霍乱弧菌检出率。方法用实时荧光PCR、常规细菌培养、胶体金法同时对甲鱼中霍乱弧菌进行检测,并用实时荧光PCR法检测标本中霍乱弧菌ctx基因。结果共检测185份甲鱼样品,其中实时荧光PCR法检出28份霍乱弧菌核酸阳性,阳性率为15.14%;6份ctx基因核酸阳性,阳性率21.43%(6/28)。常规细菌培养法分离出2株菌株,一株为O139群霍乱弧菌,一株为小川型霍乱弧菌,用实时荧光PCR检测这两株纯培养菌株或原始标本,霍乱弧菌ctx基因均为阴性;胶体金法未检出阳性标本。结论对于水产品标本,可先用实时荧光PCR法筛检霍乱弧菌,阳性标本再进行传统细菌分离培养,以提高霍乱弧菌菌株的检出率;同时阳性标本进行霍乱弧菌ctx基因核酸检测,如也为阳性,需提高警惕,加强流行病学上的预防控制措施,及时防范霍乱疫情的发生。     

一例腹泻患者粪便中霍乱弧菌的实验室检测

目的分离培养患者粪便标本中的霍乱弧菌,对其进行种属鉴定和毒力基因及药物敏感性检测。方法常规方法分离菌株,根据其生化及血清学反应结果鉴定菌株,聚合酶链反应检测霍乱肠毒素基因（ctxAB）,K-B法分析药物敏感性。结果从患者粪便中分离到O139霍乱弧菌1株,携带霍乱肠毒素基因（ctxAB）,对头孢他啶、头孢哌酮等常用药物敏感,对氯霉素、呋喃妥因、庆大霉素、四环素、氨苄西林耐药。结论该株菌为霍乱弧菌流行株,聚合酶链反应可较快完成对霍乱弧菌肠毒素基因（ctxAB）的检测。在对O139群霍乱弧菌引起的霍乱疫情防控工作中,应密切监测其耐药性和毒力基因携带情况,为临床有针对性用药提供依据,及时控制疫情。     

从污水中检出拟态弧菌4株

目的了解大连开发区2010年5～10月外环境污水中致病性弧菌的分布情况,为预测霍乱疫情以及制定防控提供科学依据。方法按WS289-2008霍乱弧菌诊断标准和中华人民共和国卫生部卫生防疫司第五版霍乱防治手册及相关资料进行霍乱弧菌O1群及O139群分离鉴定。结果在12份样品中均未检出霍乱弧菌O1群及O139群,在78、月份4份污水中检出拟态弧菌4株,其余标本均未检出。结论在流行性腹泻、疑似霍乱病人粪便细菌学诊断工作及食物中毒检验工作中应注意除霍乱弧菌O1群及O139群外,其他致病性弧菌的检测。     

O1群霍乱弧菌胶体金法快速检测

目的 了解胶体金法检测O1群霍乱弧菌的特异性、灵敏度和实用性.方法 取患者粪便标本,先用碱性蛋白胨水35℃增菌6 h,然后用胶体金法进行检测,同时作霍乱弧菌常规培养,培养出细菌后用血清凝集法作为鉴别诊断O1群霍乱弧菌的金标准,用统计学方法对胶体金法诊断试验的评价指标进行计算..结果 700份样本中,常规法培养出O1霍乱弧菌105株,胶体金法试验阳性108株,经χ2检验,差异无统计学意义(χ2=0.24,P>0.05),表明胶体金法检测O1群霍乱弧菌与常规培养法检测结果之间的差异无统计学意义.胶体金法检测O1群霍乱弧菌诊塑试验的灵敏度为93.33%,特异性为98.32%,阳性预测值为90.74%,阴性预测值为97.18%,假阴性率为1.68%,假阳性率为6.67%.结论 胶体金法检测O1群霍乱弧菌特异性高(98.32%),灵敏度好,与常规培养法的一致性也较高,在快速检测O1群霍乱弧菌中有一定应用价值.     

霍乱一步法快诊技术现场应用研究

“一步法快诊霍乱”是一种全新的检测Ｏ1群霍乱弧菌的快诊技术 ,该法以一种特定的条状滤膜为载体 ,采用免疫层析原理 ,直接使用粪便标本做检查 ,5～ 10ｍｉｎ观察结果。具有快速简便的优点。为考核该法的实际应用效果 ,我们在疫区使用该法对疑似霍乱病人和密切接触者进行了快速诊断 ,并与常规 4号琼脂养法比较 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　标本来源　我省疫区医院门诊中收治的疑似霍乱病人和密切接触者。按实验要求所有标本均采双份。1 2　霍乱快诊纸条　美国泛太生物技术公司出品 ,批号0 0 90 712 ,失效期 2 0 0 10 112。内附标…     

上海市虹口区水环境霍乱弧菌监测分析

<正>霍乱弧菌广泛存在于近海岸的水体和水产品中,其中O1群和O139群霍乱弧菌是霍乱的致病菌。上海市虹口区是国家级霍乱监测点。我们按照国家监测方案于2008—2010年采集国家监测点水体和水产品,检测O1群霍乱弧菌和O139群霍乱弧菌,了解和掌握本地区水体和水产品霍乱弧菌的污染情况,为霍乱的防控提供实验室依据。     

龙海市2010—2014年霍乱监测分析

目的分析龙海市2010—2014年霍乱监测结果,为制定防控策略提供依据。方法每年3~11月采集的各类标本,包括腹泻病人粪便、海(水)产品、水体等进行监测。结果检测各类标本共13 230份,检出霍乱弧菌5份,阳性检出率0.038%,其中粪便标本未检出,海(水)产品标本和水体标本阳性检出率分别为0.119%(4/3 363)和0.049%(1/2 042),海(水)产品标本阳性率最高;5株霍乱弧菌均为不产毒菌株,其中O1群小川型2株,O1群稻叶型3株。结论加强肠道门诊管理和技术培训,加强海(水)产品和养殖场水体监测,及时发现和管理好传染源,提高霍乱弧菌阳性检出率是控制霍乱传播的关键。     

佛山市外环境水体非O1群霍乱弧菌生物学特性和流行病学研究

目的　了解佛山市外环境水体中非O1群霍乱弧菌的菌型分布及毒素携带情况。方法收集外环境水样 ,用常规的细菌培养方法分离非O1群霍乱弧菌。采用分子生物学PCR技术检测霍乱肠毒素 (CT)基因 ,用ELISA检测耐热肠毒素 (ST)和不耐热肠毒素 (LT)。结果　共检测水样 16 4 4份 ,分离到非O1群霍乱弧菌 4 78株 ,分离率为 2 9 0 7% ;血清学分型显示近年佛山市外环境水体中非O1群霍乱弧菌的主要菌型为VBO7。霍乱肠毒素基因检测阳性率为 1 91% ;耐热肠毒素、不耐热肠毒素的检出率分别为 13 14 %和 12 17%。结论　个别非O1群霍乱弧菌可同时带有多种毒力因子 ,提示佛山市外环境水体中存在的非O1群霍乱弧菌具有潜在的致病性 ,加强监测对做好感染性腹泻的防治工作实属必要。     

胶体金免疫层析法应用于感染性肠道疾病病原的快速检测

目的：寻求能够应用于感染性肠道疾病现场,快速检测病原体的方法。方法：应用胶体金免疫层析法（GICA）检测出血性大肠杆菌O157：H7、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌肠毒素、肠炎沙门菌、霍乱弧菌小川型、霍乱弧菌O139群6种菌株模拟标本和流行期的霍乱监测标本,并与培养法相比较,以评价方法的敏感性、特异度和符合率。结果：上述6种细菌检测卡的检测限分别是10^6、10^6、10^8、10^8、10^7、10^7cfu/ml。除O1群霍乱弧菌检测卡与非O1/O139群霍乱弧菌VBO12型有弱阳性反应外,各检测试剂卡与非检测目标菌液呈阴性反应。实际环境样品检测结果敏感性为50%,特异度为99%,总符合率98%,一致性较好。结论：胶体金快速诊断技术与其他方法相比,在许多方面具有无可比拟的优势,但其敏感性有待提高。     

2005～2007年莱州市外环境水体霍乱弧菌检测情况报告

[目的]了解菜州市外环境水体霍乱弧菌的存在及分布情况,为监督监测和预防霍乱提供科学依据.[方法]对2005～2007年莱州市外环境水体504份按<霍乱防治手册>规定方法进行霍乱弧菌检测.[结果]在外环境水体标本中检出不典型O1群霍乱弧菌2株,非O1、O139群霍乱弧菌145株.[结论]外环境水体存在非O1、O139群霍乱弧菌,应加强霍乱监测工作,避免霍乱疫情的发生.     

武汉地区长江水检出O1群霍乱弧菌的报告

霍乱是《中华人民共和国传染病防治法》规定的甲类传染病之一.该病为急性烈性肠道传染病,发病急,传染性强.历史上曾多次发生世界性霍乱大流行,主要由O1群和O139群霍乱弧菌引起.武汉市青山区疾病预防控制中心于2010年5月31日从长江水中分离出O1群小川型霍乱弧菌,现报道如下.1 标本和方法1.1 标本来源 2010年5～10月采集长江水及医院污水池塘水240份.     

从肠道门诊送检标本中检出7株霍乱弧菌

目的：对海盐县内各医院、卫生院肠道门诊腹泻病人标本进行霍乱弧菌检测，为当前霍乱防治工作提供可靠的实验室依据。方法：按照卫生部疾病控制司编写的第5版《霍乱防治手册》（1999年）进行细菌的增菌和分离鉴定，药敏试验用K—B法，用标准的参比菌株大肠埃希菌（ATCC25922）进行质量控制，对2005年5月-12月全县各医院、卫生院肠道门诊送检标本3048份进行检测。结果：从3048份标本中检出7株霍乱弧菌，检出率为0．23％，其中4株为01群霍乱弧菌稻叶型，1株为01群霍乱弧菌小川型，2株为0139群霍乱弧菌。结论：海盐县引起人类腹泻的霍乱弧菌呈现多样性，须高度重视霍乱流行病学监测，常年开设肠道门诊，将疫情控制在萌芽状态。     

腹泻患者O_139群霍乱弧菌的检测

目的通过对参加1起丧宴最先出现3个腹泻病例粪便进行病原体检测,确定丧宴腹泻病暴发的病原学病因,并确定适宜抗生素。方法对腹泻病例粪便标本进行霍乱弧菌、沙门菌、志贺菌、致泻性大肠埃希菌的分离培养和鉴定,并用K-B纸片扩散技术对分离株进行抗生素敏感性试验。结果 3个腹泻病例粪便标本都分离培养出O139群霍乱弧菌,没有分离到其他病原菌;O139群霍乱弧菌分离菌株抗菌素敏感性实验结果显示对诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢噻肟、阿米卡星、氯霉素、庆大霉素都敏感,对四环素、强力霉素耐药。结论这是一起O139霍乱弧菌引起的食源性霍乱的暴发。     

湖南省O139群霍乱流行因素和快速评估研究

目的了解湖南省O139群霍乱的流行特点,分析流行因素,探索快速有效的监测评估方法和预防控制措施,为制定科学的防控策略提供依据。方法采用回顾性队列研究、生态学研究和现场流行病学调查研究湖南省O139霍乱的流行特点和高发区的流行因素;评估农村集体聚餐卫生指导和管理预防控制措施的效果。分别采用膜免疫层析法和常规细菌分离培养法对腹泻病人及霍乱病人的密切接触者粪便标本进行O139霍乱弧菌检测,以后者为金标准,计算膜免疫层析法的灵敏度和特异度。结果湖南省1997-2009年共发生48起O139霍乱疫情,报告病例103例,带菌者119例,死亡2例,病死率为1.94%。在局部地区有集中发生趋势。2002-2009年常规监测腹泻病人阳性率为2.47/万,水产品样阳性率为0.57%,疫点监测检测人群阳性率为1.18%,外环境阳性率为3.44%;非疫点地区水体环境中未检测到霍乱弧菌。48起疫情中暴发16起,散发32起,28起疫情与农村集体聚餐有关。2003年9起暴发疫情中参与聚餐人员的O139霍乱弧菌感染率为5.46%,食用聚餐剩菜人员的感染率为9.23%,未食用聚餐食物人员的感染率为0,病人和带菌者分离到的O139霍乱弧菌和甲鱼中菌株的PFGE图谱相同。高发区农村聚餐中使用甲鱼和食品制作生熟不分的比率、人均甲鱼消耗量、甲鱼中O139霍乱弧菌检出率均高于低发区。高发区采取农村集体聚餐卫生指导和管理措施后,农村厨师和就餐人群的卫生习惯改善,未再发现疫情。膜免疫层析法检测病例粪便标本中灵敏度为100%,特异度为95.20%,45份实验室霍乱弧菌培养阳性的甲鱼和外环境标本经二次增菌培养,试纸条检测结果为阴性。结论湖南省1997-2009年的O139霍乱疫情呈低流行水平;O139霍乱疫情的发生主要跟食用被霍乱弧菌污染的水产品特别是甲鱼有关,以农村集体聚餐卫生指导和管理为主的综合性预防控制措施是预防O139霍乱疫情发生的有效措施;膜免疫层析法可适用于各医疗机构的腹泻病门诊患者的快速筛查和评估。