ROS不参与Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid诱导的HepG2细胞凋亡

目的:确定活性氧(ROS)生成在Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)所诱导的HepG2细胞凋亡中的作用。方法:采用MTT分析检测5F对HepG2细胞增殖的影响,再以Hoechst/PI法分析凋亡细胞的形态变化。为了评价细胞内ROS水平,采用了GENMED试剂盒。HepG2细胞经5F处理24 h,或1 mmol.L-1GSH预处理1 h再经5F处理24 h,然后以Cell Death Detection ELISA试剂盒检测胞浆核小体片段。结果:通过细胞活性分析证实,5F对HepG2的细胞毒作用随着5F浓度升高而增强。而凋亡变化,如染色质浓缩,则被Hoechst/PI染色所证实。经5F处理的HepG2细胞内ROS生成减少被观察到。5F诱导的胞浆核小体片段并不由于GSH降低ROS介导的信号转导水平而发生变化。并且,顺铂(CDDP)诱导的ROS生成可被5F清除,同时5F还显示了与CDDP协同杀伤细胞作用。结论:5F不仅能通过非ROS依赖途径诱导细胞凋亡,还可缓解氧化应激。     

复尔康注射液对肝癌HepG2细胞凋亡和VEGF表达的影响

目的 研究复尔康注射液对肝癌HepG2细胞凋亡和VEGF表达的影响.方法 复尔康注射液干预HepG2细胞48 h后,CCK8试剂盒检测细胞的增殖活性,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡率,免疫组化SABC法检测细胞VEGF的表达.结果 复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖,IC50值为(29.63±1.22)mg/L.复尔康注射液5、10 mg/L干预HepG2细胞48h后,Hoechst 33258荧光染色可见核浓缩、核碎裂等凋亡形态学改变,Annexin V/PI双染法检测显示细胞凋亡率明显升高,免疫组化SABC法检测显示VEGF的表达明显减弱,且呈现出一定的量效关系.结论 复尔康注射液可诱导HepG2细胞凋亡,减弱VEGF的表达.     

半边旗提取物5F对HepG2细胞凋亡的影响及其机制

目的:研究半边旗(PsL)提取物Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)诱导的HepG2细胞凋亡及其可能机制。方法:通过MTT法检测细胞活性以研究HepG2细胞经不同浓度(5~80 mg/L)5F处理24 h所导致的5F细胞毒作用。采用Hoechst/PI实验定性分析细胞凋亡。采用Western blotting实验检测经5F处理的HepG2细胞线粒体内Bax水平及分析cyto-c与AIF在胞浆内的水平。结果:通过细胞活性分析证明,5F对HepG2细胞的细胞毒性随着5F浓度的提高而增强。HepG2经5F处理后,可观察到以细胞核凝聚为特征的凋亡细胞。经5F处理的HepG2细胞线粒体内Bax水平提高,胞浆内cyto-c及AIF水平增强。结论:5F介导的细胞凋亡涉及线粒体依赖途径,5F可能对人类癌细胞具有诱导凋亡作用,尤其是肝细胞癌(HCC)细胞。     

5F诱导的HepG2细胞凋亡与NF-кB活性抑制有关

目的调查中草药半边旗(PsL)提取物Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法通过生存及细胞凋亡分析检测5F对HepG2的增殖抑制效果。同时,采用免疫印迹法评价5F对细胞株HepG2细胞核NF-кB/p65、胞浆IкBα表达的影响。结果 MTT分析证实5F处理呈剂量依赖、时间依赖方式抑制了HepG2增殖。形态分析及Annexin V-EGFP染色则确认了5F诱导的细胞凋亡。而且,该凋亡伴随着IкBα表达的提高、NF-кB/p65表达的降低。结论 5F所诱导HepG2细胞凋亡与IкB生成导致的NF-кB活性抑制有关。     

5F诱导的HepG2细胞凋亡与NF - κB活性抑制有关

目的 调查中草药半边旗(PsL)提取物Ent - 11α - hydroxy - 15 - oxo - kaur - 16 - en - 19 - oic - acid (5F)诱导HepG2细胞凋亡的机制.方法 通过生存及细胞凋亡分析检测5F对HepG2的增殖抑制效果.同时,采用免疫印迹法评价5F对细胞株HepG2细胞核NF - κB/p65、胞浆IκBα表达的影响.结果 MTT分析证实5F处理呈剂量依赖、时间依赖方式抑制了HepG2增殖.形态分析及Annexin V- EGFP染色则确认了5F诱导的细胞凋亡.而且,该凋亡伴随着IxBα表达的提高、NF - κB/p65表达的降低.结论 5F所诱导HepG2细胞凋亡与IκB生成导致的NF - κB活性抑制有关.     

迷迭香酸抑制自噬诱导HepG2细胞凋亡的作用研究

目的:观察迷迭香酸(RA)对HepG2细胞凋亡和自噬的作用,探讨自噬与凋亡之间的相互作用。方法:用不同浓度迷迭香酸作用于HepG2细胞24h、48h、72h。MTT法检测细胞存活率,观察迷迭香酸对HepG2细胞核形态的影响,流式细胞术检测细胞凋亡变化,台盼蓝染色法观察细胞自噬泡情况,透射电镜观察HepG2细胞的自噬变化,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bcl-2和自噬相关蛋白(LC3)、p62的表达水平。采用迷迭香酸+3-甲基腺嘌呤(3-MA,自噬抑制剂)或迷迭香酸+雷帕霉素(RAP,自噬诱导剂)分别培养处理HepG2细胞,观察细胞增殖、细胞凋亡情况及相关蛋白表达变化。结果:与对照组相比,迷迭香酸(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)均能降低HepG2细胞的存活率,诱导HepG2细胞发生凋亡,具有量效和时效关系,减少细胞内自噬泡和自噬小体,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3、p62蛋白的表达。与迷迭香酸25μmol/L处理组相比,迷迭香酸25μmol/L+3-MA 1.0μM/mL应用可诱导HepG2细胞凋亡增加,可进一步减少细胞内自噬泡和自噬小体数目,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,进一步抑制HepG2细胞的自噬水平,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3和p62表达;迷迭香酸25μmol/L+RAP 1.0μM/mL处理HepG2细胞,增加细胞内自噬泡和自噬小体数目,升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,可以抑制和逆转迷迭香酸诱导的细胞自噬水平下降,增加Bcl-2的表达,减少Cleaved Caspase-3和p62表达,细胞凋亡水平下降,这说明抑制或增强自噬时,迷迭香酸能改变对HepG2细胞的凋亡影响作用。结论:迷迭香酸可通过抑制自噬促进HepG2细胞的凋亡。     

青蒿素半乳糖苷的抗肿瘤活性及其机制研究

目的:探讨青蒿素半乳糖苷体外抗癌活性及相关机制。方法:采用体外培养的Hela细胞株为研究对象,流式细胞仪检测青蒿素半乳糖苷作用后Hela细胞凋亡率,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞凋亡关键蛋白p53、BAX、Caspase-3、BCL-2的表达变化。结果:青蒿素半乳糖苷可诱导Hela肿瘤细胞凋亡,且呈剂量-效应关系;青蒿素半乳糖苷还可引发Hela肿瘤细胞Caspase-3活性水平升高,促凋亡蛋白Caspase-3、BAX高表达,抗凋亡蛋白BCL-2表达降低,且均呈现时间-效应关系。结论:青蒿素半乳糖苷具有明确的抑制肿瘤细胞的作用,其机制之一可能是通过不依赖于p53途径的BCL-2家族介导的细胞色素C通路引发肿瘤细胞的凋亡。     

β-谷甾醇诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制研究

目的:探讨β-谷甾醇诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其作用机制.方法:以MTT法检测细胞增殖活力,高内涵活细胞成像系统检测细胞周期变化、凋亡率、线粒体膜电位的变化,Western Blotting检测凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,Bcl-2,Bax,tBid,cytochrome c的表达.结果:β-谷甾醇剂量依赖性地抑制肝癌细胞HepG2的生长、降低线粒体膜电位并诱导其凋亡;上调细胞Bax及tBid表达,下调细胞Bcl-2表达;诱导Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9等蛋白酶原表达逐渐降低而激活的大片段表达逐渐增加;胞浆中cytochrome c表达逐渐增加而线粒体中的cytochrome c表达逐渐减少.β-谷甾醇对正常肝细胞QSG7701的生长及凋亡相关蛋白几乎没有影响.结论:β-谷甾醇对人肝癌HepG2细胞生长具有较强的抑制作用,并通过线粒体途径及膜死亡受体途径诱导该细胞凋亡.     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及机制研究

目的:研究氯化两面针碱在体外诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用与机制。方法:通过MTT法测定氯化两面针碱细胞毒作用,通过酶解可见光底物DEVD-pNp法测Caspase-3的活性;免疫组化技术研究氯化两面针碱对SMMC-7721细胞中p53、bax和bcl-2三种细胞凋亡相关蛋白表达的影响,透射电镜观察细胞的超微结构。结果:氯化两面针碱作用SMMC-7721细胞48h后的IC50值为3.8μg/ml;药物处理后的细胞中p53、Bax蛋白水平表达显著增强,Bcl-2蛋白水平表达减弱,与对照组比较,差异有统计学意义,典型的凋亡形态学特征表现出细胞核裂解、染色质聚集、细胞膜皱缩、有空泡形成,出现凋亡小体。结论:氯化两面针碱对SMMC-7721细胞有明显抑制作用,其机理可能与恢复p53的功能,激活Caspase-3的活性,Bcl-2/Bax的表达进行性下调,诱导细胞凋亡有关。     

冬凌草甲素诱导HepG2肝癌细胞凋亡机制的研究

目的:研究冬凌草甲素(oridonin)诱导HepG2凋亡的分子机制。方法:MTT法、Hoechst33258荧光染色、流式细胞分析法和Western blot分析法。结果:冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生死亡呈时间和浓度依赖性,其作用24h的半数有效抑制浓度IC50=(29.7±1.5)μmol.L-1。Hoechst33258荧光染色证明冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生了凋亡;30μmol.L-1冬凌草甲素作用于HepG2细胞使之产生大量的活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),p53抑制剂PFTα显著地抑制了ROS的产生,从而抑制了细胞凋亡的发生;在HepG2细胞中,30μmol.L-1冬凌草甲素促进了Bax的表达,抑制了Bcl-2的表达,同时线粒体下游蛋白caspase-9,-3的抑制剂明显地抑制了30μmol.L-1冬凌草甲素诱导的HepG2细胞凋亡。结论:冬凌草甲素通过p53蛋白诱导ROS的产生,从而导致HepG2细胞凋亡,除此之外冬凌草甲素还通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。     

莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与Fas/FasL途径的相关性研究

目的 研究莱菔硫烷对人肝癌HepG2细胞Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响,探讨其诱导HepG2细胞凋亡过程中Fas/FasL途径的作用.方法 Caspase-8试剂盒检测莱菔硫烷对HepG2细胞Caspase-8活性的影响;流式细胞仪检测莱菔硫烷对HepG2细胞中Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响.结果 莱菔硫烷10、20、40 μmol/L作用于HepG2细胞48 h,可显著升高HepG2细胞Caspase-8活性(P＜0.01);可使HepG2细胞Fas、FasL蛋白的表达显著升高(P＜0.01);莱菔硫烷20、40 μmol/L时,可显著提高Bid蛋白的表达(P＜0.01),上述作用均呈剂量相关性.结论 激活Fas/FasL途径可能是莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的重要机制之一.     

通关藤提取物通过线粒体途径诱导肝癌HepG2细胞凋亡研究

目的:探讨通关藤提取物(MTE)对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响及诱导凋亡的途径.方法:采用不同浓度MTE(15、20、30mg/mL)处理HepG2细胞,AnnexinV-FTTC/PI双染法检测MTE对HepG2细胞凋亡的影响,JC-1染色法检测HepG2细胞线粒体膜电位,蛋白质印迹(Western blottin...     

川芎嗪对人肝癌HepG2细胞的影响及与突变型p53蛋白表达的影响

目的观察川芎嗪对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其与突变型p53蛋白表达变化的关系。方法应用不同浓度的川芎嗪作用于人肝癌HepG2细胞24h、48h和72h,MTT法检测细胞活力;Hoechst染色法检测细胞凋亡;免疫细胞化学法检测川芎嗪对突变型p53蛋白表达的影响。结果不同浓度的川芎嗪呈时间、剂量依赖性地抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并促进其凋亡（均P〈0.01）,800mg/L川芎嗪作用细胞72h后,其抑制率及凋亡率分别为49.59%和31.31%。免疫细胞化学法显示,不同浓度的川芎嗪作用人肝癌HepG2细胞48h后,突变型p53表达呈显著降低（均P〈0.01）。结论川芎嗪可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与其抑制突变型p53蛋白的表达有关。     

花椒毒素通过死亡受体途径诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的 研究伞形科药用植物花椒毒素对细胞增殖和凋亡的影响,并探究其对人胃癌SGC-7901细胞的体外作用机制。 方法 用不同浓度的花椒毒素（10,20,60,80,100,120,140和160μg/ mL）处理SGC-7901,HepG-2,MCF-7和A549细胞48h,用MTT法测定细胞活力（IC 50）;用Hoechst 33258染色试剂盒和Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒观察花椒毒素诱导的细胞凋亡;流式细胞术检测花椒毒素处理后人胃癌SGC-7901细胞凋亡相关蛋白Fas / FasL,Bid和DR5 / TRAIL; 通过Flouormetric Assay Kit测定花椒毒素对细胞中Caspase-8蛋白表达的影响。 结果 花椒毒素明显抑制SGC-7901,HepG-2,MCF-7和A549细胞增殖,其抑制作用呈浓度依赖性;;流式细胞术结果显示,在一定浓度范围内,黄嘌呤毒素可以以浓度依赖性方式增加Fas / FasL和DR5 / TRAIL蛋白的表达水平。 细胞中Bid蛋白含量增加,且表现出浓度依赖性。 结论 花椒毒素可通过Fas / FasL蛋白介导的死亡受体途径或DR5 / TRAIL介导的死亡受体途径在一定浓度范围内诱导SGC-7901细胞凋亡,并增加死亡受体蛋白的表达水平,激活Caspase-8,激活下游影响因子,诱导细胞凋亡,或激活Caspase-8切割蛋白Bid,然后进入线粒体途径,诱导细胞凋亡。     

垂盆草醇提物抑制HepG2细胞STAT-3信号通路诱导细胞凋亡的研究

目的:研究垂盆草醇提物对STAT-3信号通路的影响,及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:MTT法检测垂盆草醇提物对HepG2细胞增殖的影响;流式细胞术分析结合FITC-Annexin V/PI双标记检测对肝癌细胞凋亡的影响,免疫印迹试验检测细胞凋亡Caspase-3,Caspase-9,PARP,P-STAT-3(Tyr705),STAT-3,Bcl-2,Mcl-1相关蛋白表达水平。结果:垂盆草醇提物可明显抑制HepG2细胞的增殖,诱导HepG2细胞凋亡,且抑制作用呈剂量依赖效应。垂盆草醇提物作用后,抑制STAT-3信号转导通路,下调Mcl-1和Bcl-2的表达,引起凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-9的降解/活化及PARP的降解,并呈剂量依赖效应。结论:垂盆草醇提物通过抑制STAT-3信号转导通路和Mcl-1和Bcl-2的表达,进而抑制HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡。     

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??OBJECTIVE To investigate the mechanism of human liver cancer HepG-2 cells apoptosis induced by Undaria pinnatifida sulfated polysaccharides S-UPPS??B. METHODS The anti-proliferation effects of S-UPPS??B on HepG-2 cells was by MTT assay. [Ca²⁺]i in HepG-2 cells was detected by laser cofocal scaning microscopy (LCSM). The apoptosis rate and protein expression level of Bcl-2, Bax, Cyt-C and p53 were detected by flow cytometry (FCM). Caspase Assay Kit was used to detected the activities of Caspase-3 and -9. RESULTS S-UPPS??B could inhibit the proliferation of HepG-2 cells and the IC₅₀ was 50.09 ??gmL^-1. With the increase of drug delivery dosage, apoptosis rate also increased, and the significant regulating effects of S-UPPS??B on Ca²⁺ and its associated channel proteins were observed. The [Ca²⁺]i level, the protein expression level of Cyt-c, p53 and the activities of Caspase-3 and -9 were all increased remarkably (P<0.05). The ratio of Bcl-2 to Bax was reduced. CONCLUSION Undaria pinnatifida sulfated polysaccharides S-UPPS??B can effectively inhibit the proliferation of human liver cancer HepG-2 cells by inducing apoptosis of HepG-2 cells through mitochondrial pathway.     

从PI3K/Akt/p53通路探讨藤茶总黄酮抗肝癌的作用机制

目的:研究藤茶总黄酮(TF)对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用,预测其作用机制可能与调控细胞凋亡肌醇磷脂-3-激酶/蛋白激酶B/p53(PI3K/Akt/p53)通路的相关因子有关。方法:建立BEL-7404肝癌裸鼠移植瘤模型,实验分为模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU,1.0 g·L~(-1))组及TF高、中、低质量浓度(30,15,7.5 g·L~(-1))组,给药干预2周后处死裸鼠,剥离出瘤组织,根据瘤重和瘤体积计算抑瘤率(IR)及相对肿瘤增殖率(T/C);采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3K/Akt/p53中相关基因胞内PI3K,Akt1,p53,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达;采用免疫组化检测相关蛋白PI3K,Akt1,p53,Caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:TF高、中、低质量浓度组IR分别为53.26%,35.94%,26.74%,T/C分别为59.74%,69.66%,84.82%;逆转录聚合本科链式反应(RT-PCR)表明,与模型组比较,TF 30 g·L~(-1)能明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2 mRNA表达,显著上调抑癌基因p53,Capsase-3,Bax mRNA表达;免疫组化表明,与模型组比较,TF 30,15 g·L~(-1)均明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2蛋白的表达,显著上调p53,Capsase-3,Bax蛋白的表达。结论:TF有明显的体内抗肝癌活性,其机制可能与上调p53,Caspase-3的表达,激活细胞凋亡PI3K/Akt/p53通路,从而抑制Bcl-2,提高Bax的表达,促进肝癌细胞凋亡有关。     

牡荆苷对人食管癌EC-109细胞生长及凋亡的影响

目的观察金莲花中提取的牡荆苷体外对人食管癌EC-109细胞生长及诱导EC-109细胞凋亡的作用,探讨p53及bcl-2蛋白表达在牡荆苷抗肿瘤细胞机制中的作用。方法用不同浓度牡荆苷作用于对数生长期的EC-109细胞,通过CCK-8法检测其对EC-109细胞体外生长、增殖的抑制作用;Hoechst33258荧光染色观察细胞形态的变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带;AnnexinV-FITC/PI双标法流式细胞术观察牡荆苷对EC-109细胞凋亡的诱导作用;流式细胞术检测EC-109细胞中抑癌基因p53和促癌基因bcl-2蛋白的表达。结果牡荆苷对EC-109细胞生长、增殖具有明显的抑制作用,能够诱导EC-109细胞凋亡,且作用与牡荆苷浓度、作用时间呈正相关,可上调p53蛋白表达,下调bcl-2蛋白表达。结论牡荆苷可能通过上调p53蛋白和下调bcl-2蛋白的表达,促进EC-109细胞凋亡,抑制EC-109细胞生长。     

甘草查尔酮B诱导小鼠黑色素瘤细胞凋亡作用

目的:研究甘草查尔酮B(licochalcone B)诱导小鼠黑色素瘤细胞(B16F0)凋亡作用并初步探讨其机制.方法:取对数生长期B16F0细胞按5 000个/孔接种于96孔板中,MTT染色法检测甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5,15 mg·L-1)作用24 h后,对B16F0细胞的增殖抑制作用;取对数生长期B16F0细胞按1×105个/孔接种于6孔板中,甘草查尔酮B(7.5,15mg·L-1)作用24 h后,Hoeehst 33258染色法观察细胞凋亡形态;取对数生长期B16F0细胞按5×105个/瓶接种于细胞培养瓶中,甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5 mg·L-1)作用24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测与凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2) mRNA表达;荧光法检测半胱氨酸蛋白酶蛋白9(Caspase-9)和半胱胺酸蛋白酶蛋白3(Caspase-3)相对活性.结果:甘草查尔酮B能有效抑制B16F0细胞增殖,作用24 h后对细胞的生长有明显的抑制作用,IC.011.3 mg·L-1,在5～15 mg·L-1表现出明显的剂量依赖,细胞出现明显凋亡特征,随甘草查尔酮B浓度的增加凋亡率逐渐升高;甘草查尔酮B(10,12.5 mg·L-1)能明显下调Bcl-2/Bax,上调Caspase-3,Caspase-9的表达,其中7.5 mg·L-1甘草查尔酮B引起Caspase-9,Caspase-3的活化程度较12.5 mg·L-1高.结论:甘草查尔酮B可能通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导B16F0细胞凋亡.