芒柄花素抗肿瘤作用机制的研究进展

芒柄花素（FN）是一种从红三叶草、黄芪和鸡血藤等药用草本植物中提取的植物异黄酮。研究表明,芒柄花素具有较强的抗肿瘤生物活性,可作为抗肿瘤药物治疗各种恶性肿瘤。迄今为止的研究表明,芒柄花素通过多种分子机制与途径对肿瘤产生抑制增殖、诱导凋亡、抑制迁移和侵袭、诱导细胞周期停滞等作用,可以在乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、膀胱癌和肺癌等多种肿瘤细胞和动物模型中观察到这些抗肿瘤活性。主要抗肿瘤活性体现在触发活性氧（ROS）生成、调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路;抑制酪氨酸激酶1（JAK1）,酪氨酸激酶2（JAK2）和非受体酪氨酸激酶（c-Src）的激活;调节细胞角蛋白19（CK19）,基质金属蛋白酶（MMP）,微小RNA-21（miR-21）,核纤层蛋白A/C抗体（Lamin A/C）,细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）和细胞周期蛋白E₁（Cyclin E₁）的表达。此外,笔者对于芒柄花素衍生物的抗肿瘤作用研究也进行了综述。通过对芒柄花素的化学结构进行修饰,目前已得到多种具有抗肿瘤作用的衍生物。实验结果表明芒柄花素的一些衍生物具有更强的抗肿瘤活性和较低的细胞毒性,分子作用机制研究仍需要进一步深入。综上所述,芒柄花素及其衍生物可能成为抗肿瘤的潜在新药。     

HPLC测定玉郎伞中芒柄花素的含量

目的：建立玉郎伞药材中芒柄花素的含量测定方法。方法：乙腈-0．5％磷酸（35：65）为流动相,ZorbaxXDB—C18色谱柱,流速1ml／min,在250nm处进行芒柄花素的HPLC测定。结果：芒柄花素在HPLC进样0．0204～0．255μg线性关系良好（R：0．9999）,平均加样回收率为98．27％,RSD为0．8％（n=5）。结论：本法准确,简便,重复性好,可作为玉郎伞药材的质量控制方法。     

HPLC 测定广西牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素的含量

目的:建立牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素的含量测定方法.方法:采用HPLC测定药材中芒柄花素和高丽槐素含量,色谱柱C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-0.1%冰醋酸溶液(38∶62),检测波长248,310 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃.结果:芒柄花素进样量在0.002 3~0.060 0 μg与峰面积值呈现良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率100.0%,RSD为2.0%(n=6);高丽槐素进样量在0.039 1~1.015 6 μg与峰面积值呈现良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为100.6%,RSD为0.7%(n=6).结论:该方法可用于牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素的含量测定.     

常春油麻藤中刺芒柄花素的提取工艺研究

目的建立常春油麻藤中刺芒柄花素的提取方法。方法采用正交试验对刺芒柄花素的提取条件进行相关研究。结果甲醇作为提取溶剂,料液比1：40（g：mL）,85℃回流提取3次,每次1．5h,常春油麻藤中刺芒柄花素含量为0．03812％。结论本研究优化确定了常春油麻藤中刺芒柄花素的提取方法。     

RP-HPLC法测定鸡血藤合剂中芒柄花素的含量

目的：建立鸡血藤合剂中芒柄花素的含量测定方法。方法：采用RP-HPLC法,以Agilent Eclipse XDB-C18为分析柱（46 mm×250 mm,5μm）,流动相：水-乙腈（70∶30）,流速：1 mL·min-1,检测波长：253 nm。理论塔板数按芒柄花素峰计算应不低于5000。结果：芒柄花素在1-60μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9993）。加样回收率为98.57％,RSD%=0.18％。结论：该方法简便、准确、可靠,可以作为鸡血藤合剂的质量控制指标之一。     

HPLC测定扶正抑瘤颗粒中芒柄花素的含量

扶正抑瘤颗粒作为甘肃省武威市肿瘤医院的院内制剂,由兰州大学中西医结合研究所所长赵健雄教授研制,功效补气养血、消瘀化积、利湿解毒,用于乳腺癌、食道癌、胃癌、肝癌、肺癌等肿瘤的辅助治疗[1]。它由红芪、当归、莪术、墓头回等药组成[2],该制剂君药为红芪,而芒柄花素又是红芪中主要指标成分之一[3],为了更好地控制本产品质量,保证产品的疗效,本文选用高效液相色谱法对制剂中芒柄花素的含量进行了研究,建立了分离效果好、简便可行的含量测定方法,可用于本制剂的质量控制。1仪器与试药1.1仪器W aters 600E高效液相色谱仪系列:在线脱气机,…     

芒柄花素舒张家兔离体肠管平滑肌的研究

目的:探讨芒柄花素舒张家兔离体肠管平滑肌的作用及其机制。方法:采用经典离体肠管平滑肌实验方法,观察不同浓度芒柄花素对对组胺(His),乙酰胆碱(Ach)收缩离体肠管平滑肌量效曲线的影响;用L型钙通道开放剂氟硝尼啶(Bay K8644)、肌浆网ryanodine受体阻断剂钌红(Ruthenium Red,RR)和一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME),探讨芒柄花素舒张肠平滑肌的作用机制。结果:不同浓度的芒柄花素(25,50μmol/L)能剂量依赖性地抑制Ach,His收缩离体肠平滑肌的作用,使其量效曲线右移,最大效应降低;亦能抑制L型钙通道开放剂Bay K8644引起的离体肠管平滑肌收缩,大于30μmol/L的芒柄花素作用明显增强(P>0.01)。芒柄花素还能够抑制钌红舒张肠平滑肌的作用,但L-NAME不能够抑制芒柄花素舒张肠平滑肌作用。结论:芒柄花素舒张家兔离体肠管平滑肌的作用与非竞争性抑制M受体和H1受体有关,亦能抑制外钙内流以及内钙的释放作用,但与小肠平滑肌NO浓度无关。     

测定红车轴草中刺芒柄花素含量的新方法

目的:建立了一种用同步荧光测定红车轴草中刺芒柄花素含量的新方法。方法:研究了检测条件对刺芒柄花素荧光强度的影响,以及实验的准确性、重现性和回收率。结果:该方法的线性回归方程为y=1440x-0.263,r=0.999,检出限为1.50×10-9mol/L。本方法测得红车轴草中刺芒柄花素的含量与HPLC法的结果相对偏差为1.65%。结论:说明本方法结果准确,可以满足科研和生产的要求。     

高效液相色谱法测定甘草黄酮类成分中芒柄花素的含量

甘草(GIycyrrhiza uralensisFisch)为豆科(Leguminosae)甘草属(GlycyrrhizaLinn.)多种植物的根和根茎。传统医学认为其有益气补中、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药等功效,有“十方九草”之说。由于近年来人们发现甘草中黄酮类成分有较强的生物活性,其抗肿瘤[1]、保肝[     

补骨脂素的植物雌激素作用及其机制探讨

目的:利用雌激素受体(ER)α,β阳性T47D细胞和子宫内膜癌Ishikawa细胞观察补骨脂素的雌激素样作用,并探讨其可能的作用机制。方法:以1×10^-8mol.L^-1雌二醇(E₂)为阳性对照药,利用MTT细胞增殖试验观察1×10^-5~1×10^-9mol.L^-1补骨脂素对T47D增殖的影响,同时观察1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对Ishikawa细胞增殖的影响;以半定量RT-PCR法检测1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对T47D细胞雌激素效应基因PR mRNA表达情况的影响;并以雌激素受体拮抗剂ICI 182,780为工具药进行干预。同时,通过流式细胞术检测1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素引起T47D细胞ER-α,ER-β含量的变化。结果:1×10^-5~1×10^-7mol.L^-1补骨脂素能够显著促进T47D细胞增殖;1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对Ishikawa细胞增殖也有显著的促进作用;RT-PCR结果显示:1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素可使T47D细胞PR mRNA表达显著增加,表现出雌激素样作用,而且以上效应可被ICI 182,780拮抗。1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素还可诱导T47D细胞ER-α,ER-β表达明显增加。结论:补骨脂素具有植物雌激素作用,并且其作用是通过ER途径介导的。     

胶艾汤及参芪胶艾汤的雌激素样作用及可能机制

目的:观察胶艾汤及其加味方参芪胶艾汤的植物雌激素样作用,并利用雌激素受体(ER)(+)MCF7细胞探讨其发挥雌激素样作用的可能靶点和机制.方法:正常昆明种性未成熟雌性小鼠60只,体重9～12 g,按体重均衡和随机的原则分为6组:正常组给予等体积蒸馏水,阳性药己烯雌酚组按0.35 mg·kg~(-1)·d~(-1)给予己烯雌酚,胶艾汤和参芪胶艾汤低,高剂量组分别按2.5,5.0 g·kg~(-1)·d~(-1)给予中药方剂,给药持续4 d.第5天眼眶取血,分离血清,称取子宫并计算子宫系数.通过MTT细胞增殖实验观察2个方剂含药血清对MCF7细胞增殖的影响;运用实时荧光定量RT-PCR技术检测含药血清对雌激素效应基因pS_2及ERα,ERβ泶锏牡骺刈饔茫徊⒁源萍に厥芴遛卓辜罥CI182,780干预,探讨其发挥雌激素样作用的可能机制.结果:高剂量胶艾汤及参芪胶艾汤能够明显提高性未成熟小鼠的子宫系数(P<0.05);其含药血清能够显著促进MCF7细胞增殖(P<0.05或0.01),加入ER拮抗剂ICI182,780可抑制其促增殖作用(P<0.05或0.01).与已烯雌酚组一致,2个方剂含药血清也可提高靶细胞pS_2表达水平(P<0.01),加入ICI182,780可抑制ps_2表达水平的提高(P<0.01);2个方剂含药血清还可明显提高ERα(P<0.05)和ERβ(P<0.01)的表达水平.结论:胶艾汤及参芪胶艾汤均具有一定的通过ER介导的雌激素样作用,并可提高靶细胞ER亚型(特别是ERβ）mRNA的表达水平.     

淫羊藿苷和淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷及淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响,探讨雌激素受体(ER)与其作用机制的关系.方法 用不同浓度的淫羊藿苷和淫羊藿素处理雌激素受体呈阳性的乳腺癌T47D细胞系后,MTT法检测T47D细胞增殖,流式细胞术检测T47D细胞周期的变化,Western blotting法检测T47D细胞ERα和ERβ蛋白表达.结果 淫羊藿苷和淫羊藿素浓度为1×10-9～1×10-6 mol/L,能显著促进T47D细胞增殖,且该作用可被雌激素受体拮抗剂ICI 182.780(1×10-6 mol/L)所拮抗.与对照组相比,淫羊藿苷和淫羊藿素1×10-7 mol/L使S期T47D细胞比例明显增加,增殖指数显著升高,但该作用可被ICI 182.780抑制.淫羊藿苷和淫羊藿素1×10-7 mol/L还可显著增加ERα、ERβ蛋白表达(P＜0.01).结论 淫羊藿苷和淫羊藿素均可显著促进T47D细胞增殖,该作用可能是通过上调胞内ERα、ERβ蛋白表达介导的.     

薏苡仁水煎液雌激素样活性筛选研究

目的：对薏苡仁水煎液进行雌激素样活性筛选,探讨其作用机制。方法：首先通过小鼠子宫增重实验和人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖实验对薏苡仁水煎液进行雌激素样活性筛选;以质粒pERE-TAL-luc、pβgal-Control、pCXN2-hERα或pCXN2-hERβ共转染的HEK293细胞株为模型,采用以ERE调控的报告基因luc瞬时表达检测技术,评价薏苡仁水煎液雌激素样作用的信号通路。结果：薏苡仁水煎液可显著的诱导性未成熟小鼠子宫系数的增加（P<0.01）,且在去雌激素的培养基中能够显著促进MCF-7细胞的增殖（P<0.01）; ERE调控的报告基因瞬时表达结果显示,分别由ERα和ERβ介导时,与正常组相比,薏苡仁水煎液的标准化荧光素酶活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：薏苡仁水煎液可诱导性未成熟小鼠子宫系数的增加,在去雌激素的培养基中诱导MCF-7人乳腺癌细胞的增殖,首次发现薏苡仁具有雌激素样作用,且主要是通过ERβ介导发挥雌激素样作用。     

熟地等4味中药的植物雌激素作用的实验研究

目的:观察熟地黄、白芍、当归、川芎等中药对性未成熟SD大鼠子宫系数的影响,以及含药血清对人乳腺癌MCF7细胞体外增殖的影响,评价其植物雌激素样作用.方法:正常雌性性未成熟SD大鼠,体重(70±5)g,按体重均衡和随机的原则分为7组(正常对照、己烯雌酚、熟地黄、白芍、当归、川芎和四物汤组),分别每天分早、晚2次灌胃,给药均持续4 d,第5天腹主动脉取血,分离血清,分离子宫并称重,免疫组化法测定子宫组织雌激素受体表达量;药物血清用于MCF7细胞体外增殖,细胞周期和雌激素受体ERα蛋白表达的测定.结果:熟地黄、白芍和当归组的幼鼠子宫系数均高于正常对照组(P＜0.05);川芎组幼鼠子宫系数与正常对照组相比,差异无统计学意义;白芍、当归、川芎的含药血清均可显著促进MCF7细胞MTT体外增殖(P＜0.05),并且4味中药的药物血清均能使MCF7细胞S期细胞数和细胞增殖指数PI增加(P＜0.01),当归和川芎可提高MCF7细胞ERα蛋白的表达水平(P＜0.05),熟地黄和白芍的药物血清对MCF7细胞的ERα蛋白表达水平,与正常对照组相比,差异无统计学意义.结论:熟地黄、白芍和当归等中药的免煎剂有植物雌激素样作用,川芎组整体实验和体外细胞培养结果不完全一致,已烯雌酚在本实验剂量时有使幼鼠体重增长减缓的作用,而实验剂量的中药未表现出此样作用.     

Growth inhibition and cell cycle arrest in the G0/G1 by schizandrin,a dibenzocyclooctadiene lignan isolated from Schisandra chinensis,on T47D human breast cancer cells

Schizandrin is one of the main dibenzocyclooctadiene lignans present in the fruit of Schisandra chinensis (Schisandraceae). Biological activities including hepatoprotective, antiviral and neuroprotective effects of schizandrin and other dibenzocyclooctadiene lignans have been reported previously. However, the antiproliferative effect of schizandrin against human cancer cells has been poorly determined to date. This study examined the antiproliferative effect of schizandrin in human breast cancer cells. Schizandrin exhibited growth inhibitory activities in cultured human breast cancer cells, and the effect was the more profound in estrogen receptor (ER)‐positive T47D cells than in ER‐negative MDA‐MB‐231 cells. When treated with the compound in T47D cells, schizandrin induced the accumulation of a cell population in the G0/G1 phase, which was further demonstrated by the induction of CDK inhibitors p21 and p27 and the inhibition of the expression of cell cycle checkpoint proteins including cyclin D1, cyclin A, CDK2 and CDK4. These results suggest that schizandrin inhibits cell proliferation through the induction of cell cycle arrest with modulating cell cycle‐related proteins in human breast cancer cells. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

鼠尾草酚抗乳腺癌细胞增殖活性及其雌激素受体亚型介导和调节机制的研究

既往研究已经表明,鼠尾草酚（carnoso1）具有一定的抗乳腺癌效应,但其ER亚型特异性调节和介导机制与该物质抑制细胞增殖效应的相关性尚不清楚。该研究利用雌激素受体（ER）阳性乳腺癌T47D细胞观察鼠尾草酚对细胞增殖活性的影响及其雌激素受体α,卢亚型特异性介导和调节机制。以ERα和ERβ特异性拮抗剂MPP,PHTPP为工具药,采用MTT细胞增殖实验观察鼠尾草酚对T47D细胞增殖的影响;检测T47D细胞增殖周期的变化。利用Western blot方法检测鼠尾草酚对T47D细胞ERα和ERβ表达情况的影响。研究发现,1×10^-51×10^-7mol·L^-1鼠尾草酚能够显著抑制T47D细胞增殖,该抑制作用可被ERα拮抗剂MPP增强、被ERβ拮抗剂PHTPP减弱;1×10^-1,1×10^-6mol·L^-1鼠尾草酚可使T47D细胞增殖指数显著下降。Western blot检测结果显示1×10^-5,1×10^-6mol·L^-1鼠尾草酚可使T47D细胞ERα和ERβ蛋白表达显著增加,并可明显提高ERα/ERβ。结果表明鼠尾草酚具有抑制ER阳性乳腺癌细胞增殖的作用,其效应是通过靶细胞雌激素受体,特别是ERβ途径实现的;同时,鼠尾草酚对靶细胞雌激素受体ERα和ERβ亚型的表达及其比例具有调节功能。     

半枝莲多糖体内抗肿瘤及其免疫调节作用的实验研究

目的:研究半枝莲多糖的体内抗肿瘤作用和免疫增强作用。方法:通过动物移植性肿瘤实验观察半枝莲多糖对小鼠体内肿瘤细胞生长和免疫器官胸腺、脾的影响;通过ANAE法观察半支莲多糖对T细胞阳性率的影响。结果:半枝莲多糖对S180肉瘤生长的抑制率以中剂量为佳;各剂量组对脾脏指数的影响均有显著性差异,但大剂量注射(200mg/kg)对胸腺有抑制作用;能够提高S180荷瘤小鼠T淋巴细胞的百分数。结论:半枝莲多糖有抗肿瘤作用和免疫增强作用。     

赤豆的雌激素样作用及其对人类乳腺癌MCF-7细胞孕激素受体水平的影响

目的：评价赤豆的雌激素样作用及其对人类乳腺癌MCF-7细胞孕激素受体水平的影响。方法：采用富含雌激素受体的雌激素依赖性人乳腺癌细胞株MCF-7细胞，分别以E-SCREEN法观察赤豆提取物对其增殖的影响，以RT-PCR法、Western blot法观察赤豆对孕激素受体mRNA和蛋白表达的影响，并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价赤豆提取物发挥雌激素样作用的机制。结果：与溶剂对照组比较，赤豆（10～200 μg·mL^-1）能显著促进MCF-7细胞的增殖，100 μg·mL^-1时作用达到最大；赤豆提取物能明显诱导MCF-7细胞孕激素受体(PR)基因mRNA和蛋白的表达，以上作用均能被雌激素受体拮抗剂所完全拮抗。结论：赤豆提取物具有雌激素活性，此作用是通过雌激素受体(ER)介导的。     

牡荆苷对急性脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用及对其Th1/Th2漂移的影响

目的探讨牡荆苷(VT)对急性脑缺血(ACI)再灌注大鼠的神经保护作用及对辅助性T细胞1(Th1)/Th2漂移的影响。方法制备ACI再灌注大鼠模型,分为模型组,VT低、中、高剂量(0.94、1.88、3.76 mg/kg)组和假手术组,缺血再灌注1 h后,VT各剂量组大鼠ip不同浓度VT,假手术组和模型组大鼠ip等量生理盐水,连续3 d。观察大鼠一般状态,评估给药前后Longa神经功能评分、给药后脑组织神经元细胞形态学变化;对比各组大鼠脑组织DNA单链、双链断裂损伤率;检测大鼠脑组织中Th1、Th2标记物γ干扰素(INF-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平,计算INF-γ/IL-4。结果 ACI再灌注建模成功率为88.89%,建模大鼠均出现精神状态不佳现象,给药后VT各剂量组大鼠状态均有所好转。与模型组比较,VT各剂量组大鼠给药1、3d后神经功能评分均显著降低(P0.05),且呈剂量依赖性。HE结果显示,模型组大鼠神经元细胞体积缩小、细胞核固缩,VT各剂量组大鼠给药后神经元细胞损伤均有所减轻,其中高剂量组减轻最为明显。与假手术组比较,模型组大鼠DNA单链、双链断裂损伤率,INF-γ水平及INF-γ/IL-4较显著升高(P0.05),IL-4水平显著降低(P0.05);与模型组比较,VT各剂量组大鼠DNA单链、双链断裂损伤率,INF-γ水平及INF-γ/IL-4均显著降低(P0.05),IL-4水平显著升高(P0.05),且呈剂量依赖性。结论 VT对ACI再灌注大鼠神经功能具有保护作用,其中VT 3.76 mg/kg保护作用最佳,可能与调节Th1/Th2细胞平衡向Th2漂移、减轻脑细胞DNA损伤有关。