细胞色素氧化酶的DAB法与Nadi反应的比较

过去常用经典的 Nadi反应显示细胞色素氧化酶以定位线立体的存在部位 ,现在广泛使用 DAB法。我们对这两种方法进行了比较。方法如下 :取 Wistar大鼠的心、肝、肾组织 ,用液氮骤冷 ,恒冷箱切片 (厚 7μm) ,进行以下实验 :Nadi反应 :切片入孵育液 ( N-苯基 -对 -苯二胺 3mg、1 -羟基 - 2 -萘酸 3mg溶于二甲基亚砜 0 .1 ml,0 .0 5 M的磷酸缓冲液 p H7.21 0 ml,混匀后过滤 )室温 30 min。入 Lugol碘液 2 min,入 5 %硫代硫酸钠 4min,入 1 %醋酸钴 6 0 min,蒸馏水洗 ,甘油明胶封固。DAB法 :切片入孵育液 ( 0 .0 5 M磷酸缓冲液 p H7.2 1 0 ml…     

血红蛋白在抗炎药物抑制前列腺素合成酶方面的影响

前列腺素是由花生四烯酸在许多组织中合成的。从绵羊精囊腺匀浆中产生的前列腺素大部分是E型。谷胱甘肽和氢醌在前列腺素E生物合成方面有促进作用。它们也能促进抗炎药物对前列腺素合成酶的抑制作用。血红蛋白也有促进前列腺素合成酶的作用.在实验中初步发现,人体血红蛋白可以阻碍乙酰水杨酸和消炎痛对前列腺素合成酶的抑制     

小剂量阿司匹林对急性脑梗死患者花生四烯酸代谢

花生四烯酸代谢产物血栓素A2(TXA2)和前列腺素I2(PGI2)以及血小板在体内血栓形成中起重要作用. 本文观察了急性脑梗死(ACI)患者服用阿司匹林前后血栓素B2、6-酮前列环素及血小板聚集率的变化, 旨在探讨阿司匹林对ACI患者血栓素A2、前列腺素I2及血小板聚集的影响, 为急性脑梗死临床治疗提供理论依据.     

显示三磷酸腺苷酶和乙酰胆碱酯酶的结合染色技术

三磷酸腺苷酶 (ATPase)和 Ach E是研究中常用的两种酶 ,将两种酶同时显示在一张切片上 ,收到良好效果 ,特介绍如下。材料和方法 :取新鲜的动物肌组织 ,平铺于滤纸上 ,在冰冻切片机上 ,进行纵行切片 ,厚度 10～ 30μm。也可用 4%中性甲醛固定保存在 0～ 4℃的冰箱内 ,时间不宜过长 ,2 4～48小时内 ,仍可收到良好效果。 ATPace显色 :将切片放在下列的孵育液内。孵育液为 :0 .1巴比妥钠 2 0 m l,0 .18M氯化钙 10 m l,双蒸馏水 30 ml,ATP钠盐 15 2 mg,用 0 .1M Na OH调至 9.4,再加蒸馏水至 10 0 m l,每配一次可使用 1周左右。在孵育液内 …     

环氧合酶及其在病理性痛中的作用

<正> 环氧合酶(Cyclooxygenase,COX)是以花生四烯酸为底物生成前列腺素(prostaglandins,PGs)途径中的关键酶。花生四烯酸是细胞膜上的卵磷脂,在磷脂酶A2(phospholipaseA2,PLA2)或磷脂酶C(phospholipase C,PLC)作用下生成,其代谢途径如图1所示。PGS在病理性痛的产生过程中发挥     

内毒素对巨噬细胞和内皮细胞前列腺素合成的影响

内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞和牛主动脉内皮细胞合成前列腺素I2、F2α、E2和血栓素A2。这种刺激作用有剂量和时间依赖性。对于预行色[^3H]花生四烯酸标记的内皮细胞，内毒素增加放射性花生四烯酸的释放和前列腺素I2的合成，多粘菌素B，放线菌酮和地塞米松抑制内素素对前列腺素合成的刺激作用。结果提示内毒素可能通过影响花生四烯酸由细胞脂质的释放过程刺激前列腺素合成。     

环氧化酶-2与肿瘤研究进展

环氧化酶(Cyclooxygenase,COX)又称前列腺素合成酶(Prostag Landin Synthase。PG synthase)。是花生四烯酸(Arachidonic Acid，AA)合成各种内源性前列腺素(PGs)过程中的限速酶。其催化产生的PGs参与机体的多种生理及病理过程。如发热、炎症、出凝血机制等。目前已知COX至少具有两种亚型。即COX-1及COX-2。COX-1为结构型(Constitutive)。被认为是“看家基因”，在大多数正常细胞中呈稳定的表达。合成生理性PGs以维持胃粘膜完整性。     

花生四烯酸诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤和凋亡

探讨花生四烯酸 (AA)能否诱导人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)凋亡及其机制。以不同浓度的AA与细胞分别作用 8、16、2 0和 2 4h ,噻唑蓝 (MTT)法检测细胞存活率 ,Hoechst 3 3 2 5 8染色法观察细胞形态学变化 ,琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解 ,流式细胞术测定细胞凋亡率。测定细胞脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量和胞内还原型GSH含量来判断细胞氧化程度。结果表明 ,AA呈浓度和时间依赖性引起HUVECs存活率下降 (P <0 0 1)。AA处理 2 4h的HUVECs可见凋亡典型的形态学变化 ,琼脂糖电泳示“DNAladder”。AA( 5 0～ 15 0 μmol L)作用 2 0h后 ,流式细胞术检测显示细胞凋亡峰 ,细胞凋亡率分别为 2 0 7% ,3 8 6%和 5 2 5 % (P <0 0 5 )。随着AA浓度的增加 ,细胞MDA含量相应增加 ,而胞内还原型GSH含量则减少 (P <0 0 5 )。表明花生四烯酸 ( 5 0～ 15 0 μmol L)能诱导HUVECs凋亡 ,可能与其促进细胞脂质过氧化损伤作用有关     

改良的Timm染色法显示大鼠海马苔藓纤维末梢出芽的变化

Timm染色方法是一种能够显示组织细胞内重金属分布的常用方法。苔藓纤维末端是脑内含锌量最高的区域 ,因此可以用此方法显示苔藓纤维末梢分布的情况。1、材料与方法1 .1　样品制备在恒温冷箱切片机中制备大鼠脑海马部位的连续冰冻切片 ,片厚 30 μm,吹干备用。1 .2　染色步骤采用改良的 Timm染色法配制 Timm′s混合液。用 30 g阿拉伯胶粉剂溶于 6 0 ml蒸馏水 ,搅拌均匀 ,放置 2 4hr,双层纱布过滤 ,配成 5 0 %的阿拉伯胶 6 0 ml。放入 1 0 ml枸橼酸缓冲液 ( 2 5 .5 %枸橼酸 2 3.5 %枸橼酸钠 )和30 ml5 .6 7%对苯二酚溶液 ,充分混合。切片…     

肥大细胞中前列腺素合成酶的组织化学观察

用正常成年豚鼠20只、大鼠10只,颈椎脱臼或重击头部处死后,立即取胸腺、淋巴结和小肠,部分材料投入-70℃液氮速冻,部分材料入10%甲醛和纯甲醇固定,石蜡切片,HE和肥大细胞特殊染色;肠系膜铺片经氮气吹干后,与液氮速冻的组织块一并置-70℃低温冰箱保存。可随时取出做恒冷箱切片,部分冰冻切片及肠系膜铺片用Janszen和Nugteren前列腺素合成酶组织化学法显示,以此法同步显示家兔肾脏。每种切片均用酶的特异抑制剂消炎痛作对照。部分连续冰冻切片,做HE和肥大细胞特殊染色。结果表明,前列腺素合成酶活性存在于肥大细胞的胞质内,颗粒和胞核为阴性。家兔肾脏集合管恒为阳性。消炎痛抑制反应极弱。确证前列腺素合成酶的组织化学方法可靠并且具特异性。前列腺素合成酶阳性反应的细胞,见于大鼠和豚鼠的小肠粘膜及粘膜下层、胸腺被膜和胸腺隔的结缔组织以及胸腺髓质、淋巴结被膜和小梁结缔组织及深皮质区;散布于肠系膜铺片上的细胞多呈椭圆形。以上所示酶活性细胞的分布,与肥大细胞的其他特殊染色结果相符。证明酶反应确是在肥大细胞内。本文用组织化学技术,证实肥大细胞内存在前列腺素合成酶,此酶是衡量前列腺素合成的敏感指标,可考虑用此方法研究肥大细胞的生理和病理。     

实验性急性肾衰和输尿管梗阻时肾前列腺素的变化

肾脏是体内产生前列腺素类最活跃的组织之一,整个肾脏匀浆或由微粒体产生的前列腺素有PGD_2、PGE_2、PGF_2、PGI_2、TXA_2、它们都是花生四烯酸代谢的产物。花生四烯酸与磷脂结合而存在于细胞膜内,当细胞膜上的     

人体低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇对体外前列腺素I_2合成酶活力的影响

本文研究由人体血清分离的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)对前列腺素I_2(PGI_2)合成酶活性的影响。用猪主动脉的微粒体部份作为酶制剂,用前列腺素H_2作底物。用气-液层析法分析产物6-氧代-前列腺素     

COX-2和VEGF在急性白血病患者体内表达

环氧化酶-2(COX-2)是花生四烯酸转化成前列腺素过程中的重要限速酶.研究表明其在多种实体瘤中表达增强,并认为其与肿瘤血管的生成、肿瘤的发生、浸润和转移密切相关,是肿瘤防治的新靶点.     

花生四烯酸的不稳定代谢物在止血和血栓形成中的作用

花生四烯酸(AA)是所有哺乳类动物细胞膜磷脂的组分,磷脂酶A_2(phospholipase A_2)使之释放。还不了解磷脂酶A_2是如何被激活的.但对细胞膜的任何搔扰都会释出AA接着迅速代谢为加氧(oxygenated)产物,其中有稳定的前列腺素(PG)。AA经两种酶代谢:一种是脂加氧酶(lipoxygenase),形成不稳定的12-hydro-     

冷烫精和摩丝的胚胎毒性的实验研究

目的 :为探讨冷烫精和摩丝的胚胎毒性。方法 :用两种美发剂的不同剂量 (10 0 0mg/kg、10 0mg/kg)对昆明小鼠孕期 6 - 14d进行灌胃染毒 ,观察孕鼠及胎鼠的生长发育结局 ,以蒸馏水为阴性对照 ,以VitA为阳性对照。结果 :冷烫精 10 0 0mg/kg、10 0mg/kg组的孕鼠体重增加 (14.0 3± 7.90g、17.6 6± 2 .6 0g)、活胎率 (73.79%、85 .16 % )、仔鼠身长 (2 .12± 0 .2 3cm、2 .2 3± 0 .17cm)、仔鼠尾长 (1.0 4± 0 .12cm、1.0 9± 0 .12cm)和仔鼠体重 (1.14± 0 .17g、1.31± 0 .15g)明显低于阴性对照组 (2 2 .2 9± 2 .0 7g、96 .43%、2 .36± 0 .14cm、1.2 2± 0 .0 9cm、1.43± 0 .10g) (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ;而吸收和死胎总率 (2 6 .2 1%、14.84% )、10 0 0mg/kg组外部畸形率 (7.48% )和骨骼畸形率 (15 .0 7% )显著高于阴性对照组 (3.75 %、0 %、0 .0 9% ) (P <0 .0 1)。摩丝 10 0 0mg/kg、10 0mg/kg组的活胎率 (77.5 8%、86 .30 % )、仔鼠身长 (2 .15± 0 .2 1cm、2 .2 2± 0 .13cm)、仔鼠尾长 (1.0 9± 0 .16cm、1.11± 0 .12cm)和仔鼠体重(1.2 1± 0 .10g、1.31± 0 .11g)明显低于阴性对照组 (P <0 .0 1) ;但吸收和死胎总率 (2 2 .42 %、13.70 % )、10 0 0mg/kg组外部畸形率(4 .6 9% )明显高于阴性对     

COX-2与结直肠癌早期发病的关系

环氧合酶(cyclooxygenase，COX)又称为环氧化酶和PG内过氧化物合成酶。COX的主要功能是将花生四烯酸转变成前列腺素(PG)。COX家族主要有两个亚型，分别是环氧合酶1(cycl00xygenase-1，COX-1)和环氧合酶2(cyclooxy-genase-2，COX-2)。PG参与体内的许多生理和病理过程，高水平的PG特别是PGE2对多种癌细胞的增殖、侵袭、转移具有促进作用。因此，作为合成PGE2过程中主要的限速酶，COX家族对肿瘤的发生和发展具有重要的调节作用。     

前列腺素与变态反应

前列腺素(Prostaglandins简称PGs)与白三烯(Leukotrienes简称LTs)具有共同的前身物质即含有20个碳原子的不饱和脂肪酸,主要是花生四烯酸。游离的花生四烯酸有两条代谢途径—环氧化酶途径与脂氧化酶途径。前者的代谢产物是各种前列腺素,后者的代谢产物是各种白三烯。自1979年Borgeat 等发现白三烯以后,该领域的研究取得了很大进展,已经证明过敏性慢     

高脂血症促进大鼠血小板活化

高脂血症是心脑血管疾病的主要危险因素之一,血小板活化在血液黏度增高、血栓形成及动脉粥样硬化的发生发展过程中起重要作用.评价血小板活化的指标主要有:二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)和花生四烯酸(araehidonic acid,AA)诱导的最大血小板聚集率(maximum platelet agglutination rate,MPAR)、P选择素(P-Selectin)、血栓素B_2(thromboxane B_2,TXB_2)、6酮前列腺素F1a(6-keto-prostaglandin F1a,6-k-PGF1a)、TXB2/6-k-PGF1a(TP)比值、血小板表面CD62P表达等.     

PGE2在结核感染中对巨噬细胞凋亡的调控

<正>1 PGE2前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)是花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)在环氧合酶(Cyclooxygenase,COX)作用下代谢形成的五大重要代谢产物之一,与其他四种产物PGF2α、PGD2、PGI及血栓烷A2(Thromboxane,TXA2)被统称为前列腺素。1.1 PGE2合成代谢PGE2的合成源自细胞膜上的磷脂(Phospholipd)在磷脂酶A2(Phospholipase A2,PLA2)作用下转化生成游离AA的过程[1]。游     

阿魏酸钠抗花生四烯酸肺栓塞的实验研究

为观察抗血小板药阿魏酸钠(socdiam feratate,SF)作用及机理,以0.5mg/kg体重花生四烯酸(AA)钠盐,从兔耳静脉缓慢注入、2分钟内形成以血小板聚集为主的肺栓塞,表现为兔呼吸,心率加快,肺动脉平均