自体干细胞移植治疗兔后肢缺血中超顺磁氧化铁纳米颗粒标记磁共振体内示踪的研究

目的探讨自体骨髓间充质干细胞（BMSC）移植治疗兔后肢缺血中超顺磁氧化铁纳米颗粒（SPION）标记磁共振成像（MRI）体内示踪的可行性和有效性。方法新西兰大白兔14只，分成A、B两组，各7只。制作后肢缺血模型。A组移植SPION与5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）共标记的自体BMSC；B组作为对照。术后MRI示踪，组织学检查，免疫组织化学染色。结果鉴定显示BMSCCD34和CIM5阴性，CD44阳性。B组中1只死亡。A组毛细血管密度198．9±2．3，B组80．5±5．1．A组毛细血管／肌纤维比值0．84±0．03，B组0．35±0．04，两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。A组：电镜发现血管内皮细胞胞质内含SPION；对应部位组织切片血管壁细胞普鲁士兰铁染色、BrdU和CD34染色均阳性；MRI显示术后即时A组注射部位圆形低信号影，术后1—3周向周围扩散，部位与组织学检查结果一致。B组仅能见到普鲁士兰阳性颗粒游离于组织间隙，并非位于血管内皮细胞；MRI低信号影局限于注射局部，无扩散。结论自体BMSC移植治疗兔后肢缺血中SPION标记MRJ体内示踪可行、有效。     

静脉移植骨髓间充质干细胞对大鼠脊髓损伤后轴突再生的作用

目的:研究静脉移植骨髓间充质干细胞(bonemarrowstromalcells,BMSC)对脊髓损伤后轴突再生的影响。方法:体外分离、培养、扩增、纯化、BrdU标记10只同种异体SD大鼠的BMSC,WD法制成完全性截瘫的同种大鼠脊髓损伤动物模型。制模后7d随机分为A、B、C三组,A组22只,作为BMSC移植组,经鼠尾静脉移植2×106/ml的BMSC悬液1ml;B组22只,作为对照组,移植1mlL-DMEM液;C组22只,作为空白手术对照组。移植后1、2、3、4、5、6周用BBB评分评估各组后肢运动功能;移植后2、3、6周组织学及免疫组织化学观察并检测损伤段脊髓内生长相关蛋白-43(growth-associatedprotein-43,GAP-43)、神经丝蛋白200(neurofilament-200,NF200)的表达。结果:移植后3周开始,A组的BBB评分在各观察时间点明显高于B组、C组,移植后6周维持在较稳定水平,而B、C组在伤后3周开始维持在较稳定水平;在移植后2、3、6周,A组GAP-43、NF200的表达明显高于高于B组、C组,6周时开始下降,而B组与C组在移植后2、3、6周的表达均维持在相对恒定的水平。结论:大鼠脊髓损伤后静脉移植BMSC能使损伤段脊髓GAP-43、NF200表达上调,促进脊髓损伤后轴突再生和神经功能改善。     

微囊化同种异体骨髓间充质干细胞移植预防兔椎间盘退变的实验研究

目的:探讨超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)磁粒子标记的微囊化同种异体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,bMMSCs)移植预防椎间盘退变的可行性.方法:选用60只健康新西兰大白兔.随机平均分为A、B、C、D、E 5组,每组12只.A、B、C、D组应用髓核抽吸法制作L2/3、L3/4、L4/5椎间盘退变模型,取同种异体兔bMMSCs行体外培养,并在体外纯化扩增,用SHO标记后行微囊化,于造模手术当时植入(A组)兔手术节段椎间盘内;B组植入未微囊化bMMSCs;C组移植空微囊;D组仅制作模型,不移植;E组为正常对照组.分别于建模后2、4、6、8周时用MRI扫描对标记干细胞在椎间盘内分布进行示踪,并于相应时间点处死动物后取L2/3、L3/4、L4/5髓核组织,用间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖含量的变化,免疫组化法测定Ⅱ型胶原含量的变化.所得数据进行统计学分析.结果:bMMSCs能被SPIO有效标记,应用MRI扫描可观察到其在体内的分布,8周时MRI图像与4周时相比,干细胞由注射部位向周边发生了迁徙.建模后2、4、6、8周各时间点.A组髓核中蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量均高于B组、C组和D组,差异有统计学意义(P<0.05);B组均高于C组及D组,差异有统计学意义(P<0.05);各时间点E组与B组、C组及D组相比差异有统计学意义(P<0.05);术后6、8周时A组与E组之间差异无统计学意义(P>0.05);各时间点C组和D组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论:微囊化bMMSCs移植后能恢复兔髓核中细胞外基质含量,其效果优于单纯bMMSCs移植.     

骨隧道大小对前交叉韧带止点转归的影响

目的 观察前交叉韧带(anterior cruciate ligament, ACL)重建中不同直径骨隧道对移植韧带止点转归的影响.方法 日本大耳兔90只,雌雄不拘,体重2.5～3.0 kg,随机分为3组,每组30只.制备ACL止点转归动物模型,分成移植韧带直径(d)与骨隧道直径(D)之比(d/D)为1/1组(A组)、1/1.5组(B组)和1/2组(C组).观察术后一般情况,并于术后4、8和16周每组处死10只动物,行移植止点大体、组织学观察及最大抗拉力载荷实验.结果 3组动物术后伤口愈合佳.平均双下肢行走时间:A组1.5 d、B组2.0 d及C组3.5 d.大体观察:术后4周,A、B组骨隧道口软组织生长多于C组;8周A、B组骨隧道口已无缝隙,C组无改善;16周A、B组与正常韧带止点相同,C组未形成止点结构.组织学观察:术后4周各组肌腱与骨隧道间充满疏松结缔组织;8周A、B组潮线结构不连续,C组未见潮线样结构;16周A、B组出现连续潮线样结构,C组仍未形成潮线样结构.术后4周,A、B及C组最大抗拉力载荷分别为(75.44±7.06)、(91.37±6.14)和(126.91±4.61)N;8周为(74.31±4.81)、(88.30±7.46)和(124.34±8.44)N;16周为(62.20±5.32)、(71.53±5.99)和(83.62±5.69)N;术后各时间点A、B组间最大抗拉力载荷差异无统计学意义(P>0.05),A、B组与C组间差异有统计学意义(P<0.01).结论 在ACL重建中d/D为1/1.5时,对止点转归无明显影响,但d/D小于此范围将影响移植物止点的转归.     

神经干细胞与原浆型星形胶质细胞联合移植对大鼠损伤脊髓轴浆运输功能的修复作用

目的：观察神经干细胞（NSC）与原浆型星形胶质细胞（PAS）联合移植对大鼠损伤脊髓轴浆运输功能的修复作用。方法：40只Wistar大鼠，制成L1～L2左侧脊髓半切空洞损伤模型，随机分为损伤组（A组），损伤后移植PAS组（B组）、移植NSC组（C组）、NSC和PAS按2：1比例联合移植组（D组），每组10只。4周及8周后行损伤部位神经丝-200（NF-200）染色观察NSC在体内的分化情况，腓肠肌胆碱酯酶染色观察运动终板的反应和核黄逆行示踪观察轴浆运输的恢复情况。结果：（1）4周时D组和C组移植部位可见少量NF-200阳性标记的神经元．8周时数量明显增多，D组多于C组；4周及8周时A、B组均未见到明显阳性标记的神经元。（2）4周时．A、B组胆碱酯酶染色示运动终板均出现退变，终板染色变浅；8周时A组终板明显退变，出现大片染色空白区，甚至终板消失，只剩下模糊的轮廓；B组终板退变程度轻于A组，着色淡，轮廓欠清晰，周边呈浅棕红色淡染，但未出现大片染色空白区；C、D组4周时终板边缘发生皱缩，呈颗粒样改变，无明显染色缺失；8周时C组较4周时变化不明显，D组受损终板皱缩明显好转，颗粒样改变消失。（3）4周时，B、C、D组核黄染色的神经元散在位于脊髓的前、后、侧角，其中D组阳性标记的神经元的数量及荧光强度大于B、C组，C组又稍强于B；8周时B、C、D组阳性神经元数量均增多．神经元的数量及荧光强度仍是D组〉C组〉B组；A组4周及8周时均未见到明显阳性染色的神经元。结论：联合移植NSC和PAS（2：1）能更好地修复损伤脊髓的轴浆运输功能并能较好地防治其后肢肌肉运动终板的溃变。     

超低温冷冻保存的吻合血管异体神经移植实验研究

目的探讨吻合超低温冷冻血管的异体神经移植的可行性.方法杂种雌性犬12只,体重15～20 kg;制备带血管坐骨神经动物模型,分别切取坐骨神经6～10 cm,直径4.5～6.5 mm,滋养血管干长3.5～4.5 cm.经超低温冷冻保存3个月后行异体移植.取杂种雄性犬48只,体重15～20 kg;随机分为4组,每组12只,超低温冷冻吻合血管的异体神经移植组为A组,超低温冷冻不吻合血管的异体神经移植组为B组,新鲜吻合血管的异体神经移植组为C组,新鲜吻合血管的自体神经移植组为D组.于术后1、4和12周(n=4)行大体观察,观察吻合动脉血管的通畅率,取移植神经作组织学检测.术后4周测定白细胞介素2活性及T细胞亚群的变化,术后12周行肌电图检测和形态定量学检查.结果术后12周,A、D组后足趾无溃疡,后肢小腿肌肉萎缩和皮肤痛觉有恢复.B、C组后足均有溃疡,后肢小腿肌肉萎缩和皮肤痛觉未恢复.1、4及12周血管通畅率A、D两组平均为83.3%,显著高于C组的50%(P＜0.05).术后4周白细胞介素2活性及T细胞亚群,C组高于A、B、D组(P＜0.01).术后2周A、D组光镜下见神经移植段有逐渐增多的新生毛细血管和再生神经纤维,单位面积髓鞘数、平均灰度值和单位面积髓鞘密度值均高于B、C组(P＜0.01).术后12周,A、D组动作电位潜伏期短,波幅高,传导速度快,神经修复明显优于B、C组(P＜0.01).结论超低温冷冻保存能降低异体血管神经的抗原性,在未使用免疫抑制剂情况下,吻合血管的异体神经移植是可行的;对于较粗大的神经,其神经修复明显优于不吻合血管的异体神经移植.     

大鼠脊髓损伤后不同时期移植人脐带间充质干细胞的修复效果观察

目的:观察大鼠脊髓损伤后不同时期局部移植人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchy-mal stem cells,hUCMSCs)修复脊髓损伤的效果,探讨hUCMSCs局部移植治疗脊髓损伤(spianl cord injury,SCI)的最佳移植时机。方法:雌性Wistar大鼠80只,随机均分为A、B、C、D组,以Impactor Model-Ⅱ打击器制备脊髓胸10(T10)损伤模型。A组为单纯损伤组,B组损伤后3d移植hUCMSCs,C组损伤后1w移植hUCM-SCs,D组损伤后3w移植hUCMSCs,分别于造模后24h、移植前1d及移植后8w(A组与D组损伤后相应时间点相同)每周对各组大鼠后肢功能进行行为学评分(BBB评分);移植后8周免疫组化染色观察移植细胞的存活、分化和血管再生情况,10周时用生物素葡聚糖胺(biotin dextran amine,BDA)示踪皮质脊髓束(corticospinaltract,CST)观察轴突的再生情况。结果:SCI后24h各组大鼠BBB评分无显著性差异(P0.05),D组在移植前和移植后1周与A组相应时间点的BBB评分无显著性差异(P0.05),移植后2w起各时间点评分均明显高于A组相应时间点,差异有统计学意义(P0.05);A组在SCI后9w时到达平台期,与实验结束时相比差异无统计学意义(P0.05)。移植各组移植后BBB评分逐渐上升,后一个时间点与同组前一时间点比较差异有显著性意义(P0.05),移植后6w开始C组明显高于B、D组(P0.05)。免疫组化染色A组脊髓中未见Brdu阳性细胞,损伤区血管形态欠完整,未见新生血管;损伤周围星形胶质细胞大量增生,细胞肥大、突起增多、排列不规则,形成胶质瘢痕;未见BDA标记的皮质脊髓束通过损伤区。B、C、D组脊髓中均有Brdu阳性标记的细胞存活,C、D组中细胞数量明显多于B组,但三组中均未见到移植细胞向神经元或神经胶质样细胞分化;B、D组损伤周围的星形胶质细胞较A组减少,但排列仍欠规则;C组损伤周围星形胶质细胞形态趋于正常,排列规则,且有大量星形胶质细胞通过损伤区,血管再生数目及通过损伤区的皮质脊髓束神经纤维也明显多于B、D组。结论:大鼠SCI后局部移植的hUCMSCs能长期存活,抑制胶质瘢痕形成,改善后肢运动功能;SCI后1w移植的效果优于SCI后3d和3w时移植的效果。     

低温保存的嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究

目的:观察低温保存复苏后嗅鞘细胞(OECs)局部移植治疗脊髓损伤(SCI)的疗效,探讨低温保存对嗅鞘细胞活性的影响。方法:建立大鼠T10节段脊髓半切损伤模型56只,随机分为四组,每组12只:新鲜OECs移植组(A组),冻存OECs移植组(B组),D/F12培养液移植组(C组)和空白对照组(D组)。A组损失伤局部行新鲜OECs移植,B组将处于对数生长期的OECs冻存3个月,复苏后(用双苯亚甲胺标记)移植到脊髓半切模型大鼠脊髓损伤区。术后第1天、1、2、3、4、6、8及10周时进行联合行为学(CBS)综合评分,术后5周和10周时取材观察移植细胞存活及迁移情况;HE染色及嗜银染色观察脊髓组织病理及轴突情况;NGFRp75免疫组织化学染色情况。结果:术后第1天,2、10周时CBS评分,A组分别为85.78±1.07、58.80±5.00、6.52±2.37;B组分别为86.12±1.29、60.06±6.51、8.15±2.26;C组分别为86.4±1.03、66.28±7.00、30.65±5.60;D组分别为86.75±1.37、69.85±6.61、34.13±5.38。A、B两组间无明显差别(P>0.05);C组与D组间比较无差异(P>0.05);A组及B组较C组和D组在2周后各时段差别有显著意义(P<0.05)。组织学方面,HE染色和嗜银染色A、B两组在术后5周可见多量突起经近侧断端向损伤区域生长,10周时可见神经纤维跨越损伤区域,而C、D组未见有神经纤维跨越损伤区;NGFRp75免疫组化染色,无论5周还是10周,A、B两组在损伤部位均可见阳性染色区域,C、D组未见有阳性着色。术后5周时A、B两组可检测到荧光标记细胞,且可见细胞发生迁移。结论:低温保存的OECs脊髓局部移植治疗SCI与新鲜OECs移植治疗效果无差别。     

蜕皮甾酮和骨髓间充质干细胞对早期创面抗炎作用的初步研究

目的:研究蜕皮甾酮(EDS)及骨髓间充质干细胞(BMSC)对烫伤创面的早期抗炎作用.方法:新西兰大耳白兔18只,每只兔用烫伤仪制备4个创面并经病理证实为深Ⅱ度,随机标记为空白对照组(A组)、EDS组(B组)、BMSC(C组)、EDS+BMSC(D组).烫伤后5、10、15 d各处死6只家兔,观察炎性细胞浸润度、创面愈合...     

胚胎脊髓移植联合甲基强的松龙治疗脊髓损伤的实验研究

目的采用胚胎脊髓移植及大剂量甲基强的松龙联合应用治疗脊髓损伤,观察两者有无协同作用.方法雄性SD大鼠50只,随机分为5组,A、B、C、D组为T12急性脊髓右侧半横断损伤后治疗组,A组给大剂量甲基强的松龙及胚胎脊髓移植联合治疗;B组行大剂量甲基强的松龙治疗;C组行胚胎脊髓移植治疗;D组为单纯损伤;E组为空白对照.治疗后24 h及8周后观察大鼠一般行为及运动功能变化,评分分析.病理观察包括治疗后8周神经纤维记数对比及辣根过氧化物酶示踪观察.结果病理学形态观察示A组损伤区横断面神经纤维记数较B、C、D组明显增多(P＜0.01);A、C组在损伤区注入的辣根过氧化物酶可扩散至损伤区远、近端各约1.0 cm处.除A组左下肢感觉有部分恢复外,无明显行为学改变.结论大剂量甲基强的松龙及胚胎脊髓移植可协同修复损伤脊髓.     

自体移植的大鼠骨髓间充质干细胞在脊髓损伤处的存活及分化

目的观察自体移植的骨髓间充质干细胞(BMSC)在脊髓损伤(SCI)处的存活及向神经细胞分化情况。方法将36只雄性SD大鼠随机分为PBS注射组(PBS组)和BMSC自体移植组(BMSC组)。BMSC组大鼠在术前均进行自体BMSC分离培养。2组大鼠均采用改良Allen撞击装置制备T9水平的SCI模型,PBS组于损伤处注射PBS,BMSC组注射第4代自体BMSC。于移植后2、3、5周采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分法进行运动功能评分;移植后2、3、5周取损伤部位脊髓,采用Hoechst33342染色法观察移植细胞存活情况,同时行免疫荧光化学染色检测自体移植的BMSC中微管相关蛋白2(MAP-2)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果移植后2、3、5周,BMSC组大鼠BBB评分均高于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05)。移植后2、3、5周,BMSC组大鼠损伤处脊髓有不同数量Hoechst33342标记细胞存活,其中2周时细胞存活较多,5周时细胞存活较少;移植后2、3周,未检测到移植细胞表达MAP-2及GFAP,5周时检测到部分移植细胞表达MAP-2和GFAP。结论SCI后立即进行移植的自体BMSC可在损伤处存活,部分存活细胞可向神经元和星形胶质细胞方向分化,促进大鼠后肢运动功能的恢复。     

骨化三醇在抑制大鼠同种肢体移植排斥反应中的作用

目的 探讨应用骨化三醇(1,25-二羟维生素D;简称:VD5)在抑制肢体移植排斥反应中的作用.方法 以Wistar大鼠为供者,SD大鼠为受者,建立同种肢体移植模型.随机将受者分为4组,每组12只.(1)对照组:术后不用免疫抑制剂,仅以15 ml·kg-1·d-1.生理盐水灌服.(2)他克莫司(FK506)组:将FK506用生理盐水稀释为0.5 mg/ml,术后前2周的用量为1.0 mg·kg-1·d-1,术后第3周起,每周灌服2次.(3)VD3组:将骨化三醇用生理盐水稀释为0.125 μg/ml,术后用量为2.5μg·kg-1·d-1,连续灌服4周.(4)VD3+FK506组:术后联合应用骨化三醇及FK506,用药方法和用量与FK506组和VD3组相同.术后观察各组受者移植肢体排斥反应发生的时间和存活时间;流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+细胞的百分率.结果 对照组、FK506组、VD3组以及VD3+FK506组肢体移植后排斥反应发生的时间分别为:(3.50±0.50)d、(13.13±1.50)d、(10.63±0.38)d和(29.25±0.63)d;移植肢体的存活时间分别为:(8.50±0.50)d、(26.25±1.50)d、(17.25±0.38)d和(62.00±0.63)d;与对照组比较,VD3组排斥反应发生的时间和移植肢体的存活时间均明显延长,差异有统计学意义(P＜0.01);VD3+FK506组抗排斥反应效果更佳,与FK506组和VD3组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).VD3组T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+细胞的比值明显低于对照组,VD3+FK506组又明显低于VD3组和FK506组(P＜0.01).结论 骨化三醇能明显减轻同种肢体移植排斥反应,延长移植肢体的存活时间;骨化三醇与FK506联合应用效果更佳,二者具有协同作用.     

骨髓间充质干细胞经蛛网膜下腔移植治疗大鼠脊髓损伤及其对T细胞亚群影响的研究

目的将异体骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells,MSCs）移植至脊髓损伤（spinalcord injury,SCI）大鼠蛛网膜下腔,探讨其治疗效果以及对T细胞亚群的影响。方法取6周龄SD大鼠10只,采用密度梯度离心法进行细胞分离及培养,传至第6代后收集细胞。雌性8周龄SD大鼠60只,采用重物打击法制备SCI模型,从BBB后肢功能评分为0的存活大鼠随机取40只分为两组,每组20只。实验组（A组）：经蛛网膜下腔注入经BrdU标记的细胞浓度为2×106/ml的MSCs细胞悬液1ml;对照组（B组）：注入等量L-DMEM。另取20只正常雌性8周龄SD大鼠作为空白组（C组）。于第1、2和3周行BBB后肢功能评分,并采外周血经流式细胞仪检测T细胞亚群;第3周时,A、B组大鼠取损伤处脊髓,行组织切片观察。结果A组BBB后肢功能评分第3周优于B组,但仍低于C组,差异均有统计学意义（P〈0.05）;CD4＋T细胞在第1、2和3周均较B、C组少,CD8＋T细胞在第2、3周较B、C组少,CD4＋/CD8＋T细胞比值在第1周较B、C组少,上述差异均有统计学意义（P〈0.05）;但CD4＋/CD8＋T细胞比值在第2、3周与B、C组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。组织学观察,A组第3周脊髓损伤处空泡缩小,有组织长入,较B组有轻微改善,但未明确见到BrdU阳性标记的MSCs。结论MSCs经蛛网膜下腔移植对SCI有一定治疗作用,且在一定时间内不引起机体排斥反应,在第1周对T细胞亚群的抑制更为明显,为临床利用MSCs治疗SCI及其他疾病提供了免疫学实验依据。     

雷公藤多甙抗大鼠原位肝移植急性排斥反应研究

目的 探讨雷公藤多甙的免疫抑制作用,以及其诱导免疫耐受作用.方法 该实验应用肝移植120只SD大鼠,分为四组:对照组(A组),TⅡ组(B组),CsA组(C组),TⅡ+CsA组(D 组).分别于术后1、3、5、7、14 d检测外周血的IL-2R的含量和脾脏淋巴细胞IL-2、IL-10的活性表达及脾脏组织CD4+、CD25+、CD8+、CD28+的蛋白表达.结果 三组治疗组的IL-2活性和IL-2R含量均明显低于对照组,三组治疗组间的比较是D组低于B、C组;三组治疗组的1L-10活性明显高于对照组,三组治疗组也有显著差异,即D组高于C组,C组高于B组,上述均有统计学意义(P<0.05).三组治疗组的CD4+、CD25+、CD8+、CD28+的蛋白活性表达均高于对照组,而CD28+的蛋白活性表达却相反.三组治疗组间的CD4+、CD28+的比较,均有显著性差异(P<0.05).结论 雷公藤多甙不但具有免疫抑制作用,而且还能够诱导一定程度的免疫耐受.     

骨髓间充质干细胞联合肝细胞生长因子基因治疗兔肢体缺血

目的探讨联合应用骨髓间充质干细胞(BMSC)和肝细胞生长因子(HGF)基因治疗兔肢体缺血的疗效。方法 32只新西兰兔切除右后肢股浅动脉并结扎股深动脉建立后肢缺血模型,成模后随机均分为空腺病毒对照组(对照组),BMSC细胞治疗组(BMSC组),HGF基因治疗组(HGF组)和联合治疗组(BMSC+HGF组),各组均采用术肢肌肉内原位注射。治疗28 d后通过动脉造影行侧枝血管计数,治疗30 d后用免疫组化和Western blot法检测注射点周围组织中CD31和HGF的表达。结果 BMSC组及HGF组的侧支血管计数与对照组间差异无统计学意义,而BMSC+HGF组侧支血管计数较其余各组明显增加(P<0.05或P<0.01);免疫组化显示,各处理组CD31表达量明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),BMSC组和HGF组间CD31表达量无明显差异(P>0.05),但两者均明显低于BMSC+HGF组(均P<0.05);Western blot显示,各处理组HGF表达量均高于对照组(P<0.05或P<0.01),且HGF在BMSC组、HGF组和BMSC+HGF组中的表达量依次增高,差异均有统计学意义(均P<0.05)...     

骨髓间充质干细胞联合血管内皮生长因子基因治疗肢体缺血的实验研究

目的 观察骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSC)联合血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因治疗对家兔肢体缺血模型的疗效.方法 切除新西兰兔右后肢全长股浅动脉并结扎股深动脉以建立兔后肢缺血模型,随机分为空质粒对照组(EP组)、骨髓间充质干细胞组(BMSC组)、VEGF基因治疗组(VEGF组)及联合治疗组(BV组),每组各8只.分别于治疗后28 d及30 d进行动脉造影及VEGF免疫组化染色.结果 EP组、BMSC组及VEGF组的新生血管计数组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).BV组的新生血管计数较其余3组明显增加,差异有统计学意义(F=35.47,P＜O.01).BMSC组及VEGF组的VEGF免疫组化染色呈阳性表达,与EP组比较差异有统计学意义(F=764.32,P＜0.01).BV组的VEGF免疫组化染色呈强阳性表达,与其余3组比较差异有统计学意义(F =764.32,P＜0.01).结论 BMSC联合VEGF基因治疗兔肢体缺血可使VEGF获得稳定而有效的表达,从而改善肢体缺血.     

肢体缺血再灌注损伤的新型动物模型制作

[目的]用充气止血带制作肢体缺血再灌注损伤的新型动物模型,研究其对周围神经和骨骼肌损伤的影响.[方法]选择健康新西兰大白兔6个月龄,30只,体重(3.5 ±0.3) kg,雌雄不限,在家兔左侧后肢环扎充气止血带,于不同时间点松开,造成左侧后肢缺血再灌注损伤的模型.随机分为3组,每组10只.A组:对照组,B组:缺血2h,C组:缺血4h.对照组不扎充气止血带,第1、2、3、4、5、6h检测肢体的神经电生理学指标,B组、C组于再灌注(松开止血带,血供恢复后)的1、2、3、4、5、6h检测肢体的神经电生理学指标,A组于第6h观察骨骼肌的形态,B、C组于再灌注(松开止血带,血供恢复后)的第6h观察骨骼肌的形态,每组于术后第5d评估左侧后肢的行走功能.[结果]随着缺血后再灌注时间的延长,B、C和A组相比较,周围神经的潜伏期延长、波幅降低,传导速度降低,三组之间的潜伏期、波幅、传导速度差异均有统计学意义(P＜0.05),光镜观察骨骼肌可见(B、C组):横纹紊乱、肌纤维断裂、间质血管扩张充血、大量中性粒细胞浸润.[结论]经过缺血期和再灌注损伤的交互作用后,肢体的功能性损伤进一步加重,出现了不可逆的病损.该模型制作对动物的损伤较小,更贴近临床.     

Intraosseus transplantation of donor-derived hematopoietic stem and progenitor cells induces donor-specific chimerism and extends composite tissue allograft survival

We investigated the effect of the intraosseous allotransplantation of the donor-derived hematopoietic stem cells (HSC) CD90+ on chimerism induction and survival of rat hind limb transplants. Eighteen rat hind limb transplantations were performed between Lewis-Brown-Norway and Lewis rats in three groups. Isograft and allograft rejection controls received no treatment. In the experimental group, 0.8 to 1.2 x 10(6) of separated and purified CD90+ HSC cells were transplanted intramedullary into the bone marrow cavity of the recipient's tibia during opposite hind limb transplantation, without immunosuppressive therapy. Transplants from isograft group survived indefinitely. Allograft controls rejected transplants on day 7 posttransplant. The injection of separated and purified CD90+ cells of the donor origin extended survival of the transplanted limbs up to 15 days in group III. We introduced a novel method of transplantation of the CD90+ cells of the donor origin into the recipient's bone marrow cavity. This technique resulted in extended allograft survival, without immunosuppressive therapy.     

骨髓基质细胞经不同移植途径在损伤脊髓中的迁移

目的 观察骨髓基质细胞(BMSCs)经不同移植途径在损伤脊髓中的迁移和分布规律.方法 40只Wistar大鼠随机分成4组,以改良Allen法制备脊髓损伤模型.第3代BMSCs经CM-Dil荧光染料标记后按不同途径移植.A组:脊髓损伤后行第四脑室注射移植;B组:脊髓损伤后行损伤区蛛网膜下注射移植;C组:脊髓损伤后行损伤区远端蛛网膜下注射移植;D组:脊髓损伤后行股静脉注射移植.分别于移植后24 h、1、2、3、4周取损伤脊髓段作冰冻切片,倒置荧光显微镜下观测移植的BMSCs在损伤脊髓中心的聚集情况.结果 移植后24 h:除B组外脊髓损伤区未发现红色荧光;移植后1周,A、C组移植的BMSCs开始向脊髓损伤区迁移;移植后2周,除D组外,各组BMSCs迁移、聚集在损伤脊髓的中心;移植后3-4周,脊髓损伤区BMSCs数量减少,B组减少速度更快.结论 经第4脑室、硬脊膜下移植的BMSCs能迁移聚集在损伤脊髓的中心,经静脉移植的BMSCs极少迁移到损伤脊髓的中心.     

白细胞靶向心肌超声造影技术评价心脏移植后急性排斥反应的研究

目的 探讨白细胞靶向心肌超声造影技术对心脏移植术后急性排斥反应及其程度的诊断价值.方法 将实验大鼠随机分为4组,行腹腔异位心脏移植术.A组为同系移植,供、受者均采用健康雄性SD大鼠;B、C、D组为同种移植,供者采用健康雄性SD大鼠,受者采用健康雄性Wistar大鼠.B、C组分别于移植前3 d起每天腹腔注射环孢素A(CsA)10 mg·kg-1·d-1和3 mg·kg-1·d-1,A、D组不给予CsA治疗.每组抽取成功建立腹部异位心脏移植模型的受者各8只.术后第3天,将声诺维造影剂经颈内静脉持续注入大鼠体内,应用心肌超声造影技术观察移植心脏,分别获取注入造影剂20 s时的心肌灌注造影图像和5 min时的白细胞靶向心肌造影图像,利用图像分析仪分别测定每只受者的造影图像灰阶值(GS20s、GS5m)和靶向灰阶值(Gstarget,为GS5m与GS20s之差).造影观察完毕后处死大鼠,行病理学检查,HE染色确定移植心肌排斥反应程度;免疫组织化学法检测移植心肌组织内CD3+T淋巴细胞浸润程度,并将其分别与各组的GS20s、GS5m和Gstatget做相关性分析.结果 心肌灌注造影显示各组GS20s之间无明显差异(P＞0.05);白细胞靶向造影显示各组GS5m之间存在梯度,差异有统计学意义(P＜0.05);且各组Gstarget之间的差异也有统计学意义(P＜0.01).移植心肌组织病理学检测显示:A组为0～Ⅰ级排斥反应,B组为Ⅰ～Ⅱ级排斥反应,C组为Ⅱ～Ⅲ级排斥反应,D组为Ⅲ～Ⅳ级排斥反应.免疫组织化学检测显示:从A组到D组,移植心肌组织中CD3+T淋巴细胞计数逐渐增多.相关性分析显示:CD3+T淋巴细胞计数与Gstarget呈正相关(r=0.86,P＜0.001),与GS5m有相关性,与GS20s无相关性.结论 白细胞靶向心肌超声造影技术能无创、有效的评价心脏移植术后的急性排斥反应程度.