凝血因子Ⅱ对肝癌细胞生物学功能的影响及其可能机制预测

目的 本研究以肝癌细胞为研究对象，探索凝血因子Ⅱ（简称F2）对肝癌细胞系的增殖、迁移、侵袭以及凋亡等生物学行为的影响，寻找新的肝癌预后标志物，为肝癌治疗提供潜在靶点。方法 利用ICGC数据库验证F2在肝癌中的表达水平及其与预后的关系。通过重组慢病毒载体构建稳定过表达和稳定敲低的肝癌细胞株，后通过CCK-8实验、平板克隆实验、划痕实验、Transwell细胞侵袭实验、流式细胞术、免疫印迹实验检测F2对肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。最后利用生物学信息方法进行通路富集分析。结果 F2在肝癌组织中表达下调（P<0.001），且与患者总生存时间更短有关（P<0.01）。CCK-8、平板克隆实验结果显示，F2对肝癌细胞的增殖起抑制作用（P<0.05）；划痕实验、Transwell细胞侵袭实验结果显示，F2对肝癌细胞的迁移和侵袭起抑制作用（P<0.05）；流式细胞术和免疫印迹结果显示，F2诱导肝癌细胞凋亡（P<0.05）。F2的潜在相关基因主要参与胆固醇代谢、PPAR信号通路、凝血等过程。结论F2对肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭有一定的抑制作用，并诱导肝癌细胞...     

Ras协同mTOR/SREBP1-c上调miR-182-96-183在肝癌中表达

目的:探讨Ras癌基因诱导的miR-182-96-183高表达机制。方法:采取H-ras12V转基因小鼠肝癌及癌旁组织,miRNA高通量测序检测miR-182-96-183基因表达水平。Westernblot检测调控miR-182-96-183表达的相关信号通路活化状态及其上游转录因子蛋白表达水平。结果:miRNA高通量测序结果表明:与PT相比,T中miR-182-96-183m RNA表达显著升高(P0.01)。Westernblot检测结果表明:与PT相比,T中ERK、mTOR活化水平显著升高,SREBP-1c蛋白水平显著升高。结论:Ras癌基因可能通过活化mTOR通路激活SREBP-1c上调miR-182-96-183的表达水平。     

磷脂酶D1基因mRNA在前列腺癌细胞雄激素非依赖性转化中的作用分析

目的探讨磷脂酶D1(phospholipase D1,PLD1)mRNA在前列腺癌细胞雄激素非依赖性转化中的作用。方法利用Arraystar Human LncRNA Microarray V3.0基因芯片,比较了前列腺癌标准株细胞LNCa P在发生雄激素非依赖性转化前后的mRNA和lncRNA的差异表达,分析表达显著的PLD1 mRNA及其信号通路的相关基因,检测PLD1 mRNA表达受相应shRNA慢病毒载体抑制后LNCa P细胞增殖能力的改变。结果 LNCa P细胞在雄激素非依赖性转化后其PLD1mRNA升高373倍(P0.05),PI3K/AKT信号途径的有关mRNA表达升高;在其PLD1 mRNA表达受慢病毒抑制后,与空白对照和阴性对照组比较,其生长率下降了近30%,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 PLD1 mRNA及其有关的PI3K/AKT信号通路在前列腺癌细胞雄激素非依赖性中可能存在重要作用,下调PLD1 mRNA的表达能在一定程度上抑制前列腺癌细胞雄激素非依赖转化后的增殖速度。     

PI3K/Akt信号通路与HepG2细胞的关系研究进展

细胞内基因直接控制着细胞增殖与凋亡,而细胞外部因素通过信号转导通路影响细胞内基因的表达活化,从而间接调节细胞的增殖与凋亡。PI3K/Akt信号通路活化可以抑制多种刺激因子诱发的细胞凋亡,促进细胞周期进展、细胞生存和增殖,同时参与血管形成、肿瘤的侵袭和转移,因此也在肝癌细胞中扮演很重要的角色。通常HepG2细胞凋亡会在一定的外在因素作用下,通过PI3K/Akt信号通路,抑制肝癌细胞发生增殖、分化,从而促使肝癌细胞发生凋亡。最近的一些调研表明,通过PI3K/Akt信号通路对HepG2细胞凋亡机制的研究,以HepG2细胞促凋亡基因Bax的分子机制为准则,对其影响进行总结,以此分析信号转导通路在肝癌细胞中的作用和意义。     

蛇床子对HER-2阳性乳腺癌的作用及K-ras的影响

目的 拟探讨K-ras基因和不同分期HER-2阳性乳腺癌的相关性及蛇床子对其调控作用。方法 应用TCGA数据库乳腺浸润癌（breast invasive cancer,BRCA）项目的 RNAseq数据分析K-ras基因和不同分期HER-2阳性乳腺癌的相关性。体外培养乳腺癌4T1细胞系,分析蛇床子对HER-2/neu高表达4T-1细胞增殖、凋亡活性EMT的影响,以及K-ras基因和Ras/MAPK通路的影响。结果 K-ras基因表达增高和不同TNM分期显著相关。蛇床子可抑制HER-2/neu高表达乳腺癌4T-1细胞增殖,促进凋亡,抑制EMT发生,抑制K-ras基因（P <0.05）,蛇床子可下调Ras/MAPK信号通路。结论 K-ras基因表达增高和HER-2阳性乳腺癌不同TNM分期显著相关,蛇床子可调控K-ras基因,进而下调Ras/MAPK信号通路,抑制乳腺癌进展。     

异丙酚对食管癌细胞侵袭能力的影响及机制探讨

目的探讨异丙酚对食管癌细胞侵袭能力的影响及其机制。方法分别以30、60和120μg/ml异丙酚处理Eca109细胞,采用平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验检测细胞的克隆形成能力、侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白的表达情况。结果 30μg/ml异丙酚对Eca109细胞的克隆形成能力无显著影响,但60和120μg/ml异丙酚能够显著抑制Eca109细胞克隆形成能力;异丙酚能够呈浓度依赖性抑制Eca109细胞的侵袭和迁移,且抑制MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT蛋白的表达。结论异丙酚能够抑制食管癌Eca109细胞的侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

hNIS基因转染介导碘-131杀伤肝癌细胞的研究

目的 将hNIS基因转染到肝癌细胞使其具备主动吸收碘的功能,观察转基因肝癌细胞吸收碘的能力,并进一步观察其介导放射性碘杀伤肝癌细胞的可能性。方法 重组含有hNIS的载体,并转染至肝癌细胞HepG2,利用稳定表达的转基因肝癌细胞进行吸碘能力测定,并应用MTT法测定碘-131杀伤肝癌细胞的效果。结果 γ计数仪测定表达hNIS基因的肝癌细胞吸收碘的能力比对照组高10倍,MTT法测定结果显示表达hNIS基因的肝癌细胞抑制率明显高于对照组。结论 转基因肝癌细胞具有浓聚碘的能力,并且可以介导碘-131杀伤肝癌细胞。     

ERK1/2通路抑制剂PD98059影响卵巢癌细胞SKOV3增殖、侵袭能力的研究

目的:探讨MAPK/ERK信号传导通路抑制剂PD98059对卵巢癌细胞SKOV3的增殖、侵袭能力的影响。初步探讨阻断MAPK/ERK信号传导通路治疗卵巢癌的可能性。方法:体外培养人上皮性卵巢癌细胞SKOV3,采用CCK-8细胞增殖方法检测卵巢癌细胞SKOV3增殖情况,Western blot检测p-ERK蛋白表达,Transwell细胞侵袭实验检测SKOV3细胞的侵袭能力。结果:CCK-8法显示PD98059在一定范围内能够明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖,其作用具有时间依赖性及浓度依赖性,PD98059有效浓度为25μmol/L,在此有效浓度作用下有效时间为24h;Western blot法检测结果显示PD98059能够下调pERK1/2,即抑制ERK1/2磷酸化,从而使得ERK1/2信号传导途径失活;Transwell细胞侵袭实验结果显示PD98059在一定浓度范围内能抑制卵巢癌细胞SKOV3的侵袭与转移能力。结论:PD98059可以通过抑制ERK1/2信号途径,抑制人上皮性卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭转移。     

RGD-TAT-KDRsiRNA慢病毒载体构建及抗肿瘤活性

目的 构建精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(RGD)介导的穿膜肽(TAT)-血管内皮细胞生长因子受体(KDR) siRNA融合基因慢病毒载体,探讨其对人肺癌A549细胞的抑制效果.方法 设计合成编码RGD的2条寡核苷酸链,克隆到pGC/TAT-KDR siRNA载体的TAT下游,构建TAT-RGD-KDR siRNA融合基因载体;慢病毒包装并感染A549细胞;通过Western blot和real-time PCR检测A549细胞KDR基因表达水平;通过噻唑蓝法、双色法流式细胞仪和Transwell侵袭实验检测KDR基因沉默对A549细胞凋亡和侵袭力的影响.结果 测序和Blast比对证实重组载体中的RGD序列与设计一致;TAT-RGD-KDR siRNA融合基因慢病毒载体转染A540细胞KDRmRNA和蛋白表达水平分别为(22.7±3.9)％和(19.3±2.7)％,明显低于TAT-KDR siRNA融合基因慢病毒载体转染组,差异有统计学意义(P＜0.01);该载体具有较强的抑制A549细胞增殖、促进细胞凋亡和抑制细胞体外侵袭力的作用.结论 TAT-RGD-KDR siRNA融合基因慢病毒载体通过抑制细胞KDR mRNA和蛋白表达,抑制A549细胞增殖和侵袭、促进细胞凋亡.     

microRNA对A549细胞TGF-β1/ERK信号通路的调控

目的观察目标micro RNA对博来霉素诱导的A549细胞TGF-β1/ERK信号通路的调控作用。方法构建mi R-16、mi R-21、mi R-29a、mi R-155、mi R-200c、mi R-204、mi R-206过表达慢病毒载体,感染A549细胞后用博来霉素刺激,采用Real time-PCR和Western blot方法检测TGF-β1、ERK、AKT和p38表达情况。结果 Real time-PCR和Western blot检测结果显示,mi R-200c过表达慢病毒能够降低博来霉素刺激的A549细胞中TGF-β1、ERK、AKT和p38的表达(P0.05)。结论 mi R-200c能够降低A549细胞TGF-β1/ERK信号通路相关基因的表达,为进一步研究mi R-200c调控TGF-β1/ERK信号通路的分子机制奠定实验基础。     

VCP通过促进Huh7肝癌细胞P-IκB的降解激活NF-κB

目的研究含缬酪肽蛋白(VCP)对肝癌细胞磷酸化核因子kappa B抑制蛋白(P-IκB)和核因子kappa B(NF-κB)信号的影响。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增VCP基因,并克隆于真核表达载体p CDNA3.1/myc-His(-)A,测序正确后将其转染Huh7肝癌细胞,转染30 h后裂解细胞,免疫印迹试验(Western blot)检测核因子kappa B抑制蛋白(IκB)、P-IκB的含量,萤火虫荧光素酶报告基因检测NF-κB的活性;并对VCP RNA干扰,检测对IκB、P-IκB的含量和NF-κB的活性的影响。结果成功构建真核表达载体p CDNA3.1/myc-His(-)A-VCP,转染Huh7肝癌细胞后,IκB含量无明显变化,然而P-IκB含量明显降低,NF-κB信号活性显著增强;而对VCP RNA干扰后,NF-κB信号的活性受到明显抑制。结论 VCP通过促进Huh7肝癌细胞P-IκB的降解进而活化NF-κB,在肝癌的发生过程中发挥重要作用,是用于肝癌治疗的重要潜在靶点。     

NOB1基因shRNA慢病毒载体的构建及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的:构建针对NOB1基因的shRNA慢病毒载体,并在卵巢癌SKOV3细胞上鉴定其沉默效率,观察其对细胞增殖能力的影响。方法:将筛选的NOB1基因特异性siRNA靶点,合成短发卡结构shRNA,并与pLVTHM慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,包装shRNA慢病毒颗粒,随后将其感染卵巢癌SKOV3细胞;采用Real-timePCR和Westernblot的方法检测靶基因在mRNA和蛋白水平的沉默效率,MTT和克隆形成实验观察NOB1基因沉默对SKOV3细胞增殖的作用。结果:构建的shRNA慢病毒颗粒感染SKOV3细胞后,NOB1基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组下降73.5%,蛋白表达显著抑制,同时MTT实验显示细胞增殖能力显著降低,克隆形成实验表明细胞克隆形成能力明显减弱。结论:成功构建的NOB1基因shRNA慢病毒表达载体能够在卵巢癌SKOV3细胞上有效沉默靶基因,验证了NOB1基因具有影响卵巢癌细胞恶性增殖的能力。     

SDF-1和PI3K/Akt通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响研究

目的:探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号传导通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制.方法:将卵巢癌CAOV3细胞分为对照组(未给药),实验组1(100 ng/ml SDF-1),实验组2(50 μmol/L PI3K/Akt信号传导通路抑制剂LY294002)和实验组3(50 μmol/L LY294002,作用0.5h后加入100 ng/ml SDF-1).采用MTT法检测卵巢癌CAOV3细胞经不同药物处理后24、48和72 h的细胞增殖能力.采用Transwell体外细胞侵袭实验和Western Blot法检测经不同药物处理48h后卵巢癌CAOV3细胞的侵袭能力、Akt磷酸化程度和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平.结果:SDF-1可以明显促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05),LY294002可以抑制卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05);实验组3卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭能力与实验组2比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:SDF-1能够通过PI3K/Akt信号传导通路诱导MMP-9蛋白表达上调,增强卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力;应用LY294002阻断PI3 K/Akt信号传导通路可显著抑制SDF-1对人卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭的促进作用.     

ω-3多不饱和脂肪酸对结肠癌的影响

ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3PUFA）主要来源于鱼油，是细胞结构和功能重要组成成分，对细胞免疫应答调节和抑制发挥重要作用。ω-3PUFA可通过影响细胞膜脂质组成、调控脂类代谢水平及细胞内基因编码等多种途径，阻滞结肠癌细胞生长周期、抑制细胞增殖、促进细胞分化和诱导癌细胞凋亡，显著抑制结肠癌生长和转移，还可改善肿瘤恶病质患者体质，提高其存活率。     

半枝莲多糖抗肝癌作用的研究

目的:探讨半枝莲多糖抗肝癌作用,观察其对H22荷瘤小鼠的增效减毒作用及对肝癌细胞Hep G2增殖的抑制作用。方法:将肝癌H22荷瘤小鼠,24h后随机分组,连续给药8天,剥离肿瘤,计算抑瘤率,并检测半枝莲多糖对人肝癌细胞Hep G2增殖的影响。结果:半枝莲多糖与环磷酰胺联用对H22荷瘤小鼠有增效减毒的作用,其对肝癌细胞Hep G2增殖的抑制作用显著。结论:初步表明半枝莲多糖具有抗肝癌的作用。     

靶向p38反义寡核苷酸-脂质体复合物对人卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响

目的:探讨p38反义寡核苷酸(p38 anti-ODN)对卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响。方法:培养卵巢癌细胞株(CAOV3),以MTT比色法及克隆形成实验测定p38 anti-ODN抑制卵巢癌细胞株CAOV3增殖的作用。免疫印迹法测定p-p38、Cyclin D1及p21waf/cip1表达。免疫沉淀法纯化蛋白并p38试剂盒测定p38活性。结果:MTT实验及克隆分析法均显示p38 anti-ODN明显抑制CAOV3细胞增殖、p-p38表达、下调Cyclin D1表达,同时上调p21waf/cip1表达。结论:p38反义寡核苷酸可以抑制卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖,其机制与影响p38通路及下游CyclinD1、p21waf/cip1表达有关;干预p38通路是基因治疗卵巢癌的重要途径之一。     

DJ-1基因在肿瘤中的研究进展

恶性肿瘤的发生、发展与癌基因的异常扩增，抑癌基因的突变、缺失或低表达等密切相关。DJ-1基因是Nagakubo等研究小鼠胚胎成纤维细胞株NIH3T3细胞的H—Ras基因时发现的一种新丝裂原依赖性癌基因，对H—Ras基因有协同转化作用。     

2450MHz微波对人肝癌细胞p27蛋白表达的影响

为探讨其抑制肝癌细胞增殖的分子机理 ,观察了 2 45 0MHz微波对人肝癌细胞p2 7蛋白表达的影响 ,。将转染p2 7基因的人肝癌细胞按微波辐照强度不同分为 (未照射组 )作为对照组和照射组 (3个剂量组10、2 0和 30mW cm2 组 )于微波屏蔽室内照射 1h后 ,用四唑盐比色试验 (MTT)检测微波对肝癌细胞的抑制作用 ;同时用Weaternblot方法检测肝癌细胞中p2 7蛋白的表达。发现微波辐照 1h对肝癌细胞有明显的抑制作用 ;且可以上调肝癌细胞中p2 7蛋白的表达。以上结果提示微波可能通过上调p2 7蛋白的表达 ,抑制肝癌细胞的增殖     

PI3K/AKT/mTOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞中的相互作用机制

目的探讨磷脂酰肌醇3–激酶/蛋白激酶B/哺乳动物靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)两条信号通路对胃癌细胞功能的影响及相互作用机制。方法使用PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂AZD8055、MEK抑制剂AZD6244单独或联合作用于胃癌MGC-803细胞。应用CCK8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;蛋白印迹法(Western blot)检测通路关键蛋白的表达。结果联合使用LY294002(25μmol/L)与AZD6244(125μmol/L)、AZD8055(0.1μmol/L)与AZD6244(125μmol/L)能够显著抑制胃癌MGC-803细胞的增殖活性,且联用组比单独作用组具有更强的抑制效果(P 0.05);联用组诱导细胞凋亡数量和阻滞于G0/G1期的MGC-803细胞数量增多,高于单独作用组(P 0.05)。与LY294002、AZD8055和AZD6244单独作用相比,LY294002与AZD6244、AZD8055与AZD6244联用组MGC803细胞p-AKT、p-P70S6K和p-ERK1/2蛋白表达明显受到抑制(P 0.05)。结论 PI3K/AKT/mTOR和MAPK/ERK两条信号通路在胃癌MGC-803细胞的生长中具有协同调控作用,对于两条信号通路的多靶点抑制能够更加明显的抑制癌细胞生长。     

长链非编码RNA AGAP2-AS1在胶质瘤增殖过程中作用机制的研究

目的探究长链非编码RNA AGAP2-AS1在胶质瘤增殖过程中的作用机制。方法选取2018年12月-2019年11月期间的30例胶质瘤患者为观察组,同时期的30例脑外伤患者为对照组。比较两组的组织AGAP2-AS1 mRNA表达量、Ras及ERK1/2蛋白表达情况,并比较观察组中不同分级胶质瘤的AGAP2-AS1 mRNA表达量、Ras及ERK1/2蛋白表达情况,比较转染siRNA AGAP2-AS1与siRNANC的U87及U251细胞克隆数。结果观察组的RNA AGAP2-AS1 mRNA表达量、Ras及ERK1/2蛋白表达显著高于对照组,不同分级胶质瘤的RNA AGAP2-AS1 mRNA表达量、Ras及ERK1/2蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05),转染siRNA AGAP2-AS1的U87及U251细胞克隆数显著低于siRNA-NC,差异有统计学意义(P<0.05)。结论长链非编码RNA AGAP2-AS1可通过调控ERK/MAPK信号通路影响胶质瘤的增殖,下调AGAP2-AS1可显著影响胶质瘤细胞的克隆形成能力。