宫颈鳞癌人乳头状瘤病毒16/18E6感染与脆性组氨酸三联体表达状态的研究

目的探讨宫颈鳞癌中人乳头状瘤病毒(HPV)16/18 E6、脆性组氨酸三联体(FH IT)蛋白表达的情况以及两者的相关性,了解HPV16/18 E6、FH IT蛋白表达与宫颈癌临床病理参数的关系。方法应用免疫组织化学M axV ision法对40例宫颈鳞癌组织标本和10例正常宫颈组织,进行HPV16/18 E6、FH IT蛋白表达的检测。结果 HPV16/18 E6蛋白在宫颈癌组织中比在正常宫颈组织中表达明显增多,FH IT蛋白在宫颈癌组织中比在正常宫颈组织中表达明显减少,FH IT蛋白与HPV16/18 E6蛋白的表达存在相关关系。结论 FH IT蛋白缺失与宫颈鳞癌发生有关,它的缺失可能作为HPV16/18阳性高危人群的筛选指标。     

实时荧光定量聚合酶链反应检测宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒16/18型感染

子宫颈病变是女性最常见的疾患之一,其中最严重的是宫颈癌,而人类乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的发生有密切关系[1]。HPV的亚型,现在发现已超过100种,其中感染生殖道的HPV亚型有近30种,可分为低危型和高危型[2,3]。低危型主要是HPV611型,与尖锐湿疣有关;高危型主要是HPV1618型,与宫颈癌发生相关。有文献报道宫颈鳞癌HPV感染率可高达93%～100%[3],因此,检测子宫颈病变是否感染HPV高危型成为防治宫颈癌的重要一环。我们采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)方法[4],检测宫颈涂片后剩余的细胞内HPV1618型感…     

HPV16/18、P16蛋白在头颈部鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨头颈部鳞状细胞癌中高危型HPV感染、P16蛋白表达及临床病理意义。方法采用组织原位杂交及免疫组化Envision技术检测头颈部鳞状细胞癌中高危型HPV16/18及P16蛋白的表达,并进行临床病理分析。结果 (1)HPV16/18在口腔癌中的表达率为80%(8/10)、下咽癌78%(11/14)、鼻咽癌0(0/7)、唇癌33.3%(1/3)、头颈部皮肤鳞癌33.3%(2/6),口腔癌、下咽癌中HPV16/18表达率显著高于鼻咽癌、唇癌及头颈部皮肤鳞癌(P=0.001<0.05);(2)P16蛋白在口腔癌中的表达率为70%(7/10)、下咽癌71.4%(10/14)、鼻咽癌0(0/7)、唇癌33.3%(1/3)、头颈部皮肤鳞癌33.3%(2/6)。口腔癌、下咽癌中P16表达率显著高于鼻咽癌、唇癌及皮肤鳞癌,鼻咽癌为阴性表达,差异具有统计学意义(P=0.001<0.05);(3)临床病理分析:组织学分级中HPV16/18在高分化、中分化及低分化鳞状细胞癌的阳性率分别为25%(2/8)、76.1%(16/21)、36.3%(4/11),P16在高分化、中分化及低分化鳞状细胞癌的阳性率分别为87.5%(7/8)、42.9%(9/21)、36.3%(4/11),差异具有统计学意义(P均<0.05);二者在年龄、性别中表达差异无显著性(P均>0.05)。结论 (1)头颈鳞状细胞癌中,HPV16/18、P16与肿瘤发生部位及肿瘤分化程度差异有显著性,分化程度越低,HPV16/18及P16蛋白表达越低;(2)HPV16/18的感染与P16蛋白的表达具有一致性。     

人乳头瘤病毒分型检测应用于宫颈癌筛查研究进展

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一,发病率仅次于乳腺癌,在发展中国家,宫颈癌发病率位于女性恶性肿瘤之首.据调查,全世界每年约有50万人罹患宫颈癌,30万患者死亡,其中80%发生在发展中国家[1];中国每年新发病例约10万,占世界宫颈癌新发病例的四分之一,近年来有年轻化趋势[2].     

宫颈癌患者石蜡组织中人乳头瘤病毒基因分型的研究

目的了解宫颈癌患者人乳头瘤病毒的感染率及基因型分布情况,探讨人乳头瘤病毒基因型与宫颈癌类型的相关性。方法收集2007年6月至2009年12月在本院住院的宫颈癌患者的石蜡包埋组织标本共163例,应用基因芯片技术检测23种HPV基因型,统计HPV各基因型的感染率,比较HPV及其基因型分布与肿癌类型的关系。结果 163例宫颈癌组织中HPV的阳性率为94.48%,其中宫颈鳞癌阳性率为97.73%,明显高于宫颈腺癌的79.30%。单一感染127例,占HPV感染的82.50%;双重感染27例,占1 7.50%,主要为HPV16、18感染;其他HPV基因型的双重感染较为少见。163例宫颈癌组织中共检测到16种HPV基因型,分别为HPV6、11、16、18、31、33、35、39、45、52、56、58、59、66、68和73,HPV16为主要致病基因型,检出率达60.80%;其次是HPV18,检出率为18.80%。结论宫颈鳞癌中HPV感染率明显高于宫颈腺癌,HPV基因型分布与肿癌类型有关;宫颈癌中HPV基因型多样,且均为高危型感染,以HPV16、18型最为常见,且存在双重感染。     

胃癌患者人乳头瘤病毒感染状况的检测

人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）属小DNA病毒,与许多部位鳞状上皮细胞良性及恶性肿瘤性病变有关,其中HPV感染与宫颈癌的相关性已得到公认。近年来研究显示,胃癌的发生与幽门螺杆菌和爱泼斯坦巴尔病毒（Epstein—Barr virus,EBV）等生物因素感染有关,     

高危型人乳头状瘤病毒检测在宫颈癌筛查中的价值

目的评价人乳头状瘤病毒（HPV）DNA检测在宫颈癌筛查中的价值。方法采用第二代杂交捕获（HC-Ⅱ）技术和液基细胞学测试（LCT）2种方法 ,对1026例在妇科病中心就诊的受检者进行同步盲法检测,同时进行阴道镜检查。以宫颈活检组织病理学检查结果为诊断标准。评价该方案在宫颈癌筛查中的应用价值。结果病理检查结果显示,宫颈上皮内瘤变（CIN）-Ⅰ级152例,CIN-Ⅱ级108例,CIN-Ⅲ级109例,宫颈浸润癌28例。筛查高危型HPV感染366例,阳性率35.70%,在不同宫颈病变中的阳性率分别是：宫颈癌92.90%（26/28）,CIN-Ⅲ90.0%（99/109）,CIN-Ⅱ88.90%（96/108）,CIN-Ⅰ87.50%（133/152）。高危HPV对宫颈高级别病变的敏感性、特异性、阳性预测值,阴性预测值分别是98.60%、86.10%、14.80%和99.80%;HPV与LCT联合检测（平行试验）的以上各指标分别是100.00%、80.90%、12.10%和100.00%。结论高危型人乳头状瘤病毒检测在宫颈癌前病变的筛查中有较高的敏感度和阴性预测值,联合LCT检测是目前宫颈癌筛查具有诊断价值的方法 。     

宫颈病变患者高危型人乳头状瘤病毒感染的基因型分析

目的 了解高危型人乳头状瘤病毒(HPV)在不同宫颈病变患者中的感染状况及基因型分布.方法 采用凯普导流杂交技术,对452例宫颈病变患者下生殖道标本进行21种HPV亚型检测.结果 患者标本除43、44亚型外,其他19种HPV亚型均被检出,总阳性率为63.7%(288/452).单一亚型阳性率为74.0%(213/288),二重亚型为20.1%(58/288),三重亚型为4.5%(13/288),三重以上亚型为1.4%(4/288).在452例宫颈炎、宫颈湿疣、宫颈上皮瘤样变(CIN)和宫颈癌患者中,HPV感染率分别为26.8%(40/149)、65.6%(42/64)、84.5%(175/207)和96.9%(31/32),差异有统计学意义(P<0.01).HPV阳性宫颈病变患者主要高危基因型感染率依次为HPV 16(34.4%)、58(15.3%)、52(11.1%)、18(10.4%)和33(5.9%)型.结论 在本地区高危型HPV感染的主要亚型为16、58、52、18、33.常见亚型符合亚洲和中国人群的分布规律,又有一定的区域性.高危型HPV持续感染及多重感染是导致宫颈癌变的主要原因之一,HPV-16亚型是宫颈癌的最大威胁.     

人乳头瘤病毒E6／E7mRNA检测在宫颈病变筛查中的应用价值

目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA 检测在宫颈病变筛查中的应用价值。方法2012年6月至2013年4月在余姚市人民医院因宫颈炎症、阴道异常出血或排液的720例门诊患者行宫颈 TCT 和 HPV DNA 检测,对 TCT 结果≥ASC-US 或（和）高危 HPV DNA 阳性者行宫颈 HPV E6/E7mRNA 检测和组织病理学检查。以病理学结果为标准,与 HPV DNA 检测相比较,评价 HPV E6/E7 mRNA 检测对 CIN2＋诊断价值,并用受试者工作特征（ROC）曲线评价其准确性。结果在 CIN 和宫颈浸润癌中,HPV E6/E7 mRNA 总体阳性率为78．7％,低于 HPV DNA 总体阳性率（92．6％）,差异有统计学意义（P ＜0．001）。HPV E6/E7 mRNA 检测诊断 CIN2＋的灵敏度为83．0％,低于 HPV DNA（94．5％）,差异有统计学意义（P ＜0．01）;特异度为51．1％,高于 HPV DNA（22．8％）,差异有统计学意义（P ＜0．001）。 HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA 对诊断 CIN2＋的 ROC 曲线下面积分别为0．670、0.587, HPV E6/E7 mRNA 检测对 CIN2＋的诊断的准确性高于 HPV DNA,差异有统计学意义（P ＜0．01）。结论 HPV E6/E7 mRNA 检测诊断 CIN2＋特异度和准确性高于 HPV DNA,对宫颈病变的筛查有一定应用价值。     

人乳头瘤病毒6/11、16/18型的检测及临床意义

目的 用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测低危型人乳头瘤病毒(HPV)(如6/11)和高危型HPV(如16/18),探讨其在宫颈癌防治方面的意义.方法 采用实时荧光定量PCR对2 162例不同年龄组患者进行HPV-DNA(6/11、16/18)检测.结果 低危型HPV的感染率为11.78%,高危型 HPV的感染率为11.40%,二者的感染率差别不大.结论 HPV为泌尿生殖道感染的重要病原,对妇女进行高危及低危型HPV-DNA检测对早期诊断、治疗具有重要的指导意义,高危型HPV在宫颈癌早期病变的筛查中具有风险提示作用.     

Affinity-based collection of amplified viral DNA: application to the detection of human immunodeficiency virus type 1, human cytomegalovirus and human papillomavirus type 16

We have devised a sensitive and convenient hybridization technique by combining the polymerase chain reaction (PCR) with affinity-based hybrid collection. In this method 5'-biotinylated primers are used to introduce biotin residues into the DNA fragments during the amplification. The amplified DNA fragments are detected by liquid hybridization using a 32P- or 35S-labelled oligonucleotide as probe. For measurement the hybrids are collected on polystyrene microparticles or onto microtitre wells taking advantage of the biotinavidin interaction. The method is highly sensitive allowing the detection of 30 molecules of DNA. It involves few and simple operations, and is thus suitable for routine diagnostics. The applicability of the method to the detection of HIV-1 DNA from blood, HCMV DNA from urine and HPV-16 DNA from cervical scrapes was evaluated.     

Detection of high-risk human papillomavirus type 16 and 18 using isothermal helicase-dependent amplification

Persistent infection with human papillomavirus (HPV) induces cervical cancer. Here, we describe a sensitive, specific, and rapid assay for high-risk HPV16 and 18 detection by isothermal helicase-dependent amplification. This method can be used as cost-effective diagnostic method for low-income countries, where highest incidences worldwide of cervical cancer are registered.     

Targeting human papillomavirus type 16 E7 to the endosomal/lysosomal compartment enhances the antitumor immunity of DNA vaccines against murine human papillomavirus type 16 E7-expressing tumors

DNA vaccination is an attractive approach for tumor immunotherapy because of its stability and simplicity of delivery. Advances demonstrate that helper T cell responses play a critical role in initiating immune responses. The aim of the current study is to test whether targeting HPV-16 E7 to the endosomal/lysosomal compartment can enhance the potency of DNA vaccines. We linked the lysosome-associated membrane protein 1 (LAMP-1) to HPV-E7 to construct a chimeric DNA, Sig/E7/LAMP-1 DNA. For in vivo tumor prevention experiments, mice were vaccinated with E7 DNA or Sig/E7/LAMP-1 DNA via gene gun, followed by tumor challenge. For in vivo tumor regression experiments, mice were first challenged with tumor cells and then vaccinated with E7-DNA or Sig/E7/LAMP-1 DNA. Intracellular cytokine staining with flow cytometry analysis, cytotoxic T lymphocyte (CTL) assays, enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA), and enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assays were used for in vitro E7-specific immunological studies. In both tumor prevention and tumor regression assays, Sig/E7/LAMP-1 DNA generated greater antitumor immunity than did wild-type E7 DNA. In addition, mice vaccinated with Sig/E7/LAMP-1 DNA had greater numbers of E7-specific CD4+ helper T cells, higher E7-specific CTL activity, and greater numbers of CD8+ T cell precursors than did mice vaccinated with Sig/E7 or wild-type E7 DNA. Sig/E7 generated a stronger E7-specific antibody response than did Sig/E7/LAMP-1 or wild-type E7 DNA. Our results indicate that linkage of the antigen gene to an endosomal/lysosomal targeting signal may greatly enhance the potency of DNA vaccines.     

高危型人乳头状瘤病毒16,18型DNA检测在宫颈病变筛查中的应用价值

目的评价高危型人乳头状瘤病毒16,18型(HPV16,18)DNA检测在宫颈病变筛查中的价值。方法收集209例病理组织学结果为癌及癌前病变[宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈浸润癌]和296例病理组织学为良性病变(炎症、息肉等),并同时做了液基细胞学检查、HPV16,18 DNA检测的病例,统计比较HPV16,18 DNA检测与液基细胞学检查对癌及癌前病变的敏感性、特异性及阴性预测值;比较不同病变程度分类患者中HPV16,18的检出率。结果 209例癌及癌前病变患者中HPV16,18阳性158例,液基细胞学阳性[低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、不除外高级别鳞状上皮细胞(ASC-H)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)、鳞状细胞癌]128例。296例宫颈良性病变患者HPV16,18阳性43例,液基细胞学阳性2例。HPV16,18 DNA检测对癌及癌前病变的敏感性为75.6%,液基细胞学为61.2%,两者比较差异有统计学意义(χ2=12.69,P<0.01),HPV16,18 DNA对癌及癌前病变的检出率明显高于液基细胞学。HPV16,18 DNA检测特异性为85.5%,阴性预测值为83.2%;液基细胞学特异性为99.3%,阴性预测值为78.4%;CINⅡ病变的HPV阳性检出率明显高于CINⅠ(χ2=6.69,P<0.05)。结论高危型HPV16,18感染与宫颈癌及宫颈癌前病变的发生、发展密切相关,HPV16,18 DNA检测对癌前病变和宫颈癌的敏感性高于液基细胞学、特异性低于液基细胞学,对宫颈炎、息肉等良性病变的阴性预测值高于液基细胞学,检测HPV16,18 DNA有着重要的临床价值。     

Facile and direct detection of human papillomavirus (HPV) DNA in cells using loop-mediated isothermal amplification (LAMP)

Human papillomavirus (HPV)-mediated cancers, particularly cervical and oropharyngeal cancer, lead to hundreds of thousands of deaths worldwide each year. Simple, straightforward, and cost-effective detection of HPV DNA from patients with these malignancies or at risk for developing cancer can improve outcomes for patients, serving as a tool for early detection, monitoring treatment response, and assessment of cancer recurrence. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) is a simple and robust method for the detection and amplification of DNA in a single tube, utilizing the Bst strand-displacing DNA polymerase. We developed a workflow utilizing LAMP for the visual detection of HPV DNA in oral rinses. We demonstrate that LAMP is able to easily discriminate between two of the high-risk HPV subtypes, HPV16 and HPV18. We then utilized LAMP to visually detect HPV DNA directly from cells in oral rinses, mimicking a clinical inspired scenario of detecting HPV DNA in clinical samples. Our results suggest that LAMP is a robust, colorimetric assay method for the detection of HPV DNA in complex cellular samples, and further development is warranted to bring LAMP into the clinic.     

人乳头瘤病毒16和18型核酸检测用质控品制备及其应用

目的制备可模拟真实临床标本的HPV-16和HPV-18核酸检测用质控品,并用于上海地区临床实验室的室间质量评价。方法分别选择整合有HPV-16和HPV-18 L1基因的宫颈癌细胞系(Siha和Hela)进行培养,收集细胞后用HPV国际标准品定值并分装,对其均匀性和稳定性进行评价,然后将样本盘发送至参评实验室,对回报结果进行分析评价。结果均匀性评价结果显示质控品间均匀性良好,稳定性评价结果表明质控品检测结果随时间延长无明显趋势变化。参评实验室对高浓度样本的检测符合率较高,低浓度样本的检测符合率较低。对于不分型项目,26%参评实验室由于上报假阴性结果导致出错。对于分型项目,不同检测方法的结果间没有显著差异,样本检测出错主要是因为错检或漏检某一亚型所致。结论制备的核酸检测用质控品的均匀性和稳定性良好,可有效用于临床实验室室间质量评价。质评结果显示上海地区参评实验室HPV核酸检测质量整体较好,个别实验室检测能力尚需提高。     

PET-CT和SPECT-CT联合在评估颈部淋巴结转移阴性喉鳞癌患者前哨淋巴结微转移中的临床价值

目的评价PET-CT与SPECT-CT联合探测在颈部淋巴结转移阴性(cN0期)喉鳞癌患者颈部前哨淋巴结(SLN)转移中的临床应用价值。方法选取15例cN0期喉鳞癌患者,术前行18F-FDG PET-CT显像疑似淋巴结,同时行99锝m-硫胶体(99Tcm-SC)SPECT-CT显影SLN,二者结合对微转移SLN进行定位及定性,术中利用手持式γ探测仪探测确定SLN,将手术切除的SLN及非SLN行术中快速病理检查判断转移。结果 15例喉鳞癌患者术前经PET-CT显像疑似淋巴结及SPECT-CT显影SLN,2例均未显影。其中有13例PET-CT显像13枚疑似淋巴结,SPECT-CT显影23枚SLN,13枚疑似淋巴结均经CT定位与相应SLN重合。术中γ探测仪探出SLN 22枚,符合率为92.3%。手术切除SLN共计23枚,非SLN共计44枚,6例患者(40%)经病理检查证实淋巴结转移,其中SLN的转移度为21.7%(5/23),高于非SLN转移度2.3%(1/44)(P=0.008)。6例患者转移患者显像淋巴结标准化摄取比值(SUV值)均值为3.51±1.76,高于9例无转移患者显像淋巴结的SUV均值1.58±0.64(P=0.010)。SLN检出率为86.7%。SLN检测的灵敏度为83.3%、准确率为86.7%、假阴性率为16.7%。结论术前联合PET-CT与SPECT-CT并参考SUV值对cN0期喉鳞癌患者微转移SLN定性及定位,有助于手术方案选择的合理性,术中结合γ仪探测SLN可提高颈清范围的准确性。