靶肌肉注射环磷酸腺苷对周围神经再生的作用

目的:观察靶肌肉注射外源性环磷酸腺苷对大鼠坐骨神经再生的治疗作用。方法:实验于2004-10/2005-03在华中科技大学同济医学院协和医院骨科实验室完成。选择健康雄性Wistar大鼠48只,制备大鼠左侧坐骨神经挤压伤模型。实验动物随机数字表法分为3组,每组16只,高剂量组:腓肠肌内注射0.2mL环磷酸腺苷1mg。低剂量组:腓肠肌内注射注射0.2mL环磷酸腺苷0.1mg。对照组:腓肠肌内注射0.2mL生理盐水。术后每日给药1次,共4周。术后4,8周时检测左侧小腿三头肌湿质量。术后8周时检测坐骨神经运动神经传导速度、小腿三头肌复合肌肉动作电位波幅、潜伏期及形态学观察神经再生情况。结果:纳入动物48只,均进入结果分析。①术后4,8周时高剂量组和低剂量组大鼠左小腿三头肌湿质量显著高于对照组[术后4周分别为(1.70±0.58),(1.26±0.71),(0.91±0.24)g;术后8周分别为(2.26±0.62),(1.65±0.16),(1.24±0.37)g],且高剂量组明显高于低剂量组,差异有显著性意义(P<0.01)。②术后8周高剂量组和低剂量组坐骨神经运动神经传导速度、小腿三头肌复合肌肉动作电位波幅、潜伏期及有髓神经纤维计数、髓鞘厚度、轴突直径均高于对照组[运动神经传导速度分别为(33.54±2.65),(26.96±4.12),(19.83±2.74)m/s;复合肌肉动作电位波幅分别为(2.435±1.257),(1.867±0.566),(1.218±0.647)mV;复合肌肉动作电位潜伏期分别为(2.946±0.658),(4.537±0.932),(5.825±1.043)ms;有髓神经纤维计数分别为(1693±201),(1357±185),(876±124)个;髓鞘厚度分别为(1.149±0.138),(0.924±0.086),(0.633±0.105)μm;轴突直径分别为(1.045±0.150),(0.794±0.095),(0.512±0.138)μm],且高剂量组显著高于低剂量组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:靶肌肉注射环磷酸腺苷可促进周围神再生,高剂量环磷酸腺苷对神经再生具有更好的促进作用。     

灯盏花素对缺血再灌注鼠脑海马三磷酸腺苷含量及其活性变化的干预

背景灯盏花素作为蛋白激酶C的抑制剂,具有降低脑缺血再灌注引起的神经细胞死亡作用.目的探讨灯盏花素对缺血再灌注沙土鼠脑海马中三磷酸腺苷的含量,以及对三磷酸腺苷酶活性的影响.设计随机对照区组设计.单位苏州大学附属四院麻醉科,无锡市第四人民医院麻醉科,徐州医学院附属医院麻醉科.材料实验于2002-03/2003-05在江苏省麻醉学重点实验室完成.选取蒙古沙土鼠90只,随机分为9组假手术组、脑缺血组、脑缺血再灌注1 h组、脑缺血再灌注12 h组、脑缺血再灌注24 h组、灯盏花素+脑缺血组、灯盏花素+脑缺血再灌注1 h组、灯盏花素+脑缺血再灌注12 h组、灯盏花素+脑缺血再灌注24 h组,10只/组.灯盏花素注射液(云南省生物制药厂生产,批号990103,每毫升含黄酮4.5 mg).方法除假手术组外,其余各组均建立缺血再灌注模型.灯盏花素各组在缺血前30 min腹腔注射灯盏花素10 mL/kg,其余组同期注射等量生理盐水.每组抽取6只行三磷酸腺苷含量及三磷酸腺苷酶活性测定,其余4只进行海马CA1区神经细胞病理学检查.在缺血期间监测鼓膜温度(反映脑温),并维持鼓膜温度于(37±0.2)℃,以避免温度变化对实验结果的影响.组间比较采用单因素方差分析.主要观察指标①各组实验鼠脑海马三磷酸腺苷含量和三磷酸腺苷酶活性的变化.②各组实验鼠脑海马CA1区神经细胞病理学变化.结果实验纳入蒙古沙土鼠90只,全部进入结果分析.①各组海马三磷酸腺苷含量和三磷酸腺苷酶活性的变化与脑缺血再灌注24 h组比较,灯盏花素1,12,24 h组三磷酸腺苷含量均明显提高[(0.25±0.08),(0.81±0.12),(0.58±0.07),(0.43±0.09)mmol/kg,P＜0.01],Na+-K+-ATP酶活性均明显上升[(1.23±0.43),(5.09±0.36),(3.67±0.37),(2.71±0.42)mmol/(g·h),P＜0.01],Ca2+-ATP酶活性亦明显上升[(0.58±0.35),(2.14±0.41),(1.64±0.39),(1.39±0.40)mmol/(g·h),P＜0.01].②各组海马CA1区神经细胞病理学变化脑缺血后7 d,低倍镜下见脑缺血再灌注1,12,24 h组锥体细胞带变薄、稀疏,甚至消失;而灯盏花素各组锥体细胞带明显比脑缺血再灌注各组宽厚.高倍镜下见脑缺血再灌注1,12,24 h组锥体细胞大部凝固性坏死,核膜完整、核仁清楚的存活锥体细胞数较少;而灯盏花素各组存活锥体细胞明显多于脑缺血再灌注1,12,24 h组.结论灯盏花素能够明显增加脑缺血再灌注后三磷酸腺苷含量,且再灌注初期升高尤为显著,同时三磷酸腺苷酶的活性亦呈相应提高趋势,具有减轻脑缺血再灌注损伤、保护神经细胞的作用.     

家兔心房肌细胞环-磷酸腺苷动态变化的实时评价

目的:探索实时评价心房肌细胞内环-磷酸腺苷动态变化的方法,为细胞内第二信使代谢水平分析提供可靠的实验数据。方法:实验于2004-04/2005-12在吉林省延边大学基础医学院生理学与病理生理学教研部完成。①采用大耳白家兔32只,建立跳动心房灌流模型,跳动心房稳定60min后,4℃下每2min收集灌流液样本。②采用固定心房跳动频率(1.3Hz)的方法,每2min收集1个灌流液样本,12min为1个循环。在1个对照循环之后,处理垂体腺苷酸环化酶激活肽(100nmol/L)或在非选择性磷酸酯酶抑制剂(1.0mmol/L)存在下再处理垂体腺苷酸环化酶激活肽1个循环,观察心房组织环-磷酸腺苷含量与逸出量的关系。③1个循环对照之后,给予30nmol/L的垂体腺苷酸环化酶激活肽或不同浓度的垂体腺苷酸环化酶激活肽(1,10,100nmol/L,每种浓度之间穿插2个循环的恢复期),实时观察心房肌细胞环-磷酸腺苷动态变化的特点。结果:①垂体腺苷酸环化酶激活肽对心房组织生成和逸出环-磷酸腺苷的影响:用垂体腺苷酸环化酶激活肽处理12min后,环-磷酸腺苷含量在组织和灌流液中分别增加到(42.18±11.17)nmol/g和(204.17±44.50)fkat/g,与对照值相比差异明显(P<0.05)。当给与非选择性磷酸酯酶抑制剂 垂体腺苷酸环化酶激活肽后,环-磷酸腺苷含量在组织和灌流液中分别增加到(149.90±13.87)nmol/g和(747.00±65.83)fkat/g(P<0.01)。且灌流液环-磷酸腺苷逸出量与组织环-磷酸腺苷含量之间存在线性关系(Y=0.2918X-0.118,R2=0.8809;P<0.01)。②垂体腺苷酸环化酶激活肽促进心房环-磷酸腺苷逸出量的情况:随着垂体腺苷酸环化酶激活肽浓度的增加,环-磷酸腺苷逸出量也随之增多,10,100nmol/L垂体腺苷酸环化酶激活肽的逸出峰值分别为(247.83±50.83),(254.00±53.50)fkat/g,均显著高于对照值和1nmol/L垂体腺苷酸环化酶激活肽[(66.00±7.50),(75.50±7.50)fkat/g;P<0.01],呈时间、剂量依赖性。结论:跳动心房灌流模型中环-磷酸腺苷逸出量是一项能够反映该组织生成环-磷酸腺苷变化的指标,实时测定心房灌流液中环-磷酸腺苷逸出量能够实时评价心房肌细胞内环-磷酸腺苷的生成变化。     

肝脏缺血预处理过程中蛋白激酶C活性的变化

目的:观察在肝脏缺血预处理过程中蛋白激酶C的活性改变及细胞内信号转导机制。方法:实验于2004-03/2005-03在南方医科大学珠江医院中心实验室完成。实验分组:36只大鼠随机分成6组,每组6只。①假手术组。②缺血再灌注组。③缺血预处理组。④缺血再灌注 豆蔻酸佛波酰乙脂组。⑤缺血预处理 白屈菜季铵碱组。⑥缺血预处理 PD98059组。实验干预:①假手术组仅分离肝十二指肠韧带,不阻断肝门,不进行其他干预处理。②缺血再灌注组在第一肝门用小血管夹阻断尾状叶及左肝叶血流40min松开血管夹肝脏再灌注3h,再灌注开始后关腹。③缺血预处理组先行3个循环的缺血预处理,阻断第一肝门10min,开放再灌注10min为1个循环,随后操作同缺血再灌注组。④缺血再灌注 豆蔻酸佛波酰乙脂组:按4μg/kg共0.5mL蛋白激酶C激动剂豆蔻酸佛波酰乙脂溶液,经静脉通道缓慢推注,推注10min,推注后等待10min,余处理同缺血再灌注组。⑤缺血预处理 白屈菜季铵碱组:按5mg/kg共0.5mL蛋白激酶C抑制剂白屈菜季铵碱溶液,同样用10min经静脉通道缓慢推注,推注后等待10min,其余处理同缺血预处理组。⑥缺血预处理 PD98059组:按5mg/kg共0.5mL丝裂原激活的蛋白激酶抑制剂PD98058溶液,同上速度缓慢静脉推注,推注后等待10min,余处理同缺血预处理组。实验评估:①在ECHNICONRA-1000全自动生化分析仪上采用速率法检测血清谷草转氨酶和血清谷丙转氨酶活性。②按蛋白激酶C活性测定试剂盒操作步骤检测肝组织蛋白激酶C活力。③Westernblot免疫印迹法检测肝组织磷酸P44/42MAPKs活性。结果:36只大鼠均进入结果分析,中途无脱落和死亡。①血清谷草转氨酶和血清谷丙转氨酶活性:缺血预处理组低于缺血再灌注组(P<0.01)。缺血预处理 白屈菜季铵碱组、缺血预处理 PD98059组显著高于缺血预处理组(P<0.01)。缺血再灌注 豆蔻酸佛波酰乙脂组显著低于缺血再灌注组(P<0.01)。②蛋白激酶C活力:缺血预处理组高于缺血再灌注组[(1877.2±81.0),(713.1±37.0)pkat/g,P<0.01];缺血再灌注 豆蔻酸佛波酰乙脂组亦显著高于缺血再灌注组[(2758.4±454.3),(713.1±37.0)pkat/g,P<0.01];缺血预处理 白屈菜季铵碱组明显低于缺血预处理组[(567.9±46.2),(1877.2±81.0)pkat/g,P<0.01]。③磷酸P44/42MAPKs活性:与假手术组比较,其在缺血再灌注组的表达量轻度升高;缺血预处理组较缺血再灌注组升高显著;缺血预处理 白屈菜季铵碱组较缺血预处理组明显降低,缺血预处理 PD98059组表达量下降更为显著;缺血再灌注 豆蔻酸佛波酰乙脂组表达量较缺血再灌注组明显升高。结论:缺血预处理保护效应中,蛋白激酶C对P44/42MAPKs信号通路的激活是细胞保护效应的一个重要环节。     

腺苷预处理对缺血/再灌注心肌细胞凋亡和凋亡蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的 研究腺苷预处理对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡和凋亡蛋白Bcl-2/Bax的影响.方法 制备缺血/再灌注损伤(I/R)和腺苷预处理的大鼠模型,采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率和凋亡蛋白Bcl-2和Bax.结果 ①缺血/再灌注组和腺苷组心肌细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.01),而腺苷组凋亡率显著低于缺血/再灌注组(P<0.01).②缺血/再灌注组抗凋亡蛋白Bcl-2表达与对照组比较无明显差别,而腺苷组Bcl-2显著高于缺血/再灌注组和对照组(P<0.01);缺血/再灌注组和腺苷组促凋亡蛋白Bax表达显著高于对照组(P<0.01),而腺苷组Bax低于缺血/再灌注组(P<0.01);缺血/再灌注组和腺苷组Bcl-2/Bax比值显著低于对照组(P<0.01),而腺苷组Bcl-2/Bax比值显著高于缺血/再灌注组(P<0.01).结论 腺苷预处理明显抑制大鼠缺血/再灌注后心肌细胞的凋亡,并使Bcl-2/Bax比值增加.     

环磷酸腺苷复方制剂对白血病化疗患者肠内营养干预研究

目的观察添加环磷酸腺苷复方制剂的肠内营养支持对白血病化疗患者的干预效果,探讨适合白血病化疗患者的肠内营养支持方案。方法选择在山西医科大学第二医院血液科确诊的白血病化疗患者60例,随机分为干预组30例,对照组30例。在常规临床治疗的基础上,分别给予个性化营养指导及肠内营养食谱,干预组患者额外给予口服环磷酸腺苷复方制剂(环磷酸腺苷≥12 mg/100 ml,20 ml/瓶),1瓶/次,2次/d,连续服用4周。观察试验前后两组患者的(1)营养指标:血清总蛋白、前白蛋白及白蛋白;(2)免疫指标:T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+);(3)血液指标:血红蛋白、红细胞、血小板计数。通过指标的变化进而进行营养干预效果评价。结果干预组的营养指标及血液指标于干预的第2周末及第4周末较干预前均明显改善(P<0.05),尤其血小板数量的升高更为明显。与对照组相比,干预组的营养指标及血液指标在干预的第2周末及第4周末显著升高(P<0.05),而免疫指标的改善仅在干预的第4周末差异具有统计学意义(P<0.05)。结论添加环磷酸腺苷复方制剂的肠内营养干预模式有助于改善白血病化疗患者的营养状况,减轻化疗的毒副反应,纠正贫血并维持机体免疫功能的相对稳定。     

电针足阳明经穴后家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度、三磷酸肌醇及环磷酸腺苷含量的变化

目的:通过测定胃窦平滑肌细胞内信使物质钙离子浓度及三磷酸肌醇、环磷酸腺苷含量的变化,探讨针刺足阳明经穴对胃窦平滑肌细胞内信息转导通路的影响。方法:实验于2003-06/2004-05在湖南中医学院针灸基础实验室完成。选用清洁级健康成年新西兰大耳白兔55只,随机分为5组,每组11只。①生理盐水组耳缘静脉滴注9g/L氯化钠溶液。②阿托品组耳缘静脉滴注0.25mg/L阿托品。③电针足阳明经穴组、电针足少阳经穴组和电针足太阳经穴组均在滴注阿托品总量的一半时,分别电针双侧足阳明经穴、足少阳经穴、足太阳经穴30min。各组分别处理后,分离胃窦平滑肌细胞,制成活的单个平滑肌细胞悬液;测定胞内钙离子浓度采用荧光法;测定胞内三磷酸肌醇含量应用蛋白质竞争结合分析法;测定胞内环磷酸腺苷含量采用放射免疫计数法。结果:纳入家兔55只,每组11只。最终进入结果分析动物数为:钙离子浓度分析55只,每组11只,无脱失;三磷酸肌醇及环磷酸腺苷含量分析数均为45只,均脱失10只。①各组家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度的比较:阿托品组、足少阳经穴组与足太阳经穴组钙离子浓度明显低于足阳明经穴组[(172.97±60.38),(203.57±72.20),(183.52±76.81),(321.22±55.36)nmol/L(F=9.37,P<0.01)]。②各组家兔胃窦平滑肌细胞内三磷酸肌醇含量的比较:阿托品组、足少阳经穴组、足太阳经穴组三磷酸肌醇含量均明显低于足阳明经穴组[(21.87±10.16),(21.08±10.97),(23.81±12.06),(39.00±12.97)pmol/106(F=3.61,P<0.01)]。③各组家兔胃窦平滑肌细胞内环磷酸腺苷含量的比较:各组差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:针刺足阳明经穴可使家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子、三磷酸肌醇含量明显增高。脑肠肽是足阳明经与胃相关的重要物质基础,参与调节胃平滑肌运动的脑肠肽受体后信号转导通路可能与胞内钙离子、三磷酸肌醇等信使物质有关。     

环磷酸腺苷葡甲胺及参麦注射液佐治心肌梗死后心力衰竭

目的:观察环磷酸腺苷葡甲胺与参麦注射液对心肌梗死后心力衰竭的辅助治疗价值。方法:选择96例心肌梗死后心力衰竭患者,随机分为治疗组和对照组,每组各48例。两组均给予常规强心剂、利尿剂及卡托普利治疗,治疗组在此基础上加用环磷酸腺苷葡甲胺120 mg加5%葡萄糖注射液150 ml静脉滴注,每日1次,参麦注射液60 ml加10%葡萄糖注射液150 ml静脉滴注,每日1次,10天为一疗程,共应用一疗程。观察两组治疗前后症状体征变化及半年内心力衰竭复发率。结果:治疗组总有效率为95.83%,对照组为70.83%,两组比较差异有非常显著性的意义(P<0.01),治疗组治疗前后以及与对照组比较,心率、左室内径、射血分数改善程度差异均有显著性意义(P<0.01,P<0.05);肺底啰音消失时间较对照组显著缩短,差异具有非常显著性的意义(P<0.01);治疗组半年内复发率显著低于对照组,差异具有非常显著性的意义(P<0.01)。两组均未发现药物不良反应。结论:环磷酸腺苷葡甲胺与参麦注射液对心肌梗死后心力衰竭有良好的辅助治疗效果,疗效快速显著,可减少心力衰竭复发,安全性较高。     

环磷腺苷葡胺对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡和NF-κB表达的影响

目的 观察环磷腺苷葡胺对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡及NF-κB表达的影响.方法 30只SD大鼠随机等分为3组:对照组为假手术组仅进行开胸手术;缺血再灌注组心肌缺血30 min,再灌注100 min;环磷腺苷葡胺注射组在心肌缺血前静脉输注环磷腺苷葡胺2 mg/kg.心肌细胞凋亡和NF-κB表达分别采用TUNEL法和免疫组织化学方法检测.结果 环磷腺苷葡胺注射组大鼠心肌细胞凋亡指数及心肌组织中NF-κB表达明显低于缺血再灌注组(P<0.01),但高于对照组(P<0.01).结论 应用环磷腺苷葡胺注射液可明显降低缺血再灌注损伤大鼠的心肌细胞凋亡和NF-κB表达.     

一次缺血预处理对严重缺血再灌注损伤肾移植模型肾功能恢复的保护效应

目的:利用大鼠肾移植模型观察缺血预处理对长时间冷缺血造成严重缺血再灌注损伤的移植肾脏的保护作用。方法:实验于2004-11/2005-06在解放军第四军医大学西京医院泌尿外科实验室完成。将40只Wistar大鼠分为两组,实验组(n=20)接受缺血预处理(15min的热缺血/10min的再灌注),对照组(n=20)不接受上述处理。然后将移植肾脏用UW液低温保存42h后行肾移植术。对早期移植肾功能、移植肾组织中Na 及K -ATPase及超氧化物歧化酶水平进行检测。结果:①实验组移植肾功能恢复比对照组快,血肌酐水平实验组明显低于对照组[术后第3天:(238.5±24.15),(344.37±27.66)μmol/L;术后第6天:(79.37±8.83),(241.5±11.81)μmol/L,P<0.05或0.01]。②移植肾组织中Na ,K -ATPase水平术后第3,6天实验组明显高于对照组[术后第3天:(0.186±0.013),(0.078±0.024)nkat/g;术后第6天:(0.196±0.029),(0.082±0.011)nkat/g,P<0.01]。③移植肾组织中超氧化物歧化酶水平术后第3,6天实验组明显高于高于对照组[术后第3天:(1951.3±312.5),(1408.5±182.3)NU/g;术后第6天:(1457.0±171.8),(1044.4±280.2)NU/g,P<0.05]。结论:一次缺血预处理(15min/10min)提高了移植肾组织中Na 及K -ATPase及超氧化物歧化酶的水平,可以加快严重缺血再灌注损伤移植肾脏的恢复。可以改善长时间冷缺血移植肾的预后。