磷脂酰肌醇3-激酶信号通路在姜黄素诱导肝细胞转录因子Nrf2核转位中的作用

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）信号通路在姜黄素诱导人肝细胞Nrf2核转位中的作用。方法用30μmol/L姜黄素和Wortmannin（PI3K抑制剂）干预L02肝细胞12 h,Western blot观察Nrf2核转位水平;将L02肝细胞分为对照组、模型组、干预组和抑制剂组,对照组用RPMI1640正常培养,模型组用100 U/L葡萄糖氧化酶（GO）干预2 h,干预组用30μmol/L姜黄素干预12 h后给予100 U/L GO干预2 h,抑制剂组先用0.1μmol/L Wortmannin预处理1h,余处理同干预组。流式细胞术检测细胞内活性氧簇（ROS）。分光光度法检测细胞MDA、GSH及培养液LDH水平,速率法检测细胞培养液AST的水平。结果姜黄素明显诱导Nrf2核转位,其诱导作用可被Wortmannin部分阻断。模型组ROS、MDA、AST、LDH水平较对照组显著升高（P〈0.01）,干预组ROS、MDA、AST、LDH水平较模型组显著降低（P〈0.01）,抑制剂组ROS、MDA、AST、LDH水平显著高于干预组,低于模型组（P〈0.01）。模型组GSH水平较对照组显著降低（P〈0.01）,干预组GSH水平较模型组显著升高（P〈0.01）,抑制剂组GSH水平显著低于干预组（P〈0.01）,高于模型组（P〈0.01）。结论 PI3K信号通路是姜黄素诱导Nrf2核转位的重要信号通路,通过抑制该通路可减弱姜黄素对肝细胞氧化应激损伤的保护作用。     

姜黄素对氧化应激中肝星状细胞活化及细胞外基质分泌的影响

目的观察姜黄素对氧化应激中大鼠肝星状细胞系HSC-T6活化及细胞外基质分泌的影响。方法将HSC-T6分成对照组、模型组、干预组。对照组正常培养,模型组加入100 mU/mL葡萄糖氧化酶（glucose oxidase,GO）干预2 h,制备细胞氧化应激模型,干预组分别加入15μmol/L和30μmol/L姜黄素分别干预3 h,然后给予100 mU/mL GO干预2 h。免疫荧光法观察HSC-T6中desmin和α-SMA的表达,分光光度法检测细胞丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平,放射免疫法检测细胞内透明质酸（hyaluronic acid,HA）,层粘连蛋白（laminin,LN）,Ⅲ型前胶原（procollagenⅢ,PCⅢ）,Ⅳ型胶原（collagenⅣ,CⅣ）水平的变化。结果模型组MDA较对照组显著升高（P〈0.01）,姜黄素15μmol/L干预组MDA较模型组有所降低（P〈0.05）,姜黄素30μmol/L干预组MDA较模型组明显降低（P〈0.01）;模型组GSH较对照组显著升高（P〈0.01）,姜黄素干预组GSH均较模型组显著升高（P〈0.01）,姜黄素30μmol/L的作用优于15μmol/L;对照组中α-SMA无明显表达,模型组中α-SMA大量表达,干预组中α-SMA的表达明显减少,其中姜黄素30μmol/L的作用优于15μmol/L;模型组HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平较对照组显著升高（P〈0.01）,姜黄素15μmol/L干预组细胞内HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平较模型组有所降低（P〈0.05）,姜黄素30μmol/L干预组HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平较模型组明显降低（P〈0.01）。结论姜黄素在低浓度内能够呈浓度依赖性地降低星状细胞内氧化应激水平,抑制星状细胞活化进而减轻细胞纤维化。     

姜黄素对酒精诱导的大鼠脂质过氧化反应的影响

目的:观察姜黄素对酒精性肝病大鼠肝脏氧化应激指标SOD,MDA和NO及血清ALT,AST和ALP水平的影响,探讨姜黄素对酒精诱导的大鼠脂质过氧化反应的影响.方法:将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、姜黄素治疗Ⅰ组(40 mg/kg)、姜黄素治疗Ⅱ组(80 mg/kg)和姜黄素治疗Ⅲ组(160mg/kg),每组8只.除对照组用等量生理盐水灌胃外,其他组均采用56度白酒6.72 g/(kg·d)灌胃的方法制作酒精性肝病大鼠模型,6 wk后姜黄素治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别加用姜黄素ig,至12 wk末,处死大鼠,抽取血标本测定血清ALT、AST及ALP水平;留取肝组织标本测定SOD活性、MDA及NO含量,常规HE染色观察肝脏病理变化.结果:与对照组相比,模型组大鼠血清ALT、AST及ALP水平显著升高(86.4±7.5 vs 33.5±10.3;201.0±16.8 vs 116.5±12.0;205.1±20.0 vs 104.6±9.4:均P<0.01);肝组织SOD活性明显下降(80.21±4.55 vs 180.24±27.53,P<0.01),MDA及NO含量显著升高(3.29±0.34vs 1.35±0.12;4.37±0.21 vs 2.72±0.13:均P<0.01).与模型组相比,各姜黄素治疗组血清ALT、AST及ALP水平(Ⅰ组:66.5±9.6,171.4±10.8,176.4±13.7:Ⅱ组:52.4±12.0,145.8±11.9,146.9±13.8:Ⅲ组:40.9±7.9,135.0±11.8,127.1±12.6)明显降低(P<0.05或P<0.01),肝组织MDA及NO含量(Ⅰ组:2.84±0.27,4.01±0.17;Ⅱ组:1.95±0.23,3.60±0.16;Ⅲ组:1.65±0.08,3.22±0.13)均显著降低(P<0.05或P<0.01),而SOD活性(92.36±6.47,117.69±21.96,146.70±27.361明显提高(P<0.05或P<0.01),其中以Ⅱ、Ⅲ治疗组较为显著.模型组大鼠肝细胞出现不同程度的脂肪变性,伴有点、灶状坏死,炎性细胞浸润,各姜黄素治疗组肝脏病理变化不同程度的轻于模型组.结论:姜黄素能抑制脂质过氧化,减轻或防治酒精诱导的肝损伤.     

Wy14643对缺氧复氧损伤原代大鼠肝细胞的保护作用及机制

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）选择性激动剂Wy14643对原代大鼠肝细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制。方法采用两步灌流法分离大鼠肝细胞并进行原代培养,将培养细胞随机分成6组：C组（正常组）、H/R组（缺氧复氧组）、D组（对照组）、Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组均在缺氧前2 h加入Wy14643（终浓度分别是10、30、100μmol/L）再行复氧处理。将肝细胞缺氧4 h、复氧10 h诱导细胞损伤,然后分别收集细胞培养上清液和肝细胞,测定上清液中谷丙转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）活性和细胞内谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性,MTT法测定肝细胞的存活率,电子显微镜观察肝细胞损伤情况。结果与C组比较,H/R组ALT、AST、MDA增高（P〈0.01）,SOD、GSH下降（P〈0.01）,细胞存活率降低（P〈0.01）。Wy14643处理后,肝细胞上清液ALT、AST活性降低,并且呈剂量依赖性（P〈0.01）;肝细胞内SOD、GSH活性增强（P〈0.05）,MDA含量降低（P〈0.05）;细胞存活率升高（P〈0.05）。电子显微镜显示H/R组肝细胞比C组损伤明显,Wy14643处理后损伤逐渐减轻。结论 Wy14643对肝细胞缺氧复氧损伤有保护作用,可能与提高肝细胞抗氧化能力有关。     

齐墩果酸在小鼠酒精性肝纤维化中的作用机制

目的应用酒精灌胃方法制造小鼠肝纤维化模型,观察核转录因子相关因子(Nrf) 2表达并探索齐墩果酸抗纤维化可能的分子生物学机制。方法 30只昆明种小鼠随机分为3组,模型(B)组通过50%酒精灌胃建立小鼠酒精性肝纤维化动物模型,治疗(C)组预先给予齐墩果酸灌胃进行干预,正常(A)组生理盐水灌胃作为对照。应用免疫组化方法检测齐墩果酸对酒精性肝纤维化小鼠Nrf2的表达影响。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平; HE及MT染色观察肝脏组织病理学改变(炎症、坏死及纤维化分级);免疫组化检测细胞外基质蛋白(FN)的表达。结果 12周末成功建立小鼠酒精性肝纤维化模型; B组肝组织Nrf2表达显著高于A组(P0. 05)。B组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、AST、TBIL水平、肝细胞炎症及纤维化程度、FN表达情况均显著高于A组(P0. 01); C组肝组织Nrf2表达显著高于B组(P0. 05),而血清ALT、AST、TBIL水平、肝细胞炎症及纤维化程度、FN表达情况均显著低于B组(P0. 05)。结论齐墩果酸对酒精性肝损害有保护作用并延缓纤维化进展。其机制是通过增强Nrf2表达,诱导Nrf2依赖性保护基因,抑制肝星状细胞(HSC)活化,减少细胞外基质合成与蓄积有关。     

姜黄素干预对慢性饮水砷暴露小鼠肝脏Nrf2信号通路的影响

目的观察姜黄素干预对慢性饮水砷暴露小鼠肝脏核转录因子Nrf2信号通路的影响。方法实验小鼠自由饮用不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2,10、50、100 mg/L)6周,再分别给予姜黄素灌胃干预(200 mg/kg和600 mg/kg,每周2次),采用Western blotting和免疫组化技术分别检测肝脏Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达水平及Nrf2的细胞定位。结果与单纯砷染毒组相比,姜黄素干预组的肝脏Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达均显著增高,同时肝脏细胞的胞浆和胞核中棕褐色阳性颗粒均显著增多,且Nrf2明显入核增多。结论姜黄素干预能诱导饮水砷暴露小鼠肝脏Nrf2蛋白活化,并进一步激活Nrf2下游信号通路。     

乌司他丁对急性肝功能衰竭大鼠肝组织中血红素加氧酶-1 mRNA和蛋白表达的影响

目的 探讨乌司他丁对急性肝功能衰竭的保护作用及对血红素加氧酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)的影响.方法 66只S-D大鼠分为对照组、模型组和乌司他丁干预组,通过腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gal)及脂多糖(LPS)建立大鼠急性肝功能衰竭模型,动态观察(6、12、24、36和48 h)大鼠血清ALT、AST和丙二醛(MDA)含量变化,RT-PCR检测肝脏HO- mRNA变化,免疫组织化学方法检测HO-1蛋白表达.多组间差异比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法.结果 D-Gal/LPS联合注射成功诱导大鼠急性肝功能衰竭模型,表现为造模6 h后血清ALT、AST水平以及肝组织MDA浓度均显著升高(F值分别为23.864、38.446、18.051,均P＜0.01),以12至24 h之间最为显著.造模24 h后,模型组与干预组ALT、AST、MDA分别达到(8 346.7±1 363.1)U/L、(9 766.7±1 274.1)U/L、(8.34±1.13)μmol/g与(4 151.3±970.0)U/L、(4 696.7±1 476.9)U/L、(4.66±0.91)μmol/g,均较对照组的(24.0±2.0)U/L、(82.3±16.9)U/L、(2.55±0.22)μmol/g高(F值分别为55.684、55.501、47.843,均P＜0.01),但干预组显著低于模型组(P＜0.01);与对照组相比,模型组HO-1 mRNA及其蛋白表达增加(P＜0.01),干预组的上升更加显著(P＜0.01).结论 乌司他丁能上调HO-1 mRNA和蛋白表达,提示乌司他丁可能通过HO-1通路发挥其在急性肝功能衰竭中抗炎抗氧化的保护作用.     

维生素C和维生素E对小鼠化学性肝损伤的预防性保护作用

目的:探讨维生素C(VC)和维生素E(VE)对CCl_4引起化学性肝损伤的预防性保护作用.方法:昆明种小鼠60只随机分5组,设正常对照组、病理模型组、VC保护组、VE保护组、VC VE保护组,饲养10 d,除正常对照组外,其余各组ip 1.5 mL/L CCl_4致小鼠化学性肝损伤,测定小鼠血清中ALT,AST及肝细胞中MDA,GSH,SOD,HE染色光镜下观察肝细胞形态变化.结果:VC和VE保护组能显著降低血清中ALT和AST(2277.12±1187.90,2163.76±1412.11 nkat/L vs 4527.07±1019.37 nkat/L,P<0.01)以及肝细胞中脂质过氧化物MDA的含量(4.37±0.49,3.26±0.71μmol/g vs 9.25±2.74μmol/g,P<0.01).镜下观查肝损伤明显减轻,体外抗氧化实验能显著性的抑制脂质过化物MDA生成,联合应用有协同效应.结论:VC和VE对化学性肝损伤有预防性保护作用.     

姜黄素固体分散体对酒精性肝损伤大鼠氧化应激的影响

目的:探讨姜黄素固体分散体对酒精性肝损伤大鼠氧化应激的影响.方法:将50只SD大鼠随机分为5组:对照组、模型组、联苯双酯阳性药物组(100 mg/kg)、姜黄素固体分散体低、高剂量组(100、200mg/kg), 每组10只. 除对照组给予等量生理盐水外, 其余灌胃给予白酒与脂肪混合乳剂建立酒精性肝损伤模型, 造模的同时给予联苯双酯, 姜黄素固体分散体等药物干预. 给药6 wk后, 测定大鼠血清中ALT, AST活性, 测定肝组织中MDA含量, SOD活性, 用以评价肝损伤程度及氧化应激反应程度.结果:与对照组比较, 模型组大鼠肝质量/体质量值显著升高(3.74±0.38 vs 2.25±0.13,P<0.01); 血清中ALT, AST水平显著升高(76.24±9.14 vs 30.13±4.99, 98.85±10.50 vs 39.02±6.79, 均P<0.01); 肝组织中SOD活性显著降低(395.39±28.26 vs 258.18±22.18, P<0.01);MDA含量显著升高(27.00±1.08 vs 12.31±1.26, P<0.01). 与模型组比较, 各治疗组血清AST, ALT水平(AST:29.01±9.24, 55.92±5.49,40.94±4.54; ALT:41.69±3.67, 57.17±10.88,52.59±10.17)均显著降低( P<0.01). 给予姜黄素固体分散体低、高剂量组肝组织中SOD活性显著升高(340.50±36.26, 365.20±36.18, 均P<0.01), 而MDA含量明显下降(15.76±0.68,13.19±0.72, 均P<0.01), 而Bifendate组无显著性变化.结论:姜黄素固体分散体对酒精诱导大鼠肝损伤具有保护作用, 并能降低肝损伤大鼠氧化应激反应.     

荞麦花叶芦丁对乙醇所致小鼠肝细胞损伤的保护作用

目的探讨荞麦花叶芦丁（RBFL）对肝细胞损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法从荞麦花和叶中提取RBFL。采用胰蛋白酶消化、分离小鼠肝细胞行原代培养,乙醇体外诱导肝细胞损伤,以不同浓度的RBFL干预。检测损伤肝细胞培养上清液中天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平。结果与正常对照组比较,模型组AST、ALT、MDA明显升高,SOD活性明显降低（P均〈0.01）。与模型组比较,RBFL75～300 mg/L干预后AST、ALT、MDA水平明显降低,SOD活性明显提高,呈剂量依赖性,P〈0.05、〈0.01。结论 RBFL对乙醇所致的肝细胞损伤有明显保护作用;其机制可能与RBFL能清除自由基、防止脂质过氧化、改善脂质代谢有关。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.