脂肪间充质干细胞的研究进展

脂肪来源的间充质干细胞具有和骨髓来源的间充质干细胞相似的表型和多向分化能力,脂肪组织来源丰富,取材方便,在细胞治疗和组织工程方面具有广泛的临床应用前景。     

脂肪间充质干细胞的研究进展

脂肪来源的问充质干细胞具有和骨髓来源的间充质干细胞相似的表型和多向分化能力，脂肪组织来源丰富，取材方便，在细胞治疗和组织工程方面具有广泛的临床应用前景。     

人胎盘源间充质干细胞多向分化潜能的实验研究

目的探讨从废弃胎盘中获取的HPMSCS是否具有多向分化潜能。方法从废弃的胎盘组织中分离培养胎盘源间充质干细胞,并对其生物学性状进行鉴定。对鉴定后的胎盘源间充质干细胞在体外通过特定诱导环境下使之向成脂肪细胞、成骨细胞分化,检测其多向分化潜能。结果HPMSCS在培养基中持续培养后,在特定诱导环境下,成功使其向成脂肪细胞转化,培养2周时,可见融合成团的脂滴充满整个细胞;成功使其向成骨细胞转化,培养4周以上可见明显钙化结节,vonKossa染色可将骨结节中沉积的钙染成黑色,碱性磷酸酶染色呈强阳性反应达到95%以上。结论通过密度梯度离心法从废弃胎盘中获取的间充质干细胞具有多向分化潜能。     

脂肪间充质干细胞移植治疗阿尔茨海默病

阿尔茨海默病是一种神经退行性疾病,其典型特征是进行性神经元缺失,迄今为止还没有一种药物和治疗方法对其彻底根治.随着干细胞技术与理论的发展和完善,阿尔茨海默病的治疗研究主要集中在神经干细胞移植方面.为避免免疫反应,最好用自体干细胞进行移植,而获取自体神经干细胞是非常困难的.与神经干细胞相比,间充质干细胞具有更广泛的来源,可以从肝脏、骨髓、脂肪等多种组织中获得,且具有多向分化潜能的特质,在一定诱导条件下可分化为骨、肌肉、脂肪等多种组织,其中脂肪间充质干细胞因其具有容易获得、对患者损伤小等特性而备受关注.新近研究显示,脂肪间充质干细胞具有神经分化潜能,预测其很可能在阿尔茨海默病治疗中发挥重要作用.     

C57小鼠脂肪及骨髓间充质干细胞生物学特性的比较

背景：研究发现,脂肪源干细胞具有和骨髓间充质干细胞一样的贴壁和形成成纤维样克隆特性,并具有向骨、脂肪、软骨等多系分化的能力。 目的：比较C57小鼠脂肪源间充质干细胞和骨髓间充质干细胞的生物学特点。 方法：在无菌的条件下分别从C57小鼠的脂肪和骨髓中获取脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞。体外分离、培养并将脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞传至第3代,进行细胞形态、表面标记、生长动力学分化潜能测定和Notch信号相关基因的检测。 结果与结论：脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞形态学相似,第3代的脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞均表达CD29、CD105、Sca-1,不表达CD34、CD133,但骨髓间充质干细胞还表达CD45;生长曲线和细胞克隆分析显示脂肪间充质干细胞的增殖速度明显比骨髓间充质干细胞快;脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞均可向成骨、成脂、成软骨诱导分化,脂肪间充质干细胞更易向成骨诱导;Notch 相关基因检测显示脂肪源干细胞的 Jagged-1表达水平明显比骨髓间充质干细胞低,而 Hes-1的表达水平脂肪源干细胞明显高于骨髓间充质干细胞的表达水平。提示脂肪间充质干细胞比骨髓间充质干细胞扩增能力更强,更易向成骨分化,可能与Hes-1表达水平有关。     

体外分离培养人源性脂肪间充质干细胞及其鉴定

目的 体外分离培养人皮下脂肪来源的细胞群,依据国际标准规定通过形态观察、免疫表型检测及多种分化潜能的鉴定证实体外获得的细胞群为脂肪来源的间充质干细胞.方法 采用0.1％胶原酶Ⅰ及0.25％胰酶双消化法进行细胞的体外分离,LG-DMEM培养基加入体积分数为10％胎牛血清,于37℃、5％ CO2的饱和湿度条件下培养,待细胞生长至70％ ～ 80％融合时消化传代扩增.通过倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞免疫表型表达;取第3代细胞,于培养基中分别加入成骨及成脂诱导剂进行定向诱导分化,并对诱导后的细胞染色鉴定.结果 分离培养的细胞群呈长梭状,漩涡样贴壁生长;流式细胞仪检测P2代细胞,其中CD73,CD105,C90,CD44,CD29及CD49d呈阳性表达,而CD14,CD34,CD45,HLA-DR及CD106呈阴性表达;成骨诱导3周后,茜素红染色、VON-KOSSA染色及细胞碱性磷酸酶染色都呈阳性;成脂诱导2周后,细胞内有小脂滴出现,油红O染色呈阳性.结论 胶原酶胰酶双消化法从脂肪组织中分离获得的细胞可贴壁生长;流式细胞仪检测证实细胞表达与间充质干细胞相符的免疫表型;定向诱导后具有成骨及成脂分化能力;符合间充质干细胞的特性.     

豚鼠脂肪间充质干细胞:一种适用于耳科实验研究的理想干细胞

背景:目前关于耳科干细胞研究的动物实验大多是将其他动物种属的干细胞用于豚鼠模型,而对于豚鼠本身来源的干细胞研究报道极少。目的:观察豚鼠脂肪间充质干细胞成骨、成脂肪、成神经细胞分化的潜能,并探讨其应用于耳科实验的可能。方法:取豚鼠脂肪,分离脂肪间充质细胞培养至第3代,检测第1～10天细胞增殖吸光度值;流式细胞仪检测细胞的免疫表型;并行成骨细胞诱导、成脂肪细胞诱导、成神经细胞诱导及鉴定。结果与结论:脂肪间充质细胞增殖的生长曲线近似"S"形,传代后经过3d的潜伏期,4d进入对数生长期,8d进入平台期;锥虫蓝染色细胞拒染率94%～98%,从P0～P5细胞的总产量扩增了约3600倍;其细胞免疫表型CD29表达率86.3%,CD44表达率55.5%,CD45表达率为0.4%。成骨细胞诱导后经特异性染色可见矿化结节形成;成脂肪细胞诱导后经油红O染色胞浆内可见脂质滴;成神经细胞诱导后细胞形态与神经细胞类似,Nestin、GFAP、NF200染色均呈阳性。提示豚鼠脂肪间充质细胞在体外易于分离、培养及扩增,具有间充质干细胞的"干性",是一种适用于耳科实验研究的理想干细胞。     

人脂肪来源间充质干细胞成骨及成软骨的潜能

背景:人脂肪来源间充质干细胞是种具有较强的体外增殖和多系分化能力的成体干细胞,可以从美容吸脂手术中获得,取材方便,原料来源丰富,在生物治疗应用方面蕴藏着巨大的价值。目的:体外分离、培养人脂肪来源间充质干细胞,探讨其基本生物学特性及成骨成软骨的潜能。方法:取美容吸脂获得的脂肪组织,采用Ⅱ型胶原酶消化法分离人脂肪来源间充质干细胞并进行体外培养;观察细胞形态、测定细胞周期、流式细胞仪鉴定细胞表面标志;取第3代细胞,分别加入成骨诱导培养基及成软骨诱导培养基行体外成骨及成软骨诱导。结果与结论:体外培养人脂肪来源间充质干细胞呈纤维样形态,原代细胞24h内贴壁,培养5~7d后开始形成细胞集落;经细胞周期检测显示G0/G1,S和G2/M所占比例分别为(88±2)%,(12±2)%和0.03%。经流式细胞仪检测CD29和CD105呈阳性表达,CD34和CD45呈阴性表达。RT-PCR检测显示,人脂肪间充质干细胞经成骨诱导分化后细胞中骨桥蛋白mRNA呈阳性表达,经软骨诱导分化后细胞中Ⅱ型胶原mRNA呈阳性表达。结果证实,实验成功体外分离、培养人脂肪来源间充质干细胞,其具有向成骨细胞和软骨细胞分化的潜能。     

骨髓间充质干细胞的研究

骨髓间充质干细胞(MSCs)是骨髓中的非造血细胞,构成造血微环境,支持造血,具有向成骨细胞、软骨细胞、成肌/心肌细胞、脂肪细胞、神经元等分化的潜能,表达多种表面标记物,但不具特异性.骨髓、外周血的MSCs是一循环的整体,具有其自身代谢、更新的循环,终末分化可能跨越胚层界限.MSCs应用前景广阔.     

人脂肪间充质干细胞的研究与应用

背景:人脂肪间充质干细胞具有增殖和多向分化的能力,作为一种新型的干细胞已被广泛应用于组织工程研究,并在其已有的和潜在的生物治疗应用中发挥着重要作用.目的:通过检索相关文献,综述人脂肪间充质干细胞在组织工程和细胞治疗中的应用及存在的问题.方法:应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中1960-01/2010-01关于人脂肪间充质干细胞应用的相关文章,检索词分别为"人脂肪间充质干细胞;分离;分化;免疫表型;应用"和"human adipose tissue-derived stromal cells;isolation;differentiation;immune phenotype;application",语言分别设定为中文和英文.选择内容与人脂肪间充质干细胞生物特性和应用相关的文章,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志的文章,排除重复类文章. 结果与结论:收集到81篇相关文献,排除不符合标准的文献,共纳入57篇符合标准的文献.结果表明,人脂肪间充质干细胞具有许多特性,包括间充质干细胞潜在的增殖能力和适当条件下的多向分化能力.人脂肪间充质干细胞,不仅可以应用于组织的修复,而且在细胞免疫调节和基因治疗中均发挥重要作用.但人脂肪间充质干细胞的应用过程中仍存在许多问题.随着人脂肪间充质干细胞研究的深入,更多的生物学特性将会发现,人脂肪间充质干细胞在组织修复,细胞治疗,移植以及基因治疗中的应用前景会更加广阔.     

骨髓间充质干细胞的研究前景

除造血干细胞以外,骨髓中还含有另一类干细胞,被称为间充质干细胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ,ＭＳＣ）在不同的诱导条件下,这类细胞可分化为多种造血以外组织特别是中胚层和神经外胚层来源组织细胞,如成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞和星形神经胶质细胞等。骨髓间充质干细胞易于分离和培养扩增,还易于外源基因的导入和表达,有望成为一种新的细胞治疗和基因治疗的靶细胞,在多种造血以外组织的缺     

间充质干细胞"归巢"研究进展

间充质干细胞（mesenchymal stemcells，MSCs）是具有多向分化潜能的非造血干细胞，已广泛应用于干细胞移植、组织工程和器官移植免疫治疗等方面，但MSC回输体内后的分布和分化直接影响其应用，本文就MSC体内“归巢”特点、“归巢”机制及”归巢“的意义作一综述。     

异基因间充质干细胞输注促进动脉粥样硬化发展

本研究探索间充质干细胞（MSC）输注对动脉粥样硬化的作用。通过体外培养兔骨髓穿刺液获得间充质干细胞。30只新西兰白兔随机分为3组：正常饮食组6只（对照）,给予普通饲料饲养;高脂饮食组12只,高胆固醇高脂饲料喂养后静脉注射生理盐水;MSC注射组12只,高胆固醇高脂饲料喂养后静脉注射5×10^7MSC。分别于实验前,实验第5周,第9周和第13周测体重和空腹血脂水平。实验第13周时处死所有动物,检测动脉粥样硬化斑块和主动脉外膜滋养血管。结果表明,MSC注射组与高脂饮食组相比,主动脉窦斑块面积显著增大（斑块面积占血管面积的百分比分别为（23．35±3．51）％和（11．39±3．08）％,P〈0．05）,整体主动脉斑块形成明显增多（斑块面积占主动脉面积的百分比分别为（76．64±12．70）％和（57．61±9．00）％,P〈0．05）。MSC注射组兔主动脉外膜滋养血管增生明显,毛细血管密度增加。结论：异基因MSC输注促进高脂血症兔动脉粥样硬化斑块进展。采用MSC或包含MSC的细胞进行细胞治疗时应采取策略,减少MSC促进斑块形成的作用。     

过表达VCAM-1对小鼠间充质干细胞成脂分化的影响与作用机制

目的:探讨基因修饰过表达VCAM-1对小鼠间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响与作用机制。方法:将稳定过表达VCAM-1的MSC细胞(MIGR1-VCAM-1)和转入空载体的MSC细胞(MIGR1)分别向脂肪细胞诱导分化,以原位油红O染色和real-time PCR检测成脂分化能力与相关关键转录因子C/EBPα和PPARγ的表达;Western blot检测相关信号通路P38、ERK和JNK通路的活化。利用信号通路抑制剂处理MSC,观察其成脂分化能力的变化。结果:无论是自分化组还是诱导分化组,过表达VCAM-1的MIGR1-VCAM-1/MSC与对照组MIGR1/MSC相比,脂滴变大,脂肪细胞数量显著增加(P0.01);同时在mRNA水平调控成脂分化的关键转录因子C/EBPα和PPARγ表达显著上调;Western blot检测相关信号通路,结果表明JNK通路在VCAM-1调控成脂分化中明显下调,P38及ERK通路则显著上调;加入通路抑制剂后,JNK通路抑制可显著上调MIGR1-VCAM-1/MSC成脂分化能力,脂肪数量明显增加(P0.01),且相关转录因子C/EBPα和PPARγ的mRNA表达也显著上升;而抑制P38及ERK通路则使MIGR1-VCAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγ的mRNA表达水平下调,脂滴及脂肪细胞数则更小、更少。结论:过表达VCAM-1可促进小鼠MSC成脂分化,VCAM-1可能通过抑制JNK信号通路,活化P38及ERK通路促进小鼠MSC成脂分化能力。     

人骨髓间充质干细胞裂解物对胶原诱导的大鼠关节炎的治疗作用

以往的研究表明,间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）对Wistar大鼠胶原诱导性关节炎（colla-gen-induced arthritis,CIA）模型无治疗作用。本研究进一步探讨细胞裂解物是否具有CIA治疗作用。在造模4周后,裂解物治疗组CIA大鼠腹腔内注射1×107人骨髓MSC裂解物,阳性对照组CIA大鼠腹腔注射甲氨蝶呤（meth-otrexate,MTX）1 mg/kg,阴性对照组CIA大鼠腹腔注射生理盐水,以上各组治疗频率皆为每周1次,连续治疗4周。治疗4周后,记录大鼠踝关节肿胀程度变化,并进行病理学及X线摄片检查。结果表明：所有实验组大鼠都出现了关节炎症状,并在实验后期出现了关节畸形。治疗组关节炎综合评分均显著高于正常对照组（P〈0.01）,治疗4周后综合评分分别为6.87±0.83,6.44±1.13和7.33±0.77,治疗组之间无显著差异。病理学分析显示,MSC裂解物治疗组和对照组炎症综合评分分别为2.28±0.48和2.28±0.55,显著高于MTX组（0.71±0.48,P〈0.05）。然而,踝关节X线分析显示,对照组评分为4±0.57,显著高于裂解物治疗组（2.71±0.75）和MTX治疗组（2.57±0.78,P〈0.05）。结论：MSC裂解物对大鼠CIA有一定的治疗作用,但效果不及MTX。     

造血干细胞移植后患者间充质干细胞增殖功能的研究

为了研究造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation,HSCT）后造血植活患者中骨髓源的间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）的增殖能力,本研究选择造血干细胞移植后临床植活的34例患者作为研究对象,抽取34例患者及30例正常健康供者骨髓,进行微环境成纤维细胞集落形成单位（colony-formingunit-fibroblast,CFU-F）集落培养,同时对MSC进行培养传代,记录MSC的融合时间及传代总数;利用流式细胞术（flowcytometry,FCM）检测患者MSC表面抗原的表达;将此34例患者培养结果与30例正常对照结果进行比较统计。另外对其中骨髓加外周血加第二供者脐血移植的10例患者与骨髓加外周血移植的19例患者的MSC体外扩增指标进行比较统计。结果表明：34例患者中有31例（91.1%）患者的MSC原代培养能达到贴壁融合,有1例（2.9%）达到部分融合,2例（5.9）未达融合;与正常对照相比,患者的MSCs融合时间明显延长,传代总数明显减少,CFU-F数明显降低,即其MSC的体外扩增能力明显受损。骨髓加外周血加第二供者脐血移植的10例患者与骨髓加外周血移植的19例患者相比,MSC达到融合的时间短,体外传代总数多,CFU-F计数高。结论：移植后患者的MSC呈明显受损状态,加用第二供者脐血细胞能部分改善患者MSC体外增殖功能。     

Rspo1基因转染间充质干细胞株的构建及生物学活性鉴定

目的：构建稳定表达Rspo1的基因转染间充质干细胞株。方法将人Rspo1全长cDNA重组入逆转录病毒载体pEGZ-Term,通过与辅助病毒载体共转染293T细胞,包装为具有感染力的完整重组病毒载体,收集培养上清感染间充质干细胞C3H10 T1/2细胞株,筛选获得G418抗性的基因转染细胞,通过RT-PCR与流式细胞术检测感染后C3H10 T1/2细胞Rspo1分子的表达,并采用细胞计数法观察其上清对SW480结肠癌细胞增殖能力的影响。结果成功构建pEGZ-Term/Rspo1逆转录病毒表达载体,获得了稳定表达人Rspo1的基因转染细胞株C3H10/Rspo1,该细胞株上清能促进SW480结肠癌细胞增殖。结论建立了稳定表达Rspo1的基因转染间充质干细胞株,为进一步利用Rspo1和间充质干细胞靶向作用于肠道干细胞救治肠上皮损伤的研究奠定了基础。     

异基因造血干细胞移植后受者骨髓的间充质干细胞来源研究

为了研究造血干细胞移植植活患者骨髓源间充质干细胞（MSC）的来源，选择临床上供受者性别不同的造血干细胞移植后临床植活的34例患者作为研究对象，抽取骨髓，进行间充质干细胞培养传代，利用流式细胞术（FCM）检测患者MSC的表面抗原表达特征，利用聚合酶链反应（PCR）分析患者MSC的釉基质基因表达情况以确定其性别来源，利用荧光原位杂交（FISH）技术进一步证实患者MSC的性别来源。结果表明：34例患者中有31例患者的MSC原代培养能达到融合，其中24例患者成功传代5代以上，且可进行PCR及FISH检测；FCM结果显示，第5代MSC的CD14^＋CD45^＋细胞表达低于0．04％；PCR结果显示，移植后患者的MSC源于患者本人；FISH结果显示，移植后患者的MSC 100％源于患者本人。结论：造血干细胞移植后患者骨髓中的MSC仍源于患者本人。     

树突状细胞外泌体诱导间充质干细胞向成骨细胞分化

本研究观察人树突状细胞（dendriticcells,DC）来源的外泌体（DC—derivedexosome,DCex）对人骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSC）成骨分化的影响。采用超速离心法从树突状细胞培养上清中获取DCex,应用电子显微镜观察DCex形态并通过流式细胞术检测和鉴定其细胞来源。取第3代MSC,设3组培养诱导体系：①对照组：d—MEM基础培养液组;②实验组：d—MEM基础培养液＋DCex（10μg/m1）组;③α-MEM基础培养液＋标准诱导剂组。采用荧光实时定量PCR、琼脂糖凝胶电泳检测各组成骨分化转录因子Runx2mRNA的表达情况,并进行碱性磷酸酶（ALP）活性检测。另外,荧光染料DiI标记DCex,应用共聚焦显微镜观察DCex进入MSC的过程。结果显示,在电子显微镜下DCex呈典型的圆形或椭圆形膜层结构,直径为40—100nm,并表达DC细胞的标志物CD83,CD86,CD80和HLA—DR。在DCex处理MSC后6h时,可在共聚焦显微镜下观察到进入到MSC胞质内的DCex,随着作用时间延长,细胞荧光强度增加。按组培养第7天,DCex实验组Runx2表达较对照组增高,差异有统计学显著性（P〈0．05）;MSC培养第14天,DCex组ALP含量OD值与对应蛋白比为2．22±0．27,显著高于阴性对照组（1．20±0．21）（P〈0．01）,但低于标准诱导组（3．22±0．24）（P〈0．05）。结论：DCex可以促进MSC向成骨细胞分化,其且体机制仍需讲一步研穷证实．     

Regional Hyperthermia Enhances Mesenchymal Stem Cell Recruitment to Tumor Stroma: Implications for Mesenchymal Stem Cell-Based Tumor Therapy

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