大肠癌中hTERT和bcl-2基因表达与端粒酶活性的关系

目的 :探讨端粒酶逆转录酶 (hTERT)和bcl 2基因在大肠癌发生过程中的作用及其与端粒酶活性的关系。方法 :采用原位RT PCR和免疫组化S P法分别对 4 6例大肠癌及其相应正常大肠组织中hTERTmRNA与bcl 2蛋白表达进行检测 ,并用TRAP法测定上述组织标本中端粒酶活性。结果 :大肠癌组织中hTERTmRNA与bcl 2蛋白阳性表达率分别为 87.0 %和 71.7% ,它们与正常大肠组织比较差异均有显著性 (P <0 .0 1)。大肠癌中端粒酶活性阳性率为 80 .4 % ,明显高于正常大肠组织 (P <0 .0 1)。hTERTmRNA及bcl 2蛋白阳性表达分别与端粒酶活性呈显著正相关 (r分别为 0 .70和 0 .5 7,P均 <0 .0 5 )。结论 :hTERTmRNA及bcl 2蛋白过度表达与大肠癌的发生密切相关 ,并可能参与大肠癌端粒酶活性调节     

卵巢肿瘤端粒酶活性的研究

目的；研究探讨端粒酶活性与卵巢肿瘤的相关性。以及端粒酶与其临床病理特征的关系，探讨端粒酶在卵巢癌诊断中的价值，并为临床早期诊断卵巢癌提供理论依据。方法（PCR）-酶联免疫吸附测定（ELISA）法，联合聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）-银染色法进行检测。共检测34例卵巢癌组织．30例良性卵巢肿瘤组织。20例因其他岛性病变而切除的正常卵巢组织端粒酶活性，分析端粒酶活性与卵巢癌不同病理特征间的关系。结果：34例病理诊断证实的卵巢癌组织端粒酶活性阳性率85.29％。30例良性卵巢肿瘤组织端粒酶酶活性阳性率为16．67％；20例正常卵巢组织端粒酶活性阳性率为10％。卵巢癌组织端粒酶活性较正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织端粒酶活性显著增高（分别P〈0．001。P〈0．001），良性卵巢肿瘤组织与正常卵巢组织间端粒酶活性无显著差异（P〉0．05）。端粒酶表达在组织学类型、怨性程度上无显著差异（P〉0．05）,端粒酶表达在卵巢癌临床分期中有显著差异，Ⅲ、Ⅳ期端粒酶阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期（P〈0.05）；卵巢癌术中发现有淋巴结转移者，其端粒酶活性较无转移考明显增高（P〈0．05）。结论：检测卵巢肿瘤的端粒酶活性有助于良；且有助于早期诊断井为恶性程度判断提供熏要的理论依据。     

骨肿瘤端粒酶活性检测及其意义

目的:了解端粒酶活性高低与骨肿瘤恶性程度的关系.方法:用TRAP方法和改进的TRAP印染方法,对骨肿瘤组织端粒酶活性进行检测.结果:端粒酶阳性率分别为:骨肉瘤80 6%(29/36例),骨巨细胞瘤80 0%(20/25例),软骨肉瘤85 7%(6/7例),恶性纤维组织细胞瘤100%(2/2例),横纹肌肉瘤100%(2/2例),脊索瘤100%(3/3例),另有9例骨软骨瘤检测,仅有1例(111%)阳性.同时检测17例患者的肿瘤旁肌肉组织或软组织,均未发现有阳性.结论:端粒酶活性与骨肿瘤恶性程度密切相关,是诊断恶性骨肿瘤、判断预后的良好指标.     

人肾癌干细胞的培养鉴定及其端粒酶活性的分析

目的:研究分析人肾癌干细胞的培养鉴定及其端粒酶活性情况。方法:应用含有碱性成纤维生长因子(英简b FGF)、表皮生长因子(英简EGF)的DMEM/F12的培养基对分离的肾癌干细胞进行无血清悬浮培养,并以正常的肾组织细胞及含血清培养的肾癌细胞作为对照。通过端粒重复序列扩增法(英简TRAP)对肾癌干细胞端粒酶活性进行实时、定量的检测。结果:无血清悬浮培养组的CD133~+CD34~+的表达率显著高于含血清培养组,差异P0.05有统计学意义。并且,肾癌干细胞球、肾癌细胞端粒酶活性均显著高于正常肾组织细胞,差异P0.05有统计学意义。结论:无血清悬浮培养相比含血清培养,肾癌干细胞CD133~+的表达率更高,但二者培养的肾癌细胞的端粒酶活性均明显高于正常肾组织细胞。     

小鼠神经干细胞的分离培养

目的 探讨小鼠神经干细胞的体外分离培养方法。方法 采用贴壁培养法,从成体小鼠大脑皮层分离并体外培养成体小鼠大脑皮层细胞,制成细胞悬液后将其置入DMEN/F12(1:1)液(包括15％FCS,bFGF20ng/ml,青霉素100u/ml和链霉素100u/ml)培养,获得细胞克隆。应用免疫组织化学技术检测克隆细胞巢蛋白(Nestin)的表达。结果原代及传代培养的细胞均可持续分裂增殖形成细胞克隆;克隆细胞表达巢蛋白(Nestin)。结论 分离的细胞在体外具有很强的增殖能力和自我更新能力,表达Nestin的为中枢神经系统的干细胞。     

端粒酶活性与骨肉瘤细胞分化的关系

【目的】探讨人骨肉瘤细胞分化与端粒酶活性调节之间的关系。【方法】用维甲酸和地塞米松诱导人骨肉瘤细胞分化 ,用端粒重复序列扩增法 (TRAP)检测端粒酶活性及用Northern印迹法检测人端粒酶RNA(RNA ,hTR)表达水平的改变。【结果】经维甲酸和地塞米松处理后 ,骨肉瘤细胞生长受到抑制 ,碱性磷酸酶活性升高 ,端粒酶活性明显下降 ,且与剂量 作用时间成负相关 ,但hTR表达水平并无改变。【结论】维甲酸和地塞米松有抑制骨肉瘤细胞增殖和诱导分化的作用 ,端粒酶活性下调可作为细胞分化指标 ,但与hTR表达水平不平行。     

小檗碱对人鼻咽癌CNE-2细胞端粒酶活性的影响

目的:观察小檗碱(Berberine)对人鼻咽癌CNE-2细胞端粒酶活性的影响。方法:不同浓度的小檗碱处理体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞72 h,聚合酶链反应-端粒重复扩增(PCR-TRAP)法测定端粒酶活性,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制。结果:小檗碱可抑制CNE-2细胞端粒酶活性,随小檗碱浓度增大,端粒酶活性抑制增强。MTT结果显示小檗碱抑制CNE-2细胞增殖且抑制有浓度依赖性。结论:端粒酶活性的抑制可能是小檗碱发挥抗癌活性的作用机制之一,小蘖碱作为鼻咽癌的辅助治疗可能提高疗效。     

端粒、端粒酶的研究及其在喉癌中的应用

端粒酶作为广谱的肿瘤特异性标记物用于肿瘤的诊断 ,以及其抑制剂用于肿瘤的治疗已成为近年来肿瘤分子生物学领域中最热门的研究课题之一。笔者就端粒、端粒酶的研究及在喉癌中的应用作一综述。1　端粒、端粒酶的结构与功能端粒是真核细胞内由DNA序列和结合蛋白组成的、位于染色体 3′末端以维持染色体结构稳定的特殊结构。人类端粒含有几千拷贝的六聚体重复序列 ,是一个简单重复的富含鸟苷酸 (G)的DNA序列[1] ,重复单位是 (5′ ,-TTAGG 3′)n ,端粒对染色体稳定及其基因组的完整非常重要 ,为染色体末端提供一个保护性“帽子” ,就象鞋…     

大鼠神经干细胞体外培养及分化

神经干细胞的研究是最近几年来神经科学及胚胎发育学的热点问题。人们通常认为成年哺乳动物的中枢神经系统组织是不可再生的，中枢神经系统损伤或神经系统退行性病变将只能由神经胶质爬行替代，遗留难以弥补的神经系统功能缺损。而神经干细胞特别是在成年哺乳动物中枢神经系统中发现的神经干细胞对以上观点产生了巨大的冲击。随着神经干细胞的研究深入，必将为神经系统损伤性、退行性疾病的彻底治愈，甚至神经移植治疗带来一次革命性突破。     

胃肠道恶性肿瘤端粒酶活性的表达与意义

目的 探讨端粒酶在胃肠道恶性肿瘤癌组织和癌旁正常组织中的表达及其临床意义。方法 应用端粒酶PCR-ELISA检测法检测胃癌11例、结肠癌14例及25例癌旁正常组织中的端粒酶活性。结果 25例胃肠道肿瘤组织中21例端粒酶呈阳性（84.0%);25例癌旁正常组织 5例阳性（20.0%)。癌组织和癌旁正常组织中端粒酶的表达均与肿瘤临床病理特征无关,癌旁正常组织存在端凿酶阳性表达的病例,病理上多伴有不典型增生或癌细胞的浸润转移。结论 端粒酶可作为实质性肿瘤早期诊断的辅助指标。对癌旁正常组织中端粒酶阳性的患者加强观察,有助于早期发现某些胃肠道恶性肿瘤的术后再发或复发。     

脑源性神经营养因子对神经干细胞的体外定向分化及体内移植的影响

目的 了解体外培养的大鼠脑神经干细胞植入正常成鼠脑内后的存活、迁移和分化情况，以及脑源性神经营养因子（BDNF）对其影响。方法 从出生2～3d的大鼠脑皮质分离培养神经干细胞，采用BDNF诱导分化后，用免疫荧光染色鉴定神经元的数量。将培养的神经干细胞经溴脱氧尿苷（BrdU）标记，或同时加用BDNF后，移植入成鼠大脑皮质，移植1个月后，应用抗BrdU和抗β-ptubulin Ⅲ双重免疫荧光染色，对脑切片中细胞分化和迁移情况进行分析。结果 植入的神经干细胞可在大脑皮质发生迁移，个别移植的细胞可分化成神经元。体外诱导分化实验中，神经干细胞经BDNF诱导3d后，其分化成神经元的数量约为对照组的5倍。在神经干细胞脑内移植时，加用BDNF发生迁移的神经干细胞的数量较未加BDNF的增多，但神经干细胞分化成神经元的数量与未加BDNF对比无明显差别。结论 体外培养的新生大鼠脑神经干细胞植入正常成鼠脑内后，能够存活、迁移及分化，BDNF有助于移植的神经干细胞的存活和迁移。     

体外培养大鼠骨髓间质干细胞的超微结构

[目的]研究体外培养大鼠骨髓间质干细胞的超微结构。[方法]采用常规技术对SD鼠骨髓间质干细胞进行体外培养传代、鉴定、诱导分化和透射电镜分析。[结果]流式细胞仪检测,细胞表达CD29和CD44,不表达CD11b和CD45;经5-氮杂胞苷和两性霉素B诱导分化后结蛋白和肌球蛋白染色阳性。透射电镜观察有巨噬样、内皮样和成纤维样三类基本细胞,巨噬样细胞表面有胞质突起,胞浆含电子密度高的结晶样包涵体;内皮样细胞靠胞膜边有吞饮小泡,胞浆中有电子密度高的内皮特殊小体;成纤维样细胞呈梭形,较幼稚,细胞器简单,有丰富的糖原和核糖体;经诱导分化的肌样细胞胞浆靠胞膜缘可见无细胞器的条状肌丝区带;细胞间存在胞膜局部紧密连接和胞质突起接合。[结论]传代贴壁生长的为骨髓间质干细胞;超微结构分析显示早期幼稚细胞发育的特征,但各有特点;在不同培养条件诱导下,细胞具备向肌肉和脂肪组织分化的潜能。本研究为进一步了解和掌握骨髓间质干细胞的生物学特性和临床应用打下基础。     

端粒酶活性及其hTR表达在诱导大肠癌分化细胞中的变化

【目的】观察全反式维甲酸 (ATRA)和 1,2 5 二羟维生素D3 (VD3 )大肠癌细胞株诱导分化过程中端粒酶活性的变化 ,并对其RNA组分hTR进行检测。【方法】ATRA和VD3 对大肠癌细胞进行诱导分化 ,在进行细胞活力测定、细胞增殖测定、流式细胞仪 (FCM )分析细胞周期及碱性磷酸酶比活性测定的同时 ,分别在诱导后第 2天、第 4天和第 6天用TRAP法检测其端粒酶活性的变化 ,并同时用RT PCR的方法对端粒酶的RNA组分进行检测 ,PAGE观察结果。【结果】TRAP法检测端粒酶活性 ,结果显示在诱导分化的第 2天后活性减弱 ,第 4天、第 6天其活性受到明显抑制。利用RT PCR法检测各阶段端粒酶RNA组分无明显改变。【结论】ATRA和VD3 诱导大肠癌细胞分化过程中端粒酶活性明显抑制 ,但RT PCR检测其RNA组分无改变。     

阿糖胞苷对子宫颈癌细胞的端粒酶活性的影响

目的 :探讨阿糖胞苷对体外培养的宫颈癌细胞 (Hela细胞 )端粒酶活性的影响。方法 :采用PCR ELISA法检测经阿糖胞苷处理前后的Hela细胞株端粒酶活性的改变。结果 :经阿糖胞苷处理后 ,Hela细胞的生长受到抑制 ,端粒酶活性明显降低。结论 :阿糖胞苷对Hela细胞具有生长抑制作用 ,其抗肿瘤作用的机理可能与抑制肿瘤细胞的端粒酶活性有关。     

神经干细胞移植治疗阿尔茨海默病研究现状

神经干细胞(NSCs)治疗阿尔茨海默病(AD)可以修复和替代受损神经细胞,并重建细胞环路和功能。主要方法包括内源性途径,即诱导内源性NSCs增殖与分化,使损伤的中枢神经系统进行自我修复;外源性途径,即直接替代缺损组织或植入基因工程细胞,这一类细胞能分泌促进干细胞增殖与存活的因子。目前,用NSCs移植治疗人类AD的确切疗效还缺乏足够的证据,如何评价其对人类神经功能恢复所起的作用尚在研究中。     

神经干细胞、成体神经发生以及神经变性疾病的细胞移植治疗

成体哺乳动物的神经元是退出细胞周期的终末分化细胞,因此长期以来神经系统被认为缺乏再生能力。自神经干细胞（neural stem cells,NSCs）及神经发生在许多物种尤其哺乳动物的成体中被广泛发现和证实后,成体中枢神经系统的可塑性和神经发生的机制和功能成为神经科学研究的热点。神经干细胞的基因组在多种表观遗传因子和微环境的共同调节下,在特定时间和空间中表达出特异的RNA及蛋白质。新生神经细胞经过增殖、分化、迁移、整合并最终成熟为特化的神经细胞,这一过程即为成体神经发生。成体哺乳动物脑中的神经发生贯穿整个生命周期,且已在侧脑室的室管膜下区（subventricular zone,SVZ）和海马齿状回（dentate gyrus,DG）的颗粒下区（subgranular zone,SGZ）被明确证实。成体神经发生受到多种生理和病理因素的调控,与嗅球和海马等脑区的功能密切相关。移植神经干细胞治疗中枢神经系统（central nervous system,CNS）变性疾病被广泛研究并且在临床前实验中有明显的治疗效果。然而,成体神经发生的分子机制尚不明确,尤其新生神经细胞如何与CNS的神经细胞、免疫细胞、以及微环境相互作用而发挥治疗作用需要深入研究。此外,神经干细胞移植疗法还需要解决神经干细胞来源、体外培养技术、免疫排斥、移植剂量、脑部定位以及各种疾病治疗的最佳时间窗口选择等问题。总之,深入了解神经干细胞及神经发生的机制不仅会极大地推动神经科学的基础研究,也为CNS相关疾病提供了新的有效的治疗方案,有着广阔的理论和应用前景。     

端粒、端粒酶与肿瘤

端粒和端粒酶与人类的衰老和肿瘤的发生发展有着极为密切的关系，端粒是一种封闭真核染色体末端的脱氧核糖核酸，对染色体起保护作用，端粒酶是一种特异的染色体末端转移酶，它的存在解决了染色体末端复制缩短问题，同时认为端粒酶的过度表达与细胞的永生化和癌变直接相关。因此,有关端粒和端粒酶的深入研究对肿瘤的诊断和治疗有着极其重要的意义。本文对端粒和端粒酶的结构与功能，及其在细胞癌变中的重要作用进行了综述。     

放射损伤对外源骨髓间充质干细胞迁徙定植的影响

 【目的】 研究机体中枢神经系统受放射损伤时骨髓间充质干细胞(MSCs)的迁徙定植特性的改变,从而为应用MSCs治疗中枢神经系统放射损伤提供理论和实验依据? 【方法】用8周龄SD大鼠接受22GyX线照射制作枢神经系统放射损伤模型;从GFP鼠抽取骨髓,分离和扩增MSCs?中枢神经系统受放射损伤的SD大鼠4个月后予静脉输注GFP-MSCs?于移植后几个时间点取脑?骨髓?肝?脾等做冰冻切片,用双光子共聚焦红外脉冲激光显微镜检测GFP-MSCs? 【结果】 在最早24 h内实验组和对照组的骨髓中检测到外源性GFP阳性细胞,至第7天后实验组骨髓中GFP阳性细胞显著多于对照组?脑内第1天未检测到外源性GFP阳性细胞,第4天后中枢神经系统受放射损伤的SD大鼠,脑组织检测到带绿色荧光的外源性GFP阳性细胞;而对照组脑内一直未检测到带绿色荧光的外源性MSCs?实验组和对照组脾脏在输注MSCs后第1天即检测到大量GFP阳性细胞,并持续存在,第21天实验组GFP阳性细胞较对照组减少?【结论】 在放射损伤条件下外源性MSCs可透过血脑屏障到达脑组织,中枢神经系统放射损伤可诱导外源性MSCs向脑组织迁徙定植?     

胚胎干细胞源性与海马源性神经干细胞培养与分化的特性比较

【目的】探讨胚胎干细胞(ESCs)源性神经干细胞(NSCs)与海马源性NSCs的培养条件与分化特性,并进行比较研究。【方法】将拟胚体阶段视黄酸及视网膜Muler细胞诱导的ESCs和自60只BALB/c胎鼠海马组织分离的细胞(每次实验取10只),分别在NSCs选择性培养基中进行NSCs培养筛选,观察细胞形态变化,RT-PCR法检测Nestin基因表达,免疫细胞化学法检测Nestin等NSCs特异性标志物,对其分化后细胞检测Map2、Gap43、NF200、S100、GFAP神经组织细胞标志抗原,并对6次诱导结果进行观察比较。【结果】初级诱导的ESCs及海马细胞,在NSCs选择性培养基中培养,均形成大量呈Nestin抗原阳性,整合BrdU,表达Nestin基因的神经球样结构,且具有体外扩增传代及分化为神经元及神经胶质样细胞的能力。但ESCs源性NSCs增殖力更强,且分化细胞中NF200阳性细胞率42.1％±3.6％高于海马源性NSCs分化细胞中NF200阳性细胞率18.7％±5.1％,P<0.01。【结论】体外诱导可获得ESCs源性NSCs,与海马源性NSCs相比有更强的增殖力和向神经元分化的潜能,可作为干细胞移植治疗青光眼等神经变性疾病研究新的种子细胞。