三氧化二砷对人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:20只皮下接种移植瘤大小相似的BALB/c裸鼠,随机分为0.9%氯化钠液(NS)组(n=10)和As2O3组(n=10)。尾静脉注射NS0.2ml.只-1(NS组)或As2O310mg·kg-1(As2O3组),每日1次,连续7d。21d时处死所有裸鼠,测量肿瘤的重量和体积。结果:NS组瘤重0.992±0.401g、体积(1.50±0.57)mm3,As2O3组瘤重(0.526±0.269)g、体积(0.83±0.39)mm3,瘤重和体积明显下降(P<0.01)。结论:As2O3能明显抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的生长。     

三氧化二砷对人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制

目的：观察三氧化二砷（As2O3）对人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用并探讨其机制。方法：20只体质量相似的BALB/c裸鼠,皮下接种胆囊癌移植瘤随机分为0.9%氯化钠液（NS）组（n=10）和As2O3组（n=10）。尾静脉注射NS0.2mL（NS组）或As2O310mg.kg-1（As2O3组）,每日1次,连续7d。21d时处死所有裸鼠,测量肿瘤的质量和体积,同时分别用免疫组织化学法和Western blot法检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表达。结果：NS组瘤质量0.992±0.401g、体积1.50±0.57mm3,As2O3组瘤质量0.526±0.269g、体积0.83±0.39mm3,两组间均有显著差异（P〈0.01）;免疫组织化学和West-ern blot检测结果显示As2O3组肿瘤组织Cyclin D1的表达明显下降。结论：As2O3能明显抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的生长,可能通过下调Cyclin D1的表达来实现抑瘤生长。     

三氧化二砷对K562细胞增殖作用的影响和机制

目的:探讨三氧化二砷(As_2O_3)通过调控细胞周期素D1(CyclinD1)和细胞周期素依赖性激酶抑制剂p27kip1对K562细胞增殖的影响。方法:用细胞增殖实验M TT检测As_2O_3对K562细胞的增殖的影响;选取合适的药物浓度作用于K562细胞,观察As_2O_3对K562细胞凋亡的影响;进一步应用RT-PCR、免疫组织化学和Western blot方法检测As_2O_3对K562细胞CyclinD1和p27kip1表达的作用。结果:As_2O_3可以抑制K562细胞的增殖,细胞抑制率均随药物浓度增大抑制率逐渐增高,在药物作用24 h时呈明显的剂量依赖关系(r=0.9675)。在As_2O_3作用后K562细胞凋亡数量较正常对照组明显增多,其差异有统计学意义(P﹤0.05);在As_2O_3作用K562细胞48 h后CyclinD1的mRNA和蛋白的表达降低,与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.05),但p27kip1的mRNA和蛋白的表达水平没有明显增高。结论:As_2O_3可诱导K562细胞凋亡,As_2O_3可能通过调控CyclinD1的表达诱导细胞凋亡,从而抑制K562细胞的增殖。     

中华眼镜蛇毒对K562/ADM和难治性急性髓性白血病细胞作用研究

目的:探讨中华眼镜蛇毒(NNAV)对人红白血病/阿霉素细胞(K562/ADM细胞)及原代难治性急性髓性白血病细胞的作用。方法:以K562/ADM细胞及10例急性髓性白血病(AML)患者的原代初发难治性急性髓性白血病细胞为研究对象进行实验,应用不同剂量的NNAV作用于细胞后,采用噻唑蓝实验法(MTT)测定细胞增殖情况,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白Bcl2表达,流式细胞仪测定凋亡率,蛋白质印迹法检测Caspase-3表达。流式细胞仪检测NNAV对细胞周期的影响,检测原代初发难治性急性髓性白血病细胞细胞周期蛋白D(Cyclin-D)的表达情况;观察以上指标在Cyclin-D阳性表达组和阴性表达组有无差异。结果:经过不同浓度的NNAV处理后,无论是K562/ADM细胞还是初发难治性急性髓性白血病细胞,Bcl-2表达下调,Caspase-3表达上调;细胞增殖抑制明显,并具有时间依赖性及剂量依赖性。流式细胞仪检测证实0.8 mg/L和1.0 mg/L的NNAV均能够使原代初发难治性细胞阻滞于细胞周期的G0/G1期,而处于G2/M期的细胞含量减少。10例原发难治性急性髓性白血病细胞中Cyclin-D表达阳性7例,Cyclin-D表达阴性3例,但以上指标在Cyclin-D阳性表达组和阴性表达组无显著差异。结论:NNAV在体外可明显抑制K562/ADM细胞和原代初发难治性AML细胞增殖;调节细胞周期停滞于G0/G1期,减少G2/M期的细胞含量,提示NNAV有可能通过干预Bcl-2、Caspase-3表达而诱导细胞凋亡,细胞周期进程可能是中华眼镜蛇毒组分对原发难治性AML细胞的发挥增殖抑制作用的机制。     

三氧化二砷对前列腺癌PC-3细胞周期的阻滞作用

目的:研究三氧化二砷As2O诱导前列腺癌PC-3细胞生长抑制、周期()3阻滞的作用。方法:实验于2003-10/2004-05在解放军第四军医大学唐都医院中心实验室完成。应用体外细胞生长抑制试验(MTT比色法)研究As2O3对细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期分布的情况;Westernblotting检测细胞周期调节分子周期素依赖性激酶CDKs)、周期素依赖(性激酶抑制素(CDKI)和周期素的变化。结果:As2O抑制人前列腺癌细胞系PC-3生长具有时间、剂量依赖性,3MTT比色试验显示1,2,5μmol/L的三氧化二砷处理1～6d,各组之间吸光值差异有显著性意义(F=22.220,P<0.001);流式细胞术检测细胞周期分布见As2O(1,2,5μmol/L)处理72h后,随着浓度的增加,3聚集G1期的细胞增加犤(51.8±2.4)%～(58.8±2.3)%犦,各组之间比较,差异有显著性意义(χ2=15.846,P=0.01),说明可诱导PC-3细胞G1期阻滞;免疫印迹试验提示As2O可诱导PC-3细胞Cip1/p21和3Kip1/p27呈计量依赖性增加,而CDK2,6和周期素E,A下调。结论:As2O通过调节细胞周期调节素的表达来阻滞前列腺癌PC-3细3胞周期进程、抑制细胞生长,有必要进一步研究,为其在临床上用于治疗前列腺癌提供依据。     

Six1基因对As_2O_3诱导的口腔鳞癌细胞凋亡和ROS水平的影响研究

目的探讨Six1 siRNA或三氧化二砷(As_2O_3)对口腔鳞癌细胞活力、凋亡及活性氧(ROS)水平的影响。方法实验分为空白对照组(无需处理)、Six1-siRNA组(细胞转染Six1的特异性siRNA)、As_2O_3组(终浓度为5μmol/L As_2O_3处理细胞)和Six1-siRNA+As_2O_3组(Six1-siRNA及As_2O_3共同处理细胞) 4个组,siRNA转染参照Lipofectamine TM 2000说明。人口腔鳞癌CAL-27细胞处理48 h,Western blotting检测Six1及Wnt/β-catenin信号相关的β-catenin、Cyclin Dl和Survivin的蛋白表达。CCK8及流式细胞术分别检测细胞活力、凋亡率及ROS含量。结果 Six1siRNA的转染可明显降低CAL-27细胞Six1的蛋白表达,与空白对照组比较差异具有统计学意义(P 0. 05)。与空白对照组比较,Six1-siRNA组和As_2O_3组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,ROS含量明显升高,β-catenin、Cyclin Dl和Survivin的蛋白表达明显降低(P 0. 05),而联合使用的细胞活力及β-catenin、Cyclin Dl和Survivin的蛋白表达均显著低于Six1-siRNA组和As_2O_3组,凋亡率及ROS含量高于Six1-siRNA组和As_2O_3组(P 0. 05)。结论 Six1-siRNA可增加As_2O_3对口腔鳞癌细胞凋亡的诱导,机制与增加细胞ROS水平及下调Wnt/β-catenin信号有关。     

间歇性高糖对胰岛β细胞生长及细胞周期进程的影响

背景:间歇性高糖可阻滞胰岛β细胞生长,增加β细胞的凋亡,但具体作用机制尚不清。目的:观察间歇性高糖对大鼠胰岛素细胞增殖、凋亡及对细胞周期进程的影响。方法:实验对大鼠胰岛素细胞进行培养,分为正常糖对照组,恒定性高糖组和间歇性高糖组,分别含葡萄糖5.5,30,30和5.5mmol/L间歇换液。采用细胞计数试剂盒检测细胞增殖活性,流式细胞仪测定细胞周期,Annexin-V/PI双标流式细胞术检测细胞凋亡,应用Westernblot检测细胞周期调控蛋白CyclinD1的表达水平。结果与结论:与正常糖对照组相比,恒定性高糖组及间歇性高糖组均明显抑制大鼠胰岛素细胞细胞的生长(P<0.01),增加大鼠胰岛素细胞的凋亡(P<0.01),明显抑制细胞周期进程,使大鼠胰岛素细胞的细胞周期更多滞留在G0/G1期(P<0.01),能显著减弱细胞周期调控蛋白CyclinD1的表达(P<0.01)。与恒定性高糖组相比,间歇性高糖以上各指标作用均更显著(P<0.01)。结果证实,间歇性高糖能够抑制大鼠胰岛素细胞的生长,增殖和诱导凋亡,其机制可能是通过降低CyclinD1的活性,使细胞阻滞在G0/G1期,抑制细胞周期进程,从而减弱细胞的增殖活性。     

三氧化二砷上调Beclin-1诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226自噬的实验研究

目的:研究三氧化二砷诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226自噬及其机制。方法:不同浓度As_2O_3作用RPMI8226细胞不同时间后,用MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测不同浓度As_2O_3诱导RPMI8226细胞的自噬率;透射电子显微镜观察As_2O_3作用后RPMI8226细胞超微结构的变化;RT-PCR和Western blot检测不同浓度As_2O_3作用后Beclin-1 mRNA及蛋白表达的变化。结果:不同浓度的As_2O_3对RPMI8226细胞均有增殖抑制作用(P0.05),且在一定浓度和时间范围内,其抑制作用呈时间-剂量依赖性增强;随着药物浓度增加和作用时间的延长,MDC阳性细胞率(即自噬率)逐渐增加,各时间段各浓度组与其对应的对照组相比,差异有统计学意义(P0.05);As_2O_3作用RPMI8226细胞48 h后,在电子显微镜下可见典型的自噬体;RT-PCR和Western blot检测结果均显示,在1.0、2.0、5.0μmol/L As_2O_3作用RPMI8226细胞48 h后,Beclin-1表达上调(P0.05)。结论:As_2O_3可诱导RPMI8226细胞自噬,其机制可能与As_2O_3使Beclin-1表达上调有关。     

超声评价三氧化二砷量与肝癌细胞凋亡关系的实验性研究

目的探讨三氧化二砷(As_2O_3)体外诱导肝癌细胞凋亡作用,利用超声观察AszO_3对小鼠肝癌的抑瘤效果,探讨其应用价值。方法 (1)以肝癌细胞株HepG2为研究对象,在体外用浓度分别为0、1、2、4、5、6、7 μmol/L的As_2P_3。作用48 h,显微镜观察细胞形态学变化,用MTT法和流式细胞术检测As_2O_3对HepG2的抑制作用;(2)裸鼠30只,随机分成2组。皮下注射HepG2细胞悬液,制作肿瘤模型,用0.1ml的PBS和不同浓度的As_2O_3进行多点注射。观察肿瘤的超声影像改变,病理检查肿瘤坏死情况。结果 (1)As_2O_3能抑制肝癌细胞生长,呈现剂量依赖性。(2)As_2O_3根据干预浓度不同,抑瘤效果不一致,超声观察其肿瘤大小及体积之间差异有统计学意义(P0.01)。结论 As_2O_3能抑制HepG2生长,促进其凋亡,超声作为一种检查手段,可观察肿瘤生长的情况,为抑瘤效果的评价提供有价值的信息。     

RNA干扰TAK1表达以增强三氧化二砷抑制Kasumi-1细胞增殖的作用及其机制研究

目的:探讨沉默转化生长因子β激活激酶(TAK1)基因表达对三氧化二砷(As_2O_3)抑制人t(8;21)急性髓系白血病细胞株Kasumi-1增殖的影响及其可能机制。方法:实验分为4组:对照组,TAK1特异siRNA转染Kasumi-1细胞组,As_2O_3作用组及两者联合处理的Kasumi-1细胞组。采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测TAK1、p-JNK及凋亡相关蛋白的表达。结果:在0.5-20μmol/L范围内,As_2O_3作用于Kasumi-1细胞24 h能够浓度依赖性地抑制Kasumi-1细胞增殖,24 h的IC_(50)值为(3.79±0.36)μmol/L;在0.5-10μmol/L范围内,As_2O_3作用于Kasumi-1细胞48 h能够浓度依赖性地抑制Kasumi-1细胞增殖;之后As_2O_3对Kasumi-1细胞的增殖抑制作用进入平台期,48 h的IC_(50)值为(2.38±0.17)μmol/L。TAK1siRNA转染组和As_2O_3 3.5μmol/L作用24 h组,Kasumi-1细胞的增殖抑制率分别为(10.86±1.64)%和(49.80±2.19)%,凋亡率分别为(8.47±0.75)%和(24.78±2.14)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05);两者联合作用于Kasumi-1细胞的增殖抑制率为(65.63±0.83)%,凋亡率为(68.97±2.94)%,与对照组和各单独组比较,差异均有统计学意义(P0.001)。TAK1siRNA转染和As_2O_3作用Kasumi-1细胞24 h能不同程度下调TAK1、p-JNK、c-Fos、c-Jun、BCL-2的表达,上调BAX和活化型(cleaved)Caspase-3、9的表达,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05),两者联合后该作用进一步加强(P0.05)。结论:利用RNA干扰技术沉默TAK1表达能够增强As_2O_3抑制Kasumi-1细胞增殖的作用,其原因可能是通过TAK1下游的JNK信号传导通路,以及线粒体途径诱导细胞凋亡实现的。     

NM-3对体外胃癌细胞株SGC-7901的作用和机制探讨

目的：研究新小分子血管生成抑制剂NM-3对体外培养的胃癌SGC79n1细胞的作用，并探讨NM-3对胃癌抑制作用的机理。方法：将体外培养的人胃癌细胞株SGC7901用NM-3、卡铂及生理盐水处理，观察细胞的生长规律。并在不同时间段以流式细胞仪检测细胞的凋亡率，分析细胞周期分布。结果：将药物作用后1h，2h，3h，6h，12h，24h，48h，72h的胃癌SGC7901细胞通过流式细胞仪检测胃癌细胞早期凋亡率及凋亡峰。发现NM-3组（1mol／L）在72h内与对照组比较细胞早期调亡率无显著差异（P2〉0．05）；经0．1mol／L卡铂处理的细胞组早期即可诱导发生明显的凋亡，并随着时间的延长调亡率增高，呈时间依赖性，与对照组相比较，有显著差异（P〈0．05）。对细胞周期分布的分析中，NM-3组（1mg／L）Sub-G1峰与对照组比较无显著差异（P〉0．05）。而卡铂能使细胞周期发生相对变化，随着药物作用时间的增加，Go／G1期细胞增多，而S期覆G2／M期细胞则相应减少。结论：NM-3对胃癌组织的生长抑制主要是通过作用于血管内皮细胞，减少肿瘤新生血管生成。而对体外培养的人胃癌细胞无直接诱导其凋亡的作用。     

护牙素对人口腔鳞状细胞癌细胞系细胞增殖的影响

目的：探讨富士（GC）护牙素对口腔黏膜上皮细胞增殖的影响。方法：实验组用10-3浓度的GC护牙素处理人口腔鳞状细胞癌细胞系NB和NT细胞;对照组不使用护牙素,描绘生长曲线,并在处理24h后进行细胞周期测定和凋亡检测。结果：与对照组相比,10-3浓度的GC护牙素对NB和NT细胞的生长具有轻度抑制作用,GC护牙素可使NB和NT细胞中G0G1期的百分比增加,减少S期的百分比,但对细胞凋亡无影响。结论：GC护牙素可能对口腔黏膜上皮细胞的增殖具有一定的抑制作用。     

Lack of In vitro cytotoxicity, associated to increased G(2)-M cell fraction and inhibition of matrigel invasion, may predict In vivo-selective antimetastasis activity of ruthenium complexes

The ruthenium complexes trans-dichlorotetrakisdimethylsulfoxide ruthenium(II) (trans-Ru), imidazolium trans-imidazoletetrachlororuthenate (ICR), sodium trans-tetramethylensulfoxideisoquinolinetetrachlororuthenate (TEQU), and imidazolium trans-imidazoledimethylsulfoxidetetrachlororuthenate (NAMI-A) are tested in vitro by short exposure of MCF-7, LoVo, KB, and TS/A tumor cells to 10(-4) M concentration, and in vivo on Lewis lung carcinoma by a daily i.p. treatment for 6 consecutive days using equitoxic and maximum tolerated doses. NAMI-A 1) inhibited tumor cell invasion of matrigel, 2) induced a transient accumulation of cells in the G(2)-M phase, 3) did not modify in vitro cell growth, and 4) markedly reduced lung metastasis formation. TEQU showed significant cytotoxicity in vitro and was not antimetastatic in vivo. ICR and trans-Ru did not modify cell cycle distribution of in vitro tumor cells nor did they inhibit matrigel invasion; ICR was also devoid of antimetastasis effects in vivo. Ruthenium uptake by tumor cells did account for in vitro cytotoxicity but not for other in vitro actions or for in vivo antimetastasis activity. The contemporary absence of cytotoxicity, associated to inhibition of matrigel crossing and to transient block in the premitotic G(2)-M phase, appears to be prerequisites for a ruthenium compound to show in vivo-selective antimetastasis effect. The validation of this model for other classes of compounds will allow an understanding of the combined weight of the above-mentioned phenomena for tumor metastasis growth and control.     

Knockdown of c-Met by adenovirus-delivered small interfering RNA inhibits hepatocellular carcinoma growth in vitro and in vivo

c-Met is highly expressed and constitutively activated in various human tumors. We employed adenovirus-mediated RNA interference technique to knock down c-Met expression in hepatocellular carcinoma cells and observed its effects on hepatocellular carcinoma cell growth in vitro and in vivo. Among the five hepatocellular carcinoma and one normal human liver cell lines we analyzed, c-Met was highly expressed and constitutively tyrosine phosphorylated in only MHCC97-L and HCCLM3 hepatocellular carcinoma cells. Knockdown of c-Met could inhibit MHCC97-L cells proliferation by arresting cells at G0-G1 phase. Soft agar colony formation assay indicated that the colony forming ability of MHCC97-L cells decreased by approximately 70% after adenovirus AdH1-small interfering RNA (siRNA)/met infection. In vivo experiments showed that adenovirus AdH1-siRNA/met inhibited the tumorigenicity of MHCC97-L cells and significantly suppressed tumor growth when injected directly into tumors. These results suggest that knockdown of c-Met by adenovirus-delivered siRNA may be a potential therapeutic strategy for treatment of hepatocellular carcinoma in which c-Met is overexpressed.     

AG1478对GRC-1细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的:探讨表皮生长因子受体阻滞剂TyrophostinAG1478对肾癌GRC-1细胞的诱导凋亡作用及其机制,为肾癌的生物学特征研究和药物治疗提供理论依据。方法:将不同浓度的AG1478作用于体外培养的肾癌GRC-1细胞,以研究表皮生长因子受体信号转导阻滞剂对细胞增殖和细胞周期分布的影响。结果:AG1478抑制肾癌GRC-1细胞的增殖,诱导细胞周期停留在G1期,诱导肾癌GRC-1细胞凋亡。结论:表皮生长因子受体特异性阻滞剂可抑制肾肿瘤细胞的增殖,有望成为抗肾脏恶性肿瘤药物。     

黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45诱导凋亡和细胞周期的影响

目的 观察不同浓度﹑不同时间的黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45的影响.方法 应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验﹑流式细胞仪﹑细胞免疫组化等方法对人胃癌细胞MKN45进行检测.结果 MTT实验显示黄芪多糖可抑制MKN45细胞增殖;细胞周期分析提示黄芪多糖可将细胞MKN45阻滞于G0/G1期,均与浓度和时间呈正相关;免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调, Bax蛋白表达上调.结论 黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45有直接杀伤作用,同时诱导肿瘤细胞凋亡,可将细胞周期阻滞于G0/G1期,其作用机制可能通过上调促凋亡蛋白和下调抑制凋亡蛋白实现.     

黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45诱导凋亡和细胞周期的影响

目的观察不同浓度不同时间的黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验流式细胞仪细胞免疫组化等方法对人胃癌细胞MKN45进行检测。结果 MTT实验显示黄芪多糖可抑制MKN45细胞增殖;细胞周期分析提示黄芪多糖可将细胞MKN45阻滞于G0/G1期,均与浓度和时间呈正相关;免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调。结论黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45有直接杀伤作用,同时诱导肿瘤细胞凋亡,可将细胞周期阻滞于G0/G1期,其作用机制可能通过上调促凋亡蛋白和下调抑制凋亡蛋白实现。     

CD133蛋白在胆囊癌细胞株及胆囊癌组织中的表达

目的:检测CD133蛋白在胆囊癌细胞株GBC及胆囊癌组织中的表达。方法:用Hoechst染色检测CD133蛋白在胆囊癌细胞株GBC中的表达及分布;用免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法检测CD133蛋白在20例胆囊癌组织和20例正常胆囊组织中的表达。结果:Hoechst染色检测结果显示,CD133主要表达于GBC细胞株的细胞膜和细胞浆中;免疫组织化学检测结果显示,CD133蛋白在胆囊癌组织中高表达,在正常胆囊组织无表达。结论:胆囊癌细胞株及胆囊癌组织中均存在CD133蛋白的表达。