不同炮制品入药的青娥丸含药血清对人成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的:研究以不同炮制品入药的青娥丸含药血清对人成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。观察盐炙品及生品青娥丸含药血清对人成骨细胞功能的影响,探讨青娥丸对骨质疏松症的治疗机制,阐述应用盐炙品配伍入药的必要性。方法:以绝经后妇女股骨松质骨分离得到的成骨细胞为研究对象,制备以补骨脂和杜仲生品及盐炙品配伍入药的青娥丸,给予大鼠生品及盐炙品青娥丸水提液ig(10mL·kg-1),给药持续7d,第7天采集大鼠血液制备含药血清。实验分为空白组、空白血清组、青娥丸含药血清组、盐青娥丸含药血清组。采用MTT法检测各组含药血清对人成骨细胞增殖的影响;同时测量成骨细胞碱性磷酸酶活性来评价各组含药血清对人成骨细胞分化的作用;采用细胞钙茜素红染色方法对给予含药血清处理的人成骨细胞进行染色,观察对人成骨细胞矿化的影响。结果:与同浓度空白血清比较,青娥丸的生品和盐炙品的含药血清均有促进成骨细胞增殖的作用(P<0.05),且含药血清浓度相同时,青娥丸盐炙品含药血清促进成骨细胞增殖的作用优于生品含药血清(P<0.05);青娥丸生品及盐炙品含药血清具有促进成骨细胞分化的作用(P<0.05),且盐炙品的作用要优于生品(P<0.01);空白血清对成骨细胞的矿化无显著的作用,而青娥丸生品及盐炙品含药血清具有促进成骨细胞矿化结节形成的作用,且盐炙品的作用要优于生品。结论:青娥丸能提高成骨细胞增殖、分化及矿化活性,其对于骨质疏松症的治疗作用与其能显著提高成骨细胞功能有关,且盐炙品入药的青娥丸效果较好。     

不同炮制品及不同产地巴戟天中4种环烯醚萜类成分的含量测定

目的:建立UPLC同时测定巴戟天中水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷酸和车叶草苷含量的方法,并检测巴戟天不同炮制品及不同产地样品中4种环烯醚萜成分的含量。方法:采用ZOBAX SB-C_(18)(150 mm×3 mm,3.5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速为0.6 mL/min,进样量为1μL,检测波长为235 nm,柱温为40℃。结果:水晶兰苷在0.9788～7.8304μg、去乙酰基车叶草苷酸在0.4625～3.7000μg、车叶草苷酸在0.0084～0.0672μg、车叶草苷在0.0081～0.0648μg范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为99.65%、100.38%、100.21%、100.94%。不同产地24批巴戟天样品中4种环烯醚萜成分含量分别为5.642～25.250 mg/g、2.587～10.330 mg/g、0.019～0.620 mg/g和0.000～0.053 mg/g;巴戟天经不同方法炮制后,除车叶草苷含量升高外,其余3种环烯醚萜成分含量均降低;巴戟天须根及木心均含有较高的水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸。结论:所建立的含量测定方法简便、准确、重复性好,可为巴戟天质量控制提供参考。不同产地巴戟天中4种环烯醚萜成分含量差异较大,四种炮制方法均可引起成分含量变化;巴戟天须根及木心部位具有潜在利用价值。     

华中五味子含药血清对成骨细胞增殖分化的影响

目的:探讨甘肃产华中五味子对大鼠成骨细胞增殖分化的作用。方法:采用血清药理学方法,对体外培养的大鼠成骨细胞作MTT法细胞增殖测定、PNPP法ALP活性测定、以及茜素红染色矿化结节计数。结果:培养48h,10%、15%和培养72h,5%、10%华中五味子95%乙醇提取物血清组的细胞增殖速度比对照组快(P<0.01);培养48h,10%、15%和培养72h,10%华中五味子乙醇提取物血清组的ALP活性较对照组增加(P<0.05和P<0.01);培养2周,矿化结节计数显示10%华中五味子乙醇提取物血清组多于对照组(P<0.01),华中五味子水提取物各血清组对成骨细胞增殖分化没有显著作用。结论:甘肃产华中五味子95%乙醇提取物对体外大鼠成骨细胞的增殖和分化具有促进作用。     

狗脊炮制品中促进成骨细胞增殖分化成分的筛选

目的筛选狗脊炮制品正丁醇萃取物中促进成骨细胞增殖及碱性磷酸酶活性的组分;探索狗脊抗骨质疏松的机理及具体有效组分。方法将狗脊炮制品正丁醇萃取物的三氯甲烷-甲醇洗脱部分与成骨细胞共同培养,以MTT法检测细胞的增殖,用碱性磷酸酶试剂盒测定培养液中AKP酶活性。结果通过各组分与细胞共同培养,其中极性偏大的组分对细胞增殖作用较强,尤以三氯甲烷-甲醇3∶1组和3∶1-D组作用最强,且促进AKP活性也最强。结论能够显著促进成骨细胞增殖及AKP酶活性的有效成分可能存在于极性较大的3∶1-D组中,并且推测可能通过促进成骨细胞增殖及分化的机理来发挥抗骨质疏松作用。     

杜仲三萜、环烯醚萜类成分对胶原诱导性关节炎大鼠的影响

杜仲醇提物乙酸乙酯部位能有效改善胶原诱导性关节炎大鼠(collagen-induced arthritis, CIA)的关节炎症以及骨破坏情况,对类风湿关节炎有潜在的治疗作用。杜仲三萜及环烯醚萜是从杜仲醇提物乙酸乙酯部位进一步分离得出的萜类物质,其对CIA大鼠的关节炎症和骨侵蚀是否具有抑制作用尚不明确。该研究通过诱导CIA大鼠模型,观察杜仲2种萜类物质及其两者合用对大鼠关节炎的影响,进一步明确传统中药杜仲抗关节炎的物质基础,同时在给药后2、4周分别取材,观察CIA大鼠关节炎的不同阶段病理改变。对于模型对照组大鼠,随着病程的延长,足容积、关节炎评分与组织病理学病变加重,与模型对照组相比,各时期萜类给药组均可以明显降低大鼠足容积与关节炎的评分以及改善关节病变与软骨破坏。此外,各萜类给药组可以显著下调各时期脾脏中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-17(interleukin-17, IL-17)、白细胞介素-23(interleukin-23, IL-23)的mRNA表达量。在体外,杜仲总萜、三萜在质量浓度为160、320μg·mL...     

蜘蛛香中的环烯醚萜类成分及其生物活性研究进展

蜘蛛香Valeriana jatamansi不但为中国的传统中药,1977年和2010年版《中国药典》一部曾加以收载,同时也是欧洲缬草V. officinalis的重要的替代品之一。蜘蛛香的地下部位提取物在欧洲作为温和镇静剂由来已久,也是缬草制剂的主要商业来源之一。环烯醚萜类(缬草三酯类)为蜘蛛香主要有效成分之一,近年来不断从蜘蛛香中发现了大量新的环烯醚萜成分,并显示出显著的抗肿瘤、抗焦虑和治疗肠胃疾病的活性,相关的作用机制研究也受到广泛关注。该文对蜘蛛香中发现的的环烯醚萜类成分及其药理活性进行了综述,以期为蜘蛛香的研究与开发提供可借鉴的依据。     

不同性别大鼠中药含药血清对成骨细胞增殖的影响

[目的]观察不同性别大鼠的中药续断含药血清对成骨细胞增殖的影响.[方法]1)制备大鼠含药血清:取雌性与雄性Wistar大鼠各12只,按性别随机分为4组,分别为:雄性给药组,雄性对照组,雌性给药组,雌性对照组,每组各6只,给药组按体质量(4.5g/kg)分别给予续断水提液灌胃、对照组按体质量分别给予等量生理盐水.灌胃1周后取血,离心提取血清.2)分离、培养大鼠的原代成骨细胞.3)将各组大鼠血清稀释为2.5%,5%和10%3个浓度分别培养大鼠成骨样细胞,采用噻唑蓝法(MTT)检测细胞增殖能力.[结果]血清浓度为2.5%时,雌性给药组(0.569 0±0.029 5)与雄性给药组(0.361 3±0.098 3)比较,有显著性差异(P<0.05),雌性给药组与雌性对照组(0.378 7±0.047 6)比较,也有显著性差异(P<0.01);当血清浓度为5%时,雌性给药组(0.879 3±0.100 7)与雄性给药组(O.356 0±0.048 2)比较,有显著性差异(P<0.01),雌性给药组与雌性对照组(0.386 3±0.018 0)比较,也存在显著性差异(P<0.01);当血清浓度为10%时,雌性给药组(0.856 0±0.017 5)与雌性对照组(0.381 7±0.198 6)比较,存在显著性差异(P<0.05).在各浓度的血清中,雄性给药组与雄性对照组之间均无显著性差异.[结论]大鼠的续断含药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用.这种作用在雌性大鼠的血清中表达强于雄性大鼠.     

淫羊藿总黄酮含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响

目的:研究淫羊藿总黄酮含药血清对体外培养成骨细胞增殖与分化功能的影响,进一步揭示淫羊藿"补肾壮阳,益精健骨"的作用机制。方法:采用中药血清药理学方法制备含淫羊藿总黄酮大鼠血清;用多次酶消化法体外培养成骨细胞;将含淫羊藿总黄酮大鼠血清(SRAT)以2.5%,5%,10%三种质量浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,研究它们对细胞增殖与分化成熟的影响。细胞增殖采用MTT法进行分析;细胞分化并于培养第4、8、12、16天检测碱性磷酸酶活性(组织化学法)、Ⅰ-型胶原(Co-l)的表达(免疫组化法)和矿化结节(组织化学法)。结果:2.5%和5%SRAT表现出强烈的刺激细胞增殖活性并显著提高碱性磷酸酶活性、矿化结节数和Ⅰ-型胶原表达。结论:淫羊藿总黄酮代谢产物强烈刺激成骨细胞的增殖并促进其分化成熟,说明淫羊藿总黄酮代谢产物具有促进骨形成活性。     

健骨颗粒含药血清对成骨细胞增殖的影响

目的：探讨健骨颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。方法：采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布。结果：与同浓度生理盐水血清相比,20%健骨颗粒含药血清能明显促进体外培养成骨细胞增殖（P〈0.05）,明显降低G0/G1期细胞分数（P〈0.01或P〈0.05）,提高S期、G2/M期细胞分数和增殖指数（P〈0.01或P〈0.05）。结论：健骨颗粒含药血清能推进体外培养成骨细胞细胞周期,从而促进成骨细胞增殖。     

左归丸含药血清对成骨细胞增殖功能的影响

左归丸出自明代名家张景岳的<景岳全书·新方八阵>.我们以往的研究显示,左归丸对卵巢切除大鼠所致骨质疏松具有明显的治疗作用[1].本实验拟采用体外成骨细胞培养的方法,进一步探讨左归丸治疗骨质疏松症的机理.     

芦丁含药血清对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化成熟的影响

目的 研究芦丁含药血清(Serum of rats administered Rutin,SR)对体外培养大鼠乳鼠颅骨成骨细胞(Rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖和分化成熟的影响.方法 ①取出生24 h 内的Wistar 大鼠颅骨,采用酶解法分离获得成骨细胞,培养于含10%类标准胎牛血清(...     

二至丸含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的 研究二至丸含药血清对体外培养大鼠成骨细胞(Osteoporosis,OP)增殖、分化及矿化的影响.方法 二至丸(9,4.5,2.25 g/kg/d)给大鼠连续灌胃7d,每天2次,于第8天灌胃后1～2 h眼眶取血制备含药血清,采用多次酶消化法获得大鼠原代成骨细胞,将含药血清加入成骨细胞培养液中,采用MTT比色法、碱性磷酸酶(ALP)染色法、茜素红染色法研究其对细胞增殖及功能的影响.结果 二至丸含药血清能不同程度地促进大鼠原代成骨细胞的增殖,二至丸中剂量在24,48,72 h均能显著促进大鼠原代成骨细胞的增殖(P＜0.05);二至丸中、小剂量能显著增加大鼠原代成骨细胞ALP活性(P＜0.05)和矿化结节的数量(P＜0.05),其中二至丸中剂量效果最为显著(P＜0.01).结论 二至丸含药血清具有良好的促进成骨细胞增殖、分化、矿化的作用,其中二至丸中剂量组作用效果尤为显著.     

抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的探讨抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化及骨保护蛋白(OPG)和核因子-кB受体活化子配体(RANKL)蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备含抗骨增生胶囊大鼠血清。取乳鼠颅骨,利用复合胶原蛋白酶反复消化,离心,体外培养成骨细胞。加入不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测中药血清对成骨细胞增殖的影响,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Western Blot检测OPG和RANKL蛋白表达。结果成骨细胞经抗骨增生胶囊含药血清作用后,细胞的生长呈现不同程度的增殖,中、高剂量中药组在24、48、72 h均有明显的促进作用(P0.01),且呈剂量依赖性。低剂量中药组在24、48 h时与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05),72 h时作用较强(P0.05)。除低剂量组培养24 h外,低、中、高剂量中药组培养24、48、72 h后,ALP分泌均呈不同程度增加,均有明显的促进作用(P0.01)。成骨细胞经过抗骨增生胶囊含药血清低、中、高剂量作用72 h后,对比值进行统计分析,与空白对照组比较,OPG表达明显升高(P0.01),RANKL表达明显降低(P0.01)。结论抗骨增生胶囊含药血清可以促进成骨细胞的增值、分化,从而促进骨形成。     

不同炮制品及不同产地巴戟天中4种环烯醚萜成分的含量测定

目的:建立UPLC同时测定巴戟天中水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷酸和车叶草苷含量的方法,并检测巴戟天不同炮制品及不同产地样品中4个环烯醚萜成分的含量。方法:采用ZOBAX SB-C18(150 mm×3mm,3.5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速为0.6 mL/min,进样量为1μL,检测波长为235 nm,柱温为40℃。结果:水晶兰苷在978.8~7830×10-3μg、去乙酰基车叶草苷酸在462.5~3700×10-3μg、车叶草苷酸在8.1~64.8×10-3μg、车叶草苷在8.4~67.2×10-3μg范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为99.65%、100.38%、100.21%、100.94%。不同产地24个巴戟天样品中4种环烯醚萜成分含量范围分别为5.642~25.250 mg/g、2.587~10.330 mg/g、0.019~0.620 mg/g和0.000~0.053 mg/g;巴戟天经不同方法炮制后,除车叶草苷含量升高外,其余3种环烯醚萜成分含量均降低;巴戟天须根及木心均含有较高的水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸。结论:所建立的含量测定方法简便、准确、重复性好,可为巴戟天质量控制提供参考。不同产地巴戟天4种环烯醚萜成分含量差异较大,四种炮制方法均可引起成分含量变化;巴戟天须根及木心部位具有潜在利用价值。     

蜘蛛香中的环烯醚萜类成分及其抗流感病毒活性研究

目的研究蜘蛛香Valeriana jatamansi根及根茎的环烯醚萜成分及其抗流感病毒活性。方法采用正相硅胶柱色谱、羟丙基葡聚糖凝胶(SephadexLH-20)和高效液相色谱(HPLC)等色谱方法进行分离纯化,根据理化性质和NMR波谱技术对化合物进行结构鉴定,同时用流感A/WSN/33/2009(H1N1)病毒感染MDCK细胞模型评价化合物的抗流感病毒活性。结果从蜘蛛香的醋酸乙酯部位中共分离鉴定了20个环烯醚萜类成分,分别鉴定为缬草醛(1)、11-methoxyviburtinal(2)、去酰基缬草醛(3)、异缬草素(4)、去乙酰基异缬草素(5)、10-isovaleroxy-valtrathydrin(6)、jatamanvaltrate Q(7)、缬草醚F(8)、isovaltrate acetoxyhydrin(9)、jatamanvaltrate K(10)、rupesin B(11)、patriscadoid II(12)、jatamanvaltrate W(13)、patriscadoidI(14)、缬草醚D(15)、蜘蛛香素E(16)、jatamaninC(17)、(...     

甘遂不同炮制品中二萜类成分的变化研究

目的比较甘遂炮制前后各炮制品中二萜类成分甘遂萜酯B和甘遂萜酯A含有量的变化,以期揭示上述成分与甘遂醋炙减毒作用的关联性。方法采用HPLC法测定甘遂各炮制品中二萜类成分甘遂萜酯A、甘遂萜酯B,以X TerreRP C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm)为固定相;流动相为甲醇(A)-水(B)二元梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长235 nm,柱温38℃。结果假白榄烷型二萜类成分甘遂萜酯A和甘遂萜酯B经炮制后均有所降低,其质量分数高低顺序为生品>清炒品>醋润品>醋炙品。结论甘遂醋炙前后甘遂萜酯A与甘遂萜酯B的含有量变化与甘遂醋炙减毒有一定的关联性。     

环烯醚萜类成分提取分离与含量测定方法的研究进展

环烯醚萜是中药中一类重要的二次代谢产物,具有多种药理作用。本文总结了近年来关于该类化合物的提取分离与含量测定方法的研究进展,为该成分的深入探索提供参考。     

益骨口服液含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的:探讨益骨口服液含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法:取SD大鼠40只,雌雄各半。将大鼠分为A组(高剂量组)、B组(中剂量组)、C组(低剂量组)、D组(空白组),E组(对照组)。按照不同的剂量灌胃。灌胃10d后,制备含药血清;将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中,然后应用MTT法、硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化。结果:经过10d益骨口服液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量(P0.05或P0.01)、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成明显。结论:证实了益骨口服液含药血清可以促进成骨细胞增殖、分化及矿化。     

股密葆含药血清对成骨细胞分化成熟的影响及其作用机制

目的：探讨股密葆含药血清对成骨细胞分化成熟的影响及其作用机制.方法：将20只2月龄雌性SD大鼠随机分成4组,对照组8只,高、中、低浓度股密葆组各4只.对照组按10 mL·kg-1体质量以生理盐水灌胃,高浓度组按10 mL·kg-1体质量以2 430 mg· mL-1股密葆混悬液灌胃,中浓度组按10 mL·kg-1体质量以1 215 mg· mL-1股密葆混悬液灌胃,低浓度组按10mL·kg-1体质量以607.5 mg· mL-1股密葆混悬液灌胃.每天灌胃1次,连续3d.末次灌胃后lh提取各组实验大鼠含药血清,低温保存备用.将10只新生SD大鼠处死,取其颅骨,采用多次酶消化法分离出成骨细胞.将第1代成骨细胞分别在含有对照组大鼠血清及高、中、低浓度股密葆含药血清的培养基中培养1周后,采用染色法检测碱性磷酸酶表达情况,采用Western Blotting法检测Ⅰ型胶原、Runt相关转录因子2、β连环素及转录因子4的蛋白表达情况.结果：①成骨细胞中碱性磷酸酶的表达.与对照组比较,各浓度股密葆含药血清组碱性磷酸酶染色较深,其中中浓度组染色最深.②成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白的表达.对照组、高浓度组、中浓度组、低浓度组Ⅰ型胶原蛋白的表达量比较,差异有统计学意义[（1.172±0.047）,（2.023±0.131）,（2.792±0.737）,（2.235±0.525）,F=6.466,P=0.016].组间两两比较,中浓度组、低浓度组高于对照组（P=0.003,P=0.022）;高浓度组与对照组比较,差异无统计学意义（P=0.052）;其余各组间比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）.③成骨细胞中Runt相关转录因子2蛋白的表达.各组Runt相关转录因子2蛋白的表达量比较,差异有统计学意义[（1.968±0.263）,（2.255±0.286）,（2.675±0.181）,（2.652±0.211）,F=6.066,P=0.019].组间两两比较,中浓度组、低浓度组高于对照组（P=0.007,P=0.008）;高浓度组与对照组比较,差异无统计学意义（P=0.180）;其余各组间比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）.④成骨细胞中β连环蛋白的表达.各组β连环蛋白表达量比较,差异有统计学意义[（1.571±0.140）,（2.264±0.265）,（2.783±0.432）,（2.860±0.576）,F=6.980,P=0.013].组间两两比较,中、低浓度组均高于对照组（P =0.005,P=0.004）;高浓度组与对照组比较,差异无统计学意义（P=0.061）;其余各组间比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）.⑤成骨细胞中转录因子4蛋白的表达.各组转录因子4蛋白表达量比较,差异有统计学意义[（3.268±0.298）,（3.941±0.360）,（4.446±0.443）,（4.186±0.249）,F=6.431,P=0.016].组间两两比较,高、中、低浓度组均高于对照组（P=0.044,P=0.003,P=0.012）;其余各组间比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论：适当浓度股密葆含药血清可促进成骨细胞的分化,其作用机制或许与Wnt/β连环素信号通路的激活有关.