CYP1A2基因在三氯乙烯毒性中的作用研究

[目的]应用分子克隆技术,建立CYP1A2基因沉默细胞株和CYP1A2基因高表达细胞株,研究CYP1A2基因对三氯乙烯毒性的影响.[方法]将三氯乙烯分别染毒L02肝细胞、CYP1A2基因沉默细胞和CYP1A2基因高表达细胞,染毒剂量分别为0.25 mmol/L、0.50 mmol/L、1.00 mmol/L、2.00 mmol/L和4.00 mmol/L,以DMSO作为对照溶剂,染毒12 h,观察凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、c-myc、k-ras、P53)表达水平.[结果]三氯乙烯染毒CYP1A2基因沉默细胞后,Bcl-2的mRNA表达水平高于对照组(P＜0.01),三氯乙烯部分剂量组凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和癌基因c-fos、c-myc表达水平低于对照组(P＜ 0.05或P＜0.01).三氯乙烯染毒CYP1A2基因高表达细胞后,Bcl-2的mRNA表达水平相比对照组下降(P＜0.01),Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达水平相比对照组升高(P＜0.01); CYP1A2高表达细胞中癌基因c-fos、c-myc、k-ras表达水平高于对照组(P＜0.01),P53表达水平低于对照组(P＜0.01).[结论]在体内代谢与CYP1A2存在密切关系,沉默CYP1A2基因可以减少三氯乙烯在肝细胞内代谢活化,导致三氯乙烯对凋亡基因和癌基因表达水平下降;三氯乙烯在CYP1A2基因高表达细胞中,表现出对凋亡基因和癌基因的促进表达作用.     

CYP2C9基因高表达细胞株对三氯乙烯毒性影响

目的建立细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)基因高表达肝细胞株(L02),并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响。方法 PCR扩增CYP2C9基因并将其克隆到慢病毒表达载体中,然后转染293T细胞,收集病毒上清,感染正常L02细胞。采用荧光定量PCR和western blot筛选鉴定CYP2C9高表达细胞株。分别采用浓度为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mmol/L的TCE染毒剂量组对L02细胞和CYP2C9基因高表达细胞株染毒24h,同时设置二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组即0mmol/L染毒剂量组,观察L02细胞和CYP2C9基因高表达细胞株细胞增殖能力的变化以及凋亡基因Bcl-2和caspase-3表达变化。结果酶切和测序结果证明CYP2C9基因成功插入PCDH-MCS-EF1-GFP-T2A-PURO载体。CYP2C9高表达细胞株的CYP2C9 mRNA和蛋白相对表达水平分别较对照普通L02细胞升高107.3%和257.9%。TCE染毒后,2.0、4.0、8.0、16.0 mmol/L染毒剂量组CYP2C9基因高表达细胞抑制率与L02细胞相比,低于相同浓度TCE处理的L02细胞。TCE染毒后,通过荧光定量PCR和WB检测,发现TCE 2.0和8.0mmol/L染毒剂量组CYP2C9基因高表达细胞的Bcl-2表达水平低于相应染毒剂量组L02细胞,而TCE 0.0、0.5、2.0、8.0 mmol/L剂量组CYP2C9基因高表达细胞的caspase-3表达水平高于普通L02细胞。结论三氯乙烯对正常肝细胞和CYP2C9基因沉高表达细胞凋亡基因Bcl-2存在差异,提示CYP2C9与三氯乙烯在生物体内毒性存在一定关系。     

CYP1A2基因沉默及其对三氯乙烯毒性影响

目的 构建细胞色素氧化酶1A2(CYP1A2)基因沉默载体,转染L02人正常肝细胞(简称“L02细胞”),建立CYP1A2沉默细胞株并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响.方法 设计合成短发卡RNA(shRNA),连接到pLKO.1-puro质粒中构建CYP1 A2 shRNA慢病毒表达载体,感染L02细胞.筛选CYP1A2沉默细胞株,采用荧光定量聚合酶链式反应和免疫印迹法鉴定.分别采用浓度为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L的TCE(设为相应的染毒剂量组)对L02细胞和CYP1A2沉默细胞染毒12h,同时设置二甲基亚砜溶剂对照组(即0.00 mmoL/L染毒剂量组),观察凋亡基因[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9]和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)等基因表达的变化.结果 测序证明插入pLKO.1-puro载体的CYP1A2基因干扰序列与设计的shRNA 序列一致.CYP1A2沉默细胞的CYP1A2mRNA和CYP1A2蛋白相对表达水平分别较L02细胞下降75.9％和82.4％(P＜0.01).TCE染毒后,0.25 ～4.00 mmol/L 4个染毒剂量组CYP1A2沉默细胞Bcl-2表达水平均高于相应染毒剂量组L02细胞(P＜0.01);部分0.25 ～4.00 mmol/L染毒剂量组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和c-fos、c-myc k-ras、p53相对表达水平均低于相应染毒剂量组的L02细胞(P＜0.05或P＜0.01).结论 CYP1A2沉默降低TCE对L02细胞凋亡基因和癌基因的活化作用.     

CYP2C9基因沉默细胞株构建及其对三氯乙烯毒性的影响

目的建立细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)基因沉默正常肝细胞株(L02)并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响。方法设计合成短发卡RNA(shRNA)将其连接到PLVX-shRNA2P质粒中构建CYP2C9 shRNA慢病毒表达载体,感染L02细胞。采用荧光定量PCR和western blot筛选鉴定CYP2C9沉默细胞株。分别采用浓度为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mmol/L的TCE染毒剂量组对L02细胞和CYP2C9基因沉默细胞株染毒24 h,同时设置二甲基亚砜溶剂对照组即0 mmol/L染毒剂量组,观察L02细胞和CYP2C9基因沉默细胞株细胞周期的变化以及凋亡基因Bcl-2和caspase-3表达变化。结果酶切和测序结果证明插入PLVX-shRNA2P载体的CYP2C9基因干扰序列与设计的shRNA序列一致。CYP2C9沉默细胞株的CYP2C9 m RNA和蛋白相对表达水平分别较shRNAc沉默对照细胞下降76.0%和78.6%。TCE染毒后,0.5、2.0、8.0 mmol/L 3个染毒剂量组CYP2C9基因沉默细胞和L02细胞周期没有发生显著变化。TCE染毒后,2.0和8.0 mmol/L染毒剂量组CYP2C9基因沉默细胞的Bcl-2表达水平均高于相应染毒剂量组L02细胞,而0.5、2.0、8.0 mmol/L 3个染毒剂量组CYP2C9基因沉默细胞的caspase-3表达水平没有显著变化。结论三氯乙烯对正常肝细胞和CYP2C9基因沉默细胞凋亡基因Bcl-2存在差异,提示CYP2C9与三氯乙烯在生物体内毒性存在一定关系。     

三氯乙烯对肝细胞一氧化氮和诱导型一氧化氮合酶表达水平的影响

[目的]研究三氯乙烯（TCE）染毒对L-02肝细胞一氧化氮（NO）合成和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达水平的影响。[方法]用TCE不同浓度（0、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mmol／L）和1.0mmol／LTCE不同染毒时间（0、1、2、6、12、24h）染毒肝细胞。按试剂盒说明检测细胞培养液中NO浓度;提取肝细胞RNA,用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测肝细胞iNOS mRNA相对表达量。用全自动生化分析仪测定TCE染毒肝细胞后培养液中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和乳酸脱氢酶（LDH）活性。[结果]不同浓度TCE染毒肝细胞24h后,各染毒组和对照组比较,NO和iNOS mRNA表达水平均明显升高;用同一浓度TCE（1.0mmol／L）染毒不同时间,≥2h染毒时间引起NO合成和iNOS mRNA表达水平升高。TCE各剂量组染毒后ALT、AST和LDH高于对照组。[结论]TCE染毒肝细胞可诱导肝细胞iNOS mRNA表达水平升高和NO合成增加,并对肝细胞有一定的损伤作用,提示TCE的肝细胞损害作用可能与NO产生有关。     

三氯乙烯变态反应病人外周血凋亡基因表达水平的研究

目的:探讨三氯乙烯(TCE)变态反应病人外周血凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9的mRNA表达水平变化情况。方法:抽取健康人(对照组)和三氯乙烯变态反应病人(病例组)抗凝外周全血,采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR)技术检测外周血中BAX、BAD、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9的mRNA的表达水平。结果:TCE变态反应病人(病例组)BAX、BAD、Bcl-2基因mRNA表达水平与对照组相比较,分别升高85%1、39%、227%(P<0.01);病例组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9基因mRNA表达水平也比对照组分别升高130%、231%2、49%(P<0.01)。结论:三氯乙烯病人外周血凋亡基因表达水平明显高于对照组,提示这些凋亡基因可能与TCE引起的变态反应存在一定的关联。     

三氯乙烯诱导人角质形成细胞凋亡中Caspase-3活力的研究

目的 观察三氯乙烯(TCE)诱导离体培养的人角质形成细胞(KC)Caspase-3活力变化及细胞凋亡情况,探讨TCE诱导KC凋亡的可能信号通路.方法 以不同浓度(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mmol/L)TCE对离体分离培养的KC分别染毒至4、8、12、24 h;Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-FMK)预处理组,先用100 μmol/L Z-DEVD-FMK预处理细胞1 h,然后再用2.000 mmol/L TCE染毒12 h.用分光光度法检测细胞Caspase-3活力变化,借助Annexin-V/PI双染和流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 与空白对照相比,TCE染毒4 h,各TCE剂量组Caspase-3活力无明显变化(P>0.05);染毒8 h,1.000 mmol/LTCE组Caspase-3活力和2.000 mmol/LTCE组Caspase-3活力,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);TCE染毒12 h和24 h,各TCE剂量组Caspase-3活力明显升高,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且呈剂量-效应关系.各TCE剂量组,在TCE浓度达到0.250 mmol/L以后,细胞凋亡率与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且明显呈剂量-效应关系.Z-DEVD-FMK预处理组,与2.000 mmol/L TCE组比较,Caspase-3活力和细胞凋亡率明显得到抑制(P<0.01),而与空白对照相比差异无显著性(P>0.01).结论 在TCE诱导离体培养的KC凋亡中,Caspase-3的活化可能发挥了重要的作用.     

三氯乙烯染毒对豚鼠肝功能与凋亡基因表达的影响

目的探讨使用三氯乙烯(TCE)染毒对豚鼠肝功能和肝细胞凋亡基因(BAX、BAD、Bc1-2)表达的影响。方法将24只豚鼠随机分为3组,采用豚鼠最大值法(GPMT),设立TCE实验组、阴性对照组、阳性对照组,用皮内注射的方式分别注射TCE、橄榄油、2,4-二硝基氯苯(DNCB),实验结束后观察动物皮肤改变,应用自动生化分析仪检测动物肝功能指标,用荧光定量PCR检测肝细胞凋亡基因表达水平。结果 TCE实验组和阳性对照组动物出现明显皮肤损害。TCE实验组动物血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活力明显高于阴性对照组(P0.05或P0.01)。肝细胞BAX、BAD的mRNA表达水平比阴性对照组显著升高,Bc1-2表达水平下降(P0.05或P0.01)。结论三氯乙烯可诱导豚鼠产生明显的皮肤变态反应,引起实验动物肝功能指标改变和肝细胞凋亡基因表达水平明显改变。     

DDC等药物对急性羰基镍中毒大鼠肝脏SOD活力及Cu-Zn SOD基因表达影响

目的评价大鼠急性羰基镍中毒后多种药物及药物联合干预对于肝脏SOD活力及Cu-Zn SOD基因表达的影响。方法将SD大鼠分为正常对照组、染毒对照组和五个药物治疗组,药物治疗组大鼠静态吸入250 mg/m³羰基镍染毒30min,分别于染毒后4h和30h腹腔注射二乙基二硫氨基甲酸钠（DDC）、甲泼尼龙、亚硒酸钠、DDC+甲泼尼龙、参附回阳汤,染毒对照组染毒后不予药物治疗,3d和7d时取材,应用黄嘌呤氧化酶测定法和反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分别测定肝脏SOD活性并分析Cu-Zn SOD基因表达水平。结果与正常组相比较,染毒组肝脏SOD活力和Cu-Zn SOD基因表达均明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。 染毒后4h给药,肝脏SOD活力明显高于染毒后30h给药,具有统计学差异（P<0.05）。与染毒组相比较,染毒后4h、30h给予DDC,3d和7d时肝脏SOD活力和Cu-Zn SOD基因明显升高（P<0.05）,30h时给予DDC,3d和7d时肝脏SOD活力明显升高（P<0.05）;染毒后4h和30h给予甲泼尼龙,SOD和Cu-Zn SOD水平未见明显升高,差异无统计学意义（P>0.05）;染毒后4h给予DDC+甲泼尼龙,SOD水平明显升高（P<0.05）。结论急性羰基镍中毒后,DDC对于逆转羰基镍急性中毒所造成的肝脏抗氧化物酶及其基因损伤效果确切,且早期给药效果优于晚期给药;DDC联合甲泼尼龙也可逆转肝脏抗氧化物酶的损伤,但对于基因层面的损伤应用意义不大;而亚硒酸钠和参附回阳汤对于逆转抗氧化物酶水平和基因损伤效果尚不确切。     

活性氧在氯化镉诱导的小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的 探究活性氧(reactive oxygen species, ROS)在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导的睾丸间质细胞毒性中的潜在作用及机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒小鼠睾丸间质TM3细胞24 h。CCK-8法检测CdCl₂对TM3细胞活性的影响;Hoechst33342染色法检测凋亡小体;DCFH-DA探针法检测TM3细胞ROS水平;1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)预处理1 h后用10μmol/L CdCl₂染毒TM3细胞24 h, Western blot检测细胞内促凋亡蛋白Caspase-9和cleaved Caspase-3的表达水平;RT-qPCR检测细胞内抗凋亡基因Bcl-2以及促凋亡基因Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,TM3细胞活力降低且凋亡小体数量增加。10μmol/L CdCl<...     

三氯乙烯诱导人角质形成细胞凋亡过程中caspase-8及caspase-9活力的变化

目的 观察三氯乙烯(TCE)致人原代角质形成细胞(KC)损伤过程中caspase-8、caspase-9活力及细胞凋亡率的变化,探讨TCE引起KC凋亡的可能机制.方法 体外培养的KC分别给予0.125、0.250、0.500、1.000和2.000mmol/L的TCE染毒4、8、12、24 h,以100μmol/L的caspase-9特异抑制剂Z-LEHD-FMK预处理细胞1 h,再用2.000mmol/LTCE染毒12 h.MTT法检测细胞活力变化,分光光度法检测caspase-8及caspase-9活力变化.流式细胞仪检测细胞凋亡率变化.结果 与空白对照相比,2.000和1.000 mmol/LTCE染毒组作用8 h后细胞活力降低.染毒超过12 h,各剂量组细胞活力均降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).在不同的时间段,各剂量组的caspase-8活力与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).染毒8 h时,2.000mmol/LTCE组caspase-9活力明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);12和24h时,各剂量组caspase-9活力与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).不同剂量的TCE染毒12 h后,2.000 mmol/L TCE染毒组细胞凋亡率升高至(80.43±4.21)%,空白对照组为(9.40±2.98)%,除0.125 mmol/LTCE组外,其他各染毒组的细胞凋亡率与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),剂量-效应关系明显.Caspase-9抑制剂预处理组caspase-9活力及细胞凋亡率较2.000mmol/L TCE染毒组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Caspase-9的活化在TCE诱导的体外培养的人KC的凋亡过程中发挥重要作用.     

二氯乙酸对淋巴细胞的毒性和CXCR2/3表达的作用

目的 探讨三氯乙烯及其代谢产物对淋巴细胞增殖的影响以及二氯乙酸在三氯乙烯药疹样皮炎发病过程中的作用.方法 抽取健康人外周静脉血,分离淋巴细胞,分别在2 h和4 h检测0.02 0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、30.00mmol/L共12个浓度二氯乙酸、三氯乙烯、三氯乙酸刺激培养的淋巴细胞增殖能力;通过中性红试验找到二氯乙酸的半数致死量(NR_(50)),依据NR_(50)检测细胞在不同浓度二氯乙酸刺激下乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用实时荧光定量技术检测二氯乙酸刺激下体外培养的淋巴细胞CXCR2和CXCR3基因mRNA的表达情况.结果 细胞增殖能力检测结果显示,20.00mmol/L二氯乙酸刺激时的细胞活力为50%,而30.00mmol/L三氯乙烯和三氯乙酸刺激的细胞活力仍保持在60%以上.与对照组相比,染毒4 h时各剂量二氯乙酸刺激时SOD活力均明显降低,并且酶活力随剂量的升高呈下降趋势,差异均有统计学意义(P<0.05).第4 h在0.88、1.75、3.50、7.00mmol/L二氯乙酸刺激时的LDH活力与第1 h比较,差异均有统计学意义(P<0.05).在0.5、10.0 mmol/L二氯乙酸刺激培养48 h下,CXCR 2和CXCR3基因mRNA的表达分别是对照细胞表达量的10.34、5.66倍和19.43、8.75倍,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 二氯乙酸对体外培养的淋巴细胞具有较强的毒性作用,可能是三氯乙烯药疹样皮炎的主要诱导剂.     

三氯乙烯药疹样皮炎患者免疫相关基因的表达水平

目的 探讨三氯乙烯(TCE)药疹样皮炎患者外周血免疫相关基因Foxp3、GATA3、CTLA4、T-bet的mRNA表达.方法 选取TCE药疹样皮炎患者8例为病例组,8例健康人为对照组,抽取两组对象的外周血,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术检测外周血免疫相关基因Foxp3、GATA3、CTLA4、T-bet的mRNA的表达水平.结果 与对照组比较,病例组Foxp3、GATA3、CT-LA4基因mRNA表达水平分别升高115％、97％和241％,差异有统计学意义(P＜0.01);与对照组比较,病例组T-bet基因mRNA表达水平下降47％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 TCE药疹样皮炎的部分免疫相关基因表达水平发生明显改变,这些基因可能在TCE引起的变态反应中发挥重要作用.     

三氯乙烯对角质形成细胞线粒体功能和形态的影响

目的探讨三氯乙烯（TCE）对皮肤细胞的毒性机制。方法以不同浓度（0．125、0．500和2．000mmol／L）TCE处理体外分离培养的正常人角质形成细胞（KC），同时设培养基对照组和体积分数为1％的丙酮对照组，然后：（1）分别进行四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）试验和ATP酶活力测定来检测细胞毒性和线粒体的代谢变化；（2）采用罗丹明123染色方法，借助流式细胞仪检测线粒体膜电位变化情况；（3）通过透射电子显微镜观察线粒体形态学的改变。结果TCE染毒后，细胞活力随着时间延长和剂量的增加而减小，线粒体酶活力抑制率增加，ATP酶活力减小；线粒体膜电位水平从染毒开始到8h迅速下降2．000mmol／LTCE染毒8h后Rh123荧光强度（8．20±0．66）与对照组（18．73±0．45）相比，差异有统计学意义（P〈0．01）；8h以后则变化不大，12和24h Rh123荧光强度与8h组比较，差异无统计学意义（P〉0．05），线粒体膜电位随染毒剂量的增加呈明显的剂量-效应关系。电镜下可见，TCE处理组线粒体出现肿胀，空泡变性，基质减少，部分嵴消失，对照组线粒体结构完整，基质分布均匀，可见线粒体嵴。结论TCE可以导致KC线粒体功能和形态发生明显改变，这些变化在TCE诱导的KC毒性中具有重要的意义。     

三氯乙烯诱导皮肤角质形成细胞凋亡的体外研究

目的 检测三氯乙烯（TCE）对人表皮角质形成细胞（NHEK）的凋亡诱导作用,探讨TCE皮肤毒性的作用靶.方法 采用中性红吸附试验测定TCE对体外无血清培养的NHEK的中性红吸附减少50%的浓度（NR50值）,确定TCE染毒剂量;测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力反映细胞脂质过氧化作用和氧化状态;用透射电子显微镜（TEM）和流式细胞仪（FCM）观察细胞凋亡形态学改变和测定细胞DNA含量,计算凋亡发生率及增殖指数（PI）.结果 TCE对NHEK的NR50值为4.53（3.92～5.13）mmol/L;TCE处理NHEK 4 h后,MDA含量的增加和SOD活力的抑制均具有剂量-效应关系（r=0.98,r=0.93,P＜0.01）;TEM观察显示,与对照相比,TCE处理组细胞可见明显凋亡改变;FCM测定显示,DNA含量直方图中G1期前可见明显的凋亡峰,与对照组相比,TCE处理组细胞凋亡率明显增高（空白对照及TCE 0.125、0.500、2.000 mmol/L组分别为18.42%、31.83%、38.63%、44.35%）,而PI则明显降低（空白对照及TCE 0.125、0.500、2.000 mmoL/L组分别为4.99%、3.26%、2.48%、2.07%）.结论 在体外培养条件下,TCE可通过脂质过氧化和氧化应激作用诱导NHEK凋亡,抑制其增殖.     

低剂量三氯乙烯诱导下谷胱甘肽转移酶Ω-1的表达变化

目的分析低剂量三氯乙烯(TCE)诱导的细胞兴奋效应时,谷胱甘肽转移酶Ω-1(GSTO-1)的表达变化。方法利用前期的双向电泳和质谱结果,参照前期兴奋效应的剂量设计,提取染毒细胞的mRNA和总蛋白,进一步使用实时定量RT-PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白水平上验证GSTO-1的表达变化。结果 Western blotting分析发现,0.1mmol/LTCE剂量组能诱导GSTO-1蛋白表达是对照组的2倍,但随着剂量的增加,蛋白表达改变不明显(与对照组相比,P<0.05)。RT-PCR结果提示:低剂量TCE能诱导GSTO-1基因表达增加,随着剂量的增加,表达反而有所减少。结论低剂量TCE能诱导GSTO-1基因及蛋白表达增加。     

甜菜碱对脂肪变性HepG2细胞Hcy、SAM／SAH及脂代谢相关基因mRNA表达的影响

目的探讨甜菜碱对脂肪变性HepG2细胞同型半胱氨酸（Hey）水平、S腺苷蛋氨影S腺苷同型半胱氨酸（SAM／SAH）比值及脂代谢相关基因mRNA表达的影响。方法60mg／L油酸作用24h诱导非酒精性脂肪变性HepG2细胞模型,分别按脂肪变性模型组、2．5、5、10mmo／／L甜菜碱组进行干预,同时设空白对照组,每组设3个复孔。各组细胞培养24h后油红O-苏木素染色观察细胞脂滴形成情况,酶法测定甘油三酯（TG）浓度,高效液相色谱法（HPLC）测定Hey浓度和SAM／SAH比值,RT—PCR检测MTP、APOB及DGAT2mRNA的表达。结果与空白对照组比较,脂肪变性模型组的培养基中Hey浓度上升（P〈0．05）;而甜菜碱各剂量组与空白对照组比较则差异均无统计学意义（均P〉0．05）。与空白对照组比较,脂肪变性模型组的细胞内和培养基中TG浓度上升（均P〈0．01）;细胞内的SAM／SAH比值（P〈0．05）、APOB的mRNA水平（P〈0．01）均下降。与脂肪变性模型组的比较,2．5和10mmol／L甜菜碱组细胞内TG浓度均有所增加（均P〈0．05）,5mmol／L甜菜碱组培养基中TG浓度有所增加（P〈0．01）;10mmol／L甜菜碱组的SAM／SAH比值明显上升（P〈0．01）;5、10mmol／L甜菜碱组的APOBmRNA水平明显上升（均P〈0．01）;甜菜碱各剂量组中DAGT2的mRNA表达水平均有所上升（均P〈0．05）。结论甜菜碱能降低脂肪变性HepG2细胞培养基Hey的浓度,增高细胞内SAM／SAH比值,增加APOB的mRNA表达,可能提高细胞脂质清除能力,但同时增加了DGAT2mRNA的表达,可能促进TG合成。