建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞HBZY-1纤维化的作用机制的研究

目的通过体外细胞实验探讨建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞HBZY-1纤维化过程中TGF-β/Smad信号通路的调控作用。方法采用PCR、Western Blot方法观察建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞HBZY-1纤维化过程中Smad-2、Smad-3、Smad-7 mRNA及蛋白表达的影响;通过Western Blot方法检测5.5μg/L的TGF-β1诱导HBZY-1细胞不同时间p-Smad2、p-Smad3蛋白的表达影响;Western Blot检测建中理劳汤大鼠含药血清对TGF-β1诱导30min后的HBZY-1细胞p-Smad2、p-Smad3蛋白的表达影响。结果与正常组相比,TGF-β1组中p-Smad2、p-Smad3蛋白表达显著升高,Smad-7表达明显降低(P0.05);而与TGF-β1组相比,加入建中理劳汤含药血清后,p-Smad2、p-Smad3蛋白表达显著降低,Smad-7表达明显升高(P0.05)。结论建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞HBZY-1纤维化过程中TGF-β/Smad信号通路起调控作用,可能是其抗纤维化形成的机制之一。     

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨扶脾柔肝方对肝纤维化(HF)大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的干预作用。方法将SD大鼠随机分为7组:正常对照组,模型组,秋水仙碱组(0.2 mg·kg~(-1)),扶正化瘀组(0.415 g·kg~(-1)),扶脾柔肝方低、中、高剂量组(20,40,80 g·kg~(-1))。采用大鼠背部皮下注射(sc)50%四氯化碳和灌胃(ig)30%乙醇的方法诱导HF,造模10周,成功建立大鼠HF模型,其后给予相应药物10 m L·kg~(-1),每日1次,连续4周,正常对照组、模型组给予等量生理盐水。检测大鼠血清TGF-β1;HE染色和Masson染色观察肝组织病理学变化;免疫组化法检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;同时,采用荧光定量PCR方法及免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中TGF-β1、Smad 3、Smad 4、Smad7 mRNA及蛋白的表达。结果模型组的HF程度较其余组明显严重,与正常对照组比较,模型组大鼠血清TGF-β1明显升高(P0.01),肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达升高Smad 7表达降低(P0.01);与模型组比较,扶脾柔肝方各组大鼠血清TGF-β1明显降低(P0.05,P0.01),肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达下调(P0.01),Smad 7 mRNA及蛋白表达升高(P0.05,P0.01)。结论扶脾柔肝方下调HF肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达水平,上调Smad7 mRNA及蛋白表达水平,可能是其抗HF作用机制之一。     

纤愈方对CCL_4诱导的大鼠肝纤维化疗效研究

目的:观察纤愈方对四氯化碳(CCL4)诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果,并探讨其可能的机制。方法:45只大鼠用四氯化碳(CCL4)诱导致肝纤维化,随机分成3组(模型组、纤愈方治疗组、IFN-γ治疗组),连续用药12周,观察肝功能、肝组织病理、血清透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)、血清转化生长因子β1(Transforming Growth Factor beta 1,TGF-β1)、肝组织切片中TGF-β1、转化生长因子βⅠ型受体(Transforming Growth FactorβReceptor,TβR-Ⅰ)、Smad2/3的表达。结果:1肝组织病理:与正常组比较,模型组大鼠肝组织都有不同程度的炎症和纤维化产生。模型组纤维化程度较正常对照组明显,差异有显著性意义(P<0.05);各治疗组纤维化程度较模型组显著改善,差异有显著性意义(P<0.05);纤愈方治疗组与IFN-γ治疗组间差异无显著性统计学意义(P>0.05);2肝功能、肝纤维化指标(HA、TGF-β1):各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(Alamine Aminotransferase,ALT)较正常对照组均有升高(P<0.01),白蛋白(Albumin,ALB)、总蛋白(Total protein,TP)、白球蛋白比例(A/G)较正常对照组均有降低(P<0.01),但以模型组差异最明显;各治疗组及模型组间ALT、ALB、TP、A/G无明显差异(P>0.05);各治疗组大鼠HA较模型组都有不同程度的降低(P<0.05或0.01),纤愈方治疗组和IFN-γ治疗组差异无显著性意义(P>0.05);各治疗组大鼠TGF-β1较模型组都有不同程度的降低(P<0.05或0.01),其中纤愈方治疗组与IFN-γ治疗组TGF-β1差异无显著性意义(P>0.05)。TGF-β1/Smad基因蛋白:免疫组织化学检测显示,与模型组相比,各治疗组大鼠肝脏中TGF-β1、转化生长因子βⅠ型受体(Transforming Growth FactorβReceptor,TβR-Ⅰ)和Smad2/3蛋白表达均显著减弱(P<0.01)。纤愈方治疗组和IFN-γ治疗组差异无显著性意义(P>0.05)。结论:纤愈方组具有显著抗肝纤维化作用,对TGF-β1/Smad信号转导通路的影响可能为其作用机理之一。     

荔枝核总黄酮对大鼠肝纤维化TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:观察荔枝核总黄酮(total flavone from Litchi chinensis Sonn,TFL)对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝纤维化大鼠肝脏组织转移生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路中关键信号传导分子TGF-β1,Smad3,Smad7表达水平的变化,探讨TFL抗纤维化的作用机制.方法:SD大鼠ip DMN 4周建立大鼠肝纤维化模型,以ig水飞蓟宾为阳性对照50 mg· kg-1组,用不同剂量的TFL(400,200,100 mg·kg-1·d-1)ig给药,造模当日开始分组给药,每日1次,共给药6周.于实验第6周末处死大鼠,抽取下腔静脉血检测天冬氨酸转氨酶(AST),丙氨酸转氨酶(ALT),留取肝脏同一部位行HE,Masson染色观察大鼠病理改变及肝纤维化程度,采用RT-PCR法检测TGF-β1,Smad3,Smad7 mRNA的表达.结果:与空白对照组比较,模型组大鼠的肝纤维化程度明显增加,血清AST,ALT均显著升高,肝组织TGF-β1,Smad3 mRNA的表达明显增强(P＜0.05),Smad7 mRNA的表达显著减弱(P＜0.05);与模型组比较,TFL各剂量组和水飞蓟宾组血清AST,ALT均明显低于模型组,肝脏TGF-β1,smad3的表达明显降低(P＜0.05),而smad7则有所升高.结论:荔枝核总黄酮可减轻实验性大鼠肝损伤及改善肝纤维化程度,其作用机制可能与抑制TGF-β1,Smad3 mRNA的表达,上调Smad7 mRNA的表达有密切关系.     

补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β_1-Smads信号通路的干预作用

目的探讨补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β_1-Smads信号通路的影响。方法将53只Wistar大鼠随机分成空白组8只、模型组15只、补肾柔肝方组15只和秋水仙碱组15只。除空白组外,其余组均首次在背部皮下注射纯四氯化碳5 m L/kg,3 d后注射40%CCl4花生油3 m L/kg,每周注射2次,连续8周。第9周开始,补肾柔肝方组和秋水仙碱组分别给予补肾柔肝方流浸膏5 m L/(kg·d)、秋水仙碱溶液5 m L/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,共8周。然后取各组大鼠肝组织,分别采用免疫组化法和逆转录多聚酶链式反应检测肝组织中TβRⅠ、TβRⅡ蛋白,Smad2和Smad3磷酸化水平及TGF-β_1、TβRⅠ、TβRⅡmRNA的表达情况。结果与空白组比较,模型组肝组织中TβRⅠ、TβRⅡ蛋白及TGF-β_1、TβRI、TβRⅡmRNA表达水平均显著升高(P均0.05),Smad2和Smad3磷酸化水平无明显变化(P均0.05);与模型组比较,补肾柔肝方组和秋水仙碱组TβRⅠ、TβRⅡ蛋白以及TGF-β_1、TβRⅠ、TβRⅡmRNA表达水平均显著降低(P均0.05),Smad2和Smad3磷酸化水平无明显变化(P均0.05)。结论在TGF-β_1-Smads信号通路中,补肾柔肝方主要是通过抑制TβRⅠ、TβRⅡ表达,无法磷酸化的Smad2和Smad3失去活性,从而阻断信号通路传导发挥抗纤维化的作用。     

扶正化瘀抗纤方对肝硬化大鼠TGF-β1及PDGF表达的研究

目的:通过观察扶正化瘀抗纤方对肝硬化大鼠TGF-β1及PDGF表达的影响,探讨扶正化瘀抗纤方保肝抗纤的可能机制。方法:本研究中运用随机设计,将40只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、熊去氧胆酸组和扶正化瘀抗纤方组,每组各10只大鼠。采用复合因素复制肝硬化大鼠模型,造模时给予30%食用酒精为唯一饮料,并结合皮下注射CCl_4(首次剂量给予5 mL/kg,以后每隔3 d皮下注射40%CCl_4油剂3 mL/kg)联合造模,连续给药6周成模。动物成模后模型组给予生理盐水灌胃,熊去氧胆酸组和扶正化瘀抗纤方组分别给予相应药物灌胃。治疗6周后,光镜下观察大鼠肝组织病理变化,运用RT-PCR检测大鼠肝脏组织中TGF-β1及PDGF的表达。结果:与模型组相比,熊去氧胆酸组和扶正化瘀抗纤方组肝纤维化程度明显减轻,TGF-β1和PDGF的表达显著降低(P 0. 05);以扶正化瘀抗纤方组降低最为明显。结论:扶正化瘀抗纤方可明显降低肝硬化大鼠肝组织中TGF-β1和PDGF的表达水平,同时改善大鼠肝损伤及纤维化程度,其机制可能与抑制肝脏组织中致纤细胞因子TGF-β1、PDGF的表达水平有关。     

桃红芪术软肝煎对肝纤维化大鼠病理及TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:观察桃红芪术软肝煎抗大鼠肝纤维化的作用及对TGF-β/Smad信号通路的影响。方法:选取105只Wistar大鼠,随机分为空白组、模型组、对照药物组(秋水仙碱组、扶正化瘀胶囊组)、桃红芪术软肝煎组(桃红芪术低剂量组、中剂量组、高剂量组)。除空白组外,分3、6、9周3个时间点采用50%CCl41 mL/kg橄榄油溶液腹腔注射进行肝纤维化模型制作,同时进行HE染色和Masson染色观察肝纤维化的病理表现;并采用免疫组织化学法检测肝脏组织的E-Cadherin、Vimentin、转化生长因子(TGF)-β_1、Smad2蛋白表达;RT-PCR方法检测肝脏组织的E-Cadherin、Vimentin、TGF-β_1、Smad2的mRNA表达。结果:肝纤维化病理结果显示,随着造模、给药时间的延长,各给药组均能明显阻断模型大鼠肝组织纤维化进展;与模型组比较,第9周时桃红芪术高剂量组作用最明显。免疫组织化学结果显示,与模型组比较,用药各组从第3周至第9周,E-cadherin表达均较模型组表达明显增加(P0.05),用药各组间比较,差异无统计学意义(P0.05);与模型组比较,用药各组TGF-β_1表达明显减弱,差异有统计学意义(P0.05),用药各组组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。RT-PCR结果显示,与空白组比较,模型组Smad2 mRNA表达量明显升高,差异有统计学意义(P0.05),桃红芪术低剂量组Vimentin mRNA、Smad2 mRNA表达量明显下降,差异有统计学意义(P0.05),桃红芪术软肝煎中剂量组Smad2 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P0.05);扶正化瘀胶囊组TGF-β_1 mRNA、Vimentin mRNA表达量均较模型组下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论:桃红芪术软肝煎可持续通过TGF-β/Smad信号通路调节上皮间质转化,治疗肝纤维化。     

纤愈方对CCL4诱导的大鼠肝纤维化疗效研究

目的：观察纤愈方对四氯化碳（CCL4）诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果,并探讨其可能的机制。方法：45只大鼠用四氯化碳（CCL4）诱导致肝纤维化,随机分成3组（模型组、纤愈方治疗组、IFN-γ治疗组）,连续用药12周,观察肝功能、肝组织病理、血清透明质酸（Hyaluronic Acid,HA）、血清转化生长因子β1（Transforming Growth Factor beta 1,TGF-β1）、肝组织切片中TGF-β1、转化生长因子βⅠ型受体（Transforming Growth FactorβReceptor,TβR-Ⅰ）、Smad2/3的表达。结果：1肝组织病理：与正常组比较,模型组大鼠肝组织都有不同程度的炎症和纤维化产生。模型组纤维化程度较正常对照组明显,差异有显著性意义（P〈0.05）;各治疗组纤维化程度较模型组显著改善,差异有显著性意义（P〈0.05）;纤愈方治疗组与IFN-γ治疗组间差异无显著性统计学意义（P〉0.05）;2肝功能、肝纤维化指标（HA、TGF-β1）：各组大鼠血清丙氨酸转氨酶（Alamine Aminotransferase,ALT）较正常对照组均有升高（P〈0.01）,白蛋白（Albumin,ALB）、总蛋白（Total protein,TP）、白球蛋白比例（A/G）较正常对照组均有降低（P〈0.01）,但以模型组差异最明显;各治疗组及模型组间ALT、ALB、TP、A/G无明显差异（P〉0.05）;各治疗组大鼠HA较模型组都有不同程度的降低（P〈0.05或0.01）,纤愈方治疗组和IFN-γ治疗组差异无显著性意义（P〉0.05）;各治疗组大鼠TGF-β1较模型组都有不同程度的降低（P〈0.05或0.01）,其中纤愈方治疗组与IFN-γ治疗组TGF-β1差异无显著性意义（P〉0.05）。TGF-β1/Smad基因蛋白：免疫组织化学检测显示,与模型组相比,各治疗组大鼠肝脏中TGF-β1、转化生长因子βⅠ型受体（Transforming Growth FactorβReceptor,TβR-Ⅰ）和Smad2/3蛋白表达均显著减弱（P〈0.01）。纤愈方治疗组和IFN-γ治疗组差异无显著性意义（P〉0.05）。结论：纤愈方组具     

消癥活络方对肝纤维化大鼠肝组织α-SMA和TGF-β1表达的影响

目的观察消癥活络方对肝纤维化大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β_1)表达的影响。方法采用CCl_4诱导大鼠肝纤维化模型,将大鼠随机分为6组。通过肝脏病理学HE染色和Masson染色,判断肝脏纤维化程度以及肝组织结构改变;分别采用免疫组化和Wes tern Blot检测肝组织中α-SMA和TGF-β_1蛋白的表达。结果消癥活络方中、高剂量组与秋水仙碱阳性对照组均能明显改善模型大鼠肝组织纤维化程度;抑制大鼠肝脏中α-SMA和TGF-β_1蛋白的表达。结论消癥活络方能够明显改善大鼠肝纤维化程度,其作用机制可能是通过降低TGF-β_1的表达,从而抑制肝星状细胞的活化,降低ECM的合成。     

羧甲基茯苓多糖对肝纤维化大鼠TGFβ-Smad信号转导的影响

目的：了解羧甲基茯苓多糖（CMP）对实验性肝纤维化模型大鼠肝组织TGFβ,Smad3、Smad7的影响,探讨CMP对TGFβ-Smad信号转导通路的影响及抗肝纤维化的作用机制。方法：采用SD大鼠,四氯化碳复合因素法制作肝纤维化模型,免疫组化法检测TGFβ,Western blot法检测Smad3、Smad7的表达,以香菇多糖、秋水仙碱作为阳性对照。结果：与正常对照组比较,模型组TGF-β表达显著增强（P〈0．01）,Smad3高表达（P〈0．01）,Smad7低表达（P〈0．01）。CMP组与模型组比较,TGF—β和Smad3的表达显著下降（P〈0．01）,Smad7表达显著增强（P〈0．01）,显示了较好的调节TGF—β、Smad3、Smad7表达的作用。结论：CMP对肝纤维化大鼠模型肝组织细胞TGF-β表达具有明显抑制作用、能下调Smad3的表达,上调Smad7的表达,对TGF—β—Smad系统具有较好的调节作用,可能是其抗肝纤维化的主要机制之一。     

扶正消癌Ⅰ号方对小鼠肠癌肝转移血管内皮生长因子的表达的影响

目的:观察自拟扶正消癌Ⅰ号方对balbc小鼠移植瘤血管内皮生长因子(VEGF)表达的作用,探讨该方对多种肿瘤的作用机制。方法:采用balbc小鼠,脾下注射法建立鼠大肠癌细胞株肝转移的动物模型,随机分为4组,每组12只:1)阴性对照生理盐水组;2)氟尿嘧啶组;3)扶正消癌I号方中药组;4)扶正消癌I号中药+氟尿嘧啶组。观察生活质量,抑瘤率,免疫组化方法检测VEGF蛋白表达的情况。结果:扶正消癌Ⅰ号方+氟尿嘧啶组、消癌Ⅰ方组小鼠的生活质量较其他2组好,阴性对照组瘤体最大,瘤体中药组其次,联合用药组体积最小,氟尿嘧啶组、中药组及联合用药组均能下调VEGF蛋白的表达。结论:扶正消癌Ⅰ号方对鼠大肠癌细胞株肝转移小鼠抑制新生血管的作用机制可能是通过下调VEGF的表达,抑制肿瘤微血管生成,可能是该方抗肿瘤的机制之一。     

化痰活血扶正方及其拆方药组对模型大鼠VEGF及TGF-β1的影响

目的观察化痰活血扶正方拆方药组对肝纤维化大鼠模型血管内皮细胞生长因子(VEGF)及转化生长因子(TGF-β1)表达的影响,并探讨其作用机制。方法选择雄性SD大鼠(清洁级) 90只,随机分为空白对照组(K6只)、模型组(M6只)、秋水仙碱组(Q6只)、低中高剂量活血化瘀组(XD、XZ、XG各6只)、低中高剂量扶正组(FD、FZ、FG各6只)、低中高剂量化痰组(TD、TZ、TG各6只)、低中高剂量化痰活血扶正组(QD、QZ、QG各6只)。除K组未予造模处理外,其余各组大鼠均予10%CCl4橄榄油溶液按3ml/kg剂量皮下注射,每周2次,共8周,复制大鼠肝纤维化模型。除空白对照组未予以灌胃处理外,模型组在造模同时予以大鼠专用无菌水,灌胃体积1ml/100g;其余各组在造模同时即经口灌胃给予相应药液,灌胃体积1ml/100g,秋水仙碱按常用量配制予以灌胃,低、中、高剂量分别为常用量的5倍、10倍、15倍而配制相应浓度药物予以灌胃。8周时间点,分别于模型组、活血药低中高剂量组、扶正药低中高剂量组、化痰药低中高剂量组、化痰活血扶正药低中高剂量组处死所有大鼠,取肝组织。所取肝组织送于PCR检测,待数据结果出来后予以统计分析,观察治疗前后各组间的VEGFmRNA及TGF-β1mRNA的表达情况。结果使用化痰活血扶正方拆方各药组干预后,与对照组相比,模型组的VEGFmRNA及TGF-β1mRNA的表达显著升高(P 0. 05),差异具有统计学意义;各组用药后,Q组、XD组、XZ组、XG组、FD组、FZ组、FG组、TD组、TZ组、TG组、QD组、QZ组、QG组组的VEGFmRNA表达与模型组相比均有显著下降(P 0. 05),差异具有统计学意义; XZ组、XG组、FZ组、FG组、TD组及QG组的TGF-β1mRNA表达与模型组相比均有显著下降(P 0. 05),差异具有统计学意义。结论化痰活血扶正方拆方药组对四氯化碳诱导的肝纤维化实验大鼠肝组织中的VEGFmRNA及TGF-β1mRNA的表达有降低作用,因此考虑该方对临床上肝纤维化进展有较好的抑制作用。     

芪蚣抗纤方中活血化瘀药对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1及Smad2/3的影响

目的:观察芪蚣抗纤方(QF)活血组对免疫损伤性肝纤维化大鼠转化生长因子(TGF-β1)及Smad2/3的影响.方法:猪血清腹腔注射法复制免疫损伤性肝纤维化大鼠模型,分为正常对照组,模型组、活血低剂量组、活血高剂量组,用双抗夹心法(ELISA法)测定血清TGF-β1含量;免疫组化法检测肝组织TGF-β1,Smad2,Smad3的表达.结果:①血清学指标:模型组血清TGF-1含量较其他组明显升高(P＜0.01).与模型组比较,活血组血清TGF-β1含量显著下降(P＜0.01),并具量效关系.②免疫组化检测:模型组肝组织TGF-β1,Smad2,Smad3表达明显,活血组肝组织中TGF-β1,Smad2,Smad3表达明显低于模型组(P＜0.01).结论:芪蚣抗纤方活血组通过降低TGF-β1,减少Smad2/3的激活,从而抑制肝纤维结缔组织增生,减轻肝损伤及肝纤维化程度.具有抑制肝纤维化的作用.     

肾病Ⅰ号方对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响

目的:观察肾病Ⅰ号方对肾纤维化大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、洛丁新组和肾病Ⅰ号方组,每组6只。采用单侧输尿管结扎的方法制备大鼠肾纤维化模型。假手术组和UUO模型组每日予2 m L生理盐水灌胃,洛丁新组按洛丁新片1.67 mg·kg~(-1)·d~(-1)给药,肾病Ⅰ号方组按18.75 g·kg~(-1)·d~(-1)给药。灌胃14 d后处死大鼠,采集血清检测尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血肌酐(serum creatinine,SCr);取肾组织行HE染色评价肾小管间质纤维化损伤程度;采用免疫组织化学染色方法检测α-SMA、COL-Ⅳ、TGF-β1在肾组织中的表达情况;免疫印迹试验(Western blot)检测α-SMA相对蛋白表达量。结果:与模型组比较,洛丁新组、肾病Ⅰ号方组大鼠的SCr,BUN明显下降(P<0.05),肾组织α-SMA、COL-Ⅳ、TGF-β1表达量下降显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:肾病Ⅰ号方对肾纤维化具有一定改善作用,其作用机制可能是通过下调α-SMA、COL-Ⅳ、TGF-β1的表达,从而达到肾脏保护的作用。     

健脾软肝方对肝纤维化TGF-β/Smad细胞信号转导通路的影响

目的:观察健脾软肝方对四氯化碳大鼠肝纤维化模型中TGF-β/Smad信号转导通路的影响。方法:复制CCl4大鼠肝纤维化模型,观察不同剂量健脾软肝对模型大鼠肝纤维化TGF-β/Smad通路各位点的影响。利用RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA的表达水平,免疫组化法检测TGF-β1受体的表达和Western Blot法检测大鼠肝组织中Smad3、Smad7蛋白的表达。结果:健脾软肝方可以下调TGF-β1mRNA和TGF-β1受体的表达,调节Smad3/Smad7的比例。结论:健脾软肝方对TGF-β/Smad细胞信号转导途径中多个位点均有抑制作用。     

清化瘀毒方对酒精性大鼠肝纤维化转化生长因子-β1表达的影响

目的:通过观察清化瘀毒方对酒精性大鼠肝纤维化转化生长因子-β1表达的影响,探讨清化瘀毒方抗酒精性肝纤维化的作用机制。方法:选择成年雄性Wistar大鼠,SPF级65只,随机分成正常对照组10只,造模组55只;按照复合因素制作酒精性大鼠肝纤维化模型,造模成功后,造模组采用随机分成3组,分别为复方鳖甲软肝片组10只,清化瘀毒方组10只和模型空白组10只;于第20周末次给药后禁食,全部处死取出肝脏进行HE染色及MASSON染色,免疫组化法检测肝脏组织TGF-β1表达。结果:实验性大鼠肝组织炎症活动度及肝纤维化程度:经清化瘀毒方治疗后,计分均明显降低,与模型空白组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。免疫组化法检测酒精性大鼠肝脏TGF-β1的表达:与模型空白组比较,清化瘀毒方组明显降低,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:清化瘀毒方能够显著减轻酒精性肝纤维化大鼠肝组织炎症活动度及纤维化程度,并能够降低酒精性肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1表达。     

益气逐瘀解毒方抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的作用研究

目的:研究益气逐瘀解毒方(YQZYJD)对四氯化碳(CCl_4)诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:将SD雄性大鼠给予CCl_4橄榄油混合液进行皮下注射7周,制备肝纤维化大鼠模型,随机分为YQZYJD高、中、低剂量组、阳性对照组、模型组,给予相应治疗,5周后处死大鼠,检测外周血生化指标ALT、AST和GGT,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN),肝组织HE、MASSON染色分别检测肝组织损伤及肝纤维化程度,免疫组化法分别检测大鼠肝组织中α-SMA及TGF-β1表达水平。结果:与阳性对照组相比,YQZYJD高剂量组GGT、HA和LN水平显著降低(P0.05),病理组织学检测发现,YQZYJD治疗各组的肝组织结构回复均优于模型组,而高剂量组优于阳性对照组;YQZYJD各剂量组α-SMA表达均较模型组显著降低(P0.05),YQZYJD高剂量组TGF-β1的表达较阳性对照组显著降低(P0.01)。结论:YQZYJD可促进CCl_4诱导肝纤维化大鼠模型的肝组织结构回复,过度沉积的ECM降解,抑制HSCs的活化,降低TGF-β1的表达水平,改善CCl_4诱导肝纤维化大鼠的肝纤维化程度。     

肾病Ⅰ号方醋酸乙酯提取物对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨肾病I号方醋酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Shenbingyihao Decoction,EASD)对肾纤维化大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、洛丁新(洛丁新片1.67 mg/kg)组、肾病I号方(生药18.75 g/kg)组、EASD(EASD,300 mg/kg)组,除假手术组外,其他各组采用单侧输尿管结扎的方法制备单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型。各组ig给药14 d后处死大鼠,采集血清,检测尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平,取肾组织行HE和Masson染色评价肾小管间质纤维化损伤程度,采用免疫组织化学染色方法和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测TGF-β1、a-SMA蛋白及m RNA的表达情况。结果与假手术组比较,模型组和3个给药组大鼠血清Scr、BUN升高(P0.05),间质纤维化程度加重(P0.05),肾组织TGF-β1、a-SMA表达明显增多(P0.05)。与模型组比较,3个给药组大鼠的血清Scr、BUN下降(P0.05),肾组织TGF-β1、a-SMA表达下降(P0.05)。结论肾病I号方及EASD能够延缓肾纤维化的发生发展,其作用机制可能是通过下调TGF-β1、a-SMA的表达,从而达到保护肾脏的作用。     

基于TGF-β/Smads信号通路研究益肾降浊方对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化的影响

目的通过观察益肾降浊方对慢性肾衰竭(CRF)大鼠TGF-β/Smads信号通路的影响,探究本方治疗CRF的疗效机理。方法将SD雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、尿毒清组、益肾降浊方组。采用5/6肾切除方法制造CRF大鼠模型,假手术组12只行双肾被膜剥离。造模后4周开始给药干预,给药8周后取血清及残余肾组织,检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);光镜观察残余肾组织病理改变;用免疫组化法检测肾组织中Smad3、Smad7、TGF-β1的表达。结果与正常组相比,假手术组TGF-β1、Smad3、Smad7的表达无明显差异(P0.05),模型组、尿毒清组、益肾降浊方组TGF-β1、Smad3的表达明显升高,Smad7的表达明显降低(P0.05);与模型组相比,尿毒清组、益肾降浊方组TGF-β1、Smad3的表达明显降低,Smad7的表达明显升高(P0.05);与尿毒清组相比,益肾降浊方组TGF-β1、Smad3的表达明显降低,Smad7的表达明显升高(P0.05);光镜示经益肾降浊方治疗后的肾组织纤维化明显减轻。结论益肾降浊方能够降低CRF大鼠血清Scr和BUN水平,延缓肾间质纤维化进展,其作用机制可能与抑制TGF-β1、Smad3的表达,提高Smad7的表达有关。     

温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β_1、smad7蛋白表达的影响

目的:观察温肾活血化湿方对单侧输尿管梗阻(UUO)法致肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β1、smad7蛋白表达的影响,初步揭示该方防治肾间质纤维化的作用机制。方法:将雄性SD大鼠(120只)随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组和温肾活血化湿方组,每组30只。采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型(假手术组只分离但不结扎输尿管),于造模后第2天开始灌胃,假手术组、UUO组给予生理盐水,氯沙坦组灌胃氯沙坦(10 mg·kg-1·d-1),温肾活血化湿方组灌温肾活血化湿方(9.8 g·kg-1·d-1)。于造模后第7、14、21天留取梗阻侧肾组织HE、Masson染色,观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、smad7蛋白的表达。结果:造模后第14天温肾活血化湿方较模型组明显降低尿蛋白定量(P0.05),第21天温肾活血化湿方与模型组比较有极显著降低(P0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较TGF-β1蛋白表达明显降低(P0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较smad7蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:温肾活血化湿方通过抑制TGF-β1,上调smad7蛋白表达,从而延缓肾间质纤维化的进程。