大鼠油酸肺损伤早期肺组织一氧化氮合成酶活性变化,基因表达？…

观察油酸肺损伤早期肺组织一氧化氮合成酶活性活变化，诱导型一氧化氮合成酶基因表达变化及其细胞定位。方法＾３Ｈ－胍氨酸测定法测定ＮＯＳ活性；应用＾３２Ｐ标记核酸探针狭杂交技术和地高辛标记核酸探针原位杂交技术检测油酸肺损伤大鼠肺组织。     

急性肺损伤肺泡巨噬细胞诱生型一氧化氮合成酶的免疫组化研究

对大鼠用导管经颈外静脉入右心房持续灌注内毒素（ＬＰＳ），观察肺组织学改变及肺泡巨噬细胞诱生型一氧化氮合成酶（ｉＮＯＳ）免疫组化改变，发现大鼠灌注ＬＰＳ后，于１２，２４及４８ｈ出现逐渐加重的急性肺损伤改变，且肺泡巨噬细胞ｉＮＯＳ阳性表达数目逐渐增多；至７２ｈ，急性肺损伤改变减轻与肺泡巨噬细胞ｉＮＯＳ阳性表达数减少，表明生肺损伤病变程度与ｉＮＯＳ阳性表达数呈平行关系，提示ｉＮＯＳ在急性肺损伤发病机制中     

急性缺氧对大鼠肾组织一氧化氮合酶基因表达的影响

目的了解急性缺氧后大鼠肾组织一氧化氮合酶（ＮＯＳ）基因表达的变化,探讨急性缺氧引起肾损害的分子机制。方法１５只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成对照组、缺氧后１０ｍｉｎ组、缺氧后４ｈ组。实验组大鼠在低压舱内模拟上升至５０００ｍ、停留４５ｍｉｎ,出舱后分别在１０ｍｉｎ、４ｈ处死大鼠取肾,提取总ＲＮＡ,用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量检测大鼠肾组织内ｂＮＯＳｍＲＮＡ、ｅＮＯＳｍＲＮＡ、ｉＮＯＳｍＲＮＡ的表达水平。结果ｂＮＯＳｍＲＮＡ在急性缺氧后１０ｍｉｎ明显下降,４ｈ后恢复正常;ｅＮＯＳｍＲＮＡ急性缺氧后１０ｍｉｎ、４ｈ无明显变化;ｉＮＯＳｍＲＮＡ急性缺氧后１０ｍｉｎ无变化,至４ｈ则无基因表达。结论急性缺氧可导致大鼠ｂＮＯＳｍＲＮＡ、ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达下调,ＮＯ在急性缺氧的病理生理过程中起到重要作用。     

高原RDS表面活性物质相关蛋白A、B、CmRNA表达的变化

作者观察了高原呼吸窘迫综合征 (ＲＤＳ)时表面活性物质相关蛋白 (ＳＰ)Ａ、Ｂ、ＣｍＲＮＡ表达与影响因素 ,了解其变化情况 ,并探讨其在急性肺损伤中的作用机制及意义。作者采用了高原ＲＤＳ动物模型 ,利用分子生物学技术观察肺组织肺泡Ⅱ型上皮细胞表面活性蛋白及其基因的表达。结果显示 :ＳＰ -Ａ、ＳＰ -Ｂ和ＳＰ -Ｃ斑点杂交结果表明 ,油酸组ＳＰ -Ａ、ＳＰ -Ｂ和ＳＰ -ＣｍＲＮＡ表达的相对含量均显著低于对照组。油酸可抑制ＳＰ -Ａ、ＳＰ -Ｂ和ＳＰ -ＣｍＲ ＮＡ在高原ＲＤＳ中的表达 ,严重的低氧血症、肺组织细胞损伤及胞内酶活性…     

烧冲复合伤早期细胞间粘附分子—1的表达变化及意义

目的：了解烧冲复合伤早期肺组织细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的表达变化规律及其与多形核白细胞（ＰＭＮ）在肺内聚集的关系．方法：测定肺组织髓过氧化物酶（ＭＰＯ）以反映ＰＭＮ肺内聚集的情况；用地高辛标记ＩＣＡＭ－１ｃＤＮＡ探针进行肺组织原位杂交；用ＳＰ法进行肺组织ＩＣＡＭ－１免疫组化染色．结果：各致伤组动物伤后均有不同程度的肺组织ＭＰＯ活性增高，其中以复合伤组最明显，肺组织ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ及其蛋白质表达均较对照组显著增多，以伤后６小时最为明显．结论：烧冲复合伤早期肺ＩＣＡＭ－１增多可能与ＰＭＮ的肺内聚集有关．     

肢体缺血再灌注损伤时血管组织一氧化氮产生途径及其机制

目的探讨肢体缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）损伤时，血管组织一氧化氮（ＮＯ）产生的途径和机制。方法采用Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ方法复制大鼠肢体Ｉ／Ｒ损伤模型。实验动物分为对照组和Ｉ／Ｒ组。分别测定血浆中、主动脉孵育液中ＮＯ－２含量和主动脉组织中ｃＧＭＰ含量及一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性，观察主动脉组织３Ｈ－Ｌ－精氨酸（３Ｈ－Ｌ－Ａｒｇ）的含量。结果（１）Ｉ／Ｒ组大鼠血浆和主动脉条孵育液中ＮＯ－２明显增加，主动脉ｃＧＭＰ含量也增高；（２）Ｉ／Ｒ组大鼠血管总ＮＯＳ（ｔＮＯＳ）活性增高，其中主要是诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）活性增加；（３）Ｉ／Ｒ时血管组织中３Ｈ－Ｌ－Ａｒｇ的含量增多。结论肢体Ｉ／Ｒ后，血管组织Ｌ－Ａｒｇ跨膜转运加强，ｉＮＯＳ活性增加，导致非内皮源性ＮＯ生成增多。     

大鼠重型脑伤后一氧化氮/诱生型一氧化氮合酶神经细胞毒性的作用机制

目的 探讨大鼠创伤性脑损伤后一氧化氮／诱生型一氧化氮合酶（ＮＯ／ｉＮＯＳ）神经细胞毒性作用机制。方法 将雄性ＳＤ大鼠１５０只随机分为假手术组、重离伤对照组、左旋精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）治疗组、伤后６ｈ ｉＮＯＳ抑制剂氨基胍（ＡＧ）治疗组、伤后１２ｈ ＡＧ治疗组。采有向位素标记法和免疫组化双酶双标技术,研究大鼠重型脑伤后ｉＮＯＳ活性变化及其细胞定位,观察ｉＮＯＳ抑制剂氨基胍（ＡＧ）及其作用底物Ｌ－Ａｒｇ     

L-NAME对小肠上皮细胞辐射防护作用机理的探讨

目的探讨硝基左旋精氨酸甲基酯（Ｌ－ＮＡＭＥ）对小肠上皮细胞辐射防护的机理。方法实验用大鼠ＩＥＣ－６细胞，６０Ｃｏγ射线照射；荧光分光光度法测定培养液上清中一氧化氮（ＮＯ）含量；ＮＡＤＰＨ黄递酶组化法（ＮＤ组化法）和免疫细胞化学法观察一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性变化；ＭＴＴ法检测细胞的生存力。结果ＩＥＣ－６细胞经射线照射后，其培养液上清中ＮＯ含量明显增加，细胞内结构型一氧化氮合酶（ｃＮＯＳ）活性升高，诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）活性降低，Ｌ－ＮＡＭＥ能明显提高细胞的生存力，ＮＯ底物－左旋精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）部分逆转其作用。结论ＮＯ参与了ＩＥＣ－６细胞的辐射损伤，Ｌ－ＮＡＭＥ对ＩＥＣ－６细胞具有辐射防护作用。     

60Co-γ射线照射对大鼠肺一氧化氮合酶和内皮素系统基因表达的影响

探讨一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）和内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ，ＥＴ）及ＥＴ转换酶（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ，ＥＣＥ）等在受照射肺中的基因表达变化，揭示其在肺纤维化发生中的参与作用。方法用６０Ｃｏ对大鼠肺进行３０Ｇｙ照射，照后４，８，２４天提取总ＲＮＡ，分别做ＲＴ－ＰＣＲ；对照射后１，３，５个月肺组织进行ＥＴ肽的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ＮＯＳ－ｍＲＮＡ原位杂交。结果照射后肺ＮＯＳｍＲＮＡ转录减弱，ＥＴｍＲＮＡ增强，ＥＣＥｍＲＮＡ在第８和２４天增强，ＥＴＢ－ＲｍＲＮＡ在第２４天转为阴性。照射后１，３，５月肺组织ＥＴ肽合成增加。照射后５个月ＮＯＳｍＲＮＡ原位杂交呈阴性。结论ＥＴ和ＮＯ之间平衡失调可能与肺纤维化发生有关。     

缺氧性肺动脉高压时一氧化氮合酶、左旋精氨酸及亚硝基左旋精氨酸甲酶的研究

为了研究一氧化氮（ＮＯ）在缺氧性肺动脉高压（ＨＰＨ）发病中的作用,作者用烟酰胺腺嘌呤二核甘酸磷酸—黄递酶（ＮＡＤＰＨ—ｄ）和免疫组化ＡＢＣ方法检测原生型和诱生型一氧化氮合酶（ｃＮＯＳ、ｉＮＯＳ）在正常和缺氧大鼠肺内的表达和分布,同时观察左旋精氨酸（Ｌ...     

严重烫伤大鼠早期肺组织TNFmRNA表达及其细胞定位

感染引起的各种介质过度释放，尤其是肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在肺损伤病理过程中发挥了重要作用。笔者应用斑点杂交、原位杂交等方法，检测了大鼠烧伤后ＴＮＦｍＲＮＡ在肺组织的表达及其细胞定位。结果证实，烧伤后肺组织ＴＮＦｍＲＮＡ表达迅速升高，伤后６小时达顶峰，２４小时仍维持较高水平，其动态变化与腔静脉血浆内毒素变化一致。原位杂交发现，在伤后３－６小时主要是肺间质巨噬细胞、肺泡巨噬细胞和肺泡Ⅱ型上皮细胞表达Ｔ     

内毒素致肺血管内皮细胞粘附中性粒细胞增加的机理研究

目的：为观察内毒素性急性肺损伤肺血管内皮细胞（ＶＥＣ）内皮细胞白细胞粘附分子－１（ＥＬＡＭ－１）和细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）转录水平的表达规律。方法：应用地高辛标记的ｃＲＮＡ探针原位杂交技术，检测内毒素急性肺损伤大鼠肺组织。结果：内毒素致伤后，肺小静脉、微静脉及毛细血管ＶＥＣ首先出现ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达，高峰在给毒后３～６小时之间，其后逐渐减弱，２４小时内基本消失，而肺ＶＥＣ在轻微背景表达基础上呈现ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达增加是继ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达之后，增强高峰在１２～２４小时之间，其表达维持时间较长，２４小时仍无减弱倾向。结论：肺血管床ＶＥＣ这种ＥＬＡＭ－１和ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的相继表达提示了内毒素性急性肺损伤肺血管床扣压大量中性粒细胞（ＰＭＮ）并进而导致肺组织损伤过程的重要分子基础。     

脑创伤早期大鼠肺组织细胞间黏附分子-1mRNA的表达及其意义

目的 观察脑创伤后早期大鼠细胞间黏附分子－1（ICAM－1）mRAN的表达及细胞定位,探讨其病理生理意义。方法 Wistar大鼠104只,随机分为假致伤组（8只）、致伤组（48只）、致伤加N－乙酰半胱氨酸（NAC）处理组（48只）。用牙科钻在大鼠冠状缝后缘、中线左侧开骨窗、保持颅脑膜完整,再用落体撞击装置撞击硬度,按各时相点麻醉成功后,取相同部位肺组织制作标本,采用原位杂交、计算机图像分析技术及病理学观察等方法,研究脑创伤后肺组织ICAM－1mRNA的表达和分布情况,以及病理学改变。结果 假致伤动物ICAM－1mRNA在肺组织中仅有少量表达。脑创伤后,大鼠肺组织ICAM－1mRNA表达强度明显增加;阳性细胞主要定位于支气管内皮细胞、肺间质细胞、血管内皮细胞及血管壁组织细胞。腹腔注射N－乙酰半胱氨酸（NAC）显著抑制脑伤后肺组织ICAM－1mRNA表达。结论 脑创伤后肺内ICAM－1mRNA表达分泌增加,可能是脑外伤后急性肺损伤发病的分子基础之一。     

IL—6基因在髓母细胞瘤中的表达

目的：研究髓母细胞瘤中IL－6基因表达与肿瘤发生和发展关系。方法：用地高辛标记IL－6cDNA探针原位杂交法检测IL－6mRNA在16例髓母细胞瘤和10例正常脑组织中的表达。结果：髓母细胞瘤表达率明显高于对照组,差异非常显著（P＜0．01）。表明IL－6mRNA表达与组织类型有关。结论：IL-6可能是促进髓母细胞瘤发生发展的重要因子之一。     

Gene expression of cytokines and growth factors in the lungs after paraquat administration in mice

It is well known that the intake of paraquat (PQ), an herbicide, causes severe lung injury at chronic phases. We examined the intrapulmonary gene expression of cytokines and growth factors after PQ administration. To induce lung injury, C57BL/6 mice were intraperitoneally injected twice a week with 20 mg/kg of PQ. Histopathologically, at the early phase, lots of alveolar spaces contained edematous fluid. At 3 weeks after PQ challenge, a marked thickening of the alveolar walls with the accumulation of macrophages and T cells was found. Azan staining revealed the patchy distribution of collagen accumulation, indicating pulmonary fibrosis. Consistently, intrapulmonary hydroxyproline contents were significantly elevated, compared with the controls. Semi-quantitative RT-PCR analysis demonstrated that the gene expression of tumor necrosis factor-alpha and monocyte chemoattractant protein-1 were significantly increased at 3 weeks after PQ challenge compared with the controls. The mRNA expression of macrophage inflammatory protein (MIP)-1alpha and MIP-2 was significantly enhanced at 1 and 2 weeks after PQ treatment, respectively. Moreover, PQ-treated mice showed enhanced gene expression of fibrogenic growth factors such as transforming growth factor-beta, platelet-derived growth factor-A, acidic fibroblast growth factor, and hepatoctyte growth factor at 2 and/or 3 weeks after PQ challenge. The synergistic effects of these molecules are presumed to cause pulmonary fibrosis due to PQ challenge.     

巨噬细胞金属蛋白酶-12在放射性肺损伤早期组织重建中的作用

目的 探讨巨噬细胞金属蛋白酶(MMP-12)在放射性肺损伤早期肺组织重建中的作用。方法 用20 Gy ⁶⁰Co γ射线对Wistar大鼠进行全胸照射,分别于照后1、2和4周进行肺组织取材,RT-PCR方法检测MMP-12基因表达,酶谱分析法检测MMP-2、MMP-9和MMP-12酶活性,组织特殊染色法检测弹力纤维降解,电镜观察Ⅱ型细胞与肺泡隔间质细胞间的"信息交流(cross talking)"现象,ELISA检测肺泡灌洗液中TGF-β1和TNF-α含量,免疫组化检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果 照射后1、2和4周肺组织MMP-12基因表达增加,2~4周MMP-12酶活性增高;照射后1周肺泡基底膜弹力纤维出现降解断裂,4周时最为严重;电镜观察发现肺泡Ⅱ型细胞与间质细胞间发生Cross talking现象,肺泡灌洗液TGF-β1和TNF-α含量与α-SMA免疫组化阳性信号皆随照射后时间延长而增高。结论 照射后肺组织MMP-12表达增加,可能通过降解基底膜弹力纤维启动肺组织重建,导致肺损伤朝着纤维化方向发展。     

严重创伤早期大鼠下丘脑HSP70与iNOS表达与分布的时效关系

目的研究严重创伤早期大鼠下丘脑热休克蛋白(HSP)70与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)转录表达变化分布和意义.方法采用BIM-Ⅲ型生物撞击机致大鼠胸部严重撞击伤,并造成单侧股骨骨折,运用S-ABC免疫组化、原位杂交技术测定下丘脑HSP70与iNOS及其mRNA的转录表达水平.结果正常对照组HSP70低水平表达,在伤后1小时即开始明显增高(P＜0.05),6小时达到峰值为正常的18倍,12小时后开始下降,24小时时主要集中在室旁核内;iNOS无基础表达,在伤后1小时开始出现,随HSP70同步增高,8小时达到高峰,较1小时时增加13倍.两者相关系数r=0.97601.结论严重创伤后早期下丘脑内HSP70和iNOS过度表达, 在严重创伤应激时下丘脑的损伤与抗损伤机制中起重要作用.     

血必净注射液对烫伤大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1表达的影响及意义

目的 观察中药血必净注射液(简称血必净)对烫伤大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达及炎症反应的影响.方法 采用大鼠30% TBSA三度烫伤延迟复苏模型.78只雄性Wistar大鼠随机分为假烫伤组(n=18)、烫伤组(n=30,伤后2h静脉注射生理盐水4ml/kg)和血必净组(n=30,伤后2h静脉注射血必净4ml/kg),于伤后8、24、72h活杀动物,留取肺组织,采用RT-PCR和Western blot检测HMGB1基因和蛋白的表达,酶学分光光度法测定髓过氧化物酶(MPO)活性.结果 与假烫伤组比较,烫伤组肺组织HMGB1基因和蛋白表达在伤后8～72h显著增强(P＜0.05或0.01),MPO活性在伤后8h及24h明显增高(P＜0.01).与烫伤组比较,血必净组大鼠肺组织HMGB1表达在伤后24h及72h显著下调(P＜0.05或0.01),MPO活性在24h时间点显著降低(P＜0.01).结论 HMGB1作为晚期炎症因子参与了烫伤后肺组织炎症反应的病理过程,血必净治疗可明显下调肺组织HMGB1表达,并减轻烫伤延迟复苏所致急性肺损伤.