基于内质网应激探讨GLP-1RA 抗动脉粥样硬化的作用

目的 探讨胰高血糖素样肽 -1受体激动剂(glucagon-like peptide-1 receptor agonist,GLP-1RA)Exendin-4 对载脂蛋白 E 基因敲除(ApoE -/-)小鼠动脉粥样硬化斑块的作用及内质网应激通路的影响。方法 将16只ApoE -/- 小鼠随机分为模型组、Exendin-4组,同时以C57BL/6J小鼠作为对照组,8只/组。对照组给予普通饲料,其余组给予高脂饲料喂养12周建立动脉粥样硬化斑块模型,Exendin-4组给予Exendin-4腹腔注射,20μg/(kg·d),余两组分别腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液,干预4周。监测各组小鼠血糖变化,给药结束后检测血清总胆固醇、甘油三酯水平,留取主动脉用HE染色、天狼星红染色观察斑块,免疫组化法检测斑块中内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白 78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、C/EBP 同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(apoptotic protein B lymphoblastoma-2,Bcl-2)的表达情况。结果 Exendin-4组随机血糖水平与模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05),Exendin-4组血清TC水平较模型组降低(P＜0.05), TG水平比较差异无统计学意义(P＞0.05);病理学形态观察显示Exendin-4组主动脉斑块面积较模型组变小,斑块内胶原含量增多,脂质、泡沫细胞数目均减少,管腔狭窄减轻;Exendin-4组GRP78、CHOP阳性细胞数较模型组明显减少(P均＜0.05),Bcl-2阳性细胞数增多(P＜0.05)。结论 GLP-1RA具有改善动脉粥样硬化的作用,其机制可能是通过下调内质网应激,降低凋亡蛋白的表达来实现的。     

利拉鲁肽基于NF-资B/NLRP3通路介导的焦亡途径对小鼠动脉粥样硬化的干预作用研究

目的基于NF-资B/NOD样受体蛋白3（NLRP3）通路,探讨利拉鲁肽[胰高血糖素样肽-1（GLP-1）类似物）]对动脉粥样硬化（AS）小鼠模型的干预作用。方法取12只6周龄雄性C57BL/6J正常小鼠作为普通饮食组（A组）,将36只6周龄SPF级雄性ApoE-/-小鼠随机分成高脂饮食组（B组,12只）、高脂饮食＋利拉鲁肽组（C组,12只）和高脂饮食＋利拉鲁肽＋GLP-1受体抑制剂exendin（9-39）组（D组,12只）。各组小鼠饲养至18周龄后,检测血清中IL-6、IL-1茁、TNF-琢、HDL-C、LDL-C、TG和TC水平;HE染色检测小鼠主动脉病理学变化,并分析内膜中层厚度（IMT）及主动脉AS面积与所取血管面积比值;Westernblot法检测主动脉内膜中NLRP3、半胱天冬酶-1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、磷酸化NF-资Bp65（p-NF-资Bp65）、NF-资Bp65蛋白表达水平。结果与A组相比,B组和D组小鼠的主动脉呈血管壁增厚,管腔狭窄,有大量斑块、炎性细胞浸润及脂质沉淀等病变,血清IL-6、IL-1茁、TNF-琢、LDL-C、TG、TC水平,主动脉IMT,主动脉AS面积与所取血管面积比值,主动脉内膜NLRP3、Caspase-1、ASC、p-NF-资Bp65/NF-资Bp65蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,HDL-C水平显著降低（P＜0.05）;与B组相比,C组小鼠主动脉病变程度明显减轻,血清中IL-6、IL-1茁、TNF-琢、LDL-C、TG、TC水平、主动脉IMT、主动脉AS面积与所取血管面积比值、主动脉内膜NLRP3、Caspase-1、ASC、p-NF-资Bp65/NF-资Bp65蛋白表达水平均降低（均P＜0.05）,HDL-C水平升高（P＜0.05）;与C组相比,D组小鼠主动脉病变程度明显加重,血清IL-6、IL-1茁、TNF-琢、LDL-C、TG、TC水平,主动脉IMT、主动脉AS面积与所取血管面积比值、主动脉内膜NLRP3、Caspase-1、ASC、p-NF-资Bp65/NF-资Bp65蛋白表达水平均升高（均P＜0.05）,HDL-C水平降低（P＜0.05）。结论利拉鲁肽可通过抑制NF-资B/NLRP3信号通路,减轻AS小鼠的炎症反应和细胞焦亡,改善主动脉病理学损伤。     

可可粉抑制雌性ApoE-/-小鼠主动脉动脉粥样硬化斑块的形成

目的研究可可粉对雌性ApoE-/-小鼠主动脉动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法以雌性ApoE-/-小鼠为研究对象,按照随机对照表将小鼠（45只）随机分为3组:对照组（高脂高胆固醇饮食）、低剂量组（高脂高胆固醇+0.2%可可粉饲喂）、高剂量组（高脂高胆固醇+2%可可粉饲喂）,每组各15只。相应饮食饲喂小鼠12周,观察各组小鼠体重、肝脏重量、肝脏重量/体重;检测小鼠血浆血脂指标（TG、TC、LDL-C和HDL-C）的水平;HE和油红O染色分析小鼠主动脉的病理变化及斑块面积。结果 3组小鼠的体重、肝脏重量、肝脏重量/体重、TG、TC和主动脉根部斑块面积差异均无统计学意义（P>0.05）;与对照组比较,低、高剂量组的HDL-C水平显著升高,LDL-C水平显著降低,主动脉斑块面积显著减少。结论可可粉能够有效抑制雌性ApoE-/-小鼠主动脉动脉硬化斑块形成,这可能与其改善机体血脂水平有关。     

芍药苷对ApoE^-/-小鼠血脂及主动脉斑块的影响

[目的]观察芍药苷对ApoE^-/-小鼠血脂及主动脉斑块形成的影响。[方法]6周龄ApoE^-/-雄性小鼠经普通饲料饲养4周,髙脂饲料饲养12周后,随机分为ApoE^-/-模型组及芍药苷60 mg/kg、30 mg/kg剂量组,相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠作为空白对照组。药物干预12周后,检测血脂的变化,并测量主动脉弓部、胸段、腹段斑块面积。[结果]ApoE^-/-模型组甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）显著高于C57BL/6J组（P〈0.01）,芍药苷60 mg/kg、30 mg/kg组的血脂水平显著低于ApoE^-/-模型组（P〈0.05,P〈0.01）,并且不同程度减小主动脉各段斑块的面积。[结论]芍药苷具有降脂和抑制主动脉斑块形成的作用,表明芍药苷具有抗动脉粥样硬化作用。     

血脂平稳度对兔动脉粥样硬化病变进展的影响

目的探讨血脂平稳度对兔动脉粥样硬化病变进展的影响。方法 24只雄性新西兰大耳兔随机分为3组,空白组（A）6只,对照组（B）9只,血脂波动组（C）9只,A组给予普通饲料,B组持续高脂饲料喂养,C组高脂饲料喂养至12周后与低脂饲料每隔3周交替喂养1次,共喂养24周。分别于0周、12周更换高低脂饲料时测定血脂及hs-CRP水平,并行腹主动脉超声检查。观察主动脉病理学改变并分析病变程度。结果 12周时,血清TC、TG、LDL-C及hs-CRP水平,B组分别为（37.36±1.82）mmol/L、（2.30±1.46）mmol/L、（40.33±2.32）mmol/L、（0.40±0.10）mg/dl,C组为（34.96±6.98）mmol/L、（1.48±0.82）mmol/L、（34.65±7.94）mmol/L、（0.45±0.11）mg/dl,均较A组（0.78±0.24）mmol/L、（0.61±0.44）mmol/L、（0.27±0.13）mmol/L、（0.17±0.04）mg/dl显著升高（P〈0.01）。24周时,C组TC、LDL-C的SI值（3.60、3.29）明显低于B组（12.51、7.61）,B、C组血清TC、TG、LDL-C、hs-CRP水平升高的同时,C组hs-CRP水平（0.53±0.07）mg/dl较B组（0.45±0.06）mg/dl升高（P〈0.05）。12周时B、C组腹主动脉内-中膜厚度（intima-media thickness,IMT）（0.70±0.11、0.84±0.14）mm均高于A组（0.40±0.01）mm,24周时C组IMT（1.10±0.21）mm高于B组（0.77±0.11）mm。B、C组主动脉内膜可见典型动脉粥样斑块,C组斑块面积百分比（53.53±22.6）%较B组（33.90±24.91）%高,但斑块纤维帽厚度（103.50±45.66）μm较B组（295.83±97.90）μm薄（P〈0.01）,光镜下可见纤维帽不连续。结论血脂平稳度与动脉粥样硬化病变的进展相关,血脂平稳指数越小斑块发展速度越快,其发生机制可能与炎症反应加重有关。     

抗菌肽LL-37对结肠癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及其机制

目的：探讨抗菌肽LL-37对结肠癌小鼠肿瘤生长和细胞凋亡的影响,阐明其抗肿瘤作用的可能分子机制。方法：构建LL-37过表达结肠癌HT-29细胞,采用qRT-PCR和Western blotting法检测HT-29细胞中LL-37 mRNA和蛋白表达水平。30只BALB/c小鼠随机分为对照组（给予未经感染的HT-29细胞）、空载组（给予感染空载质粒的HT-29细胞）、LL-37过表达组（给予感染LL-37过表达载体的HT-29细胞）、AMPK抑制剂组[给予感染空载体的HT-29细胞后,立刻尾静脉注射2 mg·kg^-1（Dorsomorphin,Dor）]和联合组（给予感染LL-37过表达载体的HT-29细胞后,立刻尾静脉注射2 mg·kg^-1 Dor）,每组6只。采用结肠癌HT-29细胞复制结肠癌小鼠模型,观察各组小鼠肿瘤体积并绘制生长曲线,感染24 d后剥离肿瘤测量质量并计算抑瘤率,TUNEL染色检测各组小鼠肿瘤细胞凋亡情况,Western blotting法检测各组小鼠肿瘤组织中自噬相关蛋白Beclin1、Atg5、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ及AMPK/mTOR通路相关蛋白AMPK、p-AMPK、mTOR及p-mTOR表达水平。结果：与对照组和空载组比较,LL-37过表达组小鼠结肠癌HT-29细胞中LL-37 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,肿瘤质量和体积明显降低（P<0.05）,抑瘤率升高（P<0.05）,肿瘤细胞凋亡数减少,肿瘤组织中自噬相关蛋白Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值均明显升高（P<0.05）,p-mTOR/mTOR比值明显降低（P<0.05）;与空载组比较,AMPK抑制剂组小鼠肿瘤质量和体积明显升高（P<0.05）、抑瘤率降低（P<0.05）,肿瘤细胞凋亡数减少,自噬相关蛋白Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值明显降低（P<0.05）,p-mTOR/mTOR比值明显升高（P<0.05）;与LL-37过表达组比较,联合组小鼠肿瘤组织中Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值明显降低（P<0.05或P<0.01）,p-mTOR/mTOR比值明显升高（P<0.01）。结论：抗菌肽LL-37能激活AMPK/mTOR信号通路促进细胞自噬,进而抑制结肠癌HT-29荷瘤小鼠的肿瘤生长。     

早期雌激素替代疗法对去卵巢家兔动脉粥样硬化的影响

目的探讨早期雌激素替代疗法对去卵巢家兔动脉粥样硬化病变的影响。方法36只雌性新西兰大白兔随机分成假手术组（A组）、对照组（B组）和雌激素组（C组）,每组12只,各组均进食含1.5%胆固醇的高脂饲料。A组不去卵巢,B组和C组均去卵巢,A组、B组均给予安慰剂,C组给予小剂量雌激素（戊酸雌二醇2?mg/周）,饲养12周后均切开股动脉后取血,并取全长的主动脉。分别检测血液学指标,光镜下观察组织病理。取主动脉根部5?mm?标本进行切片(横切面):HE染色,观察横切面动脉硬化病变的内膜/中膜厚度比值;苦味酸天狼星红染色,观察斑块内胶原纤维的含量,免疫组化法半定量观察横切面斑块内巨噬细胞的阳性率。其余部分从胸主动脉起始部到腹主动脉分叉处纵行剖开,油红O染色,分析纵剖面斑块面积及占主动脉的面积比。结果无论是横切面HE染色的内膜/中膜厚度比,还是纵剖面油红O染色的动脉粥样硬化斑块面积及占主动脉的面积之比,A、C组都明显小于B组（P＜0.05）,C组斑块内巨噬细胞的阳性率明显低于B组（P＜0.05）,但C组斑块内胶原纤维的含量多于B组（P＜0.05）。结论早期雌激素替代治疗可改善血脂代谢,减少斑块内巨噬细胞的数量,增加斑块内胶原纤维的含量,稳定斑块,可能是通过这些作用抑制了动脉粥样硬化斑块的进展。     

栀子苷对1型糖尿病小鼠心肌损伤的保护作用和机制研究

目的：探究栀子苷对1型糖尿病小鼠心肌损伤的保护作用及可能的机制。方法：将32只C57BL/6J小鼠随机分为4组：对照组、1型糖尿病模型组（STZ组）、25 mg/kg栀子苷给药组（GE25组）、50 mg/kg栀子苷给药组（GE50组）。测定血糖和体重水平,HE和Masson染色检测心肌纤维化,免疫组化检测LC3B、P62、Ⅰ型胶原蛋白（Collagen Ⅰ）和Ⅲ 型胶原蛋白（Collagen Ⅲ）的表达。体外培养大鼠心肌细胞H9C2,将细胞分为正常组、高糖组、高糖+栀子苷组、高糖+栀子苷+ AMPK抑制剂化合物C（Compound C）组。Western blot检测自噬相关蛋白LC3BⅡ/Ⅰ、P62、Beclin1、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine 5′?monophosphate ?activated protein kinase,AMPK）、磷酸化AMPK（p?AMPK）、mTOR和p?mTOR及凋亡相关蛋白的表达。结果：与STZ组相比,栀子苷给药组（GE25组和GE50组）体重明显增加（P < 0.01）,血糖显著降低（P < 0.01）,明显减轻心肌结构异常,减少胶原沉积（P < 0.01）;免疫组化和Western blot结果显示,STZ组LC3BⅡ/Ⅰ、Beclin1和p?AMPK/AMPK的表达水平降低,Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、P62、p?mTOR/mTOR、BAX/BCL2和Cleaved?caspase 3/Caspase 3的表达水平升高,栀子苷给药组与之趋势相反。细胞实验中,栀子苷预处理激活AMPK（p?AMPK/AMPK比值升高）和自噬活性（LC3BⅡ/Ⅰ升高,P62的表达降低）,且该效应被AMPK抑制剂阻断。结论：栀子苷能改善1型糖尿病心肌病的心肌损伤,减轻心肌纤维化,其机制可能与激活AMPK介导的细胞自噬有关。     

参红通络颗粒对 ApoE－／－小鼠动脉粥样硬化斑块内细胞凋亡的影响及其抗动脉粥样硬化作用机制

目的：探讨参红通络颗粒对载脂蛋白E基因缺陷（ApoE^-/-）小鼠血脂水平、主动脉粥样硬化斑块及斑块内细胞凋亡的影响,阐明参红通络颗粒抗动脉粥样硬化的作用机制。方法：选取无特异病原（SPF）级6周龄雄性ApoE^-/-小鼠40只,适应性喂养1周后,按随机数字表法分为正常对照组、模型组、低剂量中药治疗组和高剂量中药治疗组,每组10只。正常对照组给予普通饲料,其余各组小鼠通过喂饲高脂饲料建立小鼠动脉粥样硬化模型,造模成功后,低和高剂量中药治疗组小鼠分别给予参红通络颗粒5.06和10.12g·kg^-1·d^-1灌胃治疗6周。6周后腹腔麻醉下摘眼球取血,测定各组小鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平;分离主动脉弓,行HE染色,观察各组小鼠主动脉粥样硬化斑块形态并计算斑块面积;TUNEL法检测小鼠主动脉粥样硬化斑块内细胞凋亡情况,计算凋亡指数;免疫组织化学染色法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：低剂量中药治疗组小鼠血清TG水平明显低于模型组（P<0.05）,低和高剂量中药治疗组小鼠血清HDL-C水平明显高于模型组（P<0.05或P<0.01）;高剂量中药治疗组小鼠血清TG和HDL-C水平均明显高于低剂量中药治疗组（P<0.05）。与模型组比较,低和高剂量中药治疗组小鼠主动脉粥样硬化斑块面积明显缩小（P<0.01）,主动脉粥样斑块内细胞凋亡指数明显降低（P<0.01）,主动脉粥样斑块内Bcl-2蛋白表达水平明显降低、Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：参红通络颗粒能够显著升高ApoE^-/-小鼠血清HDL-C水平,并通过调控Bcl-2、Bax蛋白表达抑制细胞凋亡,从而有效抑制动脉粥样斑块进展。     

核外p53通过AMPK/mTOR信号抑制自噬并促进热打击诱导的血管内皮细胞损伤

目的 阐明核外p53通过调控蛋白激酶（AMPK）/雷帕霉素靶体（mTOR）信号通路介导自噬抑制在热打击后血管内皮细胞（VECs）损伤的分子机制。方法 实验分为：对照组、热打击组、热打击组+Compound C组、热打击组+rapamycin组、热打击组+PFT组,并分别使用AMPK抑制剂Compound C、mTOR抑制剂（自噬激活剂）rapamycin、p53线粒体转位抑制剂PFT预处理细胞或C57BL/6小鼠,通过CCK8法检测细胞活力,Western blot观察p53线粒体移位、自噬关键蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1和P62以及AMPK/mTOR信号通路的激活情况,HE染色观察各组小鼠主动内皮血管病理改变,TUNEL染色观察各组小鼠动内皮血管凋亡情况。结果 与对照组相比,热打击后主动脉内皮细胞（MAECs）活力显著下降（P<0.05）,热打击后小鼠主动脉血管内皮细胞肿胀、脱落,内弹力膜断裂,平滑肌排列紊乱,可见大量凋亡细胞;热打击后随着复温时间（0、3、6、9 h）延长,MAECs胞浆中p53表达逐渐减弱,而线粒体p53表达逐渐增强;热打击后（6 h）LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达被抑制,p62蛋白表达增加（P<0.05）;热打击后（6 h）AMPK的磷酸化被抑制,mTOR、4EBP1和p70S6K的磷酸化表达增加（P<0.05）。AMPK抑制剂Compound C明显抑制了热打击后MAECs中LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达,促进了p62蛋白表达,并加重了热打击后小鼠主动脉血管的损伤以及促进了凋亡的增加,而mTOR抑制剂rapamycin均呈现相反作用。p53线粒体转位抑制剂PFT促进了AMPK的磷酸化激活,并抑制mTOR、4EBP1和p70S6K的磷酸化（P<0.05）;使用PFT后促进了LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达,抑制了P62的表达（P<0.05）;使 用PFT后明显提高了MAECs的细胞活力（P<0.05）,也减轻了热打击后小鼠主动脉血管的损伤和凋亡的发生。结论 核外p53主要通过抑制AMPK活性,激活mTOR信号,继而介导细胞自噬抑制,参与热打击诱导的MAECs损伤。     

利拉鲁肽通过AMPK/mTOR信号通路诱导自噬改善肝脂肪变性

目的探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路在利拉鲁肽(LG)改善肝细胞脂肪变性中的作用及机制。方法动物实验:将小鼠分为对照组、模型组和LG组,各10只,对照组普通饲料喂养, 另2组高脂饲料喂养建立肝脂肪变性模型。LG组应用LG腹腔注射0.6 mg·kg-1·d-1,另2组应用等量0.9%氯化钠溶液,连续4周。检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、低密度脂蛋白(LDL)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG);应用HE染色和油红O染色观察肝细胞形态、脂肪变性和脂滴情况;应用蛋白质印迹(Western blotting)法检测p-AMPK、p-mTOR及自噬蛋白LC3B、Beclin1表达情况。细胞实验:应用棕榈酸(PA)诱导建立HepG2肝细胞脂肪变性模型,分为模型组(PA)、LG组(PA+LG)和AMPK抑制剂组(PA+LG+Compound C)。应用免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3B的表达;应用Western blotting法检测p-AMPK、p-mTOR、LC3B、Beclin1的蛋白表达情况。结果动物实验:模型组ALT、AST、LDL、TC、TG升高,应用LG后下降,差异均有统计学意义(P < 0.05~P < 0.01);HE染色、油红O染色发现,模型组肝细胞可见大片脂肪变性、大量融合脂滴,LG组脂变减轻、脂滴含量减少。Western blotting结果显示,模型组p-AMPK、LC3B、Beclin1的蛋白表达下降,而LG组中升高,模型组p-mTOR升高,而LG组中降低(P < 0.05~P < 0.01)。细胞实验:免疫荧光染色LC3B发现,LG组较模型组增加,而AMPK抑制剂组,LC3B的表达受到抑制;Western blotting结果示:和模型组相比,LG组p-AMPK、LC3B、Beclin1的蛋白表达升高,而应用AMPK抑制剂后表达受抑制,而p-mTOR相反, 差异均有统计学意义(P < 0.05~P < 0.01)。结论LG通过AMPK/mTOR通路来改善肝细胞脂肪变性,自噬可能参与其中。     

黄连解毒汤通过调节性T细胞产生抗动脉粥样硬化作用

目的 观察黄连解毒汤（HLJDD）对ApoE-/-小鼠斑块、炎症因子及调节性T细胞（Tregs）的影响;方法 高脂饲料喂养雄性ApoE-/-小鼠建立动脉粥样硬化（Atherosclerosis, AS）模型,40只雄性ApoE-/-小鼠随机分为：模型组、辛伐他汀组、HLJDD高、中、低剂量组（n=8）,HLJDD灌胃剂量依次为：3.5、7.0、14.0 g-1穔g-1穌-1,辛伐他汀灌胃剂量为5 mg穔g-1穌-1,另设8只同龄雄性C57BL/6J小鼠为对照组,喂以普通饲料,连续给药16周后处死小鼠。检测血脂水平,观察主动脉斑块形成情况;ELISA法检测血清炎症因子水平;流式细胞术检测Tregs数量;RT-PCR法检测Foxp3 mRNA水平;结果 与对照组相比,模型组中主动脉斑块明显,TC、TG与LDL-C浓度显著升高,促炎因子超敏C反应蛋白（hs-CRP）、白介素-6（IL-6）与肿瘤坏死因子-α （TNF-α）水平显著升高,而HDL-C、白介素-10（IL-10）、生长转化因子-β（TGF-β）、Foxp3 mRNA水平显著降低,Tregs数量减少,二者差异有统计学意义（P<0.01）;HLJDD能显著缩小主动脉斑块面积,降低血清TC、TG与LDL-C,并降低IL-6、hs-CRP与TNF-α水平,增加血清HDL-C、IL-10、TGF-β及Foxp3 mRNA水平,并增加Tregs数量,与模型组相比差异显著（P<0.01）;结论 HLJDD可显著减轻ApoE-/-小鼠主动脉斑块损伤,可能与增加Tregs数量,从而降低血清炎症因子水平有关。     

TR3受体激动剂6-mercaptopurine对糖尿病ApoE-/-小鼠NF-κB p65/CylinD1通路影响及其与抗动脉硬化关系

目的观察TR3受体激动剂（6-mercaptopurine,6-MP）对链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的载脂蛋白E（apolipoprotein E,ApoE-/-）敲除糖尿病小鼠糖脂代谢及NF-κB p65/CylinD1通路的影响及其与抗动脉硬化的关系,探讨TR3受体在改善糖尿病动脉粥样硬化可能机制。方法40只雄性ApoE-/-小鼠随机分为4组:ApoE-/-组、STZ-ApoE-/-组、STZ-ApoE-/-+6-MP5（5 mg·kg-1·d-1）组、STZ-ApoE-/-+6-MP10（10 mg·kg-1·d-1）组,每组10只;6-MP腹腔注射法给药,每天1次,连续8周;STZ 60 mg/kg腹腔注射ApoE-/-小鼠建立糖尿病动脉粥样硬化模型,血糖试纸法测血糖水平;酶法或匀相法测血脂水平;蛋白免疫印迹试验（Western-blotting）测胸主动脉组织NF-κB p65/CylinD1蛋白水平;油红O染色观察胸主动脉内膜动脉脂质沉积;HE染色测胸主动脉内膜粥样斑块面积。结果与ApoE-/-组相比,STZ-ApoE-/-组血糖及血清TG、TCHO、LDL-C均显著增高（P < 0.05）;TR3受体激动剂6-MP呈剂量依赖性降低糖尿病ApoE-/-小鼠血糖、血脂水平,与STZ-ApoE-/-组相比,STZ-ApoE-/-+6-MP5组血糖、TG、LDL-C、TC均显著降低（P < 0.05）,与ApoE-/-组相比,STZ-ApoE-/-组胸主动脉NF-κBp65、CylinD1蛋白表达水平均显著增加（P < 0.05）;6-MP呈剂量依赖性降低糖尿病ApoE-/-小鼠胸主动脉NF-κBp65/CylinD1蛋白表达,STZ-ApoE-/-+6-MP5组NF-κB p65/CylinD1蛋白表达水平均明显低于STZ-ApoE-/-组（P < 0.05）;STZ-ApoE-/-+6-MP10组与STZ-ApoE-/-+6-MP5组之间胸主动脉NF-κB p65/CylinD1蛋白表达水平差异均有统计学意义（P < 0.05）。油红O染色显示:TR3受体激动剂6-MP可呈剂量依赖性抑制STZ-ApoE-/-小鼠胸主动脉内膜脂质沉积;HE染色显示:TR3受体激动剂6-MP可呈剂量依赖性降低STZ-ApoE-/-小鼠胸主动脉内膜斑块面积,减少斑块内部有空洞（脂质）形成,抑制斑块周围组织及斑块基底部平滑肌层增生,与STZ-ApoE-/-组相比,STZ-ApoE-/-+6-MP5组胸主动脉内膜斑块面积明显减小（P < 0.05）,STZ-ApoE-/-6-MP10组斑块面积进一步减小（P < 0.01）。结论TR3激动剂6-MP可明显降低糖尿病ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的形成,其机制可能与其改善糖脂代谢,抑制NF-κB p65/CylinD1信号通路有关。     

定心方调控巨噬细胞极化防治动脉粥样硬化的机制研究

目的：通过定心方（DXR）对巨噬细胞极化的调控,探讨DXR抗动脉粥样硬化（AS）可能机制。方法：ApoE-/-小鼠50只随机分为5组：AS模型组,辛伐他汀组[辛伐他汀药液灌胃5 mg/（kg·d）],DXR低、中、高剂量组[分别给予DXR药液灌胃9.3、18.6、37.2 g/（kg·d）]。10只C57BL/6J小鼠设为空白对照组。16周后HE染色测定小鼠主动脉AS斑块形态学;生化检测血清脂质水平;ELISA检测血清炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及巨噬细胞极化标记物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶-1(Arg-1)水平;Western blot检测主动脉iNOS、Arg-1蛋白表达。结果：与空白对照组比较,AS模型组小鼠主动脉可见明显的脂质斑块;血清TC、TG、LDL-C水平显著增高,HDL-C水平显著降低;血清IL-6、TNF-α水平显著增高;血清iNOS水平及主动脉iNOS蛋白表达显著增高,血清Arg-1水平及主动脉Arg-1蛋白表达显著降低（P<0.05）。与AS模型组小鼠比较,DXR可显著减小小鼠主动脉AS斑块面积;降低小鼠血...     

银杏内酯K调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对乳腺癌细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨银杏内酯K（GK）调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对乳腺癌细胞自噬和凋亡的影响。方法 取对数生长期的MCF-7细胞,设置分组为对照组、GK低浓度（GK-L,12.5 μg/mL）组、GK中浓度（GK-M,25 μg/mL）组、GK高浓度（GK-H,50 μg/mL）组、GK-H+AMPK抑制剂（Compound C,50 μg/mL GK+50 μmol/L Compound C）组。观察各组细胞形态以及细胞增殖、凋亡、自噬状况并分析自噬相关基因LC3、P62、Beclin1 mRNA表达以及AMPK、p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1、LC3、P62、Beclin1表达。结果 与对照组相比,GK-L、GK-M、GK-H组细胞自噬泡数量增多,增殖率、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1、p62表达显著下降,凋亡率、LC3、Beclin1表达、AMPK蛋白表达显著增加（P＜0.05）;与GK-H组相比,GK-H+Compound C组细胞自噬泡数量减少,增殖率、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1、p62显著增加,凋亡率、LC3、Beclin1表达、AMPK蛋白表达显著降低（P＜0.05）。结论 GK可以诱导乳腺癌细胞自噬和凋亡、抑制其增殖,可能与激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路有关     

原花青素预防大鼠冠状动脉粥样硬化研究

目的在大鼠冠状动脉粥样硬化（AS）模型发展过程中,用葡萄籽原花青素进行干预,探讨大鼠AS时葡萄籽原花青素对血总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）活性,及其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法将80只健康Wistar雄性大鼠随机分为4组;A空白对照组（普通饮食）;B模型组（维生素D3＋高脂、高胆固醇饮食）;C银杏黄酮组（90mg/kg,ig/d）;D葡萄籽原花青素组（90 mg/kg,ig/d）。10周后测定TC、TG、HDL、LDL活性。结果 B组TC、TG、LDL,较A组明显升高（P〈0.01）,HDL降低（P〈0.01）;C组TC、TG、LDL、较B组显著降低（P〈0.01）,而HDL升高（P〈0.01）。D组的作用优于C组（P〈0.05）。结论葡萄籽原花青素具有降脂、阻止AS早期主动脉壁粥样硬化发展的作用。     

肥甘饮食诱导ApoE-/-小鼠引发高脂血症及对血脂、超氧化物歧化酶、丙二醛影响的研究

目的：通过肥甘饮食诱导ApoE-/-小鼠引发高脂血症及对血脂及超氧化物歧化酶、丙二醛影响的研究,探讨高脂血症的伏痰病因学本质。方法：将ApoE-/-小鼠用随机数字表法分为2组,同样将C57BL/6J小鼠分为2组,共4组,每组10只。分别以正常饲料、肥甘饲料喂养。通过生化检测,比较各组小鼠血清中总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的水平及超氧化物歧化酶、丙二醛的变化。结果：喂养8周后,与A组小鼠相比较,B、C、D各组小鼠在TC、TG、HDL-C、LDL-C改善方面有统计学意义（P〈0.05）;与B、C组比较,D组小鼠在TC、TG、LDL-C改善方面具有统计学意义（P〈0.01）,而在HDL-C方面,D组与B组比较,有统计学意义（P〈0.05）,与C组比较,无统计学意义。结论：在饮食干预和（或）先天禀赋不足情况下,血清超氧化物歧化酶活性下降,血清丙二醛含量增高。     

芹菜素通过AMPK/mTOR通路调控肺癌A549细胞自噬

目的 探讨芹菜素（APG）对肺癌A549细胞增殖及自噬的影响及其与AMPK/mTOR通路的关系。方法 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度芹菜素处理A549细胞不同时间后对细胞增殖的影响。后续实验分为空白对照组(0 μmol/L APG),低、中、高浓度实验组和抑制剂组5组,采用MDC染色法检测各组对细胞自噬的影响,免疫印迹法检测自噬相关蛋白以及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 芹菜素可显著抑制A549细胞增殖,且呈浓度依赖性（P<0.05）;20、40、80 μmol/L芹菜素组随作用时间延长,对A549细胞的增殖抑制率逐渐增加,呈时间依赖关系（P<0.05）。与空白对照组比较,实验组A549细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡数量及IOD值逐渐增加（P<0.05）,芹菜素可浓度依赖性上调LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值（P<0.05）,下调p-mTOR、p62蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值（P<0.05）。与高浓度实验组比较,抑制剂组细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡减少,IOD值下降,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值降低,而P62、p-mTOR蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值升高（P<0.05）。结论 芹菜素能抑制肺癌A549细胞增殖,诱导其自噬,作用机制可能与AMPK/mTOR通路有关     

松果菊苷对动脉粥样硬化血管钙化小鼠Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响

目的 探究松果菊苷对动脉粥样硬化血管钙化小鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 将48只7周龄雄性ApoE-/-小鼠采用随机数字表法分为6组,每组8只：分别为模型组,松果菊苷（ECH）12.5、25、50 mg/kg组,辛伐他汀片（Sta）组和对照组,依据不同分组建模及给药。观察小鼠主动脉组织形态学变化,检测小鼠血清中生化指标水平,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠主动脉组织β-连环蛋白（β-catenin）mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测小鼠主动脉组织β-catenin、Wnt3a、LDL受体相关蛋白5(LRP5)及骨形态发生蛋白2(BMP-2)蛋白表达水平,采用免疫组化法检测小鼠主动脉组织LRP5蛋白表达水平。结果 ECH 25、50 mg/kg组及Sta组小鼠主动脉中膜较模型组明显变薄,弹力纤维排列整齐,斑块明显缩小。ECH 25、50 mg/kg组和Sta组TG、TC、LDL-C水平均低于模型组,差异均有统计学意义（均P<0.01）。ECH 12.5、25、50 mg/kg组和Sta组HDL-C水平均高于模型组,差异均有统计学意义（均P&l...     

兔动脉粥样硬化模型血清TNF-α与斑块内细胞凋亡的相关性研究

目的 探讨TNF-α 在动脉粥样硬化斑块形成中的作用。 方法 10 只雄性大耳白兔随机分为模型组（A 组） 和正常对照组（B 组）,每组5 只。模型组通过球囊损伤腹主动脉内膜,并饲喂高脂饲料15 周;对照组普通饲料喂养15 周。于实验前及15 周末,经耳缘静脉空腹取血,进行血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholested,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholested,LDL-C）、TNF-α的测定,并处死动物分离腹主动脉,进行光学显微镜观察,TUNEL 免疫组化检测细胞凋亡。 结果 兔动脉粥样硬化模型制备成功。模型组与对照组比较,TG、TC、LDL-C、TNF-α 均显著增高（P 均＜ 0.05）。TG、TC、LDL-C 与TNF-α 均呈显著正相关（P 均＜ 0.05）,与HDL 无明显相关性。模型组血清TNF-α 水平与腹主动脉斑块内细胞凋亡指数呈显著正相关。 结论 TNF- α 可能参与了动脉粥样硬化斑块内细胞凋亡,血清TG、TC、LDL-C、TNF-α 是动脉粥样硬化的危险因素。