硅藻COX-Ⅰ区种属特异性PCR用于法医学溺死诊断

目的:对KEint2F和KEintR这一对COX-Ⅰ区特异性PCR引物应用于法医学溺死诊断的有效性进行研究。方法:取12例溺死尸体和5例非水中尸体的肺、肝组织,以及取落水区域水样及双蒸水,通过硝酸消化镜检法(镜检法)和种属特异性PCR检验法(PCR法)两种方法进行硅藻检验,对其硅藻的检出率进行对比。结果:PCR法比镜检法具有更高的硅藻检出率。结论:KEint2F和KEintR可作为法医学硅藻检验的特异性PCR引物用于法医学溺死的诊断。     

贵阳市区不同水域硅藻检验在鉴定溺死中的应用

在鉴定溺死的许多方法中,由于硅藻法技术简单、稳定,结果可靠,因此是一种最出色的方法。本实验旨在探索几种特殊水域与一般水域硅藻量及种属的特点．以借助硅藻检验鉴定不同水域中溺死尸体提供依据。     

溺死相关硅藻rbcL基因检测技术研究

目的：筛选硅藻叶绿体核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶大亚基（large subunit of ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase oxyge－nase,rbcL）基因的特异性引物,建立溺死尸体组织内硅藻rbcL基因的聚合酶链式反应-毛细管电泳（polymerase chain reaction-capillary electrophoresis,PCR-CE）检测方法,探讨在溺死诊断中的应用价值。方法：采用荧光标记引物扩增硅藻rbcL基因,对21种标准藻株、5种浮游水生标准菌株、3种人体共生标准菌株和人类DNA扩增产物进行PCR-CE检测,验证引物特异性和灵敏度。检测溺死尸体组织样本中硅藻,并比对微波消解-真空抽滤-自动扫描电镜法（microwave digestion-vacuum filtration-automated scanning electron microscopy,MD-VF-Auto SEM）检测结果。结果：使用引物ND-rbcL对21种标准藻株、5种浮游水生标准菌株、3种人体共生标准菌株和人类DNA进行扩增,其中舟形藻、菱形藻、小环藻、变异直链藻、针杆藻和骨条藻6种硅藻的CE检测结果为阳性,DNA片段为197 bp,其他为阴性。6种硅藻DNA检测阳性的灵敏度分别为0.502、0.117、0.029、0.042、0.275和0.215 ng（20 μL扩增体系）。PCR-CE方法检测35例尸体（3例陆地正常死亡尸体,2例水中发现非溺死尸体,30例溺死尸体）的组织样本,肺脏、肝脏和肾脏硅藻检出率分别为100%、63.3%和53.3%,检测总阳性率为83.3%。当溺水死亡尸体脏器组织内硅藻含量>10个/10 g时,使用MD-VF-Auto SEM方法检测,其检测总阳性率为100%,PCR-CE方法检测,其检测总阳性率为92.6%,两者对检测溺死尸体脏器中硅藻阳性率无统计学差异（ ?字2=2.077,P=0.491）;当硅藻含量<10个/10 g时,PCR-CE方法检测为阴性,与MD-VF-Auto SEM方法检测溺死尸体各种脏器中硅藻阳性率具有统计学差异（P<0.05）。结论：基于ND-rbcL引物建立的PCR-CE法能快速检测硅藻rbcL基因,所需检材量小,易于推广,在溺死诊断中有较好地应用前景。     

三种硅藻检验方法比较

目的比较强酸消解-离心富集-光镜检验法（方法A）、微波消解-滤膜富集-扫描电镜联用法（方法B）和微波消解-滤膜富集-
光镜检验法（方法C）在硅藻检验中的效果,为法医学实验室选择硅藻检验方法提供参考。方法60份样本,随机分为3组,分别
采用A、B、C三种方法处理,比较3种方法处理样本所需时间、消化程度和硅藻回收率。结果样本处理时间C法最短,其次是B
法,A法耗时最长（P<0.05）。B法和C法对组织的消化程度比A法更彻底。硅藻总回收率B法最高,C法其次,A法最低（P<
0.05）。硅藻种类回收率B法最高,C法其次,A法最低（P<0.05）。结论强酸消解-离心富集-光镜检验法的硅藻回收率低,易漏
检长度小于40 μm、含量低于1/5的硅藻;微波消解-滤膜富集-扫描电镜联用法硅藻回收率高、定性定量准确,适用于疑难案例的
硅藻检验;微波消解-滤膜富集-光镜检验法处理样本时间短、硅藻回收率高、种类检出全,设备经济、操作简单、易于推广。
     

溺死动物不同时间血清锶检测的实验研究

目的研究动物溺水死后不同时间血锶的变化。方法以高频电感偶合等离子体光谱分析仪（ICP-XSP）检测外样水体中锶离子含量，并分别测定家兔溺死与死后入水的左心血的锶含量。结果实验家兔溺水死后5min、6h和24h血锶含量分别为（0．273±0．126）、（0．335±0．146）和（0．132±0．033）μg／ml，溺水死后5min和6h与溺水前的（0.117±0.035）μg／ml差异有统计学意义（P〈0.05；P〈0．01），溺水死后24h与溺水前差异无统计学意义（P〉0．05），而死后入水的血锶含量与死前差异皆无统计学意义（P〉0．05）。结论实验表明尸体在水中浸泡时间对血锶含量有显著影响，所以超过12h以上的水中尸体，须结合当地环境，尸体现象，硅藻检验，溺死水源及血锶离子含量等多因素综舍分析，确定死因。     

酶法检测59例尸体脏器硅藻的结果分析

目的探讨酶法硅藻检验制片新技术和防止污染措施,提高检验质量。方法用胰蛋白酶消化法对59例硅藻检验案例进行检验并分析其结果。结果硅藻检验阳性结果准确率为93．7％。阴性检验结果准确率为82％,总体准确率为91．5％。结论酶消化硅藻检验技术简便、检出率高、结果稳定可靠,有利于提高硅藻检验的质量。     

乙肝携带者卵巢颗粒细胞原位杂交检测方法的建立及临床意义

目的探讨应用于乙肝携带者卵巢颗粒细胞涂片原位杂交技术。方法选择6例乙肝携带者颗粒细胞涂片原位杂交,每例涂片12张,分别进行蛋白酶K浓度（1μg、2μg、3μg）、消化时间（1min、3min、5min）、探针浓度（1∶10、1∶20、1∶30）及显色时间（10min、20min、30min）优化。结果 3例颗粒细胞核均检测到HBVDNA阳性信号。最佳反应条件为,蛋白酶K浓度为2μg,消化时间为3min,探针∶预杂交液比为1∶20,显色时间为20min。结论蛋白酶K浓度、消化时间、探针浓度及显色时间是原位杂交中关键性步骤,该技术可用于颗粒细胞涂片的研究。     

PCR毛细管电泳法检测嗜水气单胞菌gyrB和16SrRNA基因:溺死诊断方法

目的 建立嗜水气单胞菌gyrB和16SrRNA基因PCR毛细管电泳检测方法,探讨它们在淡水溺死诊断中的应用价值.方法 提取人、18种浮游生物(白色念珠菌、嗜水气单胞菌及16种藻类),以及经微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测过的30例尸体(其中生前淡水溺死28例,陆地自然死亡2例)的组织样本的DNA(肺、肝、肾各1份例),分别使用引物AH(gyrB基因)及引物Ah(16SrRNA基因)进行扩增,扩增产物用毛细管电泳法检测.结果 人、白色念珠菌、16种藻类DNA扩增后毛细管电泳检测结果均为阴性,而嗜水气单胞菌结果均为阳性,其产物大小分别为195 bp,350bp.分别利用引物AH和Ah对28例淡水溺死尸体样本肺、肝、肾进行PCR毛细管法进行检测,嗜水气单胞菌的检出率:AH分别为96.4％,71.4％,60.7％;Ah分别为75.0％,42.9％,32.1％,计算得到溺死者的体循环脏器中嗜水气单胞菌检验的总阳性率分别为82.1％,53.6％,2例陆地自然死亡案件尸体样本检测结果均为阴性.两对引物AH与Ah对嗜水气单胞菌检出率有显著性差异(P＜0.05).结论 PCR毛细管电泳法检测嗜水气单胞菌gyrB基因用于诊断淡水溺死灵敏度较高,可作为诊断的辅助性方法;联用16SrRNA基因可提高该菌的检出率,增强MD-VF-Auto SEM法诊断淡水溺死的证据力.     

无氧运动对大鼠骨骼肌肌浆网Na＋,K＋-ATP酶活性的影响

【目的】研究无氧运动对大鼠骨骼肌肌浆网Na＋,K＋-ATP酶活性的影响。【方法】参照BEDFORD TG标准,建立跑台运动训练及运动负荷大鼠运动模型。将16只大鼠随机分为两组：正常对照组（n=8）和无氧运动组（n=8）,训练周期为4周。超速离心法提取大鼠骨骼肌肌浆网,测定肌浆网Na＋,K＋-ATP酶的活性。【结果】无氧运动组Na＋,K＋-ATP酶的活性较正常对照组显著升高（P〈0.05）。【结论】实验结果表明,较短时间（4周）的无氧运动可保护骨骼肌肌浆网Na＋,K＋-ATP酶的活性。     

培土生金法对慢性阻塞性肺疾病大鼠膈肌细胞增殖与凋亡的影响

【目的】观察培土生金法(加味陈夏六君子汤)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠膈肌细胞增殖与凋亡的影响。【方法】将40只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、中药高剂量组(71.82 g·kg-1·d-1)、中药低剂量组(17.96 g·kg-1·d-1),采用气管内注入脂多糖(LPS)联合香烟烟熏法造模,观察各组大鼠一般情况及体质量变化;苏木素—伊红(HE)染色镜下观察大鼠膈肌病理变化,免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)在膈肌中的表达,并计算增殖指数(PI)。TUNEL法检测膈肌细胞凋亡情况,并计算凋亡指数(AI)及PI/AI值。【结果】与空白组比较,模型组大鼠体质量增长缓慢(P0.01),膈肌细胞凋亡指数显著升高(P0.01),PI/AI值显著下降(P0.01);与模型组比较,中药高剂量组大鼠体质量增长迅速(P0.01),细胞凋亡指数显著降低(P0.01),PI/AI值显著升高(P0.01)。【结论】培土生金法治疗COPD的作用与其能维持细胞增殖/凋亡平衡,减少COPD大鼠膈肌细胞凋亡有关。     

基于深度学习的生物医学文本分类研究

目的：探索基于深度学习的文本分类方法在生物医学文本的学科分类中是否具有更好的分类性能。方法：以中国医院科技量值研究中累积的神经病学科、消化病学科、肿瘤学科的SCI论文为数据来源,分别训练并测试CNN、LSTM、LSTM-CNN、LSTM-attention及SVM模型并评估其性能。结果：5类模型中,双层CNN模型的分类性能最好,CNN、LSTM、LSTM-CNN和LSTM-attention模型的分类性能均优于SVM模型。结论：基于深度学习的文本分类方法可提高生物医学文本的学科分类精度,推动医院评价和学科评估的发展。     

三种方法提取当归挥发油的气相色谱--质谱比较

【目的】比较常压水蒸气蒸馏(NPSD)、减压水蒸气蒸馏(VDS)和超临界CO2萃取(SFE-CO2)法所提取当归挥发油的化学成分及其含量。【方法】采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)进行分析。【结果】3种提取方法所提取的挥发油无论在成分还是在含量上均存在一定差异。【结论】以SFE-CO2法提取效率高,提取成分较完全,为提取当归挥发油的理想方法。     

基于贝叶斯方法对乳腺癌进行计算机辅助预测

选取699例疑似患上乳腺癌的细胞样本特性的数据集,每个数据样本都由11个属性字段所构成,选取9个细针吸取细胞学指标为学习字段,并且将数据集随机分为测试集和训练集,然后从训练集中学习得到贝叶斯模型,而从测试集的检验中获取了很高的准确率,因此贝叶斯方法是一种可行的计算机预测技术。     

基于深度学习的时间飞跃法磁共振血管成像对脑动脉瘤自动检测方法研究

目的探讨时间飞跃法磁共振血管成像(time-of-flight magnetic resonance angiography, TOF-MRA)结合人工智能技术对脑动脉瘤进行全自动检测的诊断性能。方法选择2016年3月—2017年11月在复旦大学附属华山医院行常规体格检查(简称体检)或就诊的130例非破裂颅内囊状动脉瘤患者的TOF-MRA影像,分为训练集(75例)、内部测试集(20例)、外部测试集(35例)。采用基于三维Unet(3D-Unet)的计算机辅助检测方法,在对TOF-MRA影像进行预处理后,进行全自动颅内血管分割,获得感兴趣区域,并在分割结果的基础上,引入医师的标注。对3D-Unet网络模型进行训练调参,利用得到的模型进行脑动脉瘤区域的自动检测。结果对训练集与内部测试集采用五折交叉验证,得到(94.4±1.1)%的灵敏度,对外部测试集进行动脉瘤自动检测,在平均假阳性率为0.86 FPs/case(false positives/case)的情况下得到的灵敏度为82.9%。将外部测试集数据进行分类比较显示,该方法的检测尺寸为5.00～<10.00 mm和≥10.00 m...     

三维ResNet 网络预测肺腺癌结节亚型的效能及其 稳定性

目的:探究ResNet模型对肺腺癌不同亚型结节的分类表现及稳定性。方法:回顾性收集2014 年2 月—2020 年10 月期 间的364 例肺腺癌结节CT 影像数据,以7∶3 的比例分为训练集和内部测试集,将2020 年4 月到2020 年11 月的58 例结节数 据作为外部测试集。使用基于ResNet的三维卷积神经网络在训练集中进行训练以及调参,并使用内部测试集和外部测试集对 模型的准确性及泛化性进行评估。使用随机中心移动和掩膜处理的方式分别以内部测试集和外部测试集为基础构造新的测试 集,新数据集对模型进行测试验证模型的稳定性。结果:模型在内部测试集AUC 为0.949 1（95%CI:0.910 8～0.987 4）,模型在随 机中心移动以及掩膜处理之后的数据集的AUC 值分别为0.940 4 和0.918 1, 与其差异无统计学意义（P 值分别为0.425 3 和 0.239 3）。在外部测试集中模型AUC 为0.959 6（95%CI:0.901 2～1.000 0）,在用于稳定性测试的随机中心移动以及掩膜处理之 后的数据集中,模型所得AUC 分别为0.948 5和0.947 3,与其同样差异无统计学意义（均P>0.05）。结论:ResNet 模型对肺腺癌 结节亚型有优异的鉴别能力,并且具有一定稳定性。     

高效分离屠宰成年猪肝细胞用于生物人工肝方法的建立

【目的】探讨氧合dispase及胶原酶组酶消化法从屠宰成年猪肝脏高效分离肝细胞的方法及分离肝细胞的生物活性。【方法】部分肝叶逆行灌注、氧合组酶dispase及胶原酶消化、密度梯度离心法分离、纯化肝细胞 ,并对其生物活性进行检测。【结果】肝组织细胞的收获量达10× 10 6 个 / g ,细胞平均存活率可达 92 5 % ,且无泡状变性的发生 ,原代培养生物活性与原代培养鼠肝细胞一致 ,随时间的延长而减退。【结论】氧合组酶dispase及胶原酶消化、密浓度梯度离心法自屠宰成年猪分离肝细胞产量高、且保持着良好的生物活性 ,可作为生物人工肝的理想肝细胞源用于肝脏终末性疾患的治疗。     

乙醇对兔心室肌细胞L-型钙离子通道电流的影响

【目的】观察乙醇对兔心室肌细胞L-型钙离子通道电流（ICa,L）的影响。【方法】采用蛋白酶消化的成年兔单个心室肌细胞及膜片钳全细胞技术，记录不同浓度乙醇对ICa,L的作用。【结果】（1）乙醇抑制ICa,L峰值，24mmol／L和240mmol／L乙醇抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）24、80、240mmol／L乙醇使ICa,L的电流一电压（I—V）曲线上移，在各测试电压下，电流均减小，但不影响曲线形状，用乙醇后最大激活电压仍在0mV左右。【结论】致毒浓度（24mmol／L）的乙醇对ICa,L具有明显抑制作用。可导致心肌产生负性肌力作用，动作电位时程缩短，诱发心律失常。     

止咳平喘类中成药中9种非法添加化学成分的定性定量检验方法研究

【目的】建立检测止咳平喘中成药中9种非法添加化学成分的定性定量检验方法。【方法】采用超高效液相色谱—四级杆—飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF)联用技术对止咳平喘类中成药中非法添加的9种化学成分进行定性筛查,经筛查为阳性的样品用高效液相色谱法(HPLC)对止咳平喘中成药中非法添加的9种化学成分进行含量检测。色谱柱采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈及甲酸铵缓冲液(p H 3.65),梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,检测波长为225 nm和280 nm。【结果】通过对5批止咳平喘类中成药进行检测,检出1批样品含有磷酸可待因,含量为0.84 mg/m L。【结论】本法简便准确,灵敏度高,适用于止咳平喘类中成药中9种非法添加化学成分的检测。     

两种前处理方法对粘液型宫颈HPV分型结果的比较

目的 研究2种前处理方法对粘液型标本HPV DNA杂交结果的影响,为进一步提高临床检验质量和改进检测技术提供理论依据.方法 收集100例妇科门诊患者粘液型宫颈脱落细胞标本,分别采用常规方法(生理盐水震荡法)和蛋白酶K消化法对脓性粘液型标本进行前处理,应用核酸分子快速导流杂交技术进行21种HPV亚型感染检测.研究不同前处理方法对HPV DNA浓度、纯度和分型结果的影响.结果 ①常规方法处理后所抽提的DNA纯度、含量分别为1.63±0.71和(96.35±13.15)μg/ml,蛋白酶K消化法处理后所抽提的DNA纯度、含量分别为1.80±0.52和(105.14±18.65)μg/ml,蛋白酶K消化法处理后检测的DNA纯度和含量分别高于常规法(P＜0.01).②常规法检测出现PCR反应抑制物的例数为4例,而蛋白酶K消化法则为0例.③常规法和蛋白酶K消化法HPV分型的总阳性率、单一感染率、多重感染率分别为28.0％、23.0％、5.0％和32.0％、26.0％、6.0％,两法一致性检验Kappa=0.888,结果具有较好的一致性.结论 基于蛋白酶K消化法的HPV检测,对粘液型标本可获得质量较好的HPV DNA,无核酸丢失和污染,分型结果满意,可以有效去除PCR反应抑制物,操作简便,适合临床检验应用.     

人工智能在鉴别肝门部胆管癌细胞及周围神经侵袭中的应用

目的 建立一种用于辅助诊断肝门部胆管癌(HC)的人工智能(AI)算法模型,评价其识别肿瘤细胞及周围神经侵犯(PNI)的能力.方法 采用AI算法对825张HC和175张非癌变组织图像(600张为训练集,300张为测试集,100张为比较数据集)进行深度学习,将不同参数的GoogLeNet和DenseNet相结合的神经网络用于HC细胞和PNI的特征提取和深度学习.比较该AI算法模型与3名病理科医师(副主任医师、主治医师、住院医师各1名)在判断肿瘤有无及肿瘤细胞百分比的差异.结果 基于深度学习的AI算法可以准确识别HC组织标本图像中的肿瘤细胞及PNI.AI算法诊断肿瘤的能力可与经验丰富的病理科副主任医师媲美,且在评估肿瘤细胞百分比方面更胜一筹.结论 AI算法模型在识别HC肿瘤细胞及PNI方面具有辅助作用.