中央空调冷却塔水嗜肺军团菌PFGE分子分型

目的 了解中山市中央空调冷却塔水血清1型（LP1）及血清7型（LP7）嗜肺军团菌脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型情况。方法 对2012—2014年从中山市部分酒店、娱乐场所、商场、医院等公共场所中央空调冷却塔水样本中分离出的41株LP1型嗜肺军团菌和12株LP7型嗜肺军团菌进行脉冲场凝胶电泳,运用Bio Numerics6.6软件进行聚类分析。结果 按照100%的相似程度,41株LP1型嗜肺军团菌分为26种PFGE型别,每个带型包括1~6株菌,菌株之间的相似系数为16.6%~100%;12株LP7型嗜肺军团菌分为10种PFGE型别,每个带型包括1~2株菌,菌株之间的相似系数为19.3%~100%。不同地区和不同年份分离的菌株存在相同的PFGE型别;同一场所可存在相同的PFGE型别,也可跨月份或年份存在不同的型别。按照90%以上的相似程度, LP1型嗜肺军团菌有4个克隆群,包含的菌株数和PFGE带型占其血清型别分离株总数以及PFGE型别总数的51.2%（21/41）和30.8%（8/26）;LP7型嗜肺军团菌有2个克隆群,包含的菌株数和PFGE带型占其血清型别分离株总数以及PFGE型别总数的50.0%（6/12）和40.0%（4/10）。克隆群在空间和时间分布上无明显差异。结论 中山市中央空调冷却塔水中LP1型及LP7型嗜肺军团菌分离株存在广泛的PFGE基因型别,未形成某一优势基因群的地区优势及时间趋势。     

集中空调系统水中嗜肺军团菌脉冲场凝胶电泳指纹图谱分析

目的研究某市2014年公共场所集中空调系统水中嗜肺军团菌的分子指纹图谱,初步建立某市嗜肺军团菌的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型数据库。方法对某市2014年公共场所集中空调系统水分离的34株嗜肺军团菌,采用PFGE技术进行电泳,并经Bio Numerics 6.6软件进行聚类分析。结果34株嗜肺军团菌的PFGE图谱共分为24种PFGE带型,不同地区嗜肺军团菌存在同样的酶切图谱,同一采样场所不同冷却塔检出菌株的PFGE带型相同,聚类分析结果显示菌株间相似性系数为23.80%~100.00%。结论某市2014年公共场所集中空调系统水嗜肺军团菌菌株基因型散在分布,呈多态性和复杂性,同时具有克隆化特征。     

深圳市嗜肺军团菌血清Ⅰ型菌株PFGE分型指纹图谱研究

目的研究深圳市公共场所中央空调冷却塔水中分离的嗜肺军团菌血清Ⅰ型（LpⅠ）的基因特征。方法应用脉冲场凝胶电泳（Pulsed-Field Gel Electrophoresis，PFGE）技术对30株LpⅠ型军团菌进行电泳，并经Bionumerics软件进行聚类分析。结果30株菌可分为28种PFGE型。不同地区间分离出部分菌株，经PFGE分型，相似性系数为100％，表明深圳市公共场所中央空调冷却塔水间可能存在交叉污染；同一地区，菌株间相似性系数存在差异，没有优势菌株；同一采样地点，存在两种以上PFGE型别。结论深圳市公共场所冷却塔水中分离的LpⅠ型菌株基因宅多样性．     

深圳市公共场所冷却塔水中嗜肺军团菌Mip序列分型研究

目的研究深圳市公共场所冷却塔水中嗜肺军团菌的基因特征。方法采用军团菌巨噬细胞感染力增强因子基因（Macrophage Infectivity Potentiator,mip）分型方法。提取深圳市51株嗜肺军团菌菌株DNA,聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction,PCR）技术扩增mip基因,并将PCR扩增产物进行测序。结果每菌株测序后,序列与European Working Group for Legionella Infections（E.W.G.L.I）组织建立的数据库进行比对。51株嗜肺军团菌分为5种型别,分别为L.pnuemophile-phil-1、L.pnuemophile-sg3、L.pnuemophile-D-15、L.pnuemophile-sg10与L.pnuemophile-97-2898。结论mip分型方法可用于嗜肺军团菌的基因分型。深圳各区不同场所冷却塔水中分离的嗜肺军团菌株之间存在差异,L.pnuemophile-phil-1型别为优势型别占60.8％。     

江苏省张家港市2017年人源沙门菌血清型特征及分子分型

目的 分析2017年张家港检出的92株人源沙门菌的血清学特征,用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对优势血清群进行分子分型研究,为该地区沙门菌菌型库积累数据。方法 收集和提取2017年张家港地区人源沙门菌患者血清学特征,对优势群B群沙门菌进行PFGE分子分型检测,利用PulseNet China网络获得相关性指纹图谱并进行聚类分析。结果 92株沙门菌分离株分布7个血清群和16个血清型,以B群为主（33.70％）,30株B群沙门菌PFGE指纹图谱可分为26个基因型（相似值100% 为同一PFGE 型别）,19个克隆系（相似度在0.85~1.00的为同一PFGE的克隆系）。其中9株德尔卑沙门菌可分为5个克隆系7个基因型,7个基因型相似度60.92％~100％;7株阿贡那沙门菌PFGE指纹图谱5个克隆系6个基因型,6个基因型相似度0~100%;6株鼠伤寒沙门菌可分为3个克隆系5个基因型,5个基因型相似度48.51％~100％。结论 张家港市人源沙门菌血清型多样化分布,B群沙门菌为优势血清群。沙门菌PFGE带型较多,基因多态性较高,同一血清型可获得不同PFGE指纹图谱。其中德尔卑沙门菌亲缘关系近,鼠伤寒部分菌株存在较近的亲缘关系,阿贡那沙门菌各克隆系存在明显差异,亲缘关系较远。     

漳州市公共场所淋浴水嗜肺军团菌污染状况调查

目的调查漳州市公共场所淋浴水嗜肺军团菌的污染现况,为制定预防控制措施提供依据。方法 2016-2017年随机抽取漳州市公共场所淋浴水160件,检测嗜肺军团菌及其菌型。2017年对64株阳性菌株进行荧光PCR检测。结果漳州市公共场所淋浴水两年共采集160件,检出嗜肺军团菌72件,检出率为45.00%(72/160);检出嗜肺军团菌334株,共有13种血清型,以LP1、LP6型为优势菌型,分别占检出菌的32.64%(109/334)和24.85%(83/334),LP3、LP5、LP7、LP8、LP9、LP11、LP12、LP13、LP14均有检出。用热处理检出的有177株,检出率52.99%;用酸处理检出的有86株,检出率25.75%;未处理检出的有71株,检出率21.26%;热处理与未处理比较差异有统计学意义(χ~2=72.055 8,P0.001);热处理与酸处理比较差异有统计学意义(χ~2=51.933 7,P0.001)。2016年阳性标本军团菌浓度最高为3.75×10~3CFU/L,平均浓度为1.6×10~3CFU/L;2017年阳性标本军团菌浓度最高为7.5×10~3CFU/L,平均为2.5×10~3CFU/L。2017年将分离的65株嗜肺军团菌进行属特异性基因检测和种特异性基因检测,结果均为阳性,阳性率为100.00%。结论漳州市公共场所淋浴水存在嗜肺军团菌污染,血清型别以LP1和LP6为主,相关部门需引起足够重视,防止军团菌病发生。     

深圳市中央空调冷却塔水军团菌AFLP分型研究

目的 了解深圳市中央空调冷却塔水中军团菌的多态性，分析优势种群和菌型分布，为建立军团菌分子型别库提供资料。方法 运用The European Working Group for Legionella Infections（E．W．G．L．I）组织制定的扩增片断长度多态性分型（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）方法，对深圳市中央空调冷却塔水中军团菌进行分子分型。结果 按照血清分型方法，将冷却塔水中军团菌分为Lp1、Lp2-14以及非嗜肺型，运用AFLP技术对50株军团菌菌株分型，结果将22株Lpl血清型分为7种AFLP型，分别记为AFLP1—7，以AFLP2型与AFLP5型为主要型别；20株Lp2-14血清型分为7种AFLP型，分别记为AFLPⅠ—AFLPⅦ，以AFLPⅠ、Ⅱ为主要型别；9株非嗜肺军团菌血清型分为5种AFLP图谱。结论 AFLP分型技术能初步分析深圳市军团菌优势种群，为对军团菌监测及致病性军团菌型别的分析提供基本资料。     

公共场所中央空调冷却塔水中分离出嗜肺军团菌的调查

目的调查宁夏公共场所中央空调冷却塔水中嗜肺军团菌污染状况。方法采集宁夏21家宾馆、饭店的中央空调冷却塔水21份,用GVPC、BCYE-α等培养基进行嗜肺军团菌的分离,用诊断血清进行分型,并以PCR法加以确证。结果21份冷却水中有7份分离到嗜肺军团菌,检出率为33.33%,菌型分布为：LP1 5株、LP9一株、LP10一株,上述菌株PCR检测mip基因结果均为阳性。结论宁夏公共场所中央空调冷却塔水中存在着嗜肺军团菌,污染较为严重,都有可能对人群造成危害,必须引起重视。     

深圳市食物中毒来源金黄色葡萄球菌的分子流行病学分析

目的建立金黄色葡萄球菌(金葡菌)的分子分型技术,研究深圳市食物中毒来源金葡菌的分子流行病学特征。方法对食物中毒事件中食物链的不同环节均采集标本,进行金葡菌分离培养。对所分离菌株同时应用SPA分型及PFGE技术作分子流行病学分析。结果 136起疑似食物中毒事件中有12起能够从食物链不同环节分离到金葡菌,共59株。PFGE将59株金葡菌分为15个型别,在10起食物中毒事件的不同环节中分析到PFGE型别一致的菌株,分辨系数为0.87。SPA分型将59株金葡菌分为10个型别,在12起食物中毒事件中不同环节样品中分析到SPA型别一致的菌株,分辨系数为0.85。结论 PFGE的分辨力高于SPA分型;通过结合流行病学资料分析,12起食物中毒事件中有6起能够通过分子分型方法准确溯源。     

广西2009～2012年集中式中央空调冷却塔水嗜肺军团菌调查

目的 了解广西公共场所集中式中央空调冷却塔水嗜肺军团菌污染状况,为科学防制提供依据.方法 采集2009～2012年广西14个地级市公共场所301份集中式中央空调冷却塔水进行嗜肺军团菌培养及鉴定.结果 共检出嗜肺军团菌95株,阳性率31.56％(95/301),LP1型占54.74％ (52/95),LP2-15型占45.26％(43/95).中央空调系统使用单位(酒店、宾馆、超市和医院)该菌阳性率40.29％ (83/206).45株嗜肺军团菌1型经脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,获得了41种基因型别,带型比较分散,未发现绝对优势带型.结论 广西公共场所水体嗜肺军团菌污染普遍存在且较严重,对人群健康构成潜在威胁,需要引起重视,以防军团菌病的暴发流行.     

海南省2005年霍乱暴发菌株PFGE图谱研究

目的 分析海南省2005年霍乱菌株暴发分离株的分子特征及菌株之间的分型相似性,为防治工作提供病原依据,并与PulseNet China提供资料进行相关分析。方法对分离株进行噬菌体-生物分型,通过PCR检测霍乱毒素基因,利用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子分型和相似性聚类分析。结果54株分离株中有51株为产毒株,稻叶血清型,噬菌体-生物分型为1b型,其余3株为非流行株。全部菌株被分为15种PFGE带型,聚类分析大部分产毒株之间高度相似,并与PulseNet China提供资料证实,与同时福建、广东、浙江流行的稻叶型菌株带型相同。结论海南省2005年稻叶型暴发菌株,属于2005年流行的菌型,提示在我国东南沿海地区的广泛扩散。     

上海市宝山区2015—2018年腹泻病人沙门菌血清分型和分子分型

目的 揭示上海市宝山区腹泻病人分离沙门菌的血清型和分子分型分布特征。方法 对2015—2018年分离的118株沙门菌进行血清分型和脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis,PFGE）分型,通过构建聚类树揭示不同血清型菌株的分子分型特征。结果 118株沙门菌分为25种血清型,前三位为肠炎沙门菌（45株,38.1%）、鼠伤寒沙门菌（26株,22.0%）、伦敦沙门菌（11株,9.3%）。其余22种血清型分别只包含1~3株菌。118株沙门菌通过PFGE分为71个PFGE带型,每个带型分别包含1~19株菌。45株肠炎沙门菌分为8个PFGE带型,相似度为75.0%~100.0%,在聚类树上形成一个簇;26株鼠伤寒沙门菌分为21个PFGE带型,相似度为48.0%~100.0%,在聚类树上形成两个簇;11株伦敦沙门菌分为8个PFGE带型,相似度为80.0%~100.0%,在聚类树上形成一个簇。结论 肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌是上海市宝山区腹泻病人沙门菌优势血清型,但近年伦敦沙门菌有增多的趋势。肠炎沙门菌在本地区传播流行过程中的遗传变异相对比较保守,鼠伤寒沙门菌基因型多态性大,而且存在两个克隆。     

流感嗜血杆菌基因分型研究

目的应用生物学分型、血清学分型和脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分析从健康人群分离的流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,Hi)的分子流行病学规律以及与Hi生物学分型、血清学分型、青酶素酶之间的关系。方法对深圳市1月龄以上380名健康人群采集咽拭子,共分离培养175株流感嗜血杆菌,参照Pitt-man方法对菌株进行血清学分型,应用PCR方法进行流感嗜血杆菌属及荚膜鉴定,参照Kilian方法对其中的141株菌株进行生物学分型,从不同年龄组选出共59株流感嗜血杆菌株,应用PFGE技术进行分子分型研究。结果 141株流感嗜血杆菌分为8个生物型,Ⅰ~Ⅷ型分别为8.51%、36.88%、34.04%、4.96%、7.80%、0.71%、6.38%、0.71%。分离的菌株以无荚膜的不可分型Hi为主(97.14%),5株为有荚膜型,其中2株为b型,3株为e型,Hi产青霉素酶的阳性率为14.18%,59株Hi菌株分为52个PFGE基因型。结论深圳市健康人群Hi携带菌株多为无荚膜的不可分型流感嗜血杆菌,生物学分型以Ⅱ、Ⅲ型为主。PGFE基因分型呈明显的多态性。     

深圳市布吉街道从业人员沙门菌PFGE分型分析

目的了解深圳市龙岗区布吉街道从业人员携带沙门菌的血清型、耐药特点及脉冲场凝胶电泳(pulsed fieldgel electrophoresis,PFGE)分子分型特点。方法对从深圳市龙岗区布吉街道2011~2012年健康从业人员肛拭子样品中分离的19株沙门菌进行生化及血清学分型鉴定、改良K-B法药敏试验和开展PFGE分子分型分析。结果 19株沙门菌以B群(11株)和C1群(4株)为主;19株沙门菌对四环素的耐药率最高,为57.9%,其次为甲氧苄氨嘧啶和磺胺甲基异恶唑(新诺明),均为42.1%,8株菌有多重耐药的现象,为42.1%;PFGE分子分型菌株之间的相似度在57.4%~94.1%,同一血清型的沙门菌相互间的相似度均低于85.0%,同一血清型别的沙门菌可对应多个PFGE型别。结论深圳市布吉街道从业人员携带的沙门菌的PFGE型别呈现多样性,PFGE指纹图谱与血清学型别无相关性;19株沙门菌对头孢类抗生素完全敏感,对其他抗生素存在中度敏感或耐药,耐药谱与PFGE分型无直接的关联。     

沙门菌携带者分离株血清学及PFGE分型研究

目的建立在健康携带者分离的沙门菌的血清型及PFGE分子型别图谱库,探讨其多态相关性关系。方法将预防性健康体检分离获得的21株沙门菌鉴定培养,进行血清分型;将确定后的菌株用限制性内切酶Xba I消化酶切其基因组DNA,在脉冲场凝胶电泳仪进行DNA电泳,所得的分子型别图谱用Bionumerics5.1软件建立图谱数据库,并进行聚类分析。结果21株沙门菌分属于O：4（B）、O：9（D1）和O：3,10（E1）3个菌群,8种血清型;以德尔卑沙门菌为主,共7株占所有分离株的占33.3%,其次为阿贡纳沙门菌19.1%（4/21）,鼠伤寒沙门菌14.3%（3/21）。经比对分析,18株沙门菌分为15个PFGE型别,菌株间的相似值在53.9%～100%之间,同一血清型别的沙门菌可对应多个PFGE型别。结论沙门菌的PFGE型别呈现多样性,脉冲场凝胶电泳对从业人员体检沙门菌有较高的分型能力,可为沙门菌的日常监测和相关疫情的处理提供重要的技术支撑。     

佛山市副溶血弧菌病原学与分子流行病学特征

目的了解佛山市副溶血弧菌病原学与分子流行病学特征,为副溶血弧菌感染暴发的早期预警、分子流行病学调查及溯源提供准确的实验室数据。方法选取监测食品、食物中毒、散发病例来源的副溶血弧菌,采用血清学、药物敏感性试验、多重PCR检测毒力基因和PFGE分子分型等方法,分析不同来源的副溶血弧菌病原学特征以及分子分型方面的异同。结果 151株菌株中,监测食品分离株血清型分布呈现多样性,无优势菌株;食物中毒分离株和散发病例分离株的优势血清型为O3∶K6。监测食品、食物中毒和散发病例分离株对氨苄西林和磺胺嘧啶都有较高的耐药率,多重耐药情况比较严重。监测食品分离株99.18%(121/122)为tdh-trh-菌株,1株tdh+trh+菌株;食物中毒分离株中tdh+trh-菌株占69.23%(9/13),30.77%(4/13)tdh-trh-菌株;散发病例分离株均为tdh+trh-菌株。151株菌株共获得134个不同的PFGE带型,监测食品分离株的PFGE呈现遗传多样性,无优势带型,并且与散发及食物中毒患者分离株的PFGE带型不同。食物中毒与散发病例分离株带型相对比较集中。结论佛山市不同来源的副溶血弧菌血清型、毒力基因和遗传特征复杂多样,菌株多重耐药形势严峻,需要加强菌株型别变异及耐药监测。     

沙门氏菌的PFGE分型及耐药分析

目的分析2015年乌鲁木齐市腹泻性疾病中沙门氏菌的耐药性和分子分型情况,探讨其多态性及其与分子流行病学的关系,为减少和控制沙门氏菌病的流行提供参考。方法将分离获得的71株沙门氏菌进行血清型鉴定,KB药敏纸片法检测其药物敏感性,采用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)对分离菌进行电泳分型,所得结果用Bio Numerics 6.6软件进行聚类分析。结果根据电泳指纹图谱,可将71株肠道沙门氏菌分为29个PFGE型别,菌株间的相似值在49.2%~100.0%之间,S-17、S-18型为优势型别,共计43.7%(31/71),其中23.9%(17/71)的菌株为S-17型,19.7%(14/71)的菌株为S-18型;药敏结果:头孢类和环丙沙星敏感率分别为98.6%(70/71)和95.8%(68/71)。结论脉冲场凝胶电泳对沙门氏菌有较高的分型能力,应充分结合传统实验室检测技术和PFGE技术优势,系统地开展腹泻病中沙门氏菌溯源分析及分子流行病学研究。     

腹泻患者沙门菌脉冲场凝胶电泳分型及分布特征

目的了解2014年乌鲁木齐该市引起腹泻患者腹泻的沙门菌的分子流行病学特征,为追踪传染来源,查找传播途径提供线索。方法将分离获得的76株沙门氏菌进行血清型鉴定,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对不同时间,不同地区的76株肠道沙门分离菌进行电泳分型,所得结果运用Bio Numerics 6.6软件进行聚类分析。结果 76株沙门菌血清分型检出最多的是肠炎沙门菌,占39.5%。所有76株沙门菌株酶切图谱分为41个PFGE型,分别命名为S-1~S-41,菌株间条带相似度为46.5%~100.0%。从时间分布上看,全年5~10月均能分离到沙门菌株,感染的高发季节为6月(27.6%,21/76)、7月(23.7%,18/76)和9月(23.7%,18/76)。结论 2014年乌鲁木齐市引起腹泻的沙门菌血清型以肠炎为主,PFGE分型较为分散;不同PFGE型别在时间及地区分布上均提示了一定的流行规律,应当引起重视。     

成人GHD患者的血清瘦素、脂联素、内脂素水平及相关性研究

【摘要】 目的了解三甲医院携带碳青霉烯酶基因blaOXA-58的鲍曼不动杆菌的检出率和菌株克隆相关性,为临床合理使用抗菌药物和制定恰当的感染控制措施提供理论依据。方法收集四川大学华西医院非重复鲍曼不动杆菌临床分离株。菌种的鉴定通过recA基因测序鉴定。PCR检测菌株的固有碳青霉烯酶基因blaOXA-51/66和获得性碳青霉烯酶基因blaOXA-58。用肠杆菌科基因间重复序列-聚合酶链反应分型技术(ERIC-PCR)、多位点序列分型技术(MLST)和脉冲场凝胶电泳分型技术(PFGE)对blaOXA-58阳性的菌株进行克隆相关性分析。结果经recA和blaOXA-51/66检测证实有115株鲍曼不动杆菌临床分离株。其中,9株对亚胺培南敏感性下降〔最小抑菌浓度(MIC)≥2mg/L〕的菌株携带有blaOXA-58,占7.8%。其ERIC-PCR指纹图谱相似。MLST分型结果显示有8株菌属于ST-95型,1株菌属于ST-75型。8株ST-95型鲍曼不动杆菌的PFGE图谱显示为同一个克隆,分属于两个差异很小的亚型。结论我院部分对碳青霉烯敏感性下降的鲍曼不动杆菌临床分离株携带有获得性碳青霉烯酶基因blaOXA-58。blaOXA-58阳性的鲍曼不动杆菌在我院主要以克隆性播散为主。     

PFGE分型方法在食源性单核细胞增生李斯特氏菌分型中的应用

目的了解河北省食源性单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)基因分型分布特征,建立分子分型数据库,为Lm分子流行病学研究提供资料。方法分别以Apa I和Asc I两种内切酶对食品中分离的57株Lm进行PFGE基因分型检测,并以Bio Numerics Version 6.6软件绘制进化树。结果 57株食源性Lm经Apa I和Asc I双酶切后,可产生32个基因型别(PFGE types,PT),分辨率为0.9 516。优势型别为PT11、PT12、PT5和PT10型。结论河北省食品中污染的Lm菌型分散,来源于不同的克隆株。