益气活血中药复方对CVB_3大鼠心肌细胞感染模型核糖体蛋白L27a表达的影响

目的:研究益气活血中药复方对CVB3大鼠心肌细胞感染模型核糖体蛋白L27a(ribosomal protein L27a)表达的作用机制,进一步证实益气活血中药复方是治疗CVB3病毒性心肌炎的有效方剂。方法:本实验用新生2～3天大鼠心肌细胞建立柯萨奇病毒B3(CVB3)感染模型,通过改良的抑制性消减杂交技术(SSH),克隆了受CVB3攻击的宿主细胞中被中药(益气活血中药复方)调控的基因。结果:核糖体蛋白L27a在中药组中呈高表达,病毒组中表达减弱或被抑制。结论:益气活血中药复方能够影响受CVB3攻击的宿主细胞核糖体蛋白L27a的表达,有效保护心肌、阻断病程进度,实现治疗病毒性心肌炎的目的。     

益气活血中药复方影响CVB_3病毒性心肌炎模型乳鼠心肌细胞MCP-1、Rps4基因表达的实验研究

目的:观察益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎模型大鼠心肌细胞small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因表达的影响,以期从基因水平揭示益气活血中药复方治疗CVB3心肌炎的作用机制,进一步证实益气活血中药复方是治疗CVB3病毒性心肌炎的有效方剂。方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(SSH),克隆了受CVB3攻击的宿主细胞中被中药调控的基因,并通过荧光rt-PCR对上述结果进行验证。结果:益气活血中药复方能够上调CVB3病毒性心肌炎模型大鼠心肌细胞small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因的表达。结论:益气活血中药复方可能通过调节small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的。     

益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型NADH脱氢酶亚基1和2表达的影响

目的:研究益气活血中药复方对CVB乳鼠心肌细胞感染模型NADH脱氢酶亚基1和2表达的影响,以期从基因水平揭示益气活血中药复方治疗CVB3心肌炎的作用机制,进一步证实益气活血中药复方是治疗CVB3病毒性心肌炎的有效方剂。方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离大鼠心肌细胞病毒组和益气活血中药复方给药组差异表达的基因,并通过荧光RT-PCR对上述结果进行验证。结果:SSH结果显示中药组中NADH脱氢酶亚基1和NADH脱氢酶亚基2基因的表达均比病毒组中低,这一结果通过荧光RT-PCR得到验证。结论:益气活血法能够通过调节NADH脱氢酶亚基1和2的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的。     

益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎心肌细胞actin、Cx43表达及GJIC功能的影响

目的观察益气活血中药复方对柯萨奇病毒B组3型(Coxsackie virus B3,CVB3)病毒性心肌炎心肌细胞间缝隙连接结构及通讯功能的影响。方法以免疫组化法检测正常组、病毒组、益气活血中药复方组心肌细胞肌动蛋白(actin)及连接蛋白(connexin43,Cx43)表达;,并以激光扫描共聚焦显微镜法检测各组心肌细胞荧光漂白恢复率。结果益气活血中药复方能上调CVB3病毒性心肌炎心肌细胞actin及Cx43表达,能显著改善细胞间缝隙连接通讯(GJIC)功能。结论益气活血中药复方具有对抗CVB3致心肌细胞骨架蛋白损伤,修复CVB3病毒性心肌炎心肌细胞间缝隙连接通道结构,改善CVB3攻击后心肌细胞GJIC功能的作用。     

益气活血中药复方对病毒性心肌炎模型大鼠趋化因子CXCL12 SASH1表达的影响

目的：研究益气活血中药复方影响病毒性心肌炎模型大鼠趋化因子CXCL12（CXC chemokine ligand-12）、Sash1（SAM and SH3 domain containing 1 protein）表达的作用机制。方法：通过改良的抑制性消减杂交技术（SSH）,克隆了受CVB3攻击的宿主细胞中被中药调控的基因,并通过荧光rt-PCR对上述结果进行验证。结果：趋化因子CXCL12、Sash1在中药组中呈高表达,病毒组中表达减弱或被抑制。结论：益气活血法能够影响受CVB3攻击的宿主细胞趋化因子CXCL12、Sash1表达,阻断心肌肥大进程,防止向心衰进展。     

益气活血中药复方与CVB3对乳鼠心肌细胞基因表达的影响

目的:克隆和筛选CVB3乳鼠心肌细胞感染相关基因,以期从基因水平揭示CVB3心肌炎的发病机制,同时探索益气活血中药复方治疗病毒性心肌炎的作用机制.方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离大鼠心肌细胞CVB3感染组和益气活血中药复方给药...     

益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51表达的影响

目的 研究益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51(mitochondrial ribosomal protein L51,MRPL51)表达的影响,以期从基因水平揭示CVB3心肌炎的发病机制及益气活血中药复方治疗病毒性心肌炎的作用机制,并进一步证实益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎的有效性.方法 通过乳鼠心肌细胞培养,建立病毒组和益气活血中药复方组心肌细胞模型,以改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离两组差异表达的基因,并通过荧光RT-PCR对上述结果进行验证.结果 SSH结果显示,MRPL51基因在益气活血中药复方组为低表达,而在病毒组则呈高表达状态,荧光RT-PCR结果显示益气活血中药复方组中MRRPL51基因达到阈值的循环数(Ct)明显多于病毒组,提示MRPL51在病毒组中的表达较中药组中高.结论 MRPL5基因表达上调可能是CVB3致病毒性心肌炎机制之一;益气活血中药复方通过下调MRPL5基因的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的 .     

益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51表达的影响

目的 研究益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51(mitochondrial ribosomal protein L51,MRPL51)表达的影响,以期从基因水平揭示CVB3心肌炎的发病机制及益气活血中药复方治疗病毒性心肌炎的作用机制,并进一步证实益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎的有效性.方法 通过乳鼠心肌细胞培养,建立病毒组和益气活血中药复方组心肌细胞模型,以改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离两组差异表达的基因,并通过荧光RT-PCR对上述结果进行验证.结果 SSH结果显示,MRPL51基因在益气活血中药复方组为低表达,而在病毒组则呈高表达状态,荧光RT-PCR结果显示益气活血中药复方组中MRRPL51基因达到阈值的循环数(Ct)明显多于病毒组,提示MRPL51在病毒组中的表达较中药组中高.结论 MRPL5基因表达上调可能是CVB3致病毒性心肌炎机制之一;益气活血中药复方通过下调MRPL5基因的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的 .     

调心方对氧化损伤型类AD大鼠能量代谢的影响

目的 :探讨调心方对氧化损伤型类AD大鼠脑线粒体能量代谢的影响。方法 :采用二羟延胡索酸 (DHF)加FeCl3 ADP左侧脑室注射 ,造成大鼠氧化损伤型类AD大鼠模型 ;氧电极法测线粒体呼吸链呼吸功能各项指标 (R3、R4、RCR、P/O、OPR)和呼吸链复合物酶活性 ;原位杂交法观察细胞色素氧化酶Ⅱ亚基mRNA表达。结果 :调心方可明显改善模型鼠脑线粒体呼吸功能和细胞色素C氧化酶活性、细胞色素氧化酶Ⅱ亚基mRNA表达的显著降低。结论 :调心方具有改善氧化损伤型类AD大鼠脑线粒体能量代谢异常的作用     

益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎心肌细胞损伤的影响

目的观察益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎心肌细胞损伤的影响。方法以体外细胞培养方法,建立CVB3病毒性心肌炎心肌细胞感染模型。将细胞分为正常组、病毒组、中药组。采用荧光探针Hoechst33258染色法检测心肌细胞凋亡;采用激光共聚焦显微镜检测心肌细胞内钙离子浓度;采用SABC免疫组化法检测心肌细胞心肌肌钙蛋白（cTnI）表达;采用透射电镜检测各组心肌细胞超微结构。结果病毒组与正常组心肌细胞相比,细胞超微结构损伤严重,并可见明显的凋亡细胞核形态,而中药组心肌细胞形态及细胞器结构接近正常组,未见明显的凋亡细胞核形态;正常组心肌细胞cTnI呈阴性表达,病毒组cTnI呈强阳性表达,与正常组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,中药组cTnI呈弱阳性表达,与病毒组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;正常组心肌细胞经中药干预后,钙离子荧光强度无明显变化（P〉0.05）,而病毒组心肌细胞经中药干预后,钙离子平均荧光强度升高（P〈0.01）,与正常组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论益气活血中药复方可抑制CVB3感染后细胞凋亡发生,抑制cTnI蛋白表达,防御并减轻CVB3造成的心肌损伤,具有修复损伤心肌细胞超微结构、改善心肌细胞舒缩功能和血液动力学作用。     

中药胃肠舒对糖尿病大鼠胃窦平滑肌细胞线粒体的影响

目的 :研究中药胃肠舒对糖尿病(diabetes mellitus, DM)大鼠胃窦平滑肌细胞线粒体形态、结构、功能和蛋白的影响,探讨胃肠舒促胃肠运动的线粒体动能调控机制。 方法: 选择体重150-170g的标准SD大鼠随机分为4组:正常对照组、DM组、DM+胃肠舒Ⅰ组、DM+胃肠舒Ⅱ组。透射电子显微镜检测线粒体形态、结构的变化,流式细胞术检测线粒体跨膜电位的变化,荧光测定法检测线粒体呼吸链的变化,Western Blot检测线粒体蛋白的变化。 结果: 胃肠舒能改善DM大鼠胃窦平滑肌细胞线粒体的形态、结构,增强呼吸链功能,线粒体跨膜电位和ATP含量增高,细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase, COX)活性增强,活化物氧自由基(ROS)释放减少,凋亡蛋白家族Bcl-2表达上调,Bax表达下调。 结论 :胃肠舒促胃肠运动可能与改善平滑肌的线粒体动能系统有关。     

胃肠舒对糖尿病大鼠胃窦平滑肌细胞线粒体的影响

目的 :研究中药胃肠舒对糖尿病(diabetes mellitus, DM)大鼠胃窦平滑肌细胞线粒体形态、结构、功能和蛋白的影响,探讨胃肠舒促胃肠运动的线粒体动能调控机制。 方法 :选择体重150~170 g的SD大鼠随机分为4组:正常对照组、DM组、DM+胃肠舒Ⅰ组(750 mg·kg^-1)、DM+胃肠舒Ⅱ组(1 500 mg·kg^-1)。透射电子显微镜检测线粒体形态、结构的变化,流式细胞术检测线粒体跨膜电位的变化,荧光测定法检测线粒体呼吸链的变化,Western Blot检测线粒体蛋白的变化。 结果 :胃肠舒能改善DM大鼠胃窦平滑肌细胞线粒体的形态、结构,增强呼吸链功能,线粒体跨膜电位和ATP含量增高,细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase, COX)活性增强,活性氧自由基(ROS)释放减少,凋亡蛋白家族Bcl-2表达上调,Bax表达下调。 结论 :胃肠舒促胃肠运动可能与改善平滑肌的线粒体动能系统有关。     

多重位点特异性PCR鉴别海龙及其混伪品

目的:建立一种高效、准确的中药材海龙及其常见混伪品的特异性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴别方法。方法:通过比较海龙及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(cytochrome C oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因序列差异,根据变异位点设计刁海龙、尖海龙及拟海龙的特异性鉴别引物,优化反应体系,并对此方法进行耐受性和适用性的考察和验证。在此基础上,将3对特异性引物组合,构建多重PCR体系。结果:在多重PCR体系中,刁海龙能扩增出485 bp片段,尖海龙可扩增出120 bp片段,拟海龙可以扩增出240 bp片段,其他混伪品均无条带。所设计的特异性鉴别引物具有高度的特异性。结论:该文所建立的位点特异性PCR鉴别方法可实现海龙的准确鉴别。     

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂抗CVB3作用

目的 通过体内外实验观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊K-CoXB-JN复方新制剂对柯萨奇B3(CVB3)病毒感染的心肌细胞和病毒性心肌炎(VMC)小鼠的保护作用.方法 体外实验用1000 TCID50的CVB3感染心肌细胞后,分别加入不同浓度的K-CoXB-JN复方新制剂和利巴韦林,并设定正常对照组和模型对照组,当细胞病变达到75％后,测定细胞上清液中肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;体内实验用CVB3感染Balb/c小鼠造成病毒性心肌炎模型,分别予K-CoXB-JN复方新制剂高、中、低剂量,利巴韦林和纯水连续灌胃14 d,记录小鼠死亡数,观察药物对小鼠的死亡保护情况.结果 K-CoXB-JN复方新制剂可降低CVB3感染的心肌细胞培养上清液中CK、AST、LDH含量,降低病毒性心肌炎小鼠的死亡率,给药组和模型对照组相比较P＜0.05.结论 K-CoXB-JN复方新制剂对CVB3感染的心肌细胞和病毒性心肌炎小鼠具有保护作用.     

益气活血复方对慢性心衰大鼠心肌组织AngⅡ及PKC的影响

目的:旨在通过动物实验观测中药益气活血复方对慢性心衰大鼠心肌组织血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和蛋白激酶C(PKC)介导的信号传导的影响,进而阐明益气活血复方治疗慢性心衰的作用机制.方法:选用健康雄性SD大鼠,采用冠状动脉结扎术配合饥饿、游泳等方法造成慢性心衰的动物模型.将造模成功的大鼠随机分为4组:模型组、中药大剂量组、中药中剂量组和西药组,每组8只;另设一组作为正常组.喂养8周后,采用ABC免疫组化方法测定心肌组织中Ang Ⅱ和PKC的含量;用透射电镜观察心肌细胞超微结构的变化.结果:与正常组比较,模型组心肌局部组织的Ang Ⅱ、PKC含量高于正常组(P＜0.01).中药组和两药组Ang Ⅱ、PKC含量均低于模型组(P＜0.01),左心室超微结构较之模型组有明显改善.结论:益气活血复方可能通过降低Ang Ⅱ水平达到抑制RAS系统作用,下调PKC水平,影响其传导通路,以此来改善和纠正心衰.     

茱萸颗粒体外抗CVB3病毒的实验研究

茱萸颗粒是我院心内科李七一教授经临床多年摸索,拟定治疗病毒性心肌炎的有效良方.目的:观察茱萸颗粒对CVB3病毒的作用.方法:采用体外抗CVB3病毒和大鼠心肌细胞感染CVB3实验.结果:茱萸颗粒20mg/ml对CVB3感染Vero细胞具有明显保护作用,同时可抑制CVB3毒力.茱萸颗粒0.5mg/ml至4mg/ml可减轻CVB3感染心肌细胞CPE,心肌酶谱显示:茱萸颗粒可明显降低感染CVB3心肌细胞中LDH,LDH1,AST和HBDH释放,减少心肌细胞损坏.结论:茱萸颗粒具有抗CVB3感染和保护心肌细胞的作用.     

益气活血复方逆转高血压左室重构的实验研究

目的:研究益气活血复方对自发性高血压大鼠(SHR)左室重构的影响,探讨其可能的作用机制。方法:雄性14周龄SHR40只,随机分为模型对照组(SHR-C)、益气活血复方高、中、低剂量组(SHR-Y1、SHR-Y2、SHR-Y3)及硝苯地平组(SHR-X),每组8只。监测尾动脉收缩压(SBP),每4W一次,8W后取材。检测左室心肌细胞凋亡、心肌间质Ⅰ、Ⅱ型胶原,测定循环血及心脏局部醛固酮(Ald)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量。结果:(1)与SHR-C组比较,灌胃4w、8w后,各治疗组SBP显著降低;(2)与SHR-C组比较,灌胃8w后,SHR-Y1、SHR-Y2组心肌细胞凋亡指数(CMAI)、Ⅰ型胶原、循环血及心脏局部Ald、AngⅡ含量均明显降低。结论:益气活血复方可能通过降低SBP、抑制左室心肌细胞凋亡、拮抗循环肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)活性、抑制心肌间质纤维化而防治、逆转左室重构。     

益气活血解毒中药对梗阻性肾病细胞自噬的调控作用

目的:观察益气活血解毒中药对梗阻性肾病中细胞自噬的作用。方法:将48只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、缬沙坦组和中药组,除假手术组外,其余各组结扎大鼠单侧输尿管复制梗阻性肾病的动物模型。缬沙坦组和中药组分别给予10 mg/(kg·d)缬沙坦和14 g/(kg·d)益气活血解毒中药,10天后摘取梗阻侧肾脏。通过Western blot和免疫组化检测血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶(Serum and glucocorticoid induced kinase,SGK-1)、自噬相关基因5 (Autophagy associated gene 5,Atg5)、自噬相关基因Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3 (Microtubular-associated protein 1 light chain 3,LC3)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(Phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase,P-ERK1/2)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Phosphorylated target of rapamycin,P-mTOR)的表达。结果:与假手术组比较,模型组自噬蛋白Atg5、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、SGK-1与P-ERK1/2表达增强,P-mTOR表达减弱,差异均有统计学意义(P 0.01)。与模型组比较,缬沙坦组和中药组自噬蛋白Atg5、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、SGK-1及P-ERK1/2表达降低,P-mTOR表达增强,差异均有统计学意义(P 0.05,P 0.01)。结论:益气活血解毒中药可以通过调控SGK-1、P-ERK1/2和P-mTOR通路,抑制盐皮质激素受体(Mineralocorticoid receptor,MR)的活化,从而纠正梗阻性肾病中细胞自噬的异常。     

生脉散复方制剂对体外感染柯萨奇B3病毒的大鼠心肌细胞的影响

目的探讨生脉散复方制剂对病毒性心肌炎的影响。方法取新生SD大鼠心室肌培养48 h后接种103TCID50的柯萨奇B3病毒,观察生脉散合炙甘草汤加减液Ⅰ、生脉散合炙甘草汤加减液Ⅱ对感染病毒大鼠心肌细胞的影响。结果生脉散合炙甘草汤加减液Ⅱ明显减轻感染病毒后心肌病变,改善细胞搏动,明显降低心肌细胞释放酶(乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶)活性,减轻超微结构病变。结论生脉散合炙甘草汤加减液Ⅱ对感染柯萨奇B3病毒SD大鼠培养心肌细胞具有抗病毒和明显的保护作用。生脉散合炙甘草汤加减液Ⅱ的作用优于不加虎杖的生脉散合炙甘草汤加减液Ⅰ。     

参松养心胶囊对病毒性心肌炎小鼠模型心肌细胞凋亡及其调控基因的影响

目的:探讨病毒性心肌炎(viral myocard itis,VMC)与心肌细胞凋亡及其相关调控基因的关系,以及参松养心胶囊对其的防治作用。方法:以腹腔接种嗜鼠心肌柯萨奇B3病毒(CVB3)0.1 mL建立VMC模型;将VMC小鼠随机分为模型对照组30只、中药防治1组(参松养心胶囊0.3 g/20 g)30只、中药防治2组(参松养心胶囊0.6 g/20 g)30只、中药防治3组(参松养心胶囊0.9 g/20 g)28只、另设正常对照组小鼠28只;在接种后3,7,14,20,30 d动态对照观察心肌细胞凋亡和相关调控基因C-myc及Bcl-2蛋白的表达情况,并观察不同剂量的参松养心胶囊对心肌细胞凋亡和相关调控基因C-myc及Bcl-2蛋白的表达情况的影响。结果:CVB3可引起VMC心肌细胞凋亡,C-myc及Bcl-2蛋白的阳性表达支持心肌细胞凋亡情况;与对照组对比,中药组心肌细胞凋亡检出率显著下降。结论:心肌细胞凋亡及其相关调控基因可能参与VMC的发生和发展,参松养心胶囊对其过程有良好的防治作用。