人工生物胰的体外分泌功能研究

目的 探讨海藻酸钠-氯化钡微囊对成人胰岛细胞体外分泌功能的影响.方法 对6例成人胰腺组织称重后采用V型胶原酶消化法分离,采用Ficoll间断密度梯度离心纯化法纯化,采用DTZ染色显微镜下评价胰岛细胞的数量、纯度.采用海藻酸钠氯化钡为材料包裹成人胰岛,体外培养及放射免疫法测定培养液中基础胰岛素浓度.结果 成人胰腺经胶原酶消化分离后,胰岛平均收获量(3600±447)个胰岛/g胰腺；Ficoll间断密度梯度离心纯化后,每克胰腺组织平均收获量(2140±207)个胰岛,纯度大于70％；成人胰岛细胞培养2、4、6d后,微囊化组第2、4、6天的基础胰岛素平均浓度(每100个胰岛单位mU/L)分别为3.302±1.63、3.504±1.10、2.921±1.13,未微囊化组的基础胰岛素平均浓度(每100个胰岛单位mU/L)分别为3.814±1.49、4.175±1.60、3.617±1.34,两组基础胰岛素浓度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人工生物胰具有良好的体外分泌功能,包裹成人胰岛的海藻酸钠-氯化钡微囊对胰岛体外分泌胰岛素的功能无影响.     

猪胰岛的分离与纯化

目的 探索大规模猪胰岛细胞分离纯化的方法.方法 联合器官切取,胶原酶P主胰管灌注,COBE2991细胞分离机及HCA-Ficoil纯化猪胰岛细胞.通过双硫腙(DTZ)染色,倒置显微镜下计数胰岛细胞的数量和纯度,胰岛素释放试验检测胰岛细胞的分泌功能.结果 消化后平均每条胰腺可平均获得(275 000±20 895)胰岛细胞当量(IEQ),纯化后平均为(230 350±26 679)IEQ,平均每克胰腺组织可获得(2710±229)IEQ,纯化后胰岛细胞平均纯度为(50.2±1.95)%.纯化后的胰岛细胞对胰岛素释放刺激反应良好,高糖(16.7 mmol/L)时胰岛素的释放量为低糖(3.3 mmol/L)时的4.74倍(P≤0.001).结论 成功建立了猪胰岛细胞分离、纯化的方法,纯化的猪胰岛细胞具有良好的生物活性.     

家兔胰岛分离纯化方法的改进

目的介绍一种新的家兔胰岛分离纯化方法并进行纯化后胰岛的外观、活性和胰岛细胞团表面结构等质量分析。方法雄性日本大耳白,采用2 mg/m L胶原酶V逆行胰管灌注和消化,并用Hanks液洗涤,用Histopaque-1119、Histopaque-1077密度梯度离心进行胰岛纯化,DTZ、FD-PI染色鉴定胰岛纯度和活性,扫描电镜观察纯化后胰岛表面结构。结果家兔胰管开口于小肠,纯化得到家兔胰岛外形圆整,纯度90%,活性(87.4±5.9)%,纯化前胰岛当量为(1 874.8±464.5)IEQ,纯化后胰岛当量为(1 254.8±235.8)IEQ;扫描电镜结果显示胰岛细胞团表面有被膜,但部分胰岛被膜被消化。结论采用此方法可快速得到纯度高、活性好且结构完整的家兔胰岛,为进一步进行家兔胰岛体外质量及体内移植研究奠定了基础。     

一种经济高效的SD大鼠胰岛细胞分离技术

目的 建立一种经济高效的大鼠胰岛细胞分离纯化方法,为胰腺的修复重建奠定实验基础.方法 成年雄性SD大鼠25只,体重230～380g,共进行5次实验,每5只大鼠一组进行消化和分离.采用医用复方氯化钠注射液(compound sodium chloride injection, CSCI)经胰总管灌注大鼠胰腺,0.5mg/mL V型胶原酶消化后,分别采用浓度为27.0%、23.0%、20.5%和11.0%的Ficoll 400形成不连续密度梯度介质,离心纯化胰岛细胞.双硫腙(dithizon, DTZ)染色行纯化前后胰岛细胞计数和纯度检测;荧光染料碘化丙啶(propidium iodide, PI)和二乙酸荧光素(fluorescein diacetate, FDA)储存液双染色鉴定胰岛细胞活性;RPMIl640培养基培养3d后,分别用浓度为2.8mmol/L的低糖和25.0mmol/L的高糖行葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测胰岛细胞功能.结果 5次实验胰岛细胞消化时间为(13.8±1.6)min.DTZ染色鉴定纯化前胰岛细胞数为(5626±422)个,纯化后为(2914±485)个,纯化后的胰岛细胞数较纯化前明显减少(P<0.01),回收率51.6%±6.0%,每个胰腺收获胰岛细胞数为(583±97)个/只.5次分离获得的胰岛细胞纯度为90.2%±3.4%,活性为81.6%±7.0%.培养3d后,葡萄糖刺激胰岛素释放实验显示:低糖环境下胰岛素水平为(39.7±7.5)EU/L,高糖环境为(116.1±17.4)EU/L,比较差异有统计学意义(P<0.01)刺激指数为3.0±0.4.结论 采用CSCI作为大鼠胰岛细胞分离纯化的主要液体试剂,并采用低浓度V型胶原酶消化,不仅可降低实验成本,同时可获得高质量的胰岛细胞.     

不同胶原酶消化对大鼠胰岛的纯化和获得率的影响

目的 比较不同胶原酶消化大鼠胰腺的效果,选择消化效果较好的胶原酶.方法 采用随机数字表法将SD大鼠分为2组,胶原酶P组大鼠胰腺使用1 mg/ml的胶原酶P液进行消化,Ⅴ型胶原酶组大鼠胰腺使用1 mg/ml的Ⅴ型胶原酶进行消化.胰腺消化后,对获得的两组大鼠胰岛进行纯化、培养.采用双硫腙染色于倒置显微镜下计数纯化前后获得的两组全部胰岛数量,并计算胰岛当量(IEQ);采用吖啶橙和碘丙啶双色荧光染色,于荧光显微镜下计数纯化后胰岛的活率;两组大鼠胰岛经纯化、培养2d后进行胰岛素释放试验,观察两组胰岛的功能.结果 纯化前,两组间每个大鼠胰腺获得的胰岛数量的差异无统计学意义(P＞0.05);但两组间IEQ的差异有统计学意义(P＜0.05);经纯化后,Ⅴ型胶原酶组和胶原酶P组每个大鼠胰腺获得的胰岛数量分别为485±113和643±82,IEQ分别为674±157和989±126,两组间胰岛数量和IEQ的比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).Ⅴ型胶原酶组和胶原酶P组大鼠胰岛经纯化后,其活率分别为(96.13±1.13)％和(96.38±0.92)％,两组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).胰岛素释放试验结果显示,在低糖或高糖刺激下,两组间大鼠胰岛功能的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 两种胶原酶均适用于大鼠胰腺的消化,但胶原酶P消化效果较Ⅴ型胶原酶稳定,且胰岛获得率也较高.     

乌司他丁对犬胰岛的保护作用

目的判定在机械分离纯化犬胰岛过程中,胰腺原位灌洗时应用乌司他丁(UTI)的保护作用,观察胰岛的获取产量。方法将20只犬随机分为两组,每组10只。HC-A组:胰腺经腹主动脉原位灌洗时用冷HC-A液2500ml;HC-A UTI组:胰腺原位灌洗时,HC-A液中加用UTI10000U/kg。两组均经主胰管用4℃胶原酶V控压灌注,在RicordiChamber系统中消化,用Ficoll连续梯度离心纯化。记录消化时间、胰岛外分泌腺包裹率、胰岛纯度、纯化后胰岛在体外用低糖与高糖刺激下胰岛素分泌量、C-肽的释放量及收获的胰岛当量(IEQ),并对纯化后的胰岛进行光镜及电镜观察。结果HC-A UTI组与HC-A组在胰腺消化时间、胰岛外分泌腺包裹率、胰岛纯度、纯化后的胰岛在体外经低糖与高糖刺激下胰岛素分泌量、C-肽的释放量以及胰岛的形态和结构上比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。HC-A组收获胰岛[(3.42±1.47)×104]IEQ,HC-A UTI组收获胰岛[(6.17±2.86)×104]IEQ,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论在犬胰岛分离和纯化过程中,胰腺获取原位灌洗液中加用UTI能保护胰腺组织,增加胰岛产量。     

胰岛分离、纯化制备的改进

目的 探讨大型哺乳动物胰岛机械化大量分离、纯化的方法,为人类胰岛移植物的大量制备摸索创造条件.方法 应用改进的机械化胰岛分离、纯化系统,用HCA和UW液顺序原位灌洗犬胰腺,主副胰管插管,4℃胶原酶-V(1.5 g/L)+胰酶抑制剂pefabloc(0.4 mmol/L)灌注后,Ricordi-Chamber消化罐消化,4℃COBE2991连续密度梯度离心纯化,测定胰岛当量(IEQ)、胰岛纯度及存活率、胰岛素及C-肽的释放量、培养24 h后光镜及电镜观察.结果 胰腺消化时间为(25.0±6.0)min,胰岛外分泌腺包裹率为(9.4±2.4)%,消化后胰岛收获量为(17.2±3.6)×104IEQ/每个胰腺,纯化后胰岛收获量为(8.3±2.0)×104IEQ/每个胰腺,胰岛纯度为(89.7±3.5)%.纯化胰岛体外低糖与高糖刺激下胰岛索分泌量及C-肽的释放量良好,培养24 h后形态结构及功能正常.结论 本实验室改进的胰岛机械分离方法及各设备运行可靠,获得的胰岛形态功能良好,可望用于临床人类胰岛的大量制备.     

大鼠胰岛的分离纯化方法改进与功能鉴定

目的 通过改进胰腺消化和分离的技术条件,提高成年大鼠胰岛分离纯化产率和质量. 方法 用胶原酶Ⅺ液灌注消化成年SD大鼠胰腺,对胰岛分离纯化方法加以改进:以 4 种比重的 Euro- Ficoll (F1∶D=1.132,F2∶D=1.108,F4∶D=1.069) 和 Hank's 液(F5∶D=1.023) 不连续密度梯度离心,以离心半径 15 cm,2 000 r/min 于4℃缓慢升降离心 20 min,收集位于F1 和 F2界面的胰岛.双硫腙特异染色法鉴定胰岛纯度;二醋酸酯荧光素/碘化丙啶染色法计算胰岛成活率;放射免疫分析法检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌量,计算刺激指数.将胰岛当量(islets equivalent quantity,IEQ) 为 1000 的胰岛移植于同品系糖尿病大鼠肾包膜下,9d 内隔日观察动物血糖的变化,评价胰岛功能.比较分离条件优化前后收获胰岛的产率和质量. 结果 改进纯化方法后每只大鼠胰岛收获量为(920±122) IEQ,胰岛纯度> 90%,胰岛细胞成活率为 91%±2%.胰岛细胞功能良好,在低糖和高糖刺激后培养液中胰岛素浓度分别为(18.25±0.32) mU/L 和(36.70±3.57)mU/L,刺激指数为 2.01±0.15.1000 IEQ 胰岛移植于糖尿病大鼠肾包膜下,观察期内可维持动物血糖水平正常. 结论 改进后的胶原酶灌注消化和不连续梯度离心方法提高了胰岛的产率,保证了胰岛的高纯度及高成活率.     

海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊生物相容性的研究

目的比较海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊(ACP微囊)和海藻酸-聚赖氨酸-海藻酸微囊(APA微囊)的生物相容性。方法(1)两种微囊(50、100和200个)与健康人血清共浴,检测微囊对补体的激活程度。(2)1000个APA和ACP微囊分别植入Wistar大鼠的腹腔,4d和3周时统计取出的微囊数和微囊的纤维化率。(3)Wistar大鼠胰岛用ACP微囊和APA微囊包裹,分别贯续置于含3.3mmol/L和16.7mmol/L葡萄糖的Hank's溶液中培养,测定培养液中胰岛素的浓度。结果(1)ACP微囊组残余补体活性高于APA微囊组。(2)4d时,ACP和APA微囊的取出数分别是845.0±40.4和807.6±45.7(P>0.05),囊周纤维化率分别是16.40%和65.68%(P<0.05);3周时两种微囊的取出数分别为715.0±133.0和367.5±105.6(P<0.05),囊周纤维化率为27.8%和83.9%(P<0.05)。(3)在含3.3mmol/L葡萄糖的Hank's液中,未微囊胰岛组、APA和ACP微囊化胰岛组的胰岛素浓度分别是(123.48±4.70)mIU/L、(110.11±12.18)mIU/L和(110.90±11.95)mIU/L,当葡萄糖浓度为16.7mmol/L时,胰岛素浓度分别是(754.75±13.81)mIU/L、(689.30±27.71)mIU/L和(684.28±70.10)mIU/L。结论海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊的生物相容性要优于海藻酸-聚赖氨酸-海藻酸微囊,前者更适合应用于微囊化胰岛移植。     

机械分离成人尸体胰腺提高胰岛数量和质量

目的通过机械分离胰腺的方法,提高成人胰岛数量和质量。方法切取8个成人尸体胰腺,并保存于4℃UW液中。首先经主胰管插管灌注复合胶原酶溶液,使胰腺膨胀,然后将胰腺剪切成5~8块,放入Ricordi室中,于37℃下机械震荡消化。收集的胰岛溶于100mlUW液中,放置30min。先将Ficoll液泵入COBE2991细胞分离仪中,然后泵入UW/胰岛制剂,最后加入M199液冲洗。收集纯化的胰岛,计算胰岛当量(IEQ)和纯度,检测胰岛的活性。结果热缺血时间为0~1min,冷缺血时间0.5~4h。纯化前收集的胰岛数量平均为(376.7±50.2)×103IEQ,纯化后为(378.6±56.7)×103IEQ;胰岛收获率平均为(86.8±9.4)%,镶嵌的胰岛平均占(11.0±2.7)%;收获的胰岛纯度平均为(88.3±5.1)%;经AO-PI染色后检测胰岛的活度为(91.3±7.8)%。胰岛素分泌指数平均为5.87±0.81。结论通过机械分离胰腺的方法,可以获得更多的胰岛数量和更高的胰岛活性,适合用于临床移植。     

大鼠胰岛分离、纯化技术改良

目的:探讨SD大鼠胰岛分离、纯化的较优方案,并评价依该法分离所得胰岛的生物学特性。方法:以浓度为0.75mg/ml的Ⅺ型胶原酶经胆管充分灌注大鼠胰腺;完整分离后以37℃水浴振荡消化17min,Dextron70不连续密度梯度(1.091、1.081及1.037)离心法分离、纯化胰岛;以DTZ染色鉴定胰岛并计算得率,AO-PI染色检测胰岛活性,糖刺激试验判定胰岛功能,胰岛"细胞免疫细胞化学鉴定"细胞,光镜观察体外培养胰岛的形态学变化。结果:纯化后,每只大鼠胰岛收获量为(743.60±43.07)个,胰岛纯度>90%,胰岛细胞活率>90%。在45min内每10个胰岛细胞在低糖和高糖刺激下分泌的胰岛素浓度分别为(25.35±7.00)μIU/ml和(86.48±12.75)μIU/ml。结论:依改良后的分离纯化方案分离大鼠胰岛可获得高纯度高活率的胰岛细胞,且细胞形态正常、功能良好。     

db/db小鼠胰岛的分离与特征分析

目的 分离db/db小鼠胰岛,并对其特征进行检测和分析。方法 采用胶原酶V对10只db/db小鼠胰岛分离进行逆行胰管灌注和消化,用Ficoll-1077和Ficoll-1119进行胰岛的不连续密度梯度纯化,对分离的胰岛进一步进行手工挑选,并用DTZ进行胰岛和纯度鉴定,用透射电镜观察胰岛内部分泌颗粒等情况。结果 经本方法分离可得到db/db小鼠胰岛数量为（122.4±6.6）个/只,当量为（483.6±82.3）IEQ/只,与ICR小鼠胰岛分离结果差异有统计学意义（P<0.05）;db/db小鼠胰岛DTZ染色后显淡红色;胰岛大小指数为（3.96±0.64）,显著大于ICR小鼠胰岛（P<0.05）;透射电镜下显示β细胞中的胰岛素分泌颗粒减少,分泌颗粒颜色较浅。结论 采用本方法可分离得到db/db小鼠胰岛,为后续开展基于胰岛功能和特征变化的2型糖尿病患者治疗研究提供一种参考。     

海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊化异种胰岛移植治疗小鼠糖尿病

目的比较海藻酸-聚赖氨酸-海藻酸微囊化(APA)大鼠胰岛和海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊化(ACP)大鼠胰岛移植对小鼠糖尿病的治疗作用.方法链脲霉素220 mg/kg体重腹腔内注射制作小鼠糖尿病动物模型.成模后分成APA微囊组、ACP微囊组和未微囊化胰岛组,每只小鼠腹腔内分别植入200个相应胰岛,检测监测移植前后小鼠的血糖.结果移植后第1天,3组小鼠血糖均较移植前明显降低.未微囊化胰岛移植组小鼠术后第2天血糖均恢复到术前水平;APA微囊组和ACP微囊组小鼠血糖分别维持正常(57.00±14.61)d和(41.67±16.73)d,此两组间差异无显著性(P＞0.05),但均较未微囊化胰岛移植组明显延长(P＜0.05).结论 ACP微囊与APA微囊一样具有免疫隔离作用;ACP微囊化异种胰岛移植可纠正小鼠糖尿病.     

微囊化胰岛与滋养细胞对鼠胰岛功能和活性的影响

目的 研究微囊化滋养细胞对胰岛功能和活性的影响.方法 对单独、分别和联合微囊组胰岛素含量及不同条件(5.6、16.7mmol/L葡萄糖、16.7mmol/L葡萄糖+10mmol/L茶碱)下胰岛素释放试验进行检测;监测3组(每组8例)小鼠平均空腹血糖(FIG),将胰岛的功能和活性进行对照.结果 体外,联合组胰岛素含量(288±25)、(292±29)、(203±21)mmol/L及在胰岛素释放试验中的反应性(306±25)、(335±26)、(378±32)mmol/L均好于另两组,差异有统计学意义(P<0.01);移植后,单独组(27.3 d)、分别组(30.5 d)维持FPG<6.0的时间明显少于联合组(66.8 d),联合组恢复高血糖状态的平均时间为91.7 d,差异有统计学意义(P<0.01).结论 滋养细胞与胰岛联合微囊化能够改善胰岛的存活状况,提高其生物活性,并维持其分泌功能.     

霉酚酸、雷帕霉素及FTY720在体外对成人胰岛功能的影响

目的探讨霉酚酸、雷帕霉素及FTY720对体外培养的成人胰岛功能的影响。方法将分离、纯化后获得的成人胰岛细胞分别与不同浓度的霉酚酸、雷帕霉素和FTY720混合培养24h,然后测定经各药物作用后的胰岛细胞在低糖(2.8mmol/L)和高糖(16.7mmol/L)刺激下胰岛素的释放量,并计算刺激指数。结果对照组(未添加药物)的胰岛细胞在低糖和高糖刺激下胰岛素的释放量分别为(7.37±1.74)ng/ml和(15.15±5.39)ng/ml,刺激指数为2.06±0.46。与对照组相比,添加霉酚酸的胰岛细胞在低糖和高糖刺激下胰岛素的释放量均明显下降(P<0.01),刺激指数亦明显下降(P<0.05);添加雷帕霉素组,低糖和高糖刺激时胰岛素的释放量均有下降(P<0.05),但刺激指数仅在雷帕霉素浓度为1.0ng/ml时明显下降(P<0.05);添加FTY720组,低糖刺激时胰岛素的释放量明显低于对照组(P<0.05),高糖刺激时,胰岛素释放量仅在FTY720高浓度组有明显下降(P<0.05),刺激指数也有明显下降。结论相对来说,在体外雷帕霉素和FTY720对成人胰岛细胞的毒性作用较小;胰岛移植后,选择免疫抑制方案应遵循低剂量原则。     

钴卟啉诱导胰岛血红素加氧酶-1过表达的初步研究

目的 探讨钴卟啉腹腔注射诱导大鼠胰岛血红素加氧酶-1(Ho-1)过表达的量/效关系及其对胰岛功能的影响.方法 大鼠分为5组,A、B、C、D 4组分别在提取胰岛前24 h予腹腔注射2.5、5、7.5及10 mg/ks的钴卟啉溶液,对照组给予1.5 Inl生理盐水.改良Goth法提取胰岛,计数胰岛得率、估定纯度,real time-PCR和Western印迹法检测胰岛组织内Ho-1mRNA及蛋白表达,糖刺激试验评价胰岛功能.结果 C、D组大鼠在注射CoPP溶液后出现机体损伤,D组部分大鼠死亡.A、B、C及对照组胰岛得率及纯度差异无统计学意义(P＞0.05),B组Ho-1mRNA及蛋白表达量为4组中最高(B组Ho-1mRNA表达量达对照组的84.18倍).A、B及对照组胰岛于低糖刺激时,胰岛素分泌量差异无统计学意义(P＞0.05),而高糖刺激下,胰岛素分泌量以B组最高,差异有统计学意义[A、B及对照组分别为:(172.37±16.4)、(187.68±19.93)及(91.25±12.64)μIU·ml-1·10islets-1·45min-1,P＜0.05].结论 腹腔注射5 mg/kg体重钴卟啉相对安全,可大幅提高大鼠胰岛组织中HO-1的表达量,并能增强胰岛功能.     

微囊化大鼠胰岛异种移植的实验研究

目的　通过动物实验明确微囊化胰岛是否具有免疫隔离作用。方法　SD大鼠胰腺原位消化 ,Ficoll间断密度梯度离心法纯化、分离胰岛 ,气流吹喷制作海藻酸钠 /聚赖氨酸 /海藻酸钠(APA)微囊化大鼠胰岛 ,比较微囊化与未微囊化胰岛的胰岛素释放试验 ;将微囊化 (实验组 )与未微囊化 (对照组 )大鼠胰岛植入链脲佐菌素 (STZ)诱导的I型糖尿病小鼠中 ,作两组间血糖正常持续时间比较。结果　实验组与对照组的胰岛素释放试验差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;实验组血糖正常持续时间为 2 3～ 6 5d(平均 48d) ,对照组为 3～ 6d(平均 5d) ,两组差异有极显著性 (P <0 .0 1)。已排斥的实验组小鼠腹腔灌洗发现部分微囊化胰岛存活 ,部分已坏死 ,但微囊膜皆完整 ,囊壁无纤维化。结论　微囊具有良好的免疫隔离作用 ,可使胰岛移植物存活时间明显延长。同时推测微囊内移植物死亡与细胞因子、自由基作用或营养不足等有关。     

小鼠胰岛分离纯化方法研究

目的探讨可提高胰岛产量和功能活性的小鼠胰岛分离、纯化的方法。方法通过胆总管逆行灌注胶原酶溶液消化小鼠胰腺,经不连续密度梯度离心后,人工挑取、纯化胰岛。过夜培养后,用葡萄糖刺激胰岛素分泌实验(GSIS),检测胰岛功能。电子显微镜(电镜)观察胰岛β细胞亚细胞结构变化。结果利用该改良方法平均每只小鼠可收集(200±20)个胰岛,胰岛直径大小为(175±22)μm。GSIS结果发现胰岛素水平在低糖(2.8 mmol/L)和高糖(16.7 mmol/L)刺激下分别为(0.33±0.07)、(1.36±0.47)ng/(islet·60 min),高糖刺激的胰岛素水平是低糖刺激的4.12倍,差异有统计学意义(P0.05)。电镜证实胰岛β细胞胞膜、线粒体膜完整,胞内可见大小不一的胰岛素分泌泡。结论胆总管逆行灌注胶原酶消化小鼠胰腺,体外不连续密度梯度离心联合人工挑取的方法是一种简便、快捷、稳定的小鼠胰岛分离方法,小鼠胰岛产量较高、形态完整,且GSIS反应性良好。     

微囊化新生猪胰岛细胞体外培养的研究

海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠生物微胶囊(简称APA微胶囊),具有生物半透膜性,葡萄糖与胰岛素能通过该膜,而抗体与淋巴细胞则不能,避免了机体对移植物的排异反应,使移植物体内生存时间延长。此项技术是目前最具前景的免疫隔离技术。本文利用胶元酶消化和体外培养的方法制备新生猪胰岛细胞,用微囊包膜技术,将胰岛细胞包裹,体外培养。放射免疫法测定培养液中胰岛素的含量,比较微囊化及未微囊化新生猪胰岛细胞胰岛素分泌能力和胰岛素刺激释放试验、组织学检查。证实二者差异不显著,均具有良好的生物活性。胰岛细胞团在微囊内分化发育良好,并不断分泌胰岛素,囊内外均未见纤维细胞生长。APA微囊及其制备技术对胰岛细胞活性和分泌功能无明显影响。微囊包膜后胰岛细胞的活性和分泌功能良好,微囊包膜新生猪将为临床异种移植提供良好的供体来源。     

提高冻存胚胎胰岛移植效果的实验研究

目的探讨三维组织细胞旋转培养系统(RCCS)对胚胎胰岛冻存复苏后质量的影响。方法将胚胎胰岛平均分为3组,实验组1、2为胚胎胰岛冻存前后分别用RCCS培养和普通培养,对照组新鲜胰岛经RCCS培养。切取胚胎胰腺,胶原酶V消化,纯化。然后进行标准冻存步骤,复苏后继续培养。并检测各组胰岛数量、活性、胰岛素刺激实验结果。结果纯化后收获胰岛最多每个胚胎5012.73IEQ,最少2432.68IEQ,平均(3548.07±273.46)IEQ。微重力培养组胰岛细胞存活率、胰岛素释放量、胰岛素刺激指数等均高于普通培养组。移植经过微重力培养的(2000±1)%IEQ新鲜胚胎胰岛或冻存胚胎胰岛在移植后1周内可达100%纠正糖尿病。结论微重力旋转培养有利于胰岛细胞的生长繁殖,使胰岛具有更好的胰岛素分泌能力,该方法同胰岛冻存相结合,可以进一步提高胰岛的冻存效果,为胰岛库的成功建立探索出一条新的途径。