实时荧光定量PCR技术在食品检测中的应用

阐述了实时荧光定量技术的原理、特点以及在食品微生物检测、研究和转基因食品检测方面的应用情况，并提出了目前存在的问题。     

呼吸道病原体多重实时荧光定量PCR的检测

目的 建立多重实时荧光定量PCR检测方法,为实现对呼吸道病原体的快速、灵敏特异性检测.方法 采用经报道的引物和探针对合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道病原体进行多重实时荧光定量PCR检测.结果 多重荧光定量PCR阳性检测率高达57.8%,无假阳性及假阴性,特异性强.结论 多重实时荧光定量PCR具有经济、快速、特异性强等优点,在呼吸道病原体检测方面有巨大应用价值.     

实时荧光定量PCR技术在食品检验中的应用

实时荧光定量PCR(real-time quantitativepolymerase chain reaction,RQ-PCR)又称荧光定量PCR,1994年由日本科学家Higuchi提出。当时因为想实时地看到PCR反应的整个过程,就在普通PCR仪的基础上配备了一个激发和检测的装置,在PCR反应的退火或延伸阶段检测掺入到双链核酸中EB的含     

实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用

目的探讨在流感病毒核酸检测中,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)这种检测方法的应用效果,通过对哨点医院2014年6月-2016年6月所采集的1 553份流感样病例咽拭子的分析,了解流感病毒的流行趋势,为预防流感提供科学依据。方法选取2014年6月-2016年6月天津市第四中心医院送至北辰区疾病预防控制中心检测的1 553份流感样病例咽拭子,采用Real-time PCR的方法进行核酸检测,分析所选取标本的阳性率以及阳性标本的类型,了解流感病毒的流行趋势。结果在2014年6月-2016年6月送至该中心检测的1 553份咽拭子中,共检出阳性标本299份,检测阳性率为19.25%;甲型病毒183份,占61.20%;乙型病毒116份,占38.80%,各类型流感病毒阳性率之间差异具有统计学意义(P0.05)。结论 Real-time PCR可以快速有效地对流感病毒核酸进行检测,为分析流行趋势、预防流感提供科学有效的依据。     

实时荧光定量PCR在神经梅毒检测中的应用

目的探讨脑脊液实时荧光定量PCR对于神经梅毒的诊断价值。方法对大连市皮肤病医院2011年1月-2016年1月155例疑似神经梅毒患者的临床资料及脑脊液等进行综合分析,同时用实时荧光定量PCR、TP-ELISA、VDRL法检测所有待测者脑脊液;比较分析检测结果的敏感度与特异度。结果共诊断31例神经梅毒患者(1例待观察最终确诊),TP-ELISA检测神经梅毒的敏感度与特异度分别为96.88%和38.71%,实时荧光定量PCR检测神经梅毒的敏感度与特异度分别为64.52%和100.00%,VDRL检测神经梅毒的敏感度与特异度分别为93.55%和100.00%。结论脑脊液实时荧光定量PCR虽然具有高敏感度、高特异度等优点,但对脑脊液标本要求较高,是否可作为神经梅毒的临床诊断标准有待进一步研究。     

实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用

目的通过对2009年6—11月北京怀柔地区流行性感冒(流感)病原学监测数据的分析,了解北京市怀柔区甲型H1N1型流感的流行趋势,为该地区甲型H1N1流感的防治提供科学依据。方法依据《全国流感监测实施方案》、《甲型H1N1流感病毒实验室检测技术方案》、《甲型H1N1流感监测方案(第二版)》、7500Fast型实时荧光定量PCR的SDS软件操作。结果2009年6—11月共采集流感样病例咽拭子1780件,检出流感病毒核酸阳性507件,阳性率为28.48%。阳性样本中,季节性甲3亚型92件,占18.15%;季节性甲1亚型8件,占1.58%;乙型4件,占0.79%;甲型H1N1型395件,占77.91%。结论2009年6—9月,甲型H1N1型流感的流行趋势为上升状态,但期间季节性甲3亚型仍为主要流行毒株。10—11月,甲型H1N1型流感的上升趋势达到高峰期,甲型H1N1流感病毒为流感流行主要毒株。     

实时荧光定量PCR在食品致病菌检测中的应用

随着经济的全球化,食品安全已经越来越受到人们的关注,而微生物污染已成为食品安全的首要问题。食品致病菌是引发食物中毒和食源性疾病暴发的重要因素。传统的检测方法必须经过细菌的分离、培养与鉴定,不但耗时耗力而且不适于大量样品同时检测,不能满足食物中毒和食源性疾病暴发时的检测需要。近年来随着P C R检测技术的快速发展,其在微生物检测中的应用也越来越广泛,实时荧光定量PCR作为PCR检测方法中的一种,因其具有较强的特异性和灵敏度并且还有检测速度快、准确性高等优点,在检测食品微生物的应用中有较强优势。本文介绍实时荧光定量PCR技术在金黄色葡萄球菌、沙门菌、志贺菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠埃希菌等几种常见食源性致病菌检测中的应用。     

实时荧光定量PCR在流感病毒检测中的应用进展

流行性感冒病毒简称为流感病毒,属于一种RNA的病毒,呈现出丝状或者球形的状态.流感病毒可以分为甲型、乙型以及丙型流感病毒,主要是由凝血素以及神经氨酸酶共同组成,该病毒具有一定的抗原性,极易发生变异.目前感染人类的主要是甲型和乙型两种,甲型流感病毒则主要包含H以及N的变异,H有16个亚型,而N有9个亚型.乙型流感病毒则存...     

实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用效果。方法选取2009年9月—2013年12月在我州采集的流感样病例咽拭子2489件进行分析,采用实时荧光定量PCR对流感病毒核酸进行检测,观察检测阳性率和阳性样本的类型,以分析流感的流行趋势。结果 2009年9月—2013年12月共检出流感病毒核酸阳性676件,检测阳性率为27.16%;其中甲型H1N1病毒472件,占69.82%;季节性甲3亚型病毒126件,占7.54%;季节性甲1型病毒21件,占3.11%;乙型病毒6件,占0.89%;各类型流感病毒发生率之间差异具有统计学意义（P〈0.05）。每年6-9月甲型H1N1病毒流感呈上升趋势,在10-11月达到高峰期;6-9月以季节性甲3亚型病毒为主要流行病株,10-11月甲型H1N1病毒成为主要流行病株。结论实时荧光定量PCR是一种科学有效的检测方法,可对流感病毒核酸进行快速、准确的检测,分析流感病毒的流行规律,有效预防突发公共卫生事件的发生。     

实时荧光定量PCR技术在疫情和食物中毒检测中的应用

实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术是一种日益成熟的生物体核酸检测技术,由于其具有快速、特异、敏感、定量、安全、操作简便等特点,在医学诊断、卫生防疫等领域中得到广泛的应用。目前,针对常见疫情和食物中毒中的病源微生物,已设计和开发了相应的特异性引物及探针,可以对这些微生物进行快速检测,从而提高了政府及相关部门应对和解决突发公共卫生事件的能力。     

实时荧光定量PCR技术在食源性致病菌快速检测中的应用

目前我国对食源性致病菌的标准检测方法一直沿用传统的细菌培养法,由于其检测过程繁琐复杂,所用试剂繁多,检测周期较长^[1],已难以满足当前卫生应急检测快速诊断的需求^[2]。因此,国内外学者都致力于建立以分子生物学为基础的快速检测方法。     

实时荧光定量PCR在手足口病原体检测中的应用探讨

目的：：对手足口病患儿施行病原体检测时运用荧光定量PCR实时测定法（FQ-PCR法）的效果及有关情况探析。方法：以2016年5月-7月因疑似感染手足口病进入本院施行病原体测定的患儿127例为评估对象,依据年龄段情况将其划分成A组（年龄不超3岁者）77例、B组（年龄间于3-6岁间者）50例,运用FQ-PCR法对疑似患儿的疱疹液、咽拭子实施相应指标值的测定;并以ELISA法对患儿血清展开检测,经比对两法的检出率数据情况,系统评估FQ-PCR医疗检测效果。结果：127例患儿咽拭子样本、疱疹液样本在FQ-PCR法测定下,EV检测有101例显阳性,占79.53%;当中A组有67例,占87.01%,B组有34例,占68.00%。A组患儿阳性检出率超出B组,差异明显（P＜0.05）。咽拭子样本检出阳性率是69.60%,疱疹液样本检出阳性率是81.97%。FQ-PCR法检出EV71阳性病例超出ELISA法,差异显著（P＜0.05）,检出COXA16阳性病例和ELISA法较接近,没有较大差异（P＞0.05）。结论：FQ-PCR 法践行于HFMD病原体测定及评估中,能强化病原学指标监控力度,以辅助当地HFMD疫情预测、防范工作的有效进行。     

实时荧光定量PCR在血站核酸检测中的应用效果

目的：观察并分析在血站核酸检测中实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）的应用效果。方法：选取2023年1月～2023年6月17564分无偿献血者样本,都是经过乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒抗体、人类免疫缺陷病毒抗体初检和复检都合格的样本,对其进行实时荧光定量PCR的核酸检测。结果：在17564无偿献血者的血液样本中,经过实时荧光定量PCR技术检测,共有25例乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸阳性,0例丙型肝炎病毒核糖核酸和人类免疫缺陷病毒（1型）核糖核酸阳性。在临检中心举行的室间质评中,所有检验结论均正确,得分为100分。结论：在血站核酸检测中采用实时荧光定量PCR技术,可有效减短病毒检测窗口期,有助于血液安全水平的提高。     

荧光定量PCR技术在霍乱弧菌检测中的应用

目的：建立霍乱弧菌荧光定量聚合酶链反应检测方法，评价其优越性。方法：根据霍乱弧菌NhaA基因保守序列，设计合成霍乱弧菌FQ-PCR诊断试剂盒，比较该方法与常规检测方法在外环境、海产品及临床病例霍乱弧菌检测上的灵敏度和特异性。结果：在临床患标本霍乱弧菌的检测上，FQ-PCR与常规方法灵敏度主、特异性一致，但在含菌量少、菌株易发生变异（外环境疫水、海产品及霍乱越冬）标本的检测上，FQ-PCR显示出其独特的优越性。结论：FQ-PCR方法用于霍乱弧菌的检测，不仅可避免常规PCR引起的假阳性污染，同时可实现对含菌量少、变异菌株的定量定时检测，对临床检验及卫生检测有较大的指导意义。     

实时荧光定量PCR技术在副溶血性弧菌快速检测中的应用

目的:建立副溶血性弧菌荧光定量PCR检测方法,应用于食品、食物中毒样本的快速检测。方法:食品样本先选择性增菌,取上层液提取DNA,粪样直接提取DNA,用实时荧光定量PCR方法进行检测,并与常规培养法进行比较。结果:用实时荧光定量PCR检测食品54份,食物中毒粪样12份,检测阳性食品21份、粪样9份,检测结果与培养法比较,阳性检出率分别为食品38.9%、31.5%;粪样均为75.0%。结论:副溶血性弧菌的实时荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏的优点。     

实时荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌研究中的应用

<正>核酸扩增技术特别是聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)可对不同来源的核酸进行定性检测,但需在PCR反应终止后对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,这不仅无法准确定量,而且还容易发生交叉污染,产生假阳性。     

实时荧光定量PCR技术进展

实时荧光定量PCR(real_time quantitative PCR)技术是一种新型的核酸定量检测、分析技术,它通过在PCR扩增反应过程中加入荧光物质,使得对反应过程的实时监控成为可能。它具有实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR反应后不需电泳检测等优点,已逐步成为分子生物学研究中的重要工具。     

荧光定量PCR检测急性呼吸道感染患者常见呼吸道病毒的研究

目的分析2011年8月至2012年8月期间惠州市急性呼吸道感染病毒性病原谱的构成及流行特征,为临床诊断、治疗和呼吸道传染病的预防控制提供病原学依据。方法应用荧光定量PCR方法,对485例鼻咽拭子样本同时进行甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、博卡病毒、副流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、人冠状病毒的检测,并进行统计学分析。结果 485份样本中检出228份呼吸道病毒阳性的样本,阳性率为47.01%,其中混合感染20份,占阳性样本的8.77%。病毒病原谱构成前三位为乙型流感病毒、鼻病毒和甲型流感病毒。病毒检出阳性率的时间分布有一定规律性：1月至次年2月阳性率较高,不同月份检出的优势病毒不同。各年龄组病毒阳性率差异有统计学意义（χ2=19.414,P〈0.05）,不同年龄组病毒感染的病原谱构成也不同：0～5岁年龄组以鼻病毒为主;5岁以上各年龄组均以流感病毒为主。不同性别患者之间病毒核酸检出率差异无统计学意义（χ2=0.522,P〉0.05）。结论乙型流感病毒、鼻病毒和甲型流感病毒是惠州市急性呼吸道感染主要病原体。部分病原体的感染与年龄和季节有一定的关联;ARTI患者中部分合并感染其他呼吸道病毒,应长期监测呼吸道病毒的活动水平。     

荧光定量PCR技术在痰结核菌检测中的应用

目的 比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术与痰涂片抗酸染色、改良罗氏培养法在检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值.方法 对240例临床确诊的肺结核病患者和107例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本分别应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌;另用FQ-PCR法检测14例非结核分枝杆菌DNA以评价该方法对非结核分枝杆菌检测的特异性.结果 FQ-PCR检测结核分枝杆菌的敏感性分别为52.1％ (125/240),明显高于抗酸染色法的24.2％ (58/240)和改良罗氏培养法的35.4％ (85/240),x2=39.36,P＜0.01;FQ-PCR法对14例非结核分枝杆菌检测结果全部为阴性,特异性为100％.结论 FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,并且可以有效地鉴别非结核分枝杆菌感染,在肺结核的临床实验室诊断上有重要的应用价值.     

实时荧光定量PCR检测普氏立克次体

目的 采用新型TaqMan—MGB探针建立检测普氏立克次体的实时荧光定量PCR方法。方法 根据普氏立克次体外膜蛋白B的基因（ompB）序列设计引物和探针，以克隆的ompB基因片段作DNA模板，在荧光定量PCR检测仪（ABI7900型）上建立实时荧光定量检测方法。结果 建立的定量标准曲线的循环阈值（Q）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．999）；与巢式PCR相比较，荧光定量PCR检测敏感性是其100倍。用荧光定量PCR检测莫氏立克次体及其他相关立克次体和细菌DNA，检出结果均为阴性。用荧光定量PCR检测普氏立克次体感染的豚鼠血标本，某些样本检测为阳性，而用巢式PCR检测的结果均为阴性。结论 研究中建立的检测普氏立克次体实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性，适合于快速检测样本中微量普氏立克次体DNA，可用作临床实验室快速确诊流行性斑疹伤寒。