绞股蓝总皂苷对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响

目的:探讨绞股蓝总皂苷(gypenosides,Gyp)对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响.方法:采用MTT法检测Gyp对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的增殖抑制作用;单细胞凝胶电泳法检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402 DNA损伤的影响;RT-PCR技术从分子水平上检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用机制.结果:100 ～400 μg· mL-1的Gyp对人肝癌细胞Bel-7402增殖生长有抑制作用,Gyp(182 μg·mL-1)作用4,8,12,16,24 h后,单细胞凝胶电泳观测到DNA损伤,12h时DNA损伤最大,达到(81.15±14.23)％,且有时间依赖性;Gyp组细胞caspase-8大量表达,对照组细胞无表达.结论:Gyp能抑制人肝癌细胞Bel-7402增殖且促进其凋亡,其作用机制与DNA损伤以及caspase-8的大量表达有关.     

七叶皂苷钠对小鼠急性淋巴白血病L1210细胞的体内外作用研究

目的 探讨七叶皂苷钠对小鼠急性淋巴白血病L1210细胞的体外增殖抑制作用和体内抗白血病作用.方法 采用MTT法观察七叶皂苷钠对小鼠急性淋巴白血病细胞L1210的体外增殖抑制作用;建立L1210小鼠白血病移植模型,观察七叶皂苷钠对荷瘤小鼠生命的延长率,以及对化疗药阿霉素的增敏作用,并绘制生存曲线.结果 七叶皂苷钠(20～60 μg/mL)对L1210细胞具有一定的增殖抑制作用,作用呈时间和剂量依赖性,体外作用72 h的IC50为(24.86±2.23)μg/mL;体内实验结果显示,七叶皂苷钠中、高剂量组能明显延长荷瘤小鼠的生命期,生命延长率分别为32.3%和25.8%(P＜0.01),低剂量组对常规化疗药阿霉素具有增敏作用.结论 七叶皂苷钠能有效抑制L1210细胞体外增殖,对体内L1210白血病小鼠移植模型也具有一定的治疗效果.     

开心散含药血清对β-淀粉样蛋白致SH-SY5Y细胞损伤的影响

目的:研究开心散含药血清对β-淀粉样蛋白所致人神经母细胞瘤SH-SY5Y损伤的影响及其机制。方法:SD大鼠灌胃给予开心散(0.58 g/Kg,1.16 g/Kg,2.32 g/Kg),连续7天,每天2次,第8天末次给药后1 h腹主动脉取血,制备开心散含药血清,将不同浓度的开心散含药血清加入SH-SY5Y细胞孵育2 h后,加入Aβ_(25-35)(10μmol/L),共同培养24 h。采用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,活性氧表达及线粒体膜电位。结果:与正常对照组细胞比较,Aβ_(25-35)(10μmol/L)可以明显降低SH-SY5Y细胞的细胞存活率,增加细胞凋亡率,升高细胞内活性氧的含量,降低线粒体膜电位;开心散含药血清可以明显抑制细胞凋亡,提高细胞存活率,降低活性氧表达及提高线粒体膜电位(P0.01)。结论:开心散含药血清能减轻Aβ25-35所致的细胞损伤,可能与保护线粒体,减少细胞凋亡有关。     

黄芩苷体外对白念珠菌凋亡的影响

目的探讨中药有效成分黄芩苷对白念珠菌凋亡的影响。方法采用Hoechst33258染色荧光显微镜检测白念珠菌细胞凋亡的形态;Rh123染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化;DHR染色流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果 1 000,100μmol/L的黄芩苷能诱导白念珠菌细胞核固缩与碎裂,并降低白念珠菌MMP;1 000,100,10μmol/L的黄芩苷均能提高细胞内ROS水平。结论黄芩苷可通过线粒体途径诱导白念珠菌凋亡。     

菱角提取物诱导HL-60细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨菱角提取物对人早幼粒细胞性白血病细胞株HL-60细胞增殖和凋亡的影响及凋亡的分子机制.方法 采用MTT法检测菱角提取物对HL-60细胞的增殖抑制作用;吖啶橙染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化;比色法测定Caspase-3、9蛋白活性.结果 菱角提取物能抑制HL-60细胞的增殖,其作用呈明显的时间和剂量依赖性.菱角提取物可诱导HL-60细胞凋亡并显示一定的剂量依赖关系.与对照组比较,菱角提取物可明显降低HL-60细胞线粒体膜电位,上调Caspase-3、9蛋白活性.结论 菱角提取物可抑制HL-60细胞的增殖,其机制与降低线粒体膜电位、激活Caspase-3、9蛋白继而诱导HL-60细胞凋亡有关.     

相思子蛋白P2对B16黑色素瘤的抑制作用及机制研究

目的:研究相思子蛋白P2对小鼠黑色素瘤B16生长的抑制作用及作用机制。方法:MTT法观察相思子蛋白P2对B16细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测对B16细胞周期和细胞凋亡的影响,JC-1染色法检测相思子蛋白P2对B16细胞线粒体膜电位的影响;相思子蛋白P2 50、75、100μg/kg连续灌胃给药10天,观察对小鼠黑色素瘤B16移植性肿瘤生长的抑制作用。结果:相思子蛋白P2对B16细胞具有显著的生长抑制作用,IC50值为4.6×10-3μg/ml,浓度为1μg/ml时抑制率可达95.45%;流式细胞仪分析显示,相思子蛋白P2主要将细胞周期滞留在S期,阻断向G2/M期发展,从而抑制肿瘤细胞增殖。相思子蛋白P2可明显诱导B16细胞凋亡。荧光显微镜检测结果显示相思子蛋白P2可显著降低B16细胞线粒体膜电位。相思子蛋白P2口服给药对小鼠B16移植性肿瘤生长有抑制作用,100μg/kg抑瘤率达53.75%,有明显剂量-效应依赖关系,且对胸腺和脾脏质量指数的影响较环磷酰胺小。结论:相思子蛋白P2于体内外均可显著抑制B16细胞的生长,此作用与阻止肿瘤细胞增殖周期,降低线粒体膜电位,诱导细胞凋亡有关。     

天麻素通过SIRT1/PGC-1α信号通路抗叔丁基过氧化氢诱导的HL7702细胞氧化损伤

目的 :探讨天麻素对叔丁基过氧化氢诱导的人肝细胞HL7702氧化损伤的保护作用。方法:以叔丁基过氧化氢损伤人肝细胞HL7702建立氧化损伤模型,以不同浓度天麻素(5²0μmol/L)进行干预。采用MTT比色法检测细胞活力,光学显微镜观察细胞形态,罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位改变,免疫印迹实验检测细胞中SIRT1和PGC-1α蛋白的表达。结果:不同浓度天麻素(520μmol/L)进行干预。采用MTT比色法检测细胞活力,光学显微镜观察细胞形态,罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位改变,免疫印迹实验检测细胞中SIRT1和PGC-1α蛋白的表达。结果:不同浓度天麻素(5²0μmol/L)能够提高叔丁基过氧化氢作用的细胞存活率并呈时间-剂量依赖性,确定其最佳作用时间为24 h,最佳作用浓度为10μmol/L。与对照组相比,模型组细胞氧化应激作用明显增强,而天麻素10μmol/L作用24 h后,能够显著降低活性氧和丙二醛含量,升高超氧化物歧化酶活力;抑制叔丁基过氧化氢诱导的线粒体膜电位降低并显著增加SIRT1和PGC-1α蛋白的表达。结论 :天麻素能够抑制活性氧对HL7702细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起线粒体功能损伤并上调SIRT1/PGC-1α蛋白表达有关。     

苦参碱诱导淋巴细胞白血病L1210细胞凋亡的实验研究

目的在体外培养条件下,观察苦参碱对L1210细胞的损伤效应,探讨苦参碱的作用机制,期待为临床白血病治疗提供新的思路。方法取对数期生长的L1210细胞,在细胞培养板每孔接种1×105/孔,培养24 h后,加入终浓度为0.5 g/L、1.0 g/L、2.0 g/L的苦参碱,对照组加入等体积的培养液。收集24 h、48 h和72 h的L1210细胞标本,台盼蓝染色观察直接损伤的作用,TUNNEL法观察诱导细胞凋亡的情况。结果苦参碱浓度越高,作用时间越长,L1210细胞台盼蓝拒染率越低,与对照组相比有显著性差异。高浓度的苦参碱(0.5 g/L)对L1210细胞细胞凋亡才会有显著的影响(P0.05),随着时间的延长,较高浓度的苦参碱也会显著影响L1210细胞的凋亡。结论苦参碱有杀伤白血病L1210细胞的作用,其机制可能是诱导细胞凋亡和直接损伤细胞膜。     

鸡血藤含药血清对L1210细胞的影响

目的：观察鸡血藤（SS）对白血病L1210细胞株的影响。方法：以白血病L1210细胞株为研究对象，以昆明小鼠含药血清为药物，用MTT法观察SS含药血清对白血病细胞株L1210细胞增殖的抑制作用。结果：SS含药血清对L1210细胞有抑制作用，其结果具有统计学意义。结论：SS含药血清具有一定抑制L1210肿瘤细胞增殖及其诱发的移植性肿瘤作用。     

人参多糖对D-半乳糖诱导的PC12细胞拟老化模型自噬和相关信号通路的影响

目的:探讨人参多糖对D-半乳糖(D-Gal)诱导的大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞衰老损伤后自噬和相关信号途径的影响。方法:将PC12细胞分为正常对照组、模型组、人参多糖组。除正常对照组外,其余各组用含20 mg/mL D-Gal的培养基损伤24 h;人参多糖组加入终浓度分别为65、75μg/mL人参多糖作用24 h。CCK-8法检测人参多糖对细胞活力的影响;β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老;流式细胞仪检测细胞周期、活性氧(ROS)及线粒体膜电位(MMP);Seahorse代谢分析系统结合ATP生成量评估线粒体功能;免疫蛋白印迹法检测自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3B(LC3B-Ⅱ)、泛素结合蛋白P62(P62)]和自噬相关信号通路Parkin、PINK 1蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,D-Gal可引起细胞衰老,表现为细胞活力降低,β-半乳糖苷酶阳性染色率增加,细胞周期G_1阻滞;与模型组比较,人参多糖75μg/mL组线粒体膜电位升高,活性氧降低,ATP及最大呼吸量升高(P0.05～P0.01);与模型组比较,人参多糖组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平上升,P62表达下降(P0.001),Parkin、PINK1蛋白的表达趋势与LC3Ⅱ/Ⅰ的结果一致(P0.05～P0.001)。结论:人参多糖可能通过影响PINK1/Parkin途径调控线粒体自噬,维系线粒体稳态改善D-Gal引起的PC12细胞衰老,保护受损细胞。     

华蟾素诱导白血病细胞凋亡和线粒体跨膜电位下降的实验研究

目的:观察华蟾素对白血病细胞的凋亡诱导作用并探讨其机制。方法:用 MTT 法观察华蟾素对 HL-60细胞的生长抑制作用,通过形态学方法、DNA 电泳、流式细胞仪技术、Annexin V 标记法检测华蟾素作用后 HL-60细胞的凋亡发生情况,通过罗丹明染色检测华蟾素作用后 HL-60细胞线粒体跨膜电位的变化。结果:华蟾素作用后 HL-60细胞线粒体跨膜电位下降并发生调亡,在0.0625～0.5 μg/ml 的浓度范围内具有一定的量效关系。结论:华蟾素对白血病细胞具有凋亡诱导作用,其机制与破坏线粒体的功能有关。     

紫草素对DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的抑制作用和诱导人白血病K562细胞的凋亡

目的：研究紫草素对DNA拓扑异构酶I催化活性和K562白血病细胞凋亡的影响。方法：从K562白血病细胞提取拓扑异构酶I，通过DNA解螺旋试验评价该药对拓扑异构酶I催化活性的抑制作用。用MTT法测定了该药对K562白血病细胞增殖的抑制作用。应用流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳观察了该药对细胞凋亡的诱导作用。结果：紫草素可显著抑制拓扑异构酶I的解螺旋活性(IC50=75．Oμmol/L)。该药能显著抑制K562的细胞增殖，并随剂量增大而抑制作用增强。紫草素O．3～3μmol/L对K562细胞作用24h后，其凋亡率为20％～70％。琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA“lad-der”。结论：紫草素显著抑制拓扑异构酶I的催化活性，并能诱导K562白血病细胞凋亡。     

斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制

目的探讨斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制。方法磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测不同浓度(1.668、3.336、5.004、6.672μmol/L)斑蝥素酸镁对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用,将细胞随机分为空白对照组、斑蝥素酸镁组(2.43、4.86、9.72μmol/L)、冈田酸组(0.072 nmol/L)。作用24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧(ROS)、线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞色素c、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、ERK1/2蛋白磷酸化表达。结果斑蝥素酸镁能明显抑制BEL-7402人肝癌细胞的增殖,呈剂量-效应关系,其IC_(50)为4.86μmol/L;与对照组比较,斑蝥素酸镁组凋亡率、细胞内活性氧(ROS)水平、Cyt-C、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3蛋白表达显著增加(P0.01),线粒体膜电位、ERK1/2蛋白磷酸化表达显著降低(P0.01)。结论斑蝥素酸镁可能通过抑制ERK1/2磷酸化水平来反向调节线粒体凋亡途径,最终诱导BEL-7402人肝癌细胞发生凋亡。     

基于p62-NRF2通路探讨黄芪甲苷对白血病耐药细胞株化疗敏感性的影响

目的基于p62-NRF2通路探讨黄芪甲苷(AST)对白血病耐药细胞株化疗敏感性的影响机制。方法复制白血病细胞模型,cck-8法测L1210、L1210/DDP细胞株对DDP的敏感性;将L1210/DDP细胞随机分成5组,即L1210组、L1210/DPP组、给药1组(L1210/DDP+8μg/ml DDP)、给药2组(L1210/DDP+8μg/ml DDP+100μg/ml AST)、给药3组(L1210/DDP+8μg/ml DDP+70μg/ml verapamil组),评价AST对L1210/DDP耐药性的逆转作用;流式细胞仪检测各组细胞周期、凋亡率变化,DCFH-DA荧光探针检测各组细胞内ROS变化;real time RT-PCR检测p62-NRF2通路各节点基因的表达变化。结果 L1210/DDP细胞对DDP的敏感性明显弱于L1210细胞,相对耐药指数为2.56;100μg/ml AST作用24h后,相对逆转倍数为13.67,70μg/ml verapamil的相对逆转倍数为20.46;与L1210组相比,含L1210/DDP各组内ROS水平低(P0.05);与L1210/DDP组相比,给药2、3组肿瘤细胞G_1期阻滞,S期缩短,细胞增殖受到抑制(P0.05);给药各组细胞p62、NRF2基因mRNA表达下调,除给药1组外,细胞HO-1基因mRNA表达均下调,而各给药组细胞cyclinD、Caspase3 mRNA表达均上调,但无统计学意义。结论 AST具有增强L1210/DDP细胞株对DDP敏感性,逆转L1210/DDP细胞株耐药的功效,其机制可能通过调控p62-NRF2通路及其靶基因的表达有关。     

延龄草诱导人结肠癌RKO细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨延龄草诱导结肠癌RKO细胞凋亡的作用机制。方法:以人结肠癌RKO细胞株为模型,通过MTT实验检测延龄草不同提取部位对RKO细胞的细胞毒性;以流式细胞术及光比色法检测延龄草乙酸乙酯部位对RKO细胞线粒体膜电位及Caspase9和Caspase3活性的影响。结果:延龄草乙酸乙酯部位(EE-TM)对RKO细胞增殖抑制作用最显著(P<0.01),干预24、48及72 h后的IC50值依次为52.64、22.56及18.39μg/mL;EE-TM干预12 h后可以导致RKO细胞线粒体膜电位下降(P<0.01),干预24 h及48 h后可以导致RKO细胞内Caspase9及Caspase3的活性增强(P<0.01)。结论:延龄草具有体外抗结肠癌活性,作用机制可能是通过线粒体通路介导细胞走向凋亡。     

白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其机制研究

目的探讨白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其相关机制。方法采用MTT法考察白头翁皂苷D对人肝癌细胞BEL-7402增殖的影响,同时观察BEL-7402细胞形态的变化,采用集落形成实验考察白头翁皂苷D对BEL-7402细胞集落形成的影响;Hoechest 33342染色观察BEL-7402细胞凋亡的形态变化;流式细胞术检测BEL-7402细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化;采用Western blotting法检测BEL-7402细胞Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果 MTT结果显示白头翁皂苷D对BEL-7402细胞增殖有抑制作用;集落形成实验结果显示白头翁皂苷D能明显抑制BEL-7402细胞集落的形成,白头翁皂苷D(25.00μg/m L)能显著诱导BEL-7402细胞凋亡;白头翁皂苷D(18.75、25.00μg/m L)能显著降低BEL-7402细胞线粒体膜电位;白头翁皂苷D(12.50、18.75、25.00μg/m L)可显著上调BEL-7402细胞中Caspase-3的表达;白头翁皂苷D(25.00μg/m L)可显著下调Bcl-2的表达。结论白头翁皂苷D有良好的体外抗肝癌作用,其机制与调节线粒体途径凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3的表达有关。     

地榆皂苷Ⅰ诱导人甲状腺乳头状癌细胞BCPAP凋亡的实验研究

目的研究地榆皂苷Ⅰ对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞作用及相关的分子机制。方法 MTT法检测地榆皂苷Ⅰ对BCPAP细胞增殖的作用;AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达水平;JC-1染色检测线粒体膜电位;试剂盒检测Caspase活性。结果地榆皂苷Ⅰ对BCPAP细胞增殖有显著抑制作用,且呈浓度依赖性(P0.05),IC_(50)为28.99μmol/L。地榆皂苷Ⅰ可显著诱导BCPAP细胞凋亡,且凋亡率随着药物浓度的升高而显著升高,呈剂量依赖性。地榆皂苷Ⅰ可提高Bax/Bcl-2比率,降低线粒体膜电位,促使细胞色素C从线粒体内的释放,提高Caspase-9和Caspase-3活性。结论地榆皂苷Ⅰ通过激活线粒体通路导致人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖受到抑制并诱导细胞凋亡。     

二参颗粒对氯化钴诱导的H9C2细胞氧化应激介导的细胞凋亡的保护作用

目的:通过观察二参颗粒对氯化钴(CoCl_2)诱导的缺氧损伤和大鼠心肌细胞H9C2凋亡的影响,阐明二参颗粒对心脏的保护作用。方法:以500μmol/L的CoCl_2与H9C2细胞共同作用24 h,建立心肌细胞缺氧缺血模型。将H9C2细胞分为空白对照组、模型对照组、二参颗粒50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组。酶联免疫法检测胞外培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)和凋亡水平,蛋白质印迹分析法检测细胞内Bcl-2/Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞活力下降、活性氧(ROS)荧光表达值升高、线粒体膜电位JC-1单体阳性细胞显著升高以及细胞培养液中LDH含量升高,凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,二参颗粒能有效改善细胞活力,降低LDH的含量,显著降低胞内ROS荧光表达值,改善线粒体膜电位和凋亡水平,下调凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达,升高Bcl-2/Bax的比值(P<0.05或P<0.01)。结论:二参颗粒可以抑制CoCl_2诱导的心肌细胞ROS水平,减少氧化应激发生,进而改善氧化应激介导的心肌细胞的细胞凋亡。     

灯盏花素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的观察灯盏花素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测细胞相对存活率,流式细胞术检测凋亡率,DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平;Rhodamine123染色法检测线粒体膜电位水平;Western blot法检测胞浆Cyt-C的表达;ELISA法检测caspase-3和caspase-9酶活性。结果 250μmol/L MPP+处理PC12细胞,细胞存活率显著降低,并明显诱导细胞产生凋亡。而经灯盏花素(12.5、25、50μg/L)预处理,有效抑制MPP+诱导的细胞调亡,明显增加PC12细胞存活率,同时使细胞活性氧的增加和线粒体膜电位的降低;并明显抑制胞浆Cyt-C的释放和caspase-3和caspase-9的高表达。结论灯盏花素预处理能明显提高MPP+诱导的PC12细胞损伤的细胞存活率,其机制可能与抑制细胞线粒体凋亡途径有关。     

双去甲氧基姜黄素通过降低线粒体膜电位诱导人白血病K562细胞凋亡

目的:探讨双去甲氧基姜黄素对K562细胞增殖的影响及其机制。方法:以1,10,30,50,100μmol·L~(~(-1))的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用48 h或72 h后MTT法检测细胞增殖;以10,30,50μmol·L~(-1)的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用24 h或48 h实验,另设空白组,AO/EB双染法倒置荧光显微镜观察凋亡形态,Rh123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位,Annxin V/PI染色流式细胞仪检测凋亡率,Westren blot方法检测Bcl-2,Bax的表达活性。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可剂量依赖性抑制K562细胞的增殖,在30,50μmol·L~(-1)浓度下,双去甲氧基姜黄素可诱导细胞凋亡,下调Bcl-2/Bax,并可降低线粒体的膜电位(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可抑制K562细胞的增殖,作用机制可能与改变线粒体膜电位诱导的细胞凋亡有关。