蕲蛇药材及其市售混淆品的Cyt b基因序列与分析

目的分析蕲蛇药材正品及其市场收集样品的Cyt b基因序列,为蕲蛇药材分子鉴别提供依据。方法利用Cyt b基因,对蕲蛇药材及其市场收集样品进行了序列测定和分析。结果蕲蛇药材存在着混杂现象;蕲蛇药材正品与其市售混淆品的Cyt b基因序列有着显著差异,该序列在蕲蛇种内差异率为0%~0.91%,与混淆品间的差异率为18.57%~23.78%。结论Cyt b基因序列是一种鉴别蕲蛇药材与其混淆品较好的分子遗传标记。     

五指毛桃及其混淆品的鉴别研究

目的:五指毛桃为广东地区习用药材,商品中存在较多混淆品。该文拟对五指毛桃及其可能的混淆品进行鉴别研究。方法:采用TLC法对五指毛桃及其混淆品进行定性鉴别,同时采用HPLC法进行定量分析,以及利用ITS2序列进行DNA条形码鉴定。结果:TLC鉴别检出五指毛桃和琴叶榕中均含有补骨脂素,而变叶榕、对叶榕和构树中则未检出补骨脂素;建立了基于HPLC法检测五指毛桃及其混淆品中补骨脂素、佛手柑内酯与芹菜素的定量方法;建立了基于ITS2序列的五指毛桃及其混淆品的DNA条形码,NJ树显示五指毛桃及其混淆品可从分子水平上得以区分。结论:综合运用不同的鉴定方法可对五指毛桃及其混淆品进行准确和全面的鉴定,为五指毛桃的鉴别提供新的科学依据。     

基于trnL-trnF序列分析的何首乌PCR-RFLP分子鉴别

目的:建立何首乌(Fallopia multiflora)DNA分子鉴别技术。方法:对何首乌与其近缘种及其混淆品的trnL-trnF(trnL基因和trnF基因间隔区)序列进行比较分析。结果:何首乌与其近缘种及其混淆品的trnL-trnF差异率为2.1%～22%,何首乌种内各居群间trnL-trnF差异率为0%～1.5%。基于何首乌与其近缘种及其混淆品的trnL-trnF序列的差异,找出一个位于trnL5'-trnL3'间区的何首乌特征性Xba I酶切位点(T↓CTAGA),用Xba I酶对不同采集地的何首乌样品trnL-trnF序列扩增产物酶切后均得到含约804～819 bp和256 bp两个片段的PCR-RFLP图谱,而其混淆品trnL-trnF序列扩增产物因不能被Xba I酶切,图谱呈单一条带。结论:利用建立的PCR-RFLP方法可以很好地区分何首乌及其混淆品植物。     

基于中药系统鉴别法的金铁锁及其混淆品的精确鉴别

目的:建立金铁锁药材及其混淆品有效的鉴别方法,分析二者在显微特征、DNA信息特征等方面的差异,为精确鉴定金铁锁药材及其混淆品,以保障用药安全奠定基础.方法:采用中药系统鉴定,对金铁锁药材及其市售混淆品样本的显微特征及其ITS序列进行BLAST比对分析、ITS序列的特异位点差异分析,N-J系统发育树分析等,建立金铁锁及其混伪品的系统鉴定方法.结果:中药系统鉴定法的显微特征中,金铁锁正品药材中无草酸钙结晶,而其混淆品瓦草中具有大量的草酸钙簇晶分布,可作为其鉴定的重要依据之一;此外,金铁锁药材ITS序列与瓦草ITS序列差异明显,采用BLAST比对分析、N-J系统发育树分析等可将二者进一步精确鉴别.结论:采用中药系统鉴定法能够很好的对金铁锁及其混伪品进行精确的鉴别.     

三七及其伪品的DNA测序鉴别

目的 :分析三七Panaxnotoginseng及其伪品竹节参P .japonicus、蓬莪术Curcumaphaeo caulis、温莪术C .wenyujin、桂莪术C .kwangsiensis的核基因和叶绿体基因序列 ,为三七的正品药材基原鉴定提供分子依据。方法 :采用PCR直接测序技术测定三七及其 4种伪品的 18SrRNA基因和matK基因核苷酸序列并作序列变异分析。结果 :三七和竹节参的 18SrRNA基因序列长度相同 ,均为 180 9bp ;matK基因长度亦相同 ,为 12 5 9bp。蓬莪术、温莪术和桂莪术 18SrRNA基因长度均为 1811bp、matK均为15 4 8bp。根据排序比较 ,三七与 4种伪品间的DNA序列存在很大差别。 结论 :通过序列差异比较分析 ,DNA测序技术可成为三七正品基原鉴定的准确、有效手段     

意大利牛舌草与其易混淆品的鉴定

目的:研究建立意大利牛舌草及其易混淆品的鉴别方法,为意大利牛舌草的质量控制提供依据。方法:采集不同产地的意大利牛舌草及其混淆品,采用药材显微鉴别、薄层色谱鉴别和DNA分子鉴别方法,对意大利牛舌草及其混淆品进行鉴别研究。结果:意大利牛舌草与琉璃苣、倒提壶在显微、薄层色谱有较为明显的差异,DNA分子鉴定表明,意大利牛舌草及其混淆品的最小种间K-2-P距离大于种内最大K-2-P距离,邻接法(NJ)树中意大利牛舌草的样品聚为一支,琉璃苣、倒提壶混淆品分别表现出单系性,可明显区分开。结论:该文在对意大利牛舌草及混淆品的茎、粉末显微特征比较研究的基础上,采用药材显微鉴别、薄层色谱鉴别与DNA分子鉴定手段相结合的综合鉴别模式,确定了意大利牛舌草及其混淆品的鉴别要点,DNA分子鉴定技术对于意大利牛舌草及其混淆品的鉴别有较大的优势,该法专属性强、灵敏度高,是传统鉴别技术的重要补充,具有较大的潜力和应用前景。建议进一步提高和完善意大利牛舌草的质量标准,加强意大利牛舌草的质量控制。     

基于DNA条形码技术鉴别4种龙胆科"地格达"类蒙药基原植物

目的:建立一种快速、准确和标准化的龙胆科“地格达”类蒙药材的DNA条形码鉴别方法,为“地格达”类蒙药材的分子鉴定提供依据.方法:对蒙药地格达类药用植物进行通用引物PCR扩增,PCR扩增产物直接测序,并对序列进行分析.结果:测得4种“地格达”的rbcL,ITS,trnH-psbA和matK全长序列,4种序列长度的范围为388 -940 bp,rbcL,ITS,matK序列都可以将其鉴别出来.结论:tmH-psbA序列不适合用于4种“地格达”的鉴别,ITS序列可作为地格达类蒙药材一种良好的分子标记.通过DNA条形码鉴别方法可对4种龙胆科“地格达”进行准确、可靠、有效的分子鉴别.     

琥珀及其混淆品的薄层色谱、红外和GC-MS分析

目的:鉴定琥珀及其混淆品,完善琥珀药材质量标准。方法:采用性状和理化鉴别、薄层色谱、红外光谱、气质联用等方法对琥珀及其混淆品进行比较分析。结果:通过溶解及燃烧实验,可初步区分不同类型的琥珀样品及其伪品;以β-香树精为对照品建立了薄层鉴别方法;总结琥珀及其混淆品的红外特征吸收,建立红外鉴别方法;采用GC-MS法确定了琥珀中的9种特征成分,可与其混淆品进行区分。结论:补充建立的理化鉴别、薄层色谱、红外光谱和气质联用方法均有较好的专属性和准确性,可以综合判断两种琥珀的商品及其混淆品,用于琥珀药材及其原料的质量控制。     

金钱白花蛇及其混淆品高特异性PCR的鉴别

目的：建立一种实用、简便的金钱白花蛇药材DNA分子标记鉴别方法。方法：根据金钱白花蛇及常见混淆品线粒体Cyt b基因序列,设计一对专门用于中药材金钱白花蛇的鉴别引物HJL-1和HJH-1。用不同的复性温度PCR扩增,确立特异性反应条件,并利用此方法鉴别从市场中购买的金钱白花蛇药材。结果：在67 ℃复性温度下进行PCR,正品金钱白花蛇均得到230 bp的扩增带,而混淆品在同样的条件下无扩增带。对市售金钱白花蛇药材随机选取18块进行PCR鉴别验证,其中正品14块,混淆品4块,检出率达100％。结论：设计的鉴别引物对正品金钱白花蛇有高度特异性。可用于市售金钱白花蛇药材的鉴定。PCR稳定性高,同种不同个体间的种内差异对鉴定结果不会有影响。     

天南星及其易混品DNA条形码鉴别

目的:通过DNA条形码序列鉴别天南星及其易混品,为天南星的鉴别和遗传多样性研究提供依据。方法:通过对序列的扩增成功率、测序成功率、blast鉴定成功率、种间及种内K2P遗传距离和NJ聚类分析等5个方面的信息进行对比,考察了4个DNA条形码(matK、rabL、psbK-psbI、atpF-atpH)对天南星及其易混品的鉴定能力,确定适用于天南星鉴别的DNA条形码。结果:在4个条形码序列中,rabL的鉴定成功率41.67%,matK的鉴定成功率100%,但是扩增成功率仅65.57%,psbK-psbI序列和atpF-atpH序列的扩增成功率分别为94.91%和93.22%,其鉴定成功率均为100%。结论:atpF-atpH序列和psbK-psbI序列均能把天南星与其他易混品进行区分,适合用于天南星及其易混品的鉴别,初步建立了天南星及其易混品的DNA条形码鉴别方法,可为天南星资源的合理利用提供参考依据。     

基于matK基因的高良姜及其同属混伪品的分子鉴别

目的:建立基于matK基因的高良姜及其同属混伪品的分子鉴别方法。方法:采用通用引物对高良姜样品matK基因进行PCR扩增和双向测序,并从Gen Bank下载10种同属混伪品的matK基因序列。采用Clustal X、MEGA软件进行序列比对分析、计算遗传距离以及构建聚类树。结果:获得的高良姜及其同属混伪品matK基因序列长度为732 bp,变异位点41个。高良姜种内遗传距离为0.000,与混伪品之间的最小遗传距离为0.003。基于matK序列构建的系统发生树显示高良姜样品聚在一起,能直观地与混伪品区分。结论:matK基因可以有效地鉴别高良姜及其同属混伪品。     

基于条形码ITS2序列的何首乌及其近缘种和混淆品的分子鉴别

目的:通过内转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)序列分析,探究鉴别何首乌与其近缘种和混淆品的新方法。方法:何首乌与其近缘种和混淆品的ITS2序列进行扩增、纯化、测序,运用Seqman软件进行序列拼接,通过MEGA6.0软件进行序列的分析并构建kimura 2-parameter(K2P)模型的neighbor-joinin(NJ)系统聚类树。结果:何首乌与其近缘种和混淆品ITS2序列间存在明显差异,种内遗传距离小于种间遗传距离。齿叶蓼与何首乌种间遗传距离较大,却与翼蓼非常接近,二者的遗传距离仅0.029。NJ系统聚类树显示不同产地的何首乌聚为一支,与其近缘种和混淆品可很好地区分。结论:ITS2序列可有效地鉴别何首乌与其近缘种和混淆品,为何首乌的用药安全性提供技术保障。     

三七及其伪品的DNA测序鉴别

目的：分析三七Panax natoginseng及其伪品竹节参P．japoricuscus、蓬莪术Curcuma phaeocaulis、温莪术C．wenyujin、桂莪术C．kwangsiensis的核基因和叶绿体基因序列,为三七的正品药材基原鉴定提供分子依据。方法：采用PC8直接测序技术测定三七及其4种伪品的18S rRNA基因和matK基因核苷酸序列并作序列变异分析。结果：三七和竹节参的18S rRNA基因序列长度相同,均为1809bp;matK基因长度亦相同,为1259bp。蓬莪术、温莪术和桂莪术18S rRNA基因长度均为1811bp、marK均为1548bp。根据排序比较,三七与4种伪品间的DNA序列存在很大差别。结论：通过序列差异比较分析,DNA测序技术可成为三七正品基原鉴定的准确、有效手段。     

地龙及其混淆品原动物的形态及DNA双重条形码鉴定

目的基于线粒体cytochrome coxidase I(CO I)和16 S rRNA基因开发DNA双重条形码鉴定方法,由此验证并补充形态鉴定,以期建立一种准确、有效地鉴定地龙及混淆品原动物的方法。方法对收集到的66份样品依据形态特征进行初步鉴定,使用优化后的引物同时扩增CO I和16 S rRNA序列。优化一步法双重PCR实验条件。用MEGA 5.1计算地龙及其混淆品的种内、种间遗传距离,基于K2P模型构建NJ树。结果 CO I和16 S rRNA双重DNA条形码鉴定与形态鉴定结合,可准确鉴别地龙及混淆品原动物。结论形态鉴定是分子鉴定的基础,分子鉴定是形态鉴定的有力补充。二者结合可最大程度地实现地龙及其混淆品原动物的准确鉴定。DNA双重条形码鉴定方法也可为地龙药材鉴定以及其他动物药材的分子鉴定提供参考。     

基于ITS2序列鉴定红白二丸药材及其近缘易混品

目的：基于ITS2序列建立红白二丸药材及其近缘易混品的分子鉴定方法。方法：共收集67份红白二丸药材（中华秋海棠）及其近缘易混品（秋海棠、掌裂叶秋海棠和柔毛秋海棠）,提取总DNA、PCR扩增ITS2序列并进行双向测序,通过CodonCode Aligner V4.2.1对测序序列进行质量分析和拼接,采用MEGA 6.0进行多序列比对分析,并基于最近距离法和建树法（NJ树和UPGMA树）对红白二丸药材及其近缘易混品进行物种鉴定。结果：最近距离法和建树法的结果均表明中华秋海棠与其近缘易混品掌裂叶秋海棠、柔毛秋海棠能有效区分,但其与秋海棠未能区分开（秋海棠与中华秋海棠为原亚种与亚种的关系）。结论：ITS2序列可以有效区分红白二丸药材及其近缘易混品的物种基原,可以作为红白二丸药材的分子鉴定方法,为红白二丸药材的真伪鉴别和保证临床用药安全提供有效的技术支持。     

基于COI条形码的市售蝉蜕及其混淆品DNA分子鉴定研究

目的 利用COI序列对中药材蝉蜕Cicadae Periostracum及其混淆品进行DNA条形码鉴定研究,为蝉蜕药材的快速准确鉴定提供新的技术手段。方法 收集全国市售蝉蜕药材、基地自采蝉蜕及其混淆品总45份样本,同时采集江苏徐州黑蚱养殖基地不同树种中蝉卵样品5份作为对照。提取DNA,进行PCR扩增及双向测序,测序结果采用DNAMAN和SnapGene进行拼接校对,运用MEGA11.0进行比对分析,计算种内及种间Kimura 2-Parameter(K2P)遗传距离并构建邻接法（neighbor-joining,NJ）系统发育树。结果 黑蚱种内遗传距离远小于种间最小遗传距离,NJ树结果显示,黑蚱蝉蜕样品全部聚集为独立的一支,支持率为99%。混淆品样品分别聚集为单独的一支,支持率均大于90%,表明基于COI序列的DNA条形码技术可以有效鉴别蝉蜕药材真伪。结论 应用COI序列作为DNA条形码能够准确有效地鉴别蝉蜕及其混淆品。     

基于DNA条形码的三种沉香属物种鉴定研究

目的:利用5个DNA条形码(ITS、matK、rbcL、psbA-trnH和trnL-trnF)对3个沉香属物种白木香、马来沉香和Aquilaria crassna Pierre进行分子鉴定,为沉香属药材的种类鉴定和种间分类地位提供分子生物学依据。方法:使用改良CTAB法提取沉香属植物的总DNA,分别对5个条形码序列进行聚合酶链式反应(PCR)扩增与测序。序列经DNAStar软件拼接,MEGA 7.0软件比对分析及计算相关数据,基于K2P模型构建系统发育树。结果:各条形码序列均被成功扩增与测序,其中trnL-trnF由于含有寡核苷酸重复序列而导致测序序列质量低。ITS及matK均能提供较多遗传信息,但在系统发育树中无法准确区分白木香、马来沉香和Aquilaria crassna Pierre这3个物种,而ITS+matK的组合能准确分辨上述物种。结论:ITS+matK组合序列可以用来鉴别沉香属物种,为沉香属药材的种类鉴定和种间分类地位提供分子生物学依据。     

维吾尔药欧李显微鉴别研究

目的:建立维吾尔常用药材欧李的显微鉴别方法。方法:采用石蜡切片法和粉末制片法进行制片,在光学显微镜下进行欧李Prunus domestica及常见混淆品黑刺李Prunus spinosa药材的观察并测量及描述。结果:两者的横切面显微结构无显著差别,但粉末的纤维及导管特征区别较明显。结论:粉末鉴别可以很好地区分欧李及其混淆品黑刺李,为欧李的鉴定提供科学依据。     

基于COI和16SrRNA基因的地龙药材及其混淆品的DNA条形码鉴定

目的 利用线粒体细胞色素C氧化酶亚基1（COI）和16S核糖体RNA（16SrRNA）对地龙药材及常见混伪品进行分子鉴定,探讨快速、准确鉴定地龙药材及其混伪品基原物种的方法。方法 收集地龙药材的药典收载品种及其易混品种10种,提取DNA,得到其COI和16SrRNA序列。所得序列经DNAStar校正后,用MEGA6.0自带的Clustal W多重比对,除去冗余位点,比对结果经MEGA6.0分析,构建地龙药材及其混淆品的邻接（N-J）树。结果 地龙药材的正品来源参环毛蚓（Pheretima aspergillum）、通俗环毛蚓（P. vulgaris）、威廉环毛蚓（P. guillelmi）及栉盲环毛蚓（P. pectinifera）与其混淆品种间COI和16SrRNA基因序列均存在较多变异位点。由所构建的N-J系统聚类树图显示所测物种的单系性,即16SrRNA、COI可以很好的将地龙药材区别于其他混伪品。结论 所获得的COI和16SrRNA序列可作为不同状态的地龙类药材物种鉴定的分子依据,并为进一步建立地龙等动物类中药物种真实性鉴定体系奠定了重要的实验基础。     

高良姜及其混淆品的分子鉴定

目的:探讨基于ITS2条形码序列鉴定高良姜及其混淆品的新方法。方法:本研究对高良姜及其混淆品6个物种9份样品的ITS2序列进行PCR扩增和测序,同时扩大研究范围从Gen-Bank上下载同属共15个物种37个样本。用MEGA4.1计算其种间、种内的K2P距离,并分析各样本间ITS2序列二级结构的差异,最后利用ITS2序列重构其系统发育树。结果:高良姜基源植物种内最大K2P距离为0.0171,与混伪品的种间最小K2P距离为0.0469;高良姜及其混淆品的ITS2二级结构存在明显差异;重构的系统发育树显示高良姜的不同来源聚在一支,能较好与混淆品区分。结论:ITS2序列能够成功鉴定高良姜及其易混淆品,可以作为高良姜及其混淆品的分子鉴定工具。