大肠埃希菌耐药特征及质粒介导喹诺酮耐药基因分布

目的调查临床分离大肠埃希菌的耐药特征及质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因流行状况。方法收集本院住院患者分离的大肠埃希菌191株,经VITEK 2全自动鉴定药敏仪进行鉴定和药敏分析,PCR检测PMQR基因qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、aac(6′)-Ib-cr、oqxA、oqxB、qepA。接合试验分析PMQR基因的转移性。结果 191株菌株对美洛培南和亚胺培南均敏感。对阿米卡星、奈替米星、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦和头孢西丁耐药率均低于30%。环丙沙星耐药率为64.4%,PMQR基因检出率为37.7%,123株环丙沙星耐药株中qnrA阳性26.0%、qnrB阳性4.9%、qnrS阳性1.6%、aac(6′)-Ib-cr阳性43.1%、oqxA阳性8.9%、qepA阳性4.9%,未检出到qnrC、qnrD和oqxB。其中40株(32.5%)只检测到单一基因,其余32株(26.0%)检测到2种或2种以上PMQR基因。接合试验证明43株细菌携带的PMQR基因可转移。结论本院分离大肠埃希菌耐药较严重且呈多药耐药,对环丙沙星耐药较高,PMQR基因以qnr和aac(6′)-Ib-cr为主。     

质粒介导的大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药机制的研究

目的分析广州地区大肠埃希菌对喹诺酮类等12种抗菌药物耐药性,探讨qnr、qepA、aac-(6′)-Ib-cr质粒基因流行状况以及与耐药的关系。方法收集广州市两所三甲医院临床分离大肠埃希菌103株,采用纸片扩散法进行药敏试验,采用PCR技术检测大肠埃希菌中qnr(qnrA、qnrB、qnrS)、aac-(6′)-Ib-cr和qepA质粒基因,并对PCR产物进行DNA测序分析。结果 103株大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药率均>50.0%,20株菌检出阳性基因qnrB、qnrS、aac(6′)-Ib-cr的阳性率分别为9.7%、7.8%、10.7%,有8株菌同时携带≥2种质粒基因,这8株菌对喹诺酮类药物全部耐药,同时合并其他类抗菌药物耐药,其中52号菌同时携带3种基因[qnrB、qnrS、aac-(6′)-Ⅰb-cr],对6类抗菌药物全部耐药,12株菌检出单个质粒基因,其中4株对喹诺酮类敏感。结论广州市大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药率居高不下;药敏谱呈多样化,多药耐药株比例高;菌株中存在qnrB、qnrS、aac-(6′)-Ⅰb-cr的流行,并呈现出两种或多种耐药基因共存于同一株细菌的特征;质粒介导的喹诺酮耐药基因数量与耐药种类数量呈正相关。     

质粒介导铜绿假单胞菌对喹诺酮类耐药机制的研究

目的 探讨铜绿假单胞菌临床分离株中是否存在质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)机制.方法 收集2010年1-12月中山大学附属第三医院临床分离的无重复铜绿假单胞菌256株,采用微量肉汤稀释法测定环丙沙星最低抑菌浓度(MIC),应用PCR方法扩增PMQR基因qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、aac(6')-Ib-cr、qepA,并对PCR阳性产物进行测序分析以确定基因亚型.结果 256株铜绿假单胞菌对环丙沙星的耐药株和敏感株分别为65株和180株,MIC50和MIC90分别为0.5 μg/ml、16 μg/ml;全部菌株中只有1株检测到qnrA基因,其PCR阳性产物经测序证实为qnrA1亚型,环丙沙星对该菌株的MIC为2μg/ml;未检测到qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、aac(6′)-Ib-cr和qepA基因.结论 国内首次从铜绿假单胞菌中发现qnrA1基因,该耐药基因介导细菌对环丙沙星低水平耐药,PMQR尚未成为铜绿假单胞菌对喹诺酮类耐药的主要机制之一.     

肺炎克雷伯菌对喹诺酮类及氨基糖苷类耐药基因检测及耐药机制分析

目的了解临床分离的耐环丙沙星及庆大霉素肺炎克雷伯菌喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA与氨基糖苷类耐药基因aac(6′)-Ⅰb的携带情况,并进行相关耐药机制分析。方法采用VITEK-2型全自动微生物检测系统鉴定细菌;采用K-B法检测细菌对16种常用抗菌药物的敏感性;采用聚合酶链反应检测耐药基因qnrS、qnrA、qnrB、qepA和aac(6′)-Ⅰb。结果 25株耐环丙沙星和庆大霉素的肺炎克雷伯菌中,12株(48.0%)检出aac(6′)-Ⅰb基因,7株(28.0%)检出qnrS基因,4株(16.0%)检出qnrB基因,未检出qnrA和qepA基因,其中1株同时检出qnrS和qnrB基因,qnr基因总的阳性率为40.0%;有6株肺炎克雷伯菌同时存在喹诺酮类和氨基糖苷类耐药基因(50.0%)。结论对环丙沙星和庆大霉素耐药的肺炎克雷伯菌携带aac(6′)-Ⅰb和qnrS、qnrB耐药基因,qnr基因的携带率高达40.0%,肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物耐药主要由aac(6′)-Ⅰb引起,单株菌可同时存在多种耐药基因,从而介导对多种抗菌药物的耐药性。     

铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药的分子机制研究

目的:研究铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药的分子机制,为临床抗感染治疗提供依据。方法:用PCR法检测染色体介导的喹诺酮类耐药基因gyrA、gyrB、parC、parE和质粒介导的喹诺酮类耐药基因qn-rA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、aac(6’)-Ib-cr、oqxA和oqxB,并对gyrA和parC阳性结果进行测序分析。结果:98株耐环丙沙星的铜绿假单胞菌中未检出parE、qnrC和qnrS基因。gyrA、gyrB和parC的阳性率分别为96.9%、87.8%和75.5%。测序证实84株菌(85.7%)发生gyrA或parC基因突变。90株菌(91.8%)携带质粒介导的耐药基因,qnrA、qnrB、qnrD、qepA、aac(6’)-Ib-cr、oqxA和oqxB的阳性率分别为31.6%、86.7%、15.3%、11.2%、53.1%、8.2%和26.5%,其中qnrB和aac(6’)-Ib-cr具有高携带率。结论:染色体介导的喹诺酮类耐药基因突变以及质粒携带qnr、qepA、aac(6’)-Ib-cr和oqxAB耐药基因是铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物的主要机制。首次在铜绿假单胞菌中发现qnrB基因和qnrD基因。     

肺炎克雷伯菌染色体及质粒介导的喹诺酮类药物耐药机制研究

目的了解肺炎克雷伯菌染色体、质粒介导喹诺酮类耐药基因gyrA、qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ⅰb-Cr和qepA基因的流行情况。方法采用PCR法对20株肺炎克雷伯菌进行gyrA、qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ⅰb-Cr和qepA基因检测,稀释法检测20种抗菌药物的体外抗菌活性,PCR扩增产物经纯化后测序并进行序列分析。结果20株肺炎克雷伯菌均存在突变,aac(6′)-Ⅰb和qnrS基因各检出1株,经比对分别为aac(6′)-Ⅰb-Cr和qnrS1。结论老年患者产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌对环丙沙星耐药主要为gyrA基因突变所致,但也有aac(6′)-Ⅰb-Cr和qnrS的因素。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌对喹诺酮类耐药机制的研究

目的研究质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因在耐碳青霉烯类肠杆菌(CRE)中的流行情况及耐药机制。方法收集2015年3月—2018年3月某院临床分离的CRE菌株,VITEK2 Compact分析仪对其进行鉴定及药物敏感试验,采用聚合酶链反应(PCR)及测序确定PMQR基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA、acc(6’)Ib-cr携带情况,通过质粒接合试验验证PMQR基因的水平转移。结果耐碳青霉烯类大肠埃希菌对喹诺酮类药物的耐药率达100%,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物的耐药率为15.56%～33.33%。acc(6’)Ib-cr基因检出率最高(87.72%),其次为qnrB(77.19%)和qnrS(17.54%),有2株菌携带qnrA基因(3.51%),未分离出qepA基因,菌株同时含有2种或3种PMQR基因(84.21%)。8株接合成功的菌株均存在PMQR基因转入,但喹诺酮药物对其最低抑菌浓度无明显改变。结论虽然该院CRE质粒介导喹诺酮耐药基因检出率高,但对喹诺酮类药物仍存在一定敏感性。     

1株携带qnrB4及aac(6′)-Ⅰb-suzhou型基因同时产ESBLs、AmpC酶多药耐药大肠埃希菌的调查

目的了解1株产ESBLs、AmpC酶大肠埃希菌的耐药机制。方法采用纸片扩散法检测1株大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)检测6种耐药基因:qnrA、qnrB、qnrC、qnrS、qepA、aac(6′)-Ⅰb,并对qnrB、aac(6′)-Ⅰb基因测序后进行BLAST比对分析。结果该菌株除对碳青霉烯类、酶抑制剂复合抗菌药物类敏感外,对其余药物均耐药;PCR发现该菌株同时携带qnrB和aac(6′)-Ⅰb,经测序并分别与已在美国国立信息中心登录的DQ303921(qnrB4)和EF375621[aac(6′)-Ⅰb-suzhou]型比对,同源性均>99.0%。结论该菌株多药耐药的机制与产ESBLs、AmpC酶及携带qnrB4和aac(6′)-Ⅰb基因有关;该研究是第一篇从1株产ESBLs、AmpC酶大肠埃希菌中检出同时携带qnrB4和aac(6′)-Ⅰb-suzhou型基因的报道。     

肠杆菌科细菌qnr耐药基因的流行现状及耐药分析

目的了解质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS在临床分离大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、鲍氏不动杆菌中的流行情况及其耐药特征。方法收集临床分离的4种肠杆菌科细菌共148株,用法国生物梅里埃公司VITEK-2全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,用qnr特异性基因引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增和基因型的测序分析,并通过网上GenBank进行比对以确定编码酶基因的类型。结果对喹诺酮类耐药的50株大肠埃希菌检出qnrA1株(2.0%)、qnrB5株(10.0%)、qnrS3株(6.0%),有1株同时携带qnrB、qnrS;30株肺炎克雷伯菌检出qnrA1株(3.3%)、qnrB8株(26.7%)、qnrS10株(33.3%),有3株同时携带qnrB、qnrS;18株阴沟肠杆菌检出qnrA13株(72.2%)、qnrB5株(27.8%)、qnrS4株(22.2%),有3株同时携带qnrA、qnrS,3株同时携带qnrA、qnrB;50株鲍氏不动杆菌未检出qnr基因;携带qnr基因肠杆菌科细菌对氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率均>70.0%,呈现出多药耐药现象。结论医院临床分离4种对喹诺酮类药物耐药的肠杆菌中,除鲍氏不动杆菌未检出qnr基因,其余3种均检出qnrA、qnrB、qnrS基因,以阴沟肠杆菌检出率最高,其次为肺炎克雷伯菌;携带qnr基因肠杆菌科呈现出多药耐药现象;医院在抗菌药物选择压力下,存在质粒介导喹诺酮类耐药基因qnr的流行。     

南京市食源性致泻大肠埃希氏菌多位点序列分型及耐药基因分析

目的 对南京地区食源性疾病监测中致泻性大肠埃希氏菌(diarrheagenic Escherichia coli,DEC)分离株进行多位点序列分型（Multilocus Sequence Typing,MLST）,了解超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrum beta-lactamases, ESBLs)耐药基因blaTEM、blaCTX-M和质粒介导的喹诺酮耐药基因(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)qnrA、qnrB、qnrS、oqxA、oqxB、qepA、aac(6’)-Ib-cr的流行情况及其与MLST型别之间的关联。方法对食源性监测中60株DEC分离株的管家基因（adk、fumC、gyrB、icd、mdh、purA、recA）进行PCR扩增和测序,用EnteroBase上下载的ST(Sequencetype)分型方案确定菌株序列型。PCR法检测超广谱β-内酰胺酶ESBLs耐药基因和质粒介导的喹诺酮耐药基因PMQR。结果60株DEC可分为34个ST型别,其中ST48为优势型别（16.67%）,发现两个新等位基因型,fumC1413和purA746,一个新序列型ST9953。共有43株（71.67%）携带ESBLs耐药基因,10株（16.67%）携带喹诺酮耐药基因PMQR。ESBLs阳性的大肠埃希氏菌株中占比最高的是ST10组群。结论 南京地区食源性疾病监测中致泻性大肠埃希氏菌最常见的序列型是ST48。特定的ST型别在DEC不同类型中的分布不同,两者之间呈现一定相关性。ESBLs广泛流行,blaTEM为主要流行基因,最流行的PMQR基因是qnrS。     

1株携带多种喹诺酮类药物耐药机制肺炎克雷伯菌的发现

目的研究肺炎克雷伯菌(KPN)烧伤分离株的喹诺酮类耐药机制。方法测定1株分离自烧伤科患者血液的肺炎克雷伯菌对3种喹诺酮类药物的敏感性,采用PCR方法进行6种喹诺酮类耐药基因[aac(6′)-Ⅰb、qnrA、qnrB、qnrS、qepA和gyrA]检测,并对aac(6′)-Ⅰb和gyrA PCR阳性产物进行基因测序并作BLASTx比对分析。结果该菌株对诺氟沙星和环丙沙星耐药,对左氧氟沙星敏感;PCR检测发现该菌株同时携带qnrB、qnrS及aac(6′)-Ⅰb,对aac(6′)-Ⅰb基因测序证实为aac(6′)-Ⅰb-cr突变体,对gyrA基因测序证实其83位丝氨酸(S)被异亮氨酸(I)所替代,并有65位丝氨酸(S)发生同义突变,作为新亚型已登录美国NCBI基因库(登录号为GQ422758)。结论首次发现一同时携带qnrB、qnrS及aac(6′)-Ⅰb-cr共3种质粒介导的喹诺酮类耐药基因肺炎克雷伯菌烧伤分离株,同时其gyrA基因66、83位氨基酸均有突变,为一新亚型;这对临床上预防控制多药耐药KPN在烧伤科的流行提出了更高的要求。     

2017-2018年包头地区耐喹诺酮大肠埃希菌临床分离株的耐药特征与机制分析

目的了解内蒙古包头地区临床分离的耐喹诺酮大肠埃希菌的耐药特征以及机制。方法收集2017-2018年内蒙古包头地区11所参与全国细菌耐药监测网医院的大肠埃希菌临床分离株,采用纸片扩散法或自动化仪器法按统一技术方案进行药敏试验,采用酶抑制剂增强试验测定超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),分析病原菌耐药性。并且随机从大肠埃希菌喹诺酮类耐药(环丙沙星或/和左氧氟沙星耐药)组中筛选60株作为试验菌株,采用微量肉汤稀释法测定环丙沙星最低抑菌浓度(MIC)值,采用聚合酶链反应检测GyrA、GyrB、ParC、ParE、qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ib以及qepA基因,限制性酶切反应确定aac(6′)-Ib-cr基因型。结果共收集上述医院非重复大肠埃希菌临床分离株4 262株。耐喹诺酮大肠埃希菌分离率居前3位的医院分别为包头市肿瘤医院(79.37%)、内蒙古包钢医院(74.45%)和包头市第八医院(72.52%);前3位科室分别为泌尿科(90.74%)、呼吸内科(87.58%)和肿瘤科(77.87%);前3位标本分别为尿液(73.77%)、痰液等呼吸道标本(65.63%)和引流液(63.27%)。4 262株大肠埃希菌中喹诺酮类耐药组和喹诺酮类非耐药组占比分别为66.31%和33.69%,喹诺酮类耐药组对绝大部分所测抗菌药物的耐药率和产ESBLs的检出率均高于喹诺酮类非耐药组(P<0.05)。60株试验菌株:GyrA、GyrB、ParC和ParE基因的阳性率均为100.00%;GyrA、ParC和ParE亚基突变发生率均为100.00%,GyrB亚基突变发生率为16.67%;发生最多的氨基酸取代种类是Ser83→Leu(100.00%),其次依次为Ser80→Ile(96.67%)和Asp87→Asn(91.67%);质粒介导的喹诺酮类耐药(PMQR)基因阳性率为18.33%,其中检出率由高到低分别为aac(6′)-Ib-cr基因(15.00%)、qnrS基因(6.67%)和qepA基因(3.33%)。在GyrA亚基双突变的基础上,发生ParC亚基单位点(Ser80或Glu84)突变的菌株对环丙沙星的MIC值多在32~64μg/ml范围内;发生ParC亚基双位点(Ser80和Glu84)突变的菌株对环丙沙星的MIC值多为128μg/ml。在所有发生ParE亚基Ser458→Ala突变的菌株中均检测到含有GyrA和ParC亚基突变,与无ParE亚基Ser458→Ala突变的菌株相比,含有ParE亚基Ser458→Ala突变的菌株对环丙沙星的MIC值更高。结论内蒙古包头地区为耐喹诺酮大肠埃希菌高流行地区,且耐药水平高,常呈多药耐药。编码DNA促旋酶和拓扑异构酶Ⅳ这两种药物作用靶蛋白的基因上喹诺酮类耐药决定区(QRDRs)存在多个位点突变是引起本地区大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物产生高水平耐药的主要原因。     

多药耐药肺炎克雷伯菌gyrA基因新亚型的发现

目的调查多药耐药肺炎克雷伯菌中喹诺酮类耐药相关基因的存在与变异状况。方法收集绍兴市人民医院2007年10月-2009年6月住院患者标本中分离的多药耐药肺炎克雷伯菌共20株,采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析1种染色体介导的喹诺酮类耐药相关基因(gyrA基因)和5种质粒介导的喹诺酮类耐药相关基因〔qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ⅰb、qepA基因〕。结果 gyrA基因83位密码子17株菌(85.0%)有突变,87位密码子7株菌(35.0%)有突变,各分为4种突变方式;SX007株存在同义突变的gyrA基因新亚型,SX001、002、003、006、017株同时存在有义突变和同义突变的gyrA基因新亚型;另检出aac(6′)-Ⅰb-Cr基因2株(10.0%),qnrB基因1株(5.0%),qnrS基因4株(20.0%);qnrA和qepA基因未检出。结论该组多药耐药肺炎克雷伯菌gyrA基因突变率高,这是喹诺酮类耐药的主要原因,其他耐药基因阳性率比较低。     

大肠埃希菌临床分离株aac（6′）-Ib-cr基因的检测

目的：了解温州地区大肠埃希菌临床株中质粒介导的喹诺酮类耐药基因aac（6′）-Ib-cr的分布、耐药情况。方法：收集温州医学院附属第一医院环丙沙星耐药的大肠埃希菌临床株60株，应用PCR方法检测其aac（6′）-Ib基因，琼脂稀释法检测菌株的耐药情况，DNA测序aae（6′）-Ib-cr基因变异体，用接合传递试验方法验证细菌质粒介导的耐药性的可转移性。结果：60株大肠埃希菌临床株检出10株aac（6′）-Ib，其扩增产物进行测序，结果表明4株菌在第223位（T→C或T→A）发生变异，均携带aac（6′）-Ib-cr基因；这4株菌接合传递试验成功，临床株对喹诺酮类的耐药性传递给了受体株。结论：温州地区aac（6′）-Ib-cr介导的喹诺酮类耐药的大肠埃希菌较普遍存在。     

1株携带qnrB4及aac(6')-Ⅰb-suzhou型基因同时产ESBLs、AmpC酶多药耐药大肠埃希菌的调查

目的 了解1株产ESBLs、AmpC酶大肠埃希菌的耐药机制.方法 采用纸片扩散法检测1株大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)检测6种耐药基因:qnrA、qnrB、qn rC、qnrS、qepA、aac(6 ')-Ⅰ b,并对qnrB、aac(6')-Ⅰ b基因测序后进行BLAST比对分析.结果 该菌株除对碳青霉烯类、酶抑制剂复合抗菌药物类敏感外,对其余药物均耐药;PCR发现该菌株同时携带qnrB和aac(6')-Ⅰ b,经测序并分别与已在美国国立信息中心登录的DQ303921 (qnrB4)和EF375621 [aac(6') -Ⅰ b-suzhou]型比对,同源性均＞99.0％.结论 该菌株多药耐药的机制与产ESBLs、AmpC酶及携带qnrB4和aac(6')-Ⅰ b基因有关;该研究是第一篇从1株产ESBLs、AmpC酶大肠埃希菌中检出同时携带qnrB4和aac(6')-Ⅰ b-suzhou型基因的报道.     

大肠埃希菌临床分离株aac(6'')-Ib-cr基因的检测

目的:了解温州地区大肠埃希菌I临床株中质粒介导的喹诺酮类耐药基因aac(6')-Ib-cr的分布、耐药情况.方法:收集温州医学院附属第一医院环丙沙星耐药的大肠埃希菌临床株60株,应用PCR方法检测其aac(6')-Ib基因,琼脂稀释法检测菌株的耐药情况,DNA测序aac(6')-Ib-cr基因变异体,用接合传递试验方法验证细菌质粒介导的耐药性的可转移性.结果:60株大肠埃希菌临床株检出10株aac(6')-Ib,其扩增产物进行测序,结果表明4株菌在第223位(T→C或T→A)发生变异,均携带aac(6')-Ib-cr基因;这4株菌接合传递试验成功,临床株对喹诺酮类的耐药性传递给了受体株.结论:温州地区aac(6')-Ib-cr介导的喹诺酮类耐药的大肠埃希菌较普遍存在.     

多药耐药肺炎克雷伯菌喹诺酮类耐药相关基因研究

目的 了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)喹诺酮类耐药机制.方法 对一组25株MDRKP进行了染色体介导和质粒介导的耐药相关基因进行检测和分析.结果 25株中,有19种存在gyrA基因突变(76.0%);9株存在aac(6′)-Ⅰ b-Cr(36.0%);2株存在qnrA1基因(8.0%)、2株存在qnrB基因(qnrB4-like)(8.0%)、3株存在qnrS1基因(12.0%);25株均存在mdfA基因,未检出qepA基因.结论 在MDRKP中,gyrA基因突变是喹诺酮类耐药的主要原因.     

质粒介导喹诺酮类耐药基因qnr研究进展

质粒介导喹诺酮类耐药(Plasmid-Mediated Quinolone Resistance,PMQR)基因自qnr于1998年在肺炎克雷伯菌中被发现起,目前有3种机制,分别由qnr、aac(6')Ib-cr、qepA 和oqxAB编码,介导喹诺酮靶位保护、药物修饰和药物外排.目前已有5种qnr基因被发现,分别为qnrA、qnrB、qnrS、qnrC、qnrD.     

绍兴地区肠道外气单胞菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制

目的了解浙江绍兴市人民医院肠道外分离气单胞菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药现状,及其主要耐药机制。方法对临床分离的50株肠道外气单胞菌菌株进行喹诺酮类药物敏感性测试,用PCR扩增喹诺酮类耐药基因gyrA、parC、qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6')-Ib-cr,基因序列比对分析该地区gyrA和parC基因的突变情况,分析肠道外气单胞菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药表型和耐药基因的关联性。结果绍兴地区肠道外气单胞菌对萘啶酸(NA)的耐药率已高达82.0%(41/50),对环丙沙星(CIP)和左氧氟沙星(LVX)的耐药率都在50.0%左右。27株(54.0%)菌株对两种以上喹诺酮类药物耐药。qnrS和aac(6')-Ib-cr的阳性率分别为52.0%和18.0%。qnrS基因阳性菌株对NA、CIP、LXV耐药率均显著高于阴性菌株(P<0.05);aac(6′)-Ib-cr基因阳性菌株对CIP和LVX的耐药率显著高于阴性菌株(P<0.05),但对萘啶酸耐药性无明显差异。未检测出qnrA、qnrB和qepA基因。gyrA中主要存在Ser83→Ile,parC中主要存在Ser80→Ile变异。结论绍兴地区分离的肠道外气单胞菌对喹诺酮类药物表现高耐药性,染色体介导的靶位基因突变为其主要耐药机制,目前突变较单一。     

铜绿假单胞菌耐药性及质粒介导的耐环丙沙星分子机制研究

目的 研究临床分离铜绿假单胞菌的耐药性和质粒介导铜绿假单胞菌对环丙沙星耐药的分子机制.方法 采用VITEK-2型全自动微生物检测系统鉴定细菌,用K-B法测定铜绿假单胞菌对24种常用抗菌药物的药敏率,用聚合酶链反应检测喹诺酮类耐药基因,包括qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA和aac (6') -Ib-cr.结果 423株铜绿假单胞菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均为23.2％,对第一、三代头孢菌素类药物的耐药率＞49.2％(除头孢他啶为22.7％),对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星的耐药率分别为17.5％、17.5％和13.0％,对青霉素类药物的耐药率＞40.4％(除哌拉西林为26.2％),对含β-内酰胺酶抑制剂复合物的耐药率差异较大,哌拉西林/他唑巴坦为17.0％,而氨苄西林/舒巴坦为98.6％;对碳青霉烯类药物亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为24.6％和26.0％;127株耐环丙沙星铜绿假单胞菌的耐药性明显升高,对左氧氟沙星的耐药率为86.6％,对第三代头孢菌素的耐药率上升至＞61.4％,对第四代头孢菌素头孢吡肟的耐药率由20.3％上升至62.2％,对含p内酰胺酶抑制剂复合物的耐药率从17.0％上升至＞49.6％,对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素的耐药率上升至＞64.6％,对阿米卡星的耐药率由13.0％上升至48.8％;耐环丙沙星铜绿假单胞菌中未检出qnrS基因和qnrC基因,qnrA、qnrB、qnrD、qepA和aac( 6')-Ib-cr的阳性率分别为31.2％、87.5％、15.6％、10.9％、39.1％.结论 临床分离的耐环丙沙星铜绿假单胞菌携带qnrA、qnrB、qnrD、qepA和aac(6')-Ib-cr基因,未检出qnrS、qnrC基因;qnr、qepA和aac (6') -Ib-cr基因是质粒介导的铜绿假单胞菌耐环丙沙星的主要机制.