丙氨酸溶液作为A-0血型转变酶解缓冲液的研究

本研究旨在探讨丙氨酸缓冲液对α-N-乙酰半乳糖胺酶发挥高效酶解A抗原活性的影响。用Westernblot检测α-N-乙酰半乳糖胺酶在丙氨酸等不同缓冲液中与红细胞的结合能力。结果表明，丙氨酸溶液也可以作为A-O血型转变的酶解缓冲液，α-N-乙酰半乳糖胺酶在丙氨酸溶液中酶解A型红细胞所用剂量与在甘氨酸溶液中的相当；Westernblot证实，在丙氨酸溶液中α-N-乙酰半乳糖胺酶与红细胞结合能力与在甘氨酸中相似，这也进一步证明α-N-乙酰半乳糖胺酶与红细胞的结合是α-N-乙酰半乳糖胺酶发挥酶解A抗原的活性所必需的。结论：丙氨酸溶液可以作为A—O血型转变的酶解缓冲液，在这-缓冲液中α-N-乙酰半乳糖胺酶与红细胞紧密结合，可以发挥高效的酶解A抗原的活性。     

MPT-NAG测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的应用价值

目的 应用新型底物6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)建立检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的紫外动力学新方法,用于尿液中NAG活性测定.方法 基于NAG催化水解对硝基苯-N-乙酶-β-D-氨基葡萄糖苷生成有色的对硝基酚这一反应,对缓冲液离子强度、pH值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究.用该法测定了多种病尿样中NAG活活性.结果 该法最低检出限为1.5 U/L,线性范围可达250 U/L(r=0.998 9),批内CV为＜3%,批间CV＜5%,回收率为101.3%.结论 本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,且操作简便快速,适用于全自动生物化学分析仪操作.     

以2-甲氧基-4-(2'-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为底物测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性

目的 评价以2-甲氧基-4-(2'-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MNP-NAG)为底物的全液体试剂两点终点法测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性.方法 尿样中NAG作用于底物MNP-NAG水解产生游离MNP,其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果 该法显色最大吸收波长为505 nm,试剂1和试剂2最适pH值分别为4.6和10.2,最适底物浓度为16 mmol/L,线性范围达198 U/L,批内变异系数(CV)和批间CV分别为2.2%和3.8%.166例健康体检者尿样NAG活性参考范围为:(6.21±4.53)U/gCr((x)±1.96 s).结论 MNP-NAG底物法测定尿NAG灵敏度高,操作简便,结果可靠,适合临床应用.     

尿NAG测定使用MNP-NAG为底物的全液体试剂评估

目的评价一种以2-甲氧基-4-(2′-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MNP-NAG)为基质的全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性。方法在pH4、6条件下以连续监测法测定尿液NAG并作方法学评价。结果该试剂线性范围198U/L,平均回收率为101.8%,批内变异系数和批间变异系数分别为2.2%和3.8%。CNP-NAG和MNP-NAG基质法有良好的相关性,166例健康体检者尿样NAG活性参考范围为1.59~10.83U/gCr(x±2s)。结论液体MNP-NAG基质液测定尿NAG灵敏度高、操作简便、结果可靠,适合临床应用。     

急性淋巴细胞白血病的细胞化学——酸性水解酶

急性淋巴细胞白血病(ALL)的细胞化学标记研究最近十年进展较快,多数研究集中于五种酸性水解酶:酸性磷酸酶(AP)、酸性酯酶ANAE、β-葡糖苷酸酶(BG)、N-乙酰-β-氨基葡糖苷酶(NABG)和二肽基氨基肽酶Ⅳ(DAPⅣ)。其中AP和ANAE研究最多、应用最广泛,这类酶在ALL白血病细胞中有不同的式样和分布特征,与免疫学表型相互补充,在ALL亚型的鉴别、病理生理研究、预后推测和治疗中有重要作用。一、ALL白血病细胞酸性水解酶的证实目前用光镜水平证实酸性水解酶的方法多用偶氮染料同时偶联技术,在取代或不取代     

重症监护病房中多重耐药鲍曼不动杆菌耐药基因型及同源性分析

目的分析22株重症监护病房(ICU)中多重耐药鲍曼不动杆菌耐药表型,耐药基因型及基因同源性。方法菌株鉴定采用Vitek-32细菌鉴定仪,药物敏感试验采用K-B法。三维试验检测ESBLs和AmpC酶,协同试验检测金属酶(MBL)。PCR检测各类β-内酰胺酶类、氨基糖苷类抗菌药耐药基因及喹诺酮类相关gyrA基因。脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行基因同源性分析。结果 (1)对亚胺培南耐药率最低为4.5%,头孢哌酮/舒巴坦耐药率较低为22.7%,对其他所测抗菌药耐药率均大于90%。(2)产AmpC酶21株占95.5%;产ESBLs和MBL各5株,分别占22.7%。(3)100%携带AmpC酶基因、TEM-1型广谱β-内酰胺酶基因、aacA4氨基糖苷乙酰转移酶基因;aacC1、aadA1型氨基糖苷乙酰转移酶基因各占95.5%;有gyrA型DNA旋转酶基因突变;各1株检测到OXA-23型碳青霉烯酶基因、PER型ESBLs基因和aphA1型氨基糖苷乙酰转移酶基因,分别占4.5%;未检测到SHV型β-内酰胺酶基因、VEB型ESBL基因I、MP型和VIM型金属酶基因、OXA-24型碳青霉烯酶基因。(4)PFGE结果显示20株出现完全相同条带,具有高度同源性,另2株各自为独立株。结论 22株多重耐药鲍曼不动杆菌中存在一个克隆流行株,携带AmpC酶基因、TEM-1型β-内酰胺酶基因及aacA4、aacC1、aadA1型氨基糖苷类修饰酶基因,高产AmpC酶,治疗应首选亚胺培南。     

尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶自动化测定

目的建立用对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷自动化测定尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的方法。方法采用两点终点法,无需做尿样空白,用自动生化分析仪直接测定。结果线性范围0～90U/L,精密度批内CV2.3%,批间CV2.8%,与手工终点法比较,Y(本法)=0.7831X(手工法) 0.5238,r=0.9719。结论该法简便,试剂稳定,适用于尿液NAG活力的自动分析。     

阶段洗脱法分离血清β—N—乙酰氨基己糖苷酶同工酶

本文探讨了血清β-N-乙酰氨基己糖苷酶同工酶在DEAE纤维素柱层析中的洗脱特性,在研究了洗脱图谱的基础上,建立了阶段洗脱法来分离此同工酶,并对其可靠性作了一些研究。     

尿NAG及其同工酶检测方法进展

NAG(N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、EC3.2.1.30)是一种溶酶体水解酶,与糖蛋白代谢有关。在全身各组织中尤以肾脏含量丰富。肾脏定位研究表明近曲小管NAG含量最高。大量研究表明,尿中NAG 来源于肾,因此通过测定尿中NAG 总活性,分析其同工酶变化特征可反映肾脏的病理变化。尿NAG 及其同工酶检测作为一种新的敏感性高的非侵入性肾功能试验已较为广泛地应用于原发性肾疾病的早期发现、接触重金属工业工人肾损害的过筛、高血压、糖尿病肾损害的早期诊断及肾移植排斥的预测以及     

醋酸纤维素薄膜电泳分离β-N-乙酰氨基己糖苷酶同工酶

本文探讨了醋酸纤维素薄膜电泳分离β-N-乙酰氨基己糖苷酶同工酶的方法.用pH6.2的0.02mol/L 柠檬酸-磷酸盐缓冲液作为电泳缓冲液,可使β-NAHA 与β-NAHB 得到较好的分离.结果表明此法对肝病的诊断具有一定的意义.     

全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶:PNP-NAG连续检测法

目的评价一种以PNP-NAG为基质的全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性.方法尿样中NAG作用于底物PNP-NAG水解游离PNP(对硝基酚),其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果该方法线性范围达200U/L,平均回收率为99.5%,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为2.7%和4.3%.与CNP-NAG基质法有良好的相关性,线性回归方程和相关系数分别为Y=1.004X-0.084,r=0.9972.103例健康体检者尿样NAG活性参考范围为:1.33～11.17U/gCr(x+2s).结论全液体稳定试剂(PNP-NAG基质法)测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶具有操作简单、快速灵敏,结果可靠的优点,适合临床应用.     

全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶：PNP-NAG连续检测法

目的评价一种以PNP-NAG为基质的全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性.方法尿样中NAG作用于底物PNP-NAG水解游离PNP(对硝基酚),其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果该方法线性范围达200U/L,平均回收率为99.5%,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为2.7%和4.3%.与CNP-NAG基质法有良好的相关性,线性回归方程和相关系数分别为Y=1.004X-0.084,r=0.9972.103例健康体检者尿样NAG活性参考范围为1.33～11.17U/gCr(x+2s).结论全液体稳定试剂(PNP-NAG基质法)测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶具有操作简单、快速灵敏,结果可靠的优点,适合临床应用.     

尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶自动化测定

目的建立用对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷自动化测定尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的方法.方法采用两点终点法,无需做尿样空白,用自动生化分析仪直接测定.结果线性范围0～90U/L,精密度批内CV2.3%,批间CV2.8%,与手工终点法比较,Y(本法)=0.7831X(手工法)+0.5238,r=0.9719.结论该法简便,试剂稳定,适用于尿液NAG活力的自动分析.     

肾胺酶减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的:探讨肾胺酶对高糖诱导的足细胞损伤的减轻作用及可能机制。方法:利用体外培养的小鼠足细胞,分为对照组(5 mmol/L D-葡萄糖)、甘露醇组(5 mmol/L D-葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)与肾胺酶处理组(重组肾胺酶蛋白60μg/mL预处理6 h+30 mmol/L D-葡萄糖)。48 h后收集细胞,实时定量PCR法测定Ⅳ型胶原α、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)及单核细胞趋化因子1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)的mRNA表达水平;酶联免疫吸附试验测定Ⅳ型胶原α、TGF-β1、MCP-1蛋白表达水平、凋亡相关蛋白caspase-3活性和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1(cyclin-dependent kinase inhibitor 1,p21)活性。结果:与对照组相比,高糖组足细胞Ⅳ型胶原α、TGF-β1、及MCP-1表达水平显著增高,caspase-3活性增加并伴有p21活性增加(P0.05);与高糖组相比,肾胺酶处理组足细胞Ⅳ型胶原α、TGF-β1、和MCP-1表达水平下调,caspase-3活性和p21活性下调(P0.05)。结论:肾胺酶可减轻高糖诱导的足细胞损伤,可能与其抗炎、抗纤维化、抗凋亡和降低p21的活性有关。     

尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶水平测定在慢性肾小球肾炎诊断中的价值评估

目的 研究尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定在慢性肾小球肾炎(慢性肾炎)诊断中的价值.方法 研究对象共53例,其中病例组慢性肾炎24例,健康对照组29例.采用6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)法分析受试者尿NAG水平,采用免疫透射比浊法分析受试者尿微量清蛋白(UmAlb)含量,采用谷氨酸脱氢酶法检测血清尿素氦(SBUN)浓度;采用肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐(SCr)和尿肌酐(UCr)含量.结果 独立样本t检验结果表明,在病例组和健康对照组之间,NAG和UmAlb水平差异有统计学意义(P＜0.05),SBUN和SCr水平差异无统计学意义(P＞0.05);双变量相关分析显示,NAG与SBUN、SCr、UmAlb的相关系数分别为0.367、0.450和0.824;诊断效果评价表明,NAG、SBUN、SCr和UmAlb水平在ROC曲线下的面积分别为0.728、0.432、0.628和0.888.结论 在实验室建立可靠参考区间的前提下,尿NAG测定可应用于慢性肾炎患者早期肾功能损害的评估.     

血清α-葡萄糖苷酶和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶同工酶的测定

α-葡萄糖苷酶和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)是糖蛋白、糖脂等物质降解过程中的水解酶,二者均存在同工酶。作者用荧光物质4-甲基伞形酮作底物,采用不同的试验条件,在正常人新鲜血清中检测到以下同工酶:酸性α-葡萄糖苷酶、肾型α-葡萄糖苷酶、NAG-A、NAG-B。前两种同工酶分别使用不同pH 的缓冲液,NAG-A 和NAG-B的检测是根据它们对热稳定性的不同,将血清与pH4.4缓冲液按比例混合,在55℃中加热15分钟可使NAG-A 失活,再测定NAG 的活性,基本等于NAG-B。NAG-A 活性为NAG 总活性与NAG-B 活性之差。这种枪验方法简便易行,优于过去使用的ED-     

刀豆素A(ConA)结合蛋白的简易测定技术

ConA 可与α-D-吡喃葡糖(α-D-Gluco-pyranose)、α-D-,比喃甘露糖(α-D-manno-pyranose)、α和β-D-呋喃果糖(α-and β-D-fructofuranose)及α-和β-D-呋喃阿拉伯糖     

胸腺细胞和T淋巴细胞的细胞化学研究

作者研究了胎儿及初生儿胸腺细胞(4例及6例)和正常献血员末梢血T淋巴细胞(10例)中酸性磷酸酶(ACP)、β-葡糖苷酸酶(BG)、α-萘酚醋酸酯酶(ANAE)、N-乙酰-β-氨基葡糖苷酶(NABG)、α-萘酚酯酶(NAE)和α-萘酚丁酸酯酶(NBE)等六种酶的变化,并用含酶阳性百分率表示。用六偶氮对品红方法(pH5.8)测ACP、ANAE、BG和NABG;而NBE和NAE是用重氮盐     

以2-甲氧基-4-（2′-硝基乙烯基）酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为底物测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性

目的 评价以2-甲氧基-4-（2′-硝基乙烯基）酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（MNP-NAG）为底物的全液体试剂两点终点法测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性.方法 尿样中NAG作用于底物MNP-NAG水解产生游离MNP,其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果 该法显色最大吸收波长为505 nm,试剂1和试剂2最适pH值分别为4.6和10.2,最适底物浓度为16 mmol/L,线性范围达198 U/L,批内变异系数（CV）和批间CV分别为2.2%和3.8%.166例健康体检者尿样NAG活性参考范围为：（6.21±4.53）U/gCr（-↑x±1.96 s）.结论 MNP-NAG底物法测定尿NAG灵敏度高,操作简便,结果可靠,适合临床应用.     

新生儿窒息时尿NAG活性变化观察

新生儿窒息是儿科常见的急危重症之一,可影响机体的各个系统和器官,尤其以脑、心脏、肾脏受损明显,是发生急性肾衰竭的重要原因之一[1].尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)是一种细胞溶酶体水解酶,尿中NAG的含量随着肾小管上皮细胞的损伤而增加,故对新生儿窒息时NAG的变化进行了观察.现报告如下.