不同冻存时间与温度对兔骨髓基质干细胞存活率的影响

目的：以二甲基亚砜作为保护剂，采用慢冻快融法观察不同温度及不同时间冻存的免骨髓基质干细胞复苏后存活率的变化。 方法：实验于2003-09／2005—06在浙江省医学科学院生物工程所完成。①选取清洁级3月龄新西兰大白兔5只，抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液，密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化出兔骨髓基质干细胞，并进行增殖。②取第3代骨髓基质干细胞，经消化后离心重悬，用完全培养液调整细胞浓度为6&;#215;10^9L^-1。将质量浓度为250g／L的二甲基亚砜缓慢滴入同体积含骨髓基质干细胞的上述培养液中，混匀，二甲基亚砜的终浓度为125g／L，骨髓基质干细胞的终密度为3&;#215;10^9 L^-1，1mL／安瓿冻存。③4℃冻存直接将安瓿置4℃冰箱中；-20℃及-60℃冻存，则将安瓿置于有脱脂棉的聚丙烯泡沫盒中，壁厚1．5cm，扎紧密封，各置-20℃及-60℃冰箱过夜，取出后分别直接放于-20℃及—60℃冰箱保存；-196℃液氮冻存，则将置有安瓿的泡沫盒于-60℃冰箱过夜后，取出冻存安瓿直接放于液氮中保存。骨髓基质干细胞分别于4℃、-20℃、-60℃、-196℃条件下进行3d，10d，1，3，8个月以及1年的冻存。④经不同温度及不同时间冻存后，给予复苏。复苏时将冻存安瓿从液氮或冰箱中取出，立即置37℃水浴并轻轻摇动，约1min迅速解冻。含骨髓基质干细胞的冻存液经5倍于冻存液量的完全培养液稀释后，离心重悬，进行骨髓基质干细胞存活率测定。复苏后的骨髓基质干细胞以1&;#215;10^4／cm^2用完全培养液再培养，观察骨髓基质干细胞的形态变化及生长活性情况。结果：实验选取3月龄新西兰大白兔5只，全部进入结果分析。①兔骨髓基质干细胞原代培养情况：培养3d时，骨髓基质干细胞数量较少，散在分布，呈短梭形形态。培养1周时细胞形成大量的小集落，细胞变长。此后集落细胞迅速增多，逐渐汇合成片，形态为均一的长梭形，呈旋涡状排列，2周时细胞长成单层。②兔骨髓基质干细胞传代培养情况：刚传代的骨髓基质干细胞呈圆形，数小时后迅速贴壁，重新成为梭形。之后细胞呈长梭形均匀分布生长，形态比原代培养更均一，细胞生长旺盛、增殖迅速。连续传代22代无明显变化。但随传代次数增多，细胞形态出现多样性，逐渐呈老化现象。③不同温度不同冻存时间下复苏后的兔骨髓基质干细胞存活率的比较：兔骨髓基质干细胞液氮保存1年，存活率为79％；-60℃保存1，3，8个月的存活率分别为67％，38％和0％；不宜于4℃及-20℃保存。（少复苏后的骨髓基质干细胞再培养情况：复苏后的骨髓基质干细胞细胞形态及生长状况与冻存前无明显差异，呈长梭形生长，增殖旺盛。 结论：分离纯化的兔骨髓基质干细胞生长增殖能力强，短期保存可用-60℃冻存，长期需液氮保存，为择期进行骨髓基质干细胞实验和应用提供实验依据。     

兔骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)在体外分化成神经细胞的方法。方法：抽取兔骨髓，淋巴细胞分离液密度梯度分离单个核细胞，体外培养传代，第3代时加入二甲基亚砜(DMSO)，观察MSCs分化为神经细胞的形态学变化。结果：MSCs在体外可以扩增，在DMSO诱导下向神经样细胞分化，行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体免疫反应染色。阳性率约为NSE 60％，GFAP 5％。实验活细胞率为70％～90％。结论：MSCs在DMSO存在下能够分化为神经细胞。     

兔骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的研究

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)在体外分化成神经细胞的方法。方法:抽取兔骨髓,淋巴细胞分离液密度梯度分离单个核细胞,体外培养传代,第3代时加入二甲基亚砜(DMSO),观察MSCs分化为神经细胞的形态学变化。结果:MSCs在体外可以扩增,在DMSO诱导下向神经样细胞分化,行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体免疫反应染色,阳性率约为NSE60%,GFAP5%。实验活细胞率为70%～90%。结论:MSCs在DMSO存在下能够分化为神经细胞。     

骨髓基质细胞微环境诱导神经干细胞的分化

学术背景：骨髓基质细胞能够表达多种细胞表面分子及分泌多种细胞生长因子，其共同组成的微环境可以调节造血干细胞的分化和发育。造血干细胞和神经干细胞可表达很多共同基因．提示二者存在类似的发育和分化机制。 目的：深入认识骨髓基质细胞提供的微环境对神经干细胞的诱导分化作用。 检索策略：由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库1992—01／2007—03的相关文献，检索词“bone marrow stem cells，microenvironment，neuml stem cells，differentiation”，并限定文章语言种类为English。同时计算机检索CHKD期刊全文数据库1994—01／2006—12的相关文献，检索词“骨髓基质细胞，神经干细胞，分化”，并限定文章语言种类为中文。共检索到125篇文献，对资料进行初审，纳入标准：①文章所述内容应与骨髓基质细胞密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准：①重复性研究。②Meta分析。 文献评价：文献来源主要是通过对骨髓基质细胞所提供的微环境诱导神经干细胞分化方面的内容进行汇总分析。所选用的31篇文献中，7篇为综述，其余均为临床或基础实验研究。 资料综合：①骨髓基质细胞易于分离培养，其分泌的各种细胞因子、生长因子和细胞外基质成分所构成的微环境能够调节神经干细胞的发育和分化。②从mRNA水平看，骨髓基质细胞不仅有脑源性神经生长因子和神经生长因子的表达，还有胶质细胞源性神经营养因子的表达。从蛋白水平看，采用ELISA法在骨髓基质细胞的培养液和细胞蛋白中均可检测到胶质细胞源性神经营养因子。在生理状态下，骨髓基质细胞能分泌具有神经营养活性的物质，对损伤的运动神经元具有保护作用。此外研究证实骨髓基质细胞分泌至细胞外的可溶性物质具有直接调节神经干细胞分化的能力。 结论：骨髓基质细胞通过分泌各种细胞因子所构成的微环境能够调节神经干细胞的发育，并诱导其向神经元方向分化。神经干细胞增殖分化的调控是非常复杂的过程，各因子间可能存在协同或拮抗作用，具体作用机制以及细胞信号转导通路还需深入研究。     

兔骨髓基质细胞体外培养、诱导及分化成神经干细胞的实验研究

目的研究新西兰大白兔骨髓基质细胞体外培养及诱导分化情况. 方法梯度密度离心法分离新西兰大白兔骨髓基质细胞( BMSCs),于体外用神经干细胞培养基和多种细胞因子进行培养、诱导、分化,细胞免疫化学方法进行鉴定. 结果新西兰大白兔骨髓基质细胞能在体外培养中增殖、分化,具有克隆能力的骨髓基质细胞能表达干细胞特异性抗原神经巢蛋白 (Nestin),这些细胞最终能分化出类神经元样细胞,免疫细胞化学检测可见有神经核蛋白抗体( NeuN)的表达. 结论新西兰大白兔骨髓基质细胞是具多向分化潜能的细胞,具有较强的增殖、自我更新能力.在适宜的条件下,可以分化成能表达神经系细胞特异性抗原的细胞.骨髓基质细胞来源方便、取材较容易,体外培养和扩增的技术条件简便,具有向神经系细胞分化的潜能,可以考虑作为细胞移植治疗的种子细胞.     

外环境对骨髓间充质干细胞分化成心肌样细胞的影响

目的:研究外环境对骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)定向分化成心肌样细胞的影响。方法:取SD大鼠骨髓,通过贴壁法进行MSCs培养,经过多次传代后获得较纯的MSCs。用5-氮胞苷进行诱导分化,显微镜下观察其形态变化,通过RT-PCR鉴定心肌特异基因心房利尿肽和脑钠肽表达。实验分Ⅰ组为在玻片上的5-氮胞苷干预的MSCs移入到心肌细胞培养环境中;Ⅱ组为5-氮胞苷干预的MSCs;Ⅲ组为玻片上未用5-氮胞苷干预的MSCs移入到心肌细胞培养环境中;Ⅳ组为未用5-氮胞苷干预的MSCs。显微镜下观察4组形态变化,并通过免疫组化鉴别结蛋白和心肌肌钙蛋白I(cardiactroponinI,cTnI)表达及其出现时间的早晚。结果:RT-PCR显示诱导6周后有心房利钠肽,脑钠肽的表达。Ⅱ组MSCs诱导后10d可见细胞由原来扁平多角形变成长梭状,15d后部分细胞胞体明显增粗,可见到有些细胞间有融合样情况发生,20d左右类似肌管样细胞出现;而Ⅰ组在17d左右可以看到类似肌管样细胞;Ⅲ,Ⅳ组未见上述形态改变。免疫组化表明Ⅲ,Ⅳ组未见阳性细胞出现;Ⅰ,Ⅱ组可见阳性结果,且Ⅰ组阳性结果出现的比Ⅱ组更早。结论:MSCs在体外的化学诱导物条件下可以诱导分化成心肌样细胞,心肌细胞培养环境对其定向分化成心肌样细胞有促进作用。     

自体骨髓基质干细胞修复兔桡骨骨缺损的可行性

背景迄今为止临床上对较大范围骨缺损的修复仍未得到有效的解决.目的探讨自体骨髓基质干细胞修复兔桡骨远端骨缺损的可行性.设计以实验动物为研究对象,自身对照设计的探索性研究.单位一所医科大学医院骨科.对象实验于2002-10/2003-04在福建省医科所实验动物中心完成.健康新西兰大白兔12只,雌雄各半,体质量3.1～3.4 kg.方法取兔髂骨骨髓,体外分离培养扩增骨髓基质干细胞,与生物材料混合后植入体内修复兔桡骨远端骨缺损,应用X射线片、大体标本、组织切片观察修复效果.主要观察指标主要结局①大体标本及X射线片.②组织学观察.次要结局骨髓基质干细胞分离与培养.结果移植后12周,X射线片显示高密度新骨形成,大体标本上见白色皮质骨充满骨缺损处,组织切片显示骨缺损修复处骨小梁丰富,骨髓腔形成.结论自体骨髓基质干细胞移植是修复兔桡骨远端骨缺损的理想方法.     

不同浓度二甲基亚砜对兔软骨细胞生长的影响

目的探讨作为一些水相难溶性化合物助溶剂的二甲基亚砜(DMSO)在不同浓度下对体外培养兔软骨细胞的存活率及生长的影响。方法分别以含0.1%、0.5%、1.0%、2.0%(v/v)DMSO的培养基体外培养兔软骨细胞,每天定时取样,用MTT法检测不同浓度DMSO存在下的细胞存活率,并用血球计数板计量细胞数。结果不同浓度DMSO对体外培养的兔软骨细胞生长有一定的影响,使用浓度为2.0%(v/v)时对软骨细胞显现较强的抑制作用,但在0.1%¹.0%浓度范围内影响很小。结论在0.1%1.0%浓度范围内影响很小。结论在0.1%¹.0%低浓度范围内,DMSO促溶剂的使用对培养软骨细胞实验的干扰不大,可以忽略。     

骨髓间质干细胞与心肌细胞移植

对冠心病心力衰竭患者而言心肌细胞移植、血管生成和基因治疗是提高心功能新的治疗措施。骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)是多能干细胞,易于培养,增殖扩增能力强,易于基因转染,具有多向分化能力,在体内、外诱导能分化为心肌细胞,将其作为细胞移植的种子细胞应用于心肌组织工程已成为研究热点。MSCs心肌细胞移植的动物实验研究与临床研究已有长足的进展。应用MSCs移植治疗心肌梗死被证明是有效和安全的,是提高心功能新的治疗措施。对于MSCs的表面特征标志、分化机制及提高心脏功能的机制、移植细胞的长期存活、转归及远期疗效等尚需进一步的研究。     

兔骨髓间充质干细胞体外分离培养及冻存研究

目的:寻求体外培养、冻存、复苏兔骨髓间充质干细胞(mensechymalstemcells,MSCs)的方法,为兔MSCs进一步的实验研究打下基础。方法:取新西兰白兔胫骨穿刺获取骨髓液,以贴壁筛选法分离、纯化、培养和扩增获得MSCs,并行液氮冻存,通过倒置显微镜观察其生物学表现。结果:MSCs为贴壁生长,形态为均匀成纤维细胞样,增殖能力强,传代及冻存后细胞仍然保持其生物学特性。结论:MSCs可采取贴壁筛选法进行较好的纯化和扩增,并可长期保存于液氮中,在一定的条件下可复苏存活。     

碘对骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞存活时间的影响

背景:体外实验中人们发现,常规化学诱导剂诱导骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞存活时间较短,这就限制了其进一步的应用.关于碘是否可以延长诱导的神经元样细胞的存活时间尚未见系统报道.目的:观察微量兀索碘对由骨髓间充质干细胞分化成的神经元样细胞存活时间的影响.方法:无菌条件下取大鼠第3代间充质干细胞,分为A～F组:A组不加碘离子,B～F组中分别加入质量浓度为2,55,90,125和2 500 mg/L的碘离子,另设空白对照组,同时加化学诱导剂二甲基亚砜向神经元方向诱导分化.对诱导后的细胞进行免疫组织化学检测,观察诱导的神经元样细胞在不同质量浓度碘离子下的存活时间.结果与结论:加入的碘离子质量浓度在55～125 mg/L时,细胞存活时间可达到5 d,镜下细胞结构完整,5 d后随培养时间的延长,死亡细胞逐渐增多,至1周左右,神经元样细胞几乎全部死亡.碘离子质量浓度为2 mg/L和2 500 mg/L时,细胞存活时间为12～36 h,和未加碘离子组差异无显著性意义,至两三天,神经元样细胞几乎全部死亡.提示适当浓度的碘离子加入到常规化学诱导剂中,可延长骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞的存活时间;加入到化学诱导剂中的碘离子质量浓度过低或过高时,不改变骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞的存活时间.     

储运条件对脐带间充质干细胞存活率的影响

背景：国内外尚无对脐带间充质干细胞运输过程中相关活力指标的全面评估。目的：检测白蛋白和储运时间等不同条件对脐带间充质干细胞存活率的影响。方法：体外培养的脐带间充质干细胞分为实验组和对照组,每组将3．15×10^9L-1细胞悬浮在3mL生理盐水中。其中实验组加入1％白蛋白并避光保存,对照组分为不加白蛋白避光保存组和加白蛋白光照保存组,在0,2,4,8和24h分别测定各组细胞数、锥虫蓝拒染率和细胞存活率。结果与结论：与对照组相比,实验组（保存液中加白蛋白且避光）的8h细胞损失率几乎为零,细胞存活率接近90％。对照中不加白蛋白组8h细胞损失率高达38．5％,细胞存活率为86％。在脐带间充质干细胞的长途运输中,加入1％白蛋白可以有效保证细胞存活量。运输时间超出8h后,细胞损失率上升且存活率下调。实验数据表明,16℃、避光和1％白蛋白生理盐水的保存条件下,脐带间充质干细胞在8h内符合临床输注要求。     

氯化镉对小鼠骨髓间充质干细胞微核率和染色体畸变率的影响

背景：氯化镉对骨髓间充质干细胞遗传方面影响的研究暂无报道。目的：观察化学毒性物质氯化镉对骨髓间充质干细胞微核率和染色体畸变率的影响。方法：贴壁培养小鼠骨髓间充质干细胞细胞株,显微镜下观察空白对照组及氯化镉诱导组骨髓间充质干细胞的形态学变化,微核实验检测两组微核率,染色体分析检测两组染色体畸变率。结果与结论：显微镜下观察,空白对照组细胞呈成纤维细胞样贴壁生长,胞体透亮,折光性强;氯化镉诱导组细胞呈凸起回缩,细胞变小、变圆,贴壁不牢,悬浮细胞增多。与空白对照组比较,氯化镉诱导组骨髓间充质干细胞微核发生率和染色体畸变率均显著增加（P〈0.05）。提示氯化镉可引起小鼠骨髓间充质干细胞遗传物质的损伤。     

不同诱导条件对体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响

目的:已证实骨髓间充质干细胞体内移植能改善心脏功能,但其机制尚不清楚。观察不同诱导条件对骨髓间充质干细胞体外分化为心肌样细胞的影响。方法:实验于2005-05/2006-04在南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所完成。①实验材料:健康供体骨髓(自愿捐赠),孕16周水囊引产胎儿(胎儿家属同意捐赠)。②实验方法:取健康供体骨髓,采用淋巴细胞分离液并结合骨髓间充质干细胞贴壁特性分离细胞。取第4代骨髓间充质干细胞进行诱导实验,分为生物诱导组和化学诱导组。生物诱导组分别采用胚胎心肌细胞与骨髓间充质干细胞直接混合培养、胚胎心肌细胞与骨髓间充质干细胞间接混合培养及胚胎心肌细胞匀浆液诱导培养,化学诱导组用5,10,15μmol/L5-aza分别处理12,24,48h进行诱导。③实验评估:采用免疫细胞荧光染色法检测胞浆中的肌节肌动蛋白。结果:①骨髓间充质干细胞只有在其与胚胎心肌细胞直接混合培养时,才能分化为心肌样细胞,而在其他生物诱导模型下却未见其分化为心肌样细胞。②化学诱导组骨髓间充质干细胞经免疫细胞荧光染色鉴定后,均未见胞浆中有肌节肌动蛋白表达,证实经5-aza诱导处理后,未见骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞。结论:①胚胎心肌细胞可诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞,机械因素是促进骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞必不可少的因素之一。②骨髓间充质干细胞经5-aza诱导是否分化为心肌样细胞未能获得证实。     

富血小板血浆对免骨髓间充质干细胞增殖的作用

背景:自体富血小板血浆含有多种生长因子,可以克服外源性生长因子成分单一、来源有限、价格昂贵且存在一定的免疫排斥反应等不足.目的:观察富血小板血浆对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响.设计、时间及地点:区组设计,开放实验,于2004-0912005-02在同济医学院医学实验公共实验室完成.材料:2月龄新西兰大耳白兔.方法:采用密度梯度离心结合贴壁筛选及传代方法提取、纯化骨髓间充质干细胞,取较纯和生长状态较好的第3代细胞.采用二次离心法提取兔富血小板血浆.在完全培养基加入体积分数为0.2,0.1.0.05富血小板血浆培养骨髓间充质干细胞,以未加入富血小板血浆的完全培养基为对照.主要观察指标:①骨髓间充质干细胞生长曲线.②以MTT比色法观察骨髓间充质干细胞的存活和增殖能力.结果:①加入富血小板血浆干预第2天,骨髓间充质干细胞出现较高的增殖活性,呈快速生长,曲线上升幅度大,细胞倍增时间最短,约30 h.以体积分数为0.2富血小板血浆组明显.对照组细胞从第3天起呈快速生长,细胞倍增时间最长,约46 h.②富血小板血浆体外培养骨髓间充质干细胞时间越长作用越明显,在培养第3天细胞牛长的剂量依赖不明显,培养第6天后较高剂量的富血小板血浆对细胞的增殖作用显著增强,与对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:富血小板血浆能明显促进体外培养骨髓间充质干细胞增殖,并使细胞产生剂量依赖性.     

激素对兔骨髓间充质干细胞神经递质表达的影响

背景：激素性股骨头坏死的确切发病机制仍未清楚,研究发现神经系统可通过多种途径调控骨髓间充质干细胞的分化,激素可能通过影响其调控机制而引起骨坏死。目的：观察在激素作用下,骨髓间充质干细胞中神经递质或其受体mRNA表达的变化。方法：密度梯度离心和贴壁培养获得兔骨髓间充质干细胞。将传代培养的第3代细胞随机分为两组,实验组加入浓度为10-7mol/L的地塞米松,对照组正常培养。分别于诱导后第4,7,11,15天,测定细胞中神经生长因子、成纤维细胞生长因子、降钙素相关基因肽受体、血管活性肠肽受体、P物质受体及过氧化物酶体增殖子活化受体γ的mRNA表达。结果与结论：实验组神经生长因子、成纤维细胞生长因子、降钙素相关基因肽受体、血管活性肠肽受体和P物质受体的mRNA表达较对照组明显降低,而过氧化物酶体增殖子活化受体γmRNA表达较对照组明显增高,差异均具有显著性意义（P〈0.01）,实验组各因子在不同时间点间进行比较却无明显差异（P〉0.05）。结果表明大剂量激素可使骨髓间充质干细胞中具有成骨或成血管作用的神经递质或其受体表达下降,这可能与激素性股骨头坏死发生的机制有关。     

激素对兔骨髓间充质干细胞神经递质表达的影响

背景:激素性股骨头坏死的确切发病机制仍未清楚,研究发现神经系统可通过多种途径调控骨髓间充质干细胞的分化,激素可能通过影响其调控机制而引起骨坏死。目的:观察在激素作用下,骨髓间充质干细胞中神经递质或其受体mRNA表达的变化。方法:密度梯度离心和贴壁培养获得兔骨髓间充质干细胞。将传代培养的第3代细胞随机分为两组,实验组加入浓度为10-7mol/L的地塞米松,对照组正常培养。分别于诱导后第4,7,11,15天,测定细胞中神经生长因子、成纤维细胞生长因子、降钙素相关基因肽受体、血管活性肠肽受体、P物质受体及过氧化物酶体增殖子活化受体γ的mRNA表达。结果与结论:实验组神经生长因子、成纤维细胞生长因子、降钙素相关基因肽受体、血管活性肠肽受体和P物质受体的mRNA表达较对照组明显降低,而过氧化物酶体增殖子活化受体γmRNA表达较对照组明显增高,差异均具有显著性意义(P<0.01),实验组各因子在不同时间点间进行比较却无明显差异(P>0.05)。结果表明大剂量激素可使骨髓间充质干细胞中具有成骨或成血管作用的神经递质或其受体表达下降,这可能与激素性股骨头坏死发生的机制有关。     

不同分离方法对骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响

背景：目前并没有特定的实验对骨髓间充质干细胞分离的两种基本方法进行系统评估，所以贴壁分离法和密度梯度离心法对细胞诱导分化是否存在不同影响，尚无定论。目的：拟验证两种基本分离方法对骨髓间充质干细胞成软骨分化影响的差别。设计、时间及地点：对照观察实验，2005—03／09在中国医科大学附属盛京医院儿外实验室完成。材料：2-3月龄体质量1．2-2．0kg的日本大耳兔20只用于抽取骨髓。方法：用贴壁分离法和密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞。选择两组同代的骨髓间充质于细胞，用转化生长因子β1诱导其向软骨方向分化。主要观察指标：①倒置显微镜观察骨髓间充质干细胞的生长情况，绘制两组细胞生长曲线。②免疫组化检测两组Ⅱ型胶原表达。⑧原位杂交检测两组细胞Ⅱ型胶原mRNA表达。结果：绘制生长曲线表明两组细胞生长速度趋于一致。免疫组化法检测两种方法分离的骨髓骨髓间充质干细胞的软骨细胞分化率为76．1％和77．7％，原位杂交法检测的软骨细胞分化率为70．3％和71．0％，差异无显著性意义。结论：两种分离方法对骨髓间充质干细胞的生长和成软骨分化结果的影响无差异。     

骨髓间充质干细胞移植时机及移植时间长短对大鼠肝纤维化病变进程的影响

背景:研究发现肝纤维化环境是骨髓间充质干细胞适宜的分化环境,提示通过骨髓间充质干细胞移植治疗肝纤维化成为可能.目的:探讨骨髓间充质干细胞不同移植时期及移植时间长短对大鼠肝纤维化进程的影响.设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2007-11/2008 08在福建医科大学及福建省科研所完成.材料:普通级五六周龄雄性SD大鼠5只用于制备骨髓间充质干细胞;清洁级成年雌性SD大鼠68只,分别于造模10周、12周后处死,前者分为对照组、造模第6周细胞移植组2个亚组,12只/组;后者分为对照组、造模第6周细胞移植组、造模第8周细胞移植组3个亚组,动物数量分别为16只,16只,12只.方法:各组大鼠均通过腹腔注射四氯化碳建立肝纤维化模型.取体外分离培养的第4代骨髓间充质干细胞悬液0.2 mL(含5×106个细胞),分别于造模后第6,8周经尾静脉注入各细胞移植组大鼠体内,对照组同法注入L-DMEM培养基,各组于培养对应时间点处死.主要观察指标:大鼠一般情况及肝纤维化和炎症程度.结果:①造模10周后处死:与对照组比较,造模第6周细胞移植组肝纤维化评分均值明显降低(t=-2.45,P=-0.023),炎症程度方面无明显差异(t=-0.60,P=-0.554).②造模12周后处死:对照组、造模第8周细胞移植组的肝纤维化及炎症程度评分均值均基本相似(t=-0.21,P=0.84;t=-0.18,P=0.86),2组均明显高于造模第6周细胞移植组(t=-6.17,t=-8.61,P＜0.01).③造模10周后处死与造模12周后处死比较:随细胞移植时间的延长,造模第6周细胞移植组肝纤维化及炎症程度评分均值均明显降低(t=-6.98,t=-9.78,P＜0.01).结论:早期移植骨髓间充质干细胞可以减轻CCl4引起的肝脏炎症程度,同时改善大鼠的肝纤维化程度,此作用与移植时间成正相关.