神经节苷脂GM1对新生鼠缺血缺氧后NOS表达的影响

目的：探讨神经节苷酯GM1对新生儿缺氧缺血性脑病的保护作用及可能机理。方法：通过建立新生鼠缺氧缺血性脑病动物模型，观察缺血缺氧后不同时期脑组织的病理变化和一氧化氮合酶（NOS）表达，以及GM1对其影响。结果：GM1给药组脑组织损伤明显减轻，缺血缺氧可诱导脑组织中NOS表达水平上调，GM1部分地抑制了缺血缺氧后NOS的表达水平。结论：GM1对新生儿缺氧缺血性脑损伤具有一定程度的保护作用，其作用可能是通过部分抑制NOS的表达。     

神经节苷脂GM1对谷氨酸介导的基底前脑神经元损伤的保护作用

目的 观察神经节苷脂GM1对谷氨酸造成的基底前脑神经元损伤的保护作用.方法 取出生后1 d乳鼠前脑基底神经元培养,随机分为正常对照组、模型组(谷氨酸损伤组)、神经节苷脂GM1保护组.用倒置相差显微镜进行活细胞观察,采用RT-PCR技术检测前脑基底神经元神经生长相关蛋白-43(Growth associated protein-43,GAP-43)的表达.结果 谷氨酸损伤组神经元在倒置相差显微镜下可见胞体回缩,突起消失或断裂.神经节苷脂GM1保护组的神经元绝大多数胞体饱满,突起明显,细胞间的网络联系仍清晰可见,接近于正常对照组;神经节苷脂GM1大脑基底神经节GAP-43的mRNA表达比谷氨酸损伤组高,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 神经节苷脂GM1能保护基底神经元免受谷氨酸兴奋性毒性的损伤.     

神经节苷脂GM1与亚低温对缺氧缺血后脑中HSP70、NPY表达的影响

目的 探讨神经节苷脂GM1与亚低温对缺氧缺血(HI)后新生大鼠脑中热休克蛋白70(HSP70)和神经肽Y(NPY)蛋白和基因表达的影响.方法 50只新生7 d SD大鼠制作HI模型,随机分为假手术(A)组、模型(B)组、神经节苷脂GM1(C)组、亚低温(D)组和神经节苷脂与亚低温联合干预(E)组,每组10只.采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠脑中HSP70、NPY蛋白及基因表达.结果 A组HSP70、NPY蛋白及其mRNA表达较弱,B组HSP70蛋白及其 mRNA表达增加,NPY蛋白及其mRNA表达明显增强,各干预组HSP70蛋白和mRNA表达进一步升高,而以E组升高更明显(P＜0.05),而NPY和mRNA在各干预组中表达减弱,联合组减弱更明显(P＜0.05).结论 神经节苷脂GM1与亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用可能与影响HSP70、NPY的表达有关.     

神经节苷脂GM1治疗新生儿缺氧缺血性脑病的血浆神经元特异性烯醇酶动态变化

目的研究神经节苷脂GM1治疗新生儿缺氧缺血性脑病患儿血浆神经元特异性烯醇酶（NSE）的动态变化及其临床意义。方法将新生儿科住院的90例新生儿缺氧缺血性脑病患儿分为轻度组18例、常规治疗组33例、GM1组39例。GM1组在常规治疗基础上加用神经节苷脂，20mg／次，静脉滴注1次／d，10～14d为1个疗程。治疗前后分别检测血浆NSE，同时以25例正常新生儿组作对照。治疗前及治疗1个疗程后各进行脑CT检查1次；治疗前、治疗1个疗程后和生后28d各进行NBNA测定1次；生后1个月起至生后12个月每月DQ检测1次。结果GM1组和常规治疗组治疗后血浆神经元特异性烯醇酶有显著下降（P〈0．05），GM1组比常规治疗组下降更显著。轻度组血浆神经元特异性烯醇酶改变差异无统计学意义（P〉0．05）。GM1组在CT好转率、NBNA评分及DQ评分意识障碍恢复方面明显好于常规治疗组（P〈0．05），差异有统计学意义。结论神经节苷脂治疗新生儿缺氧缺血性脑病具有十分重要价值。     

神经节苷脂对新生鼠缺血再灌注脑损伤神经细胞凋亡的影响

目的探讨神经节苷脂(GM1)对新生缺氧缺血性损伤(HIBD)大鼠脑细胞凋亡的影响。方法采用拴线法建立新生大鼠的大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。腹腔注射GM1,采用原位缺口末端标记法(TUNEL)进行细胞凋亡染色,测定血清内皮素水平和NO水平。结果假手术组偶见神经细胞凋亡,缺血再灌注组可见大量的神经细胞凋亡现象,GM1治疗组新生大鼠与缺血再灌注组相比,凋亡细胞数明显减少;假手术组、缺血再灌注组和GM1治疗组新生大鼠血浆的内皮素含量(ng/L)分别为41.6±4.06、63.45±6.91、50.67±5.20;NO2-/NO3-分别是44.67±8.6、63.65±9.9、47.7±9.8。结论GM1对新生大鼠脑缺氧缺血的保护作用可能通过抑制缺血缺氧性脑损伤后血浆内皮素和NO的生成,而抑制神经细胞的凋亡过程。     

神经节苷脂治疗新生儿缺氧缺血性脑病78例临床疗效观察

目的探讨观察神经节苷脂（GM1）治疗新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）的临床疗效。方法选取78例HIE患儿随机分观察组和对照组,每组各39例,两组均常规治疗。对照组联合胞二磷胆碱治疗,观察组联合神经节苷脂治疗,观察比较两组临床疗效。结果两组总有效率比较,观察组明显优于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论神经节苷脂治疗新生儿缺氧缺血性脑病临床疗效显著,可明显缓解患儿的临床症状,值得临床推广。     

神经节苷脂治疗中重度新生儿缺氧缺血性脑病疗效观察

目的对神经节苷脂治疗中重度新生儿缺氧缺血性脑病的疗效进行观察。方法65例患儿随机分为神经节苷脂组和对照组。对两组治疗后的头颅CT检查结果和NBNA评分进行统计学比较。结果两组结果有显著性差异,神经节苷脂组疗效满意。结论神经节苷腊对改善中重度新生儿缺氧缺血性脑病有明显疗效。     

单唾液酸四己糖神经节苷酯对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的治疗

目的:探讨单唾液酸四己糖神经节苷酯(GM1)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBI)的治疗作用.方法: 选用7 d龄SD大鼠54只,分为假手术组6只(分离但不结扎右侧颈总动脉)、GM1治疗组24只(分离并结扎右侧颈总动脉,置缺氧舱取出后每24 h腹腔注射GM1 10 mg•kg 1,直至处死)、HIBI组24只(与GM1治疗组同样造成缺血缺氧后,腹腔注射与GM1治疗组同体积0.9%氯化钠溶液),监测不同时间脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、NO、ATP酶水平.结果:与HIBI组相比,GM1治疗组中SOD水平均明显升高,NO水平均明显降低,各种ATP酶均明显增高(P＜0.05).结论:GM1对新生大鼠HIBD有明显的治疗作用.     

神经节苷脂治疗新生儿缺氧缺血性脑病23例疗效观察

目的探讨神经节苷脂治疗新生儿缺氧缺血性脑病的疗效。方法对23例缺氧缺血性脑病患儿随机分为两组,在常规三项支持及三项对症的基础上治疗组用GM1治疗,对照组加用胞二磷胆碱治疗,观察患儿意识、原始反射、肌张力的恢复时间及新生儿神经行为评分以观察药物疗效。结果治疗组临床症状及体征的恢复及新生儿神经行为评分均优于对照组。结论神经苷脂治疗缺氧缺血性脑病有明显疗效。     

神经节苷脂对新生儿缺氧缺血性脑病疗效观察

目的为探讨神经节苷脂（GM1）对新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）的疗效。方法将89例确诊为中重度新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）的患儿入院时随机分为治疗组和对照组,治疗组在常规治疗的基础上加用神经节苷脂,剂量为20mg/d,1次/d,10～15d为1个疗程。所有患儿行头颅CT检查,由专人进行NBNA评分,并进行随访。结果治疗组NBNA评分、CT异常率、后遗症发生率均优于对照组。结论神经节苷脂对HIE有明显疗效。     

人参皂苷Rg1对慢性应激抑郁模型大鼠谷氨酸及其受体表达的影响

目的：观察人参皂苷Rg1对慢性应激抑郁模型大鼠脑内海马、前额叶皮质区谷氨酸及其不同类型受体表达的影响，探讨其潜在的抗抑郁机制。方法：将SD大鼠随机分为5组：正常组、模型组、氟西汀组（10 mg·kg^-1）、人参皂苷Rg1低、高剂量组（25、50 mg·kg^-1）。采用慢性不可预见性温和应激的方法建立抑郁大鼠模型，于造模同时灌胃给药，共21天。造模结束后采用Morris水迷宫和旷场实验评价大鼠的抑郁样行为，HE染色观察大鼠海马、前额叶皮质区病理改变情况，HPLC法检测谷氨酸含量，Western-blotting法检测离子型谷氨酸受体NMDAR1、代谢型谷氨酸受体mGluR1的蛋白表达情况。结果：与正常组比较，模型组大鼠抑郁样行为显著，海马、前额叶皮质区均存在较为明显的损伤，谷氨酸含量显著升高，NMDAR1、mGluR1蛋白表达均显著上调；在给予人参皂苷Rg1干预后，模型大鼠的抑郁样行为得到缓解，海马、前额叶皮质区损伤减轻，谷氨酸含量下降，NMDAR1、mGluR1蛋白表达水平明显逆转。结论：人参皂苷Rg1对大鼠抑郁症状有明显的改善作用，并能减轻海马和前额叶皮质损伤，其机制可能与调节脑内谷氨酸含量，并抑制其受体表达有关。     

Prenatal exposure to the cannabinoid receptor agonist WIN 55,212-2 increases glutamate uptake through overexpression of GLT1 and EAAC1 glutamate transporter subtypes in rat frontal cerebral cortex

Prenatal exposure to the CB1 receptor agonist (R)-(+)-[2,3-dihydro-5-methyl-3-(4-morpholinylmethyl)-pyrrolo[1,2,3-de]-1,4-benzoxazinyl]-(1-naphthalenyl)methanone) mesylate (WIN) at a daily dose of 0.5 mg/kg, and Delta9-tetrahydrocannabinol (Delta9-THC) at a daily dose of 5 mg/kg, reduced dialysate glutamate levels in frontal cerebral cortex of adolescent offspring (40-day-old) with respect to those born from vehicle-treated mothers. WIN treatment induced a statistically significant enhancement of Vmaxl-[3H]glutamate uptake, whereas it did not modify glutamate Km, in frontal cerebral cortex synaptosomes of adolescent rats. Western blotting analysis, performed either in membrane proteins derived from homogenates and in proteins extracted from synaptosomes of frontal cerebral cortex, revealed that prenatal WIN exposure enhanced the expression of glutamate transporter 1 (GLT1) and excitatory amino acid carrier 1 (EAAC1). Moreover, immunocytochemical analyses of frontal cortex area revealed a more intense GLT1 and EAAC1 immunoreactivity (ir) distribution in the WIN-treated group. Collectively these results show that prenatal exposure to the cannabinoid CB1 receptor agonist WIN increases expression and functional activity of GLT1 and EAAC1 glutamate transporters (GluTs) associated to a decrease of cortical glutamate outflow, in adolescent rats. These findings may contribute to explain the mechanism underlying the cognitive impairment observed in the offspring of mothers who used marijuana during pregnancy.     

Down-regulation of the glial glutamate transporter GLT-1 in rat hippocampus and striatum and its modulation by a group III metabotropic glutamate receptor antagonist following transient global forebrain ischemia

Our goals were to identify biochemical markers for transient global ischemia-induced delayed neuronal death and test possible drug therapies against this neuronal damage. Four-vessel occlusion (4-VO) for 20 min was used as a rat model. The temporal expression profiles of three glutamate transporters (GLT-1, GLAST and EAAC1) were evaluated in the CA1 region of the hippocampus and the striatum. The protein levels of the GLT-1 were significantly down-regulated between 3 and 6 h after ischemia-reperfusion in the CA1 region and striatum, returned to the control (2-VO) levels 24 h after reperfusion and remained unchanged for up to 7 days. The levels of GLAST in the CA1 region and striatum, and EAAC1 in the CA1 region did not change after ischemia from 1 h to 7 days. Pretreatment with group III metabotropic glutamate receptor antagonist s-alpha-MCPA (20 microg/5 microl) 30 min prior to 4-VO significantly restored the GLT-1 levels in the CA1 region caused by global ischemia at both 3 and 6 h after reperfusion. The loss of pyramidal neurons in the CA1 region due to ischemia-reperfusion could also be prevented by intraventricular pretreatment with s-alpha-MCPA. The current findings pinpoint the significance of GLT-1 during ischemia/reperfusion and suggest a potential application of group III metabotropic glutamate receptor antagonist against ischemic/hypoxic neuronal damage.     

脑缺血后谷氨酸及其受体介导的神经细胞损伤及相关药物研究进展

脑缺血损伤涉及多种病理过程,其中兴奋性毒性是关键机制之一。谷氨酸是脑内主要的兴奋性递质,谷氨酸及其受体的病理变化是引起兴奋性毒性的重要病理基础。该文综述了脑缺血后谷氨酸异常释放、谷氨酸受体表达变化及受体后信号传导等病理机制,及以上述机制为靶点的药物研究进展。     

小檗碱抑制谷氨酸引起的新生大鼠脑细胞 c-fos 表达及游离钙的升高

目的：研究小檗碱（Ｂｅｒ）对谷氨酸（Ｇｌｕ）引起的新生大鼠脑细胞ｃ－ｆｏｓ表达及游离钙（〔Ｃａ２＋〕ｉ）变化的影响。方法：斑点杂交及Ｆｕｒａ－２技术。结果：Ｇｌｕ能诱导分离的脑细胞ｃ－ｆｏｓ的一过性高表达及〔Ｃａ２＋〕ｉ的显著升高。Ｂｅｒ１０μｍｏｌ·Ｌ－１显著抑制Ｇｌｕ诱导的脑细胞ｃ－ｆｏｓ的高表达，而尼莫地平则没有明显作用。Ｂｅｒ１～１００μｍｏｌ·Ｌ－１能剂量依赖地抑制Ｇｌｕ引起的〔Ｃａ２＋〕ｉ升高。结论：Ｂｅｒ的这种降低脑细胞ｃ－ｆｏｓ基因表达及〔Ｃａ２＋〕ｉ水平的作用可能是其治疗脑缺血性疾病的机制之一。     

谷氨酸转运体靶点药物的抗脑缺血作用研究进展

兴奋性氨基酸毒性是脑缺血损伤的主要机制之一。缺血期间谷氨酸的大量累积会导致神经元细胞、星形胶质细胞等神经细胞发生兴奋性毒性损伤,因此对缺血期间谷氨酸水平的调控一直是脑缺血防治药物研究的重点。近年来研究表明,通过上调星形胶质细胞上谷氨酸转运体GLAST(EAAT1)和GLT-1(EAAT2)的表达或活性,增加缺血时谷氨酸的摄取,维持突触间隙内谷氨酸的正常浓度,从而降低兴奋性毒性,减轻缺血性脑损伤。一些化合物如β-内酰胺类抗生素、尿酸、甲状腺激素、雌激素、山楂酸等已在体内或体外实验中被证实对谷氨酸转运体的调节作用,对抗谷氨酸毒性,发挥神经保护作用。研究和开发以星形胶质细胞谷氨酸转运体为作用靶点的药物,为缺血性脑损伤的预防和治疗提供了一条新的途径。     

神经节苷脂治疗新生儿缺氧缺血性脑病及其对免疫功能变化的研究

目的探讨单唾液酸四己糖神经节苷脂（GM1）与CD3、CD4、CD8、IgM和C3变化的相关性。方法将我院新生儿科住院60例中度HIE患儿随机分为GM1组和对照组,每组30例。两组患儿均采用常规治疗,GM1组加用GM120mg加入5%葡萄糖注射液20ml静脉滴注,1次/d。对照组加用胞二磷胆碱0.125g加入5%葡萄糖注射液20ml静脉滴注,1次/d。两组均于入院后第1d用药,疗程均为7-10d。且于第1d、第7d采血,分别检测CD3、CD4、CD8、IgM和C3免疫指标。结果 GM1组总有效率明显高于对照组（P〈0.05）。GM1组治疗后血清CD3、CD4、IgM和C3均明显升高,CD8明显下降,差异显著（P〈0.05）。结论 （1）GM1治疗HIE的临床疗效优于胞二磷胆碱;（2）GM1可能通过一定程度上抑制血清CD8过高浓度,一定程度上升高血清CD3、CD4、IgM和C3过低浓度,从而起到脑保护作用。（3）血清GM1与CD3、CD4、CD8、IgM和C3可作为HIE临床预后的免疫参考指标。     

Evidence that Akt mediates platelet-derived growth factor-dependent increases in activity and surface expression of the neuronal glutamate transporter, EAAC1

Previously we have shown that platelet-derived growth factor (PDGF) rapidly increases the activity of the neuronal glutamate transporter, EAAC1. This increase in activity is associated with a rapid (within minutes) redistribution of transporter from a subcellular compartment to the plasma membrane and is blocked by inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K). Similar effects of PI3K inhibitors have been observed for insulin-dependent up-regulation of the GLUT4 subtype of glucose transporter. Although GLUT4 regulation also depends on the serine-threonine kinase (Akt/protein kinase B), a downstream target of PI3K, the downstream effectors responsible of PDGF-dependent regulation of EAAC1 have not been identified. In the present study, PDGF increased the level of Akt phosphorylation (Ser 473) in C6 glioma cells, a cell line that has been used to study regulated trafficking of endogenous EAAC1. Two inhibitors of PI3K blocked this effect. In transient transfection studies, a dominant negative mutant of Akt-1 blocked PDGF-induced redistribution of epitope-tagged EAAC1 (myc-EAAC1). Conversely, constitutively active Akt-1 (CA Akt-1) increased the cell surface expression of myc-EAAC1. A lentiviral vector engineered to express CA Akt-1 increased Akt activation, cell surface expression of endogenous EAAC1, and Na(+)-dependent glutamate transport activity. Together, these studies suggest that Akt is required for PDGF-induced regulation of EAAC1.     

艾灸减轻新生小鼠缺氧缺血性脑病的作用及其机制研究

目的　研究艾灸减轻新生小鼠缺氧缺血性脑病（HIE）的作用及其机制。方法　55只出生7 d的ICR小鼠按照随机数字表法分为假手术组（Sham组）、模型组（HI组）和艾灸组（MOX组）。HI组和MOX组采用右侧颈总动脉结扎联合缺氧法制备HIE模型，MOX组建模后艾灸刺激大椎穴，35 min/次，1次/d，连续治疗3 d。处理结束后麻醉取脑，DAPI染色观察脑组织形态结构，TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡；免疫荧光染色检测脑组织caspase-9表达；放射免疫分析法测定脑组织caspase-3含量。结果　与Sham组相比，HI组小鼠脑组织排列疏松，脑组织凋亡细胞数和caspase-9表达显著增多（P＜0.05）；与HI组相比，MOX组小鼠脑组织排列较致密，脑组织凋亡细胞数、caspase-9和caspase-3表达显著减少（P＜0.05）。结论　艾灸可能通过降低脑组织caspase-9和caspase-3的表达来减少细胞凋亡，从而减轻新生小鼠缺氧缺血性脑损伤。