I,IV型胶原及板层素在肝纤维化大鼠肝窦周围的变化

运用免疫组化方法检测大鼠肝脏的Ｉ，ＩＶ型胶原及板层素（ＬＭ），发现三者在正常大鼠肝窦周围均有少量存在。在经ＣＣｌ４刺激后造成肝纤维化大鼠的肝脏，第６周造模组肝窦周围Ｉ型胶原与正常组相似，ＩＶ型胶原明显减少，ＬＭ增多，第１１周造模组大鼠肝窦周围的Ｉ型胶原仍无增多，ＩＶ型胶原进一步减少，ＬＭ则比第６周末明显降低，提示肝纤维化时，大鼠肝脏内皮细胞和肝细胞之间大量的功能性基底膜遭受破坏，但因连续性基底膜的     

Ⅰ、Ⅳ型胶原及板层素在肝纤维化大鼠肝窦周围的变化

运用免疫组化方法检测大鼠肝脏的Ⅰ、Ⅳ型胶原及板层素（ＬＭ），发现三者在正常大鼠肝窦周围均有少量存在。在经ＣＣｌ４刺激后造成肝纤维化大鼠的肝脏，第６周造模组肝窦周围Ⅰ型胶原与正常组相似，Ⅳ型胶原明显减少，ＬＭ增多；第１１周造模组大鼠肝窦周围的Ⅰ型胶原仍无增多，Ⅳ型胶原进一步减少，ＬＭ则比第６周末明显降低。提示肝纤维化时，大鼠肝脏内皮细胞和肝细胞之间大量的功能性基底膜遭受破坏，但因连续性基底膜的形成受到干扰，肝窦毛细血管化程度不很严重，此可能是ＣＣｌ４肝纤维化大鼠有自愈倾向的原因之一。     

肝纤维化时肝脏Ⅵ型胶原的变化

本文用免疫组化方法检测正常大鼠和肝纤维化大鼠肝组织中Ⅵ型胶原，发现随着肝纤维化的进展，门脉区、血管周围和纤维间隔中Ⅵ胶原和Ⅰ、Ⅲ型胶原同步增加。提示在组织学上Ⅵ型胶原的阳性程度也是判断肝纤维化程度的一个重要指标。     

实验性肝纤维化过程中间质胶原酶活性的动态变化

目的研究肝纤维化形成的各阶段肝组织及血清间质胶原酶活性的变化规律，并明确两者的关系。方法制备人血白蛋白免疫损伤性肝纤维化模型。在不同阶段留取肝组织及血清标本，测定（１）肝组织活化间质胶原酶活性（Ａ）、（２）肝组织潜在间质胶原酶活性（Ｌ）、（３）血清间质胶原酶活性（Ｓ）。结果模型组大鼠的Ａ、Ｌ、Ｓ在致敏阶段无显著变化；在尾静脉攻击中期Ａ、Ｌ．Ｓ三者均较致敏阶段明显增高，且达最高值。此后逐渐下降；但在造模后３个月时仍较致敏阶段为高。整个造模过程中Ａ／Ｌ比值无明显变化。肝组织间质胶原酶活性与血清间质胶原因活性间呈显著正相关。结论在实验性肝纤维化的发生、发展阶段肝组织及血清间质胶原酶活性均明显升高；到了肝硬化阶段，间质胶原酶活性较肝纤维化阶段下降；在肝硬化的自发逆转中，间质胶原酶活性保持在较高水平。血清间质胶原酶活性的变化可反映肝组织间质胶原酶活性的改变。     

复方丹参合剂提高胶原酶活性逆转实验性肝纤维化的研究

目的 了解复方８６１合剂对实验性肝纤维化的逆转作用及可能的机理，方法 制备大鼠免疫损伤性肝纤维化模型，给予复方丹参８６１合剂治疗；观察肝组织，血清胶原酶活性及肝组织胶原蛋白含量的变化。结果 治疗组大鼠在治疗过程中，肝组织胶原蛋白含量较模型组显著降低，而其肝组织活性胶原酶活性（Ａ），肝组织潜在胶原酶活性（Ｌ），Ａ／Ｌ比值有血清胶原酶活性（Ｓ）均较模型组显著升高。结论 复方丹参８６１合剂对已形成的肝纤     

实验性肝纤维化胶原变化的研究

目的：研究肝纤维化过程中胶原成分的变化规律。方法：制作四氯化碳肝纤维化模型，测定肝组织羟脯氨酸含量，用ＶＧ、ＲＦ染色显示Ⅰ、Ⅱ型胶原并进行计算机图像分析，放免法测定肝匀浆及血清Ⅲ型前胶原水平，应用上述指标反映肝纤维化过程中胶原的变化规律。结果：随实验时间延长，肝内胶原含量逐渐增加。肝纤维化早、中期以Ⅲ型胶原增生为主，肝纤维化后期及肝硬化期以Ⅰ期胶原为增生为主。血清ＰＣⅢ与肝内胶原变化基本同步。结论     

肝纤维化过程中一个重要的病理改变—肝窦毛细血管化

肝窦属不连毛细胞血管,窦壁主要由一层内皮细胞组成,其窦腔面可见少量微绒毛,扁薄的部分有发达的窗孔,细胞呈筛状形态,内皮窗孔无隔膜,肝窦内皮外无基底膜,仅见少量网状纤维,肝窦是通透性最大的血窦之一,是保证血淮和肝细胞间正常物质交换的组织学基础,1963年Schaffner发现随着肝硬化的发生,肝窦内皮窗孔数逐渐减少或消失,内皮下基阍膜程为肝窦毛细胞血管化（sinusoid capil-larization),研究肝窦毛细胞血管化的形成机理以及和肝纤维化,肝硬化的发生关系已成为世界肝病研究领域的一个热点。     

Ⅳ型胶原与肝纤维化

Ⅳ型胶原是基底膜的主要成分之一，其分子结构及代谢方式与间质胶原明显不同。在肝纤维化时，Ⅳ型胶原在Ｄｉｓｓｅ间隙内显著增加，导致肝窦毛细血管化，直接影响肝病的预后。血清Ⅳ型胶原及其前肽测定，不仅反映肝纤维化程度，而且对肝纤维化早期诊断具有重要价值。本文对肝纤维化过程中Ⅳ型胶原的研究进展作了扼要综述。     

IV型胶原与肝纤维化

Ⅳ型胶原是基底膜的主要成分之一，其分子结构及代谢方式与间质胶原明显不同。在肝纤维化时，Ⅳ型胶原在Ｄｉｓｓｅ间隙内显著增加，导致肝窦毛细血管化，直接影响肝病的预后。血清Ⅳ型胶原及其前肽测定，不仅反映肝纤维化程度，而且对肝纤维化早期诊断具有重要价值。本文对肝纤维化过程中Ⅳ型胶原的研究进展作了扼要综述。     

四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的形成

目的：观察四氯化碳（CCl4）诱导的大鼠肝纤维化过程中肝窦毛细血管化的形成过程,探讨其与肝纤维化的关系。方法32只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常对照组,肝纤维化模型组,正常对照组大鼠腹腔注射0．9％氯化钠溶液2 mL/kg ,模型组大鼠腹腔注射50％ CCl4-蓖麻油混合液2 mL/kg ,每周2次,共8周;分别于造模第2、4、6、8周处死大鼠,观察肝组织炎症及纤维化程度,放射免疫法检测血清中透明质酸（HA）的含量,透射电镜观察肝窦窦壁结构,S-P 免疫组织化学检测各组大鼠肝组织CD31、层黏连蛋白（LN）、IV型胶原（Col-IV）的表达。结果肝脏组织学证实CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型构建成功,6周可见纤维间隔形成;透射电镜显示,CCl4诱导2周时,部分肝窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cells ,LSEC）窗孔减少,内皮下未见基底膜（Basement membrane,BM）,随着造模的进程,LSEC 窗孔进一步减少,部分甚至消失,第6、8周时局部肝窦内皮下形成连续的BM。同时,随着肝纤维化的进程,HA浓度逐渐升高,肝窦内皮细胞表面标志物CD31及基底膜主要成分Col-IV、LN表达逐渐增强。结论在CCl4诱导大鼠肝纤维化过程中,肝窦毛细血管化是逐渐形成的,LSEC失窗孔早于纤维间隔的形成,而肝窦内皮下基底膜出现在纤维间隔形成以后。     

肝纤维化组织学量化诊断的实验研究

目的探讨肝纤维化组织学量化诊断方法。方法用二甲基亚硝氨（ＤＭＮ）诱导ＳＤ大鼠肝纤维化模型，常规肝组织切片，Ｍａｓｏｎ三色和苦味酸天狼红染色，苦味酸固绿－天狼红染色比色测定，图像定量处理和半定量计分分析及羟脯氨酸（Ｈｙｐ）含量测定。结果切片胶原比色测定、图像定量处理和半定量计分分析均与肝纤维化程度变化相一致，与肝组织Ｈｙｐ含量具有良好的相关性，ｒ分别为０９４、０８９和０８８，Ｐ均＜００１。结论切片胶原测定、图像定量处理和半定量计分可作为确定肝纤维化程度的量化指标     

血清有机膦酸酯酶活性在慢性肝病中的变化及其与肝纤维化的相关性研究

为探讨血清有机膦酸醋酶（ＰＥ）活性与肝纤维化的关系，用荧光分光法测定了７７例慢性肝病患者及实验诱发的肝纤维化大鼠血清ＰＥ活性变化。发现慢性肝病时血清ＰＥ活性明显升高，其升高程度依次为肝硬化＞原发性肝癌＞慢性活动性肝炎＞慢性迁延性肝炎。与血清Ⅲ型前胶原氨基末端肽（ＰⅢＰ）水平变化呈正比。肝纤维化大鼠血清ＰＥ活性也随肝纤维化程度加重而逐渐升高，与肝纤维化积分及血清Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）、透明质酸（ＨＡ）变化呈显著正相关，相关系数分别为０．９６４，０．９９８与０．９６７，均Ｐ＜０．０１。说明血清ＰＥ活性与肝纤维化程度间有明显关系，可作为肝纤维化的血清学诊断指标之一。     

实验性血吸虫病肝纤维化中TGF-β1 Smad3 Smad7的表达变化及意义

目的　研究 TGF-β1、Sm ad3、Smad7在血吸虫病肝纤维化家兔肝脏中的表达变化规律 ,为逆转血吸虫病肝纤维化寻找新的途径。方法　日本血吸虫尾蚴腹贴法制备家兔肝纤维化模型 (n=4 0 ) ,按诱导时间将动物随机分为 4、8、12、16周及正常对照共 5组 ,采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)检测肝组织中转化生长因子 TGF-β1m RNA表达水平 ,免疫组织化学检测肝组织中 、 型胶原的表达 ,且同时分别以 RT- PCR、Western blot检测原代分离肝星状细胞 (HSC)的 Sm ad3、Sm ad7m RNA和蛋白表达。结果　肝纤维化形成过程中 TGF- β1m RNA表达进行性增强 ,伴有肝组织 、 型胶原含量的明显增高 ,且分别与 、 型胶原呈显著正相关 (r1 =0 .5 36 ,P<0 .0 1;r2 =0 .5 4 4 ,P<0 .0 1) ; 、 型胶原表达在肝窦壁、中央静脉壁、Disse腔、虫卵肉芽肿内及其周围 ,呈弥漫状分布 ,伴有门管区胶原纤维隔形成和窦壁完整的基膜形成 ;与正常对照组相比 ,各期肝纤维化家兔 HSC中 Smad3m RNA表达增加 ,与 TGF- β1m RNA表达趋势基本一致。而 Sm ad7m RNA较正常对照组一过性升高 (P<0 .0 5 ) ,第 8～ 16周表达水平则持续下降 (P<0 .0 1)。 Smad蛋白表达与其m RNA改变基本一致。结论　 TGF- β1/ Smad信号通路参与了血吸虫病肝纤维化进程     

实验性肝纤维化过程中Ⅳ型胶原酶活性的研究

目的了解实验性肝纤维化过程中Ⅳ型胶原降解酶活性的动态变化。方法以人血白蛋白免疫损伤性大鼠肝纤维化为模型；检测实验性肝纤维化各阶段肝组织及血清Ⅳ型胶原降解酶活性的变化。结果肝组织活化及潜在Ⅳ型胶原降解酶活性在致敏阶段无明显变化；在尾静脉攻击中期显著升高；在尾静脉攻击后较前明显下降；在造模后１．５月及３个月时，潜在Ⅳ型胶原酶活性仍显著高正常对照组。血清Ⅳ型胶原降解酶活性与肝组织潜在Ⅳ型胶原降解酶活性呈显著正相关。结论血清Ⅳ型胶原降酶活性的变化反映了肝组织Ⅳ型胶原降解酶活性的改变。     

实验性纤维化肝内胶原生成细胞的研究

目的 探讨大鼠肝纤维化胶原生成细胞的来源。方法 利用免疫组织化学及原位分子杂交技术，对不同阶段（２０周）ＣＣｌ４诱导ＳＤ大鼠纤维肝内匀朱生成细胞Ｉ，Ⅲ，Ⅳ型前胶原ｍＲＮＡ及其相应胶原蛋白的表达状况进行观察。结果 实验早期（２－６周），于中央静脉周围坏死区或其附近聚集的结蛋白（ｄｅｓｍｉｎ，Ｄｍ）和α－平滑肌肌动蛋白（α－ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ，α－ＳＭＡ）阳性的Ｉｔｏ细胞及肌成纤维细胞     

Pathological mechanisms of alcohol-induced hepatic portal hypertension in early stage fibrosis rat model

AIM: To study the role of hepatic sinusoidal capillarization and perisinusoidal fibrosis in rats with alcohol-induced portal hypertension and to discuss the pathological mechanisms of alcohol-induced hepatic portal hypertension. METHODS: Fifty SD rats were divided into control group (n=20) and model group (n=30). Alcoholic liver fibrosis rat model was induced by intragastric infusion of a mixture containing alcohol, corn oil and pyrazole (1 000:250:3). Fifteen rats in each group were killed at wk 16. The diameter and pressure of portal vein were measured. Plasma hyaluronic acid (HA), type Ⅳ collagen (CoⅣ) and laminin (LN) were determined by radioimmunoassay. Liver tissue was fixed in formalin (10%) and 6-μm thick sections were routinely stained with Mallory and Sirius Red. Liver tissue was treated with rabbit polyclonal antibody against LN and ColⅣ. Hepatic non-parenchymal cells were isolated, total protein was extracted and separated by SDS-PAGE. MMP-2 and TIMP-1 protein expression was estimated by Western blotting. RESULTS: The diameter (2.207 ± 0.096 vs 1.528±0.054mm, P<0.01) and pressure (11.014±0.395 vs 8.533±0.274 mmHg, P<0.01) of portal vein were significantly higher in model group than those in the control group. Plasma HA (129.97±16.10 vs 73.09±2.38 ng/mL, P<0.01), ColⅣ (210.49±4.36 vs 89.65±4.42 ng/mL, P<0.01) and LN (105.00±7.29 vs 55.70±4.32 ng/mL, P<0.01) were upregulated in model group. Abundant collagen deposited around the central vein of lobules, hepatic sinusoids and hepatocytes in model group. ColⅠ and ColⅢ increased remarkably and perisinusoids were almost surrounded by ColⅢ. Immunohistochemical staining showed that ColⅣ protein level (0.130±0.007 vs 0.032±0.004, P<0.01) and LN protein level (0.152±0.005 vs 0.029±0.005, P<0.01) were up-regulated remarkably in model group. MMP-2 protein expression (2.306±1.089 vs 0.612±0.081, P<0.01) and TIMP-1 protein expression (3.015±1.364 vs 0.446±0.009, P<0.01) in freshly isolated hepatic non-parenchymal cells were up-regulated in model group and TIMP-1 protein expression was evidently higher than MMP-2 protein expression (2.669±0.170 vs 1.695±0.008, P<0.05). CONCLUSION: Hepatic sinusoidal capillarization and peri-sinusoidal fibrosis are responsible for alcohol-induced portal hypertension in rats.     

秋水仙碱治疗家兔血吸虫病肝纤维化超微结构研究

8只家兔1次感染日本血吸虫尾蚴80±5条,4个月后可导致肝纤维化。其中4只兔感染4个月后,每日服秋水仙碱40μg/kg,连服7 wk。另4只兔为正常对照。观察秋水仙碱治疗后肝细胞超微结构变化,并用图象分析仪进行形态测定胶原微纤维在狄氏腔内及肝细胞周围的分布面积。结果显示,秋水仙碱能减轻肝细胞损伤,使狄氏腔内及肝细胞周围活跃的成纤维细胞和胶原微纤维减少。感染组与治疗组胶原微纤维面积占所测量肝组织面积的百分数分别为42.5％和0.2％(P<0.91).提示秋水仙碱有抗纤维化的作用。     

前列腺素E1与日本血吸虫病肝纤维化关系的研究

目的　了解前列腺素 E1 (PGE1 )对日本血吸虫病肝纤维化形成的影响。方法　采用免疫组化 SABC技术 ,并用计算机彩色病理图文分析系统 ,检测分析感染日本血吸虫大鼠经 PGE1 治疗后肝内 、 型胶原及转化生长因子 β1 (TGF- β1 )的含量变化。结果　 PGE1 治疗组肝内 、 型胶原及转化生长因子 β1 (TGF- β1 )的含量分别低于感染对照组 (P<0 .0 5 ) ;PGE1 治疗组及感染对照组肝内 、 型胶原的含量均与 TGF- β1 呈显著正相关 (r=0 .96 36 ,P<0 .0 5 ;r=0 .86 6 7,P<0 .0 5 ;r=0 .96 36 ,P<0 .0 5 ;r=0 .92 72 ,P<0 .0 5 )。结论　 PGE1 对日本血吸虫病肝纤维化的形成有抑制作用 ,其机理可能与 PGE1 抑制 TGF- β1 的表达有关。     

核糖核酸预防日本血吸虫病病兔肝纤维化的效果

目的：观察核糖核酸（ＲＮＡ）对日本血吸虫病病兔肝纤维化的阻抑效果。方法：５４只３月龄家兔随机均分为正常组、感染组及ＲＮＡ组。于肌注ＲＮＡ后第４０ｄ、７０ｄ及１００ｄ，各组随机选６只兔抽血及取肝组织，通过光镜、电镜观察其组织病理变化，放射免疫法测定血浆ＨＡ含量，紫外分光光度法测定肝组织ＨＹＰ，ＩＢＡＳ图像分析仪测定肝组织胶原纤维分布面积百分比，用潘孺孙法测定肝组织胶原纤维含量。结果：与感染组相比较，ＲＮＡ组胶原纤维未见明显增加，而肝细胞核仁增大，粗面内质网及其附着颗粒增多，贮脂细胞周围胶原纤维减少，血浆ＨＡ、肝组织ＨＹＰ、胶原纤维分布面积百分比及胶原纤维含量均显著降低。结论：ＲＮＡ对日本血吸虫病病兔肝纤维化具有早期预防作用。