应用FQ-PCR及ELISA技术诊断孕妇巨细胞病毒感染的研究

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及ELISA检测孕妇血清的CMV-DNA、抗CMV-IgM、抗CMV-IgG在诊断CMV感染中的意义.方法用FQ-PCR和EISA同时检测168例孕妇血清标本的CMV-DNA、抗CMV-IgM、抗CMV-IgG.结果CMV-DNA阳性57例(33.9%),CMV-IgM阳性11例(6.6%),CMV-IgG阳性152例(90.5%),三种检测结果间比较有显著性差异(P＜0.01).结论FQ-PCR检测CMV-DNA灵敏度高,可作为CMV感染的筛选指标.ELISA检测抗CMV-IgM的灵敏度低,仍是CMV现症感染的指标.因此,联合FQ-PCR、ELISA测CMV-DNA、抗CMV-IgM及抗CMV-IgG对筛选CMV感染及判断是否现症感染意义较大.     

巨细胞病毒DNA检测在筛查巨细胞病毒感染中的应用

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测婴儿尿液人巨细胞病毒(CMV)DNA在儿科CMV感染诊断中的价值.方法 对565例临床疑诊CMV感染患儿分别应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)、酶联免疫法(ELISA)检测尿液CMV-DNA及血清CMV-IgM抗体.结果 FQ-PCR检测尿CMV-DNA的阳性率为42 83%,ELISA检测婴儿血清CMV-IgM抗体阳性率为20 18%.两种方法对CMV感染诊断符合率为76 46%,前者诊断阳性率显著高于后者(χ2=33 59,P<0 01).结论 FQ-PCR检测尿液CMV-DNA是早期诊断婴儿CMV感染的敏感有效的方法.     

荧光定量PCR技术在小儿尿液巨细胞病毒检测中的应用

目的探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)方法检测尿液巨细胞病毒在儿童CMV感染诊断中的意义。方法分别应用FQ-PCR和ELISA法检测75例确诊或高度怀疑为CMV感染和25例对照儿童尿CMV-DNA和血清CMV-IgM,比较病毒DNA与血清抗体的平行性和敏感性。结果75例确诊或疑诊CMV活动性感染患儿中,检测到CMV-DNA 66例;检测到CMV-IgM 54例。两种方法阳性符合率为77%,FQ-PCR和ELISA法阳性检出率分别为88%和72%,有统计学差异(P<0.05)。结论FQ-PCR法检测尿CMV-DNA对诊断活动性CMV感染具有良好的应用价值。     

尿巨细胞病毒定量检测在婴幼儿巨细胞病毒感染诊治中的应用

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法在婴幼儿巨细胞病毒感染诊治中的应用价值。方法以住院的130例巨细胞病毒感染患儿为观察组,同期80例正常体检婴幼儿为对照组,检测尿CMV-DNA、血细胞pp65抗原、血清CMV-IgM,同时观察临床表现。结果①210例标本FQ-PCR、CMV-IgM法的阳性符合率为92.0%,FQ-PCR、CMV-IgM法的阴性符合率为64.9%。FQ-PCR、pp65、血清CMV-IgM方法检测的灵敏性分别是93.8%,90.8%,80.0%,特异性分别为97.5%,96.3%,60.0%,与其他两种方法比较,FQ-PCR法灵敏性和特异性高(均P<0.05);②对照组婴幼儿尿液标本中也存在尿CMV-DNA阳性;③观察组患儿治疗后2周复查,130例患儿FQ-PCR、pp65法的阳性符合率为94.7%,FQ-PCR、CMV-IgM法的阳性符合率为81.8%。结论FQ-PCR法检测尿CMV-DNA可广泛用于CMV感染诊治过程的动态观察。     

造血干细胞移植后患者血浆巨细胞病毒DNA拷贝数与巨细胞病毒病的关系

目的 评价实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)法监测造血干细胞移植后患者血浆巨细胞病毒(CMV)DNA水平的临床意义.方法 对2005年1月至2007年1月之间进行异基因造血干细胞移植的318例患者,自移植应采用RQ-PCR每周监测血浆CMV-DNA水平,6×102拷贝/ml视为CMV-PCR阳性.结果 共136例患者(42.8%)检测出1025例次血浆CMV-DNA阳性,首次阳性出现的中位时间为42 d,最高拷贝数及初始拷贝数中位值分别为1.5×104拷贝/ml和4.5×103拷贝/ml.318例患者中共发生CMV肺炎及肠炎23例,累积发病率为7.2%.14例患者在发生CMV病之前出现CMV血症,4例在出现临床表现后方检测出病毒阳性,另有5例CMV血症阴性的患者诊断为CMV疾病.发生CMV病的患者其CMV-DNA最高拷贝数高于未发生组患者(4.3×104拷贝/ml比1.3×104拷贝/ml,P=0.009),但初始拷贝数差异无统计学意义(3.7×103拷贝/ml比4.7×103拷贝/ml,P=0.63).CMV-DNA最高拷贝数随着发生CMV感染的次数增加而增高,在发生CMV感染1～4次的患者中,中位数值分别为82.6×102、261.3×102、440.8×102和10 659.0×102拷贝/ml(P<0.01),且CMV肺炎及CMV肠炎发病率也从2.7%(5/182)明显上升至50%(2/4)(P=0.001).结论 采用RQ-PCR法监测造血干细胞移植后患者血浆CMV-DNA水平对CMV病的发生有一定的预测意义,高CMV-DNA拷贝数及多次感染者预示着CMV病发生概率升高.     

PCR-ELISA法及荧光定量PCR法检测HBV感染者精液HBV-DNA的探讨

目的探讨PCR-ELISA法及荧光定量PCR法（FQ-PCR）检测HBV感染者精液中HBV-DNA检出情况及其临床意义。方法选取男性HBV感染者60例,采集患者精液、静脉血,用PCR-ELISA法来检测患者精液及血清中HBV-DNA。同时采用荧光定量PCR检测患者精液中HBV-DNA。结果PCR-ELISA法：60例精液标本HBVDNA阳性12例,阳性率18.33%,拷贝数为1.267×10^3-6.532×10^5/ml,平均拷贝数为4.781×10^4/ml;60例血清标本阳性53例,阳性率为88.33%,拷贝数1.462×10^3-5.153×10^7/ml,平均拷贝数为2.451×10^6/ml。荧光定量PCR法：60例精液标本HBVDNA阳性13例,阳性率21.67%,拷贝数为1.357×10^3-7.113×10^5/ml,平均拷贝数为4.983×10^4/ml;两种检验方法检测精液HBV-DNA的阳性检出率比较无显著性意义（P〉0.05）。结论PCR-ELISA法与荧光定量PCR定量检测精液中HBVDNA同样具有较强的特异性和灵敏度,为临床了解乙型肝炎患者精液中肝炎病毒的感染状态提供了帮助,具有重要的临床意义。     

儿童外周血EB病毒DNA检测的临床意义

目的探讨Epstein-Barr病毒（EB病毒）DNA检测的临床应用价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应病毒核酸扩增方法,定量检测儿科以发热为主诉的患儿外周血EB病毒DNA载量。阳性病例进行临床分析和抗病毒治疗观察。结果检测522例间断和/或持续发热患儿,阳性（病毒载量≥50拷贝/ml）102例,阳性率19.5%。病毒载量最高4.44×10^6拷贝/ml,最低4.3×10^2拷贝/ml。阳性病例疾病病种较多。部分阳性病例抗病毒治疗显效。结论静脉血EB病毒DNA检测是可行的实验室诊断方法;儿科以发热为主诉的患儿可能有19.5%左右存在EB病毒感染或隐性感染。EB病毒DNA检测阳性患儿应适当抗病毒治疗并随访。     

肾移植受者巨细胞病毒隐性感染的筛查方法及应用

目的探讨肾移植受者巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)隐性感染的筛查方法,为临床早期发现CMV活动性感染提供诊断依据。方法收集笔者医院2009年10～12月期间门诊随访233例肾移植受者外周静脉血标本450份,分别采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、巢式PCR(nPCR)以及酶联免疫吸附(ELISA)法对标本进行检测,同时采用ELISA法检测他克莫司(Tac)浓度。结果 233例肾移植受者CMV-IgG均为阳性,CMV-IgM则均为阴性;Real-time PCR技术检测CMV-DNA阳性85例(36.48%),以低拷贝数为主。nPCR技术检测CMV-DNA阳性10例(4.29%),两种技术检测总阳性率存在显著性差异(P<0.05);随着Tac药物浓度升高,CMV-DNA阳性率呈增高趋势,药物高浓度组CMV-DNA阳性率高于低浓度组(P<0.05)。结论 Real-time PCR是筛查肾移植受者CMV隐性感染较为理想的方法,尤其在受者药物浓度偏高时更具有临床应用价值。     

FQ-PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床价值

目的探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV-DNA的应用价值。方法从1000份用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝五项的体格检查血清标本中,抽取288份HBsAg阳性标本及100份全阴标本,进行荧光定量聚合酶链式反应HBV-DNA定量分析。结果经FQ-PCR检测,80份HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性的标本,HBV-DNA阳性率为100%(80/80),平均HBV-DNA拷贝数为2.5×108拷贝/m l;164份HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性的标本,HBV-DNA阳性率为76.2%(125/164),平均HBV-DNA拷贝数为1.5×106拷贝/m l;12份HBsAg单项阳性的标本,HBV-DNA的阳性率为83.3%(10/12),平均HBV-DNA拷贝数为1.6×105拷贝/m l;100份HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb均阴性的标本,HBV-DNA的阳性率为2.0%(2/100),平均HBV-DNA拷贝数为4.5×105拷贝/m l。结论FQ-PCR可以检测HBV的感染和复制情况,对准确报告HBV感染、指导其选择治疗方案和观察疗效具有重要的临床意义。     

病理性黄疸新生儿巨细胞病毒感染的临床研究

目的 分析病理性黄疸患儿巨细胞病毒(CMV)感染情况,探讨母乳CMV-DNA检测的临床意义。方法 选取庆阳市人民医院住院的病理性黄疸新生儿300例,用FQ-PCR方法检测患儿血浆、外周血单个核细胞(PBMC)、尿液和母乳的CMV-DNA,ELISA法检测患儿血清CMV-IgM和IgG,分析CMV感染患儿的临床数据。结果 300例病理性黄疸新生儿中,CMV感染的阳性率为13.33%(40例),其中患儿血清CMV-IgM阳性率为4.33%(13例),CMV-IgG阳性率为80.85%(228例)。母乳CMV-DNA阳性率为46.00%(138例),患儿血浆CMV-DNA阳性率为4.00%(12例),PBMC CMV-DNA阳性率为6.67%(20例),患儿尿液CMV-DNA阳性率为10.00%(30例)。患儿尿液CMV-DNA的阳性率与乳汁CMV-DNA的阳性率有显著相关性(P<0.01)。40例CMV感染患儿中,婴儿肝炎综合症为13例(32.50%),新生儿肺炎12例(30.00%),缺血缺氧性脑病6例(15.00%),听力损伤5例(12.50%),腹股沟斜疝2例(5.00%)。结论 CMV感染是新生儿病理性黄疸主要原因之一;检测产妇母乳中CMV-DNA对母乳喂养具有临床指导意义,有助于预防CMV感染。     

联合检测CMV-IgM及CMV-DNA对婴幼儿巨细胞病毒肝炎的诊断价值

目的 探讨联合检测巨细胞病毒(CMV)-IgM及CMV-DNA对婴幼儿巨细胞病毒肝炎的诊断意义.方法 采用化学发光法检测聊城市人民医院122例确诊巨细胞病毒肝炎患儿(病例组)的血清CMV-IgM,同时用荧光探针PCR法检测患儿血清与尿液的CMV-DNA;另选择该院同期186例无感染症状健康儿童为对照组.分析各组肝炎患儿CMV-IgM和CMV-DNA的阳性率差异,并通过受试者工作特征(ROC)曲线比较单独及联合检测CMV-IgM、CMV-DNA在诊断婴幼儿巨细胞病毒肝炎中的价值.结果 病例组CMV-IgM和CMV-DNA的阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).根据年龄分组,1d至6个月组CMV-IgM及CMV-DNA联合检测的总阳性率最高;在以临床特征分组中,黄疸组CMV-IgM及CMV-DNA联合检测的总阳性率最高,以上差异均有统计学意义(P＜0.05).经ROC曲线分析病例组CMV-IgM及CMV-DNA联合检测的曲线下面积最大,灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均最大,诊断价值最高.结论 联合检测CMV-IgM、CMV-DNA比单独检测对婴幼儿巨细胞病毒肝炎有更好的诊断价值.     

22例婴儿巨细胞病毒感染的临床分析

目的 探讨婴儿巨细胞病毒感染的临床特点、检测手段及治疗。方法 对22例经尿CMV－DNA PCR及血清CMV－IgM ELISA测定确诊为巨细胞病毒感染的婴儿患者的临床资料进行分析。结果 尿CMV－DNA PCR阳性14例，血清CMV－IgM ELISA阳性22例，两者均阳性9例，患儿母血清CMV－IgM阳性20例。肝肿大19例，黄疸15例，脾肿大10例，咳嗽、气促8例，抽搐1例，小头畸形1例。所有的病例均应用更昔洛韦治疗。结论 巨细胞病毒感染以肝脏损害最多见，CMV－感染的母亲是小儿CNV感染的重要来源。用PCR检测尿中CMV－DNA和用EUSA检测血清中CMV－IgM是诊断CMV感染的常用方法。更昔洛韦治疗CMV感染效果好。     

CMV感染病儿实时荧光定量PCR检测及意义

目的 探讨实时荧光定量PCR法检测病儿尿液中巨细胞病毒(CMV)-DNA含量在诊断和动态监测CMV感染中的意义.方法 应用PE 5700全自动PCR扩增分析仪,检测35例临床高度怀疑有CMV感染病儿(病儿组)尿液中的CMV-DNA拷贝数,随机选择45例同年龄段患非感染性疾病病儿作为对照组,比较两组CMV阳性标本中CMV-DNA含量,并测定治疗后的病毒载量.同时与血清CMV-IgM抗体检测结果进行比较.对部分病儿进行临床观察和随访.结果 病儿组CMV感染27例,阳性检出率为77.14%;对照组CMV感染12例,阳性检出率为26.67%.治疗后两组病儿尿液中CMV-DNA拷贝数下降幅度均较大,与治疗前比较, 差异有显著性(t=4.159、5.438,P<0.01).实时荧光定量PCR法CMV阳性检出率高于血清CMV-IgM检测方法.9 例病儿随访2年,1例胆管闭锁病儿手术后CMV病毒载量仍在较高水平,1年后发展为肝硬化;4例CMV 肝炎经治疗后, 1 例CMV-DNA转阴,3例仍阳性;4例无症状性感染病儿CMV-DNA转阴或降至低水平.结论 实时荧光定量PCR技术检测CMV感染具有快捷、灵敏度高、特异度高等优点,量化结果便于对治疗过程进行连续监测,为病儿治疗和随访提供有效帮助.     

CMV—IgM动态检测预测造血干细胞移植术后CMV感染研究

目的探讨白血病患者异基因造血干细胞移植（Allo-HSCT）术后巨细胞病毒（CMV）IgM抗体滴度的动态变化与CMV感染进展的关系。方法采用单克隆抗体免疫荧光测定法和微粒子酶免分析法对86例接受Allo-HSCT的白血病患者,在术后50d内每周检测1次,50-270d每2周检测1次CMV-Ag和CMV-IgM,同时观察有无CMV病症状出现,并分析CMV—Ag阳性细胞数和CMV—IgM滴度变化与CMV感染进展的关系。结果86倒患者在移植后270d内共有57例患者发生过活动性感染。这57例患者CMV—Ag首次检出阳性时,其中只有5例患者CMV-IgM出现阳性,而且CMV-IgM首次出现阳性的平均检出时间为121．6d,明显迟于CMV-Ag的平均46．7d（P〈0．05）;在CMV活动性感染的中后期,由于受到抗病毒治疗的干预,CMV-Ag的平均阳性细胞数并不和CMV—IgM滴度呈相同的趋势性改变。两者之间不存在相关性（γ=0．146,P〉0．05）;8例患者从无症状感染进展到CMV病时,CMV—IgM滴度呈进行性升高,其中4例患者感染得到控制后,滴度逐渐下降。当CMV-IgM滴度在10以下,CMV病尚能控制,若滴度均超过10以上,大部分患者会发生死亡。结论CMV—IgM动态定量检测对预测Allo-HSCT后中后期CMV活动性感染进展及其预后有一定的临床指导意义。     

巨细胞病毒核酸和抗体检测在不同特征患者中的一致性分析及临床指导意义

目的: 探讨巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)脱氧核糖核酸(deoxyribo nucleic acid,DNA)检测和免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)抗体检测在不同特征患者中的一致性及对临床工作的指导价值。方法: 2014年12月至2019年11月期间,北京大学国际医院检验科同时进行CMV-IgM抗体和CMV-DNA检测的患者共计507例,收集患者性别、年龄一般资料,同时收集患者的诊断、用药及转归等临床资料。根据患者CMV-DNA阴性或阳性、CMV-IgM抗体阴性或阳性,以及年龄、性别和是否接受免疫抑制治疗进行分组和分层,组别之间率的比较采用Pearson卡方检验或Fisher精确经验,P<0.05为差异有统计学意义。结果: 507例送检患者中,CMV-DNA阳性患者55例(10.85%),CMV-IgM抗体阳性患者74例(14.60%),CMV-DNA和CMV-IgM抗体同时阳性患者20例(3.94%)。55例CMV-DNA阳性患者中,男性37例(67.27%),60岁以上者25例(45.45%),接受免疫抑制治疗者33例(60%),均高于CMV-DNA阴性组的47.35%(P=0.005)、31.86%(P=0.043)和46.02%(P=0.050)。CMV-DNA和IgM抗体双阳性患者中45%接受免疫抑制治疗,低于CMV-DNA阳性但IgM抗体阴性患者(68.57%,P=0.086),也低于CMV-DNA阴性但IgM抗体阳性患者(68.52%,P=0.064)。CMV-DNA和IgM抗体双阳性患者接受更昔洛韦治疗后91.67%出现好转,而CMV-DNA阳性但IgM抗体阴性患者的好转率仅为60%(P=0.067)。结论: CMV-IgM抗体检测受到年龄、性别、免疫状态等影响,不推荐对存在免疫抑制状态和年龄大于60岁的患者单独采用CMV-IgM抗体检测判断CMV感染;CMV-DNA和CMV-IgM抗体联合检测可能有助于预判患者的免疫状态和抗病毒治疗的结局转归。     

新生儿巨细胞病毒感染临床分析及干预对策

目的 分析新生儿巨细胞病毒感染的危险因素、干预对策与护理.方法 选择来我院就诊的巨细胞病毒感染患儿及健康新生儿,采用PCR、ELISA分别检测标本的CMV-DNA、CMV-IgG、CMV-IgM的水平.结果 95例新生儿尿液中50例CMV-DNA为阳性（52.63％）,且其母亲乳汁CMV-DNA大多为阳性（90.00％）;随着产妇年龄的增加,产妇CMV-IgM、CMV-IgG的阳性率均逐渐增加,其中产妇CMV-IgM差异有统计学意义,新生儿CMV-IgG均低于产妇CMV-IgG.结论 加强对孕妇产前的产检是预防新生儿CMV感染的重要措施.     

定量PCR检测CMV在异基因造血干细胞移植中的临床意义

目的通过监测造血干细胞移植后患者的外周血CMV DNA含量,探讨对患者进行抗病毒治疗的有效性。方法采用实时定量PCR方法对接受异基因造血干细胞移植（Allogeneic HCT）患者进行外周血CMV DNA定期检测。可评价患者57例,其中男38例,女19例,年龄13-59岁（中位年龄31岁）;含急性白血病30例（ALL 11例、AML 19例）,慢粒（CML）11例,淋巴瘤（NHL）8例,骨髓增生异常综合征（MDS）5例,急性重症再障（SAA）3例。在移植后每周检测1次,CMV DNA拷贝数〉102为阳性,连续2次〉103或1次〉1×10^4时行抗病毒治疗。结果57例患者中有32例（56.1%）在病程中检测到CMV DNA阳性,拷贝数1.2×10^2-7.8×10^5,行抗病毒治疗26例,死亡11例,仅1例与CMV感染有关。结论CMV DNA的定期检测可以使患者在病毒血症时及时接受治疗,减少CMV疾病的发生,有利于改善患者的生存。