tBHQ对无机砷致HaCaT细胞细胞周期调节失控的拮抗作用

目的探讨叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,tBHQ)对亚砷酸钠(sodium arsenite,NaAsO2)致人皮肤角质细胞系HaCaT细胞周期阻滞及其调控蛋白异常改变的拮抗作用。方法流式细胞仪法测定细胞周期;Western Blot检测细胞内Cyclin D1和CDK4的蛋白表达情况。结果 NaAsO2单独作用HaCaT细胞,G0/G1期细胞比例明显下降(P<0.01),S期和G2/M期细胞比例较对照组明显增加(P<0.01);tBHQ预处理后,tBHQ(50μmol/L)预处理的NaAsO2(25、50μmol/L)组细胞G0/G1期细胞比例有所上升(P<0.01);tBHQ(50μmol/L)预处理的NaAsO2(50μmol/L)组S期细胞比例明显下降(P<0.01);G2/M期细胞比例整体呈下降趋势。NaAsO2单独作用于HaCaT细胞,细胞周期相关蛋白Cyclin D1和CDK4的蛋白表达随NaAsO2染毒浓度的增加而明显下降(P<0.01);tBHQ预处理后,Cyclin D1和CDK4蛋白表达均明显高于相同浓度NaAsO2单独作用组(P<0.01)。结论 tBHQ对无机砷致人皮肤角质细胞细胞周期异常变化具有一定的拮抗作用。     

tBHQ对无机砷诱导HaCaT细胞凋亡中的保护作用

目的观察tBHQ对内源性线粒体凋亡通路和凋亡相关蛋白Bel-2等蛋白表达的影响,探讨tBHQ在无机砷诱导HaCaT细胞凋亡过程中的作用。方法采用分光光度法检测Caspase-3蛋白活力;Westernblot法分析细胞内Caspase-3、CytC、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果NaAsO2单独作用于HaCaT细胞24h,线粒体中CytC蛋白表达降低,而胞浆中CytC蛋白表达则随染砷剂量的增加而明显升高。tBHQ预处理12h后再分别暴露于NaAsO2,线粒体中CytC蛋白表达明显恢复,胞浆中CytC蛋白表达则随tBHQ剂量的增加而明显回落。此外,NaAsO。单独作用于HaCaT细胞24h,Procaspase-3蛋白表达降低,而Caspase-3活化程度均显著高于对照组（P〈0．01）,tBHQ预处理12h后再暴露于NaAsO2,Procaspase-3蛋白表达均明显高于相同浓度砷单独作用组,而且Caspase-3酶活力得到明显抑制,差异均具有统计学意义（P〈0．05）。NaAsO：单独作用于HaCaT细胞24h,与对照组相比Bcl-2蛋白表达降低,而Bax蛋白表达明显升高。tBHQ预处理12h后再分别暴露于NaAsO2,Bcl-2蛋白表达明显恢复,而Bax蛋白表达则随tBHQ剂量的增加而减少。结论tBHQ能够影响线粒体凋亡途径拮抗NaAsO2诱导的人皮肤角质细胞凋亡;tBHQ能够诱导调控凋亡相关蛋白Bcl-2／Bax从而发挥抗凋亡作用。     

叔丁基对苯二酚对亚砷酸钠致细胞毒性和氧化损伤的拮抗作用

目的 探讨叔丁基对苯二酚(tBHQ)对亚砷酸钠(NaAsO2)致细胞毒性和氧化损伤的拮抗作用。方法 Chang肝细胞用tBHQ[0(对照)、5、25μmol/L]预处理24h,再用5 μmol/L tBHQ和NaAsO2[0(对照)、30、40、50、60 μmol/L]共同作用24h,采用刃天青钠(Alamar blue)还原法检测细胞活力,结果用实验组Alamar blue还原率与对照组Alamar blue还原率的相对比值表示;Chang肝细胞用tBHQ[0(对照)、5、25 μmol/L]预处理24h,再用5μmol/L tBHQ和NaAso2[0(对照)、40、50 μmol/L]共同作用24h,采用荧光探针2′,7′-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)的生成,结果用实验组平均荧光强度与对照组平均荧光强度的相对比值表示。结果 30、40、50、60 μmol/L的NaAsO2暴露能够显著降低细胞活力,而tBHQ预处理(5、25 μmol/L)则可明显恢复细胞活力,NaAsO2和tBHQ两因素的主效应及其交互作用均有统计学意义（F值分别为566.57、55.09、14.50,P均＜0.05）;5、25 μmol/L tBHQ预处理的30、40、50、60 μmol/LNaAsO2组细胞活力(0.75±0.02、0.70±0.04、0.59±0.03、0.43±0.03和0.75±0.02、0.73±0.03、0.65±0.02、0.50±0.02)较相应NaAsO2单独作用组(0.70±0.03、0.64±0.03、0.43±0.03、0.33±0.01)显著升高（P均＜0.05）,25 μmol/L tBHQ 预处理的50、60μmol/L NaAsO2组细胞活力高于相应5μmol/L tBHQ预处理组（P均＜0.05）。40、50 μmol/L的NaAsO2能显著诱导Chang肝细胞内ROS的产生,而tBHQ预处理(5、25 μmol/L)则可使NaAsO2诱导产生的细胞内ROS水平显著下降,NaAsO2和tBHQ两因素的主效应及其交互作用均有统计学意义（F值分别为181.78、60.55、4.93,P均＜0.05）;5、25 μmol/L tBHQ预处理的40、50 μmol/L NaAsO2组细胞内ROS水平(1.87±0.09、1.80±0.07和1.36±0.11、1.44±0.12)较相应NaAsO2单独作用组(2.30±0.18、2.18±0.17)显著降低(P 均＜ 0.05),25 μmol/L tBHQ预处理的40、50 μmol/L NaAsO2组细胞内ROS水平低于相应5μmol/L tBHQ预处理组（P均＜ 0.05）。结论 tBHQ对NaAsO2诱导的细胞毒性和氧化损伤具有一定的拮抗作用。     

虾青素对体外氧化应激诱导人外周血内皮祖细胞凋亡的影响及机制

目的:探讨虾青素对体外氧化应激诱导人外周血内皮祖细胞凋亡的影响及机制。方法:体外培养人外周血单核细胞源的内皮祖细胞,分为对照组、模型组(叔丁基过氧化氢100μmol/L)、虾青素+叔丁基过氧化氢组(虾青素0.1、1.0、10.0nmol/L预处理24h后,再加终浓度为100μmol/L的叔丁基过氧化氢溶液继续培养6h)。MTT法检测细胞存活率;DAPI染细胞检测细胞凋亡率;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)活性;JC-1法测定线粒体膜电位。结果:与对照组比较,叔丁基过氧化氢(100μmol/L)能明显造成内皮祖细胞的凋亡(P0.05)。虾青素可降低叔丁基过氧化氢引起的内皮祖细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少(P0.05),线粒体膜电位增加,Caspase-3表达减弱。结论:ASX通过保护线粒体膜电位,下调Caspase-3活性,最终起到抗氧化应激诱导的内皮祖细胞凋亡。     

低剂量长期砷暴露对HaCat细胞增殖及凋亡水平的影响

目的探讨低剂量长期砷暴露对HaCat细胞增殖及凋亡水平的影响。方法 HaCat细胞暴露于浓度为0、0.05、0.10μmol/L的NaAsO215周后,用直接细胞计数法计数对照组及染砷组细胞数,检测细胞增殖水平;用流式细胞仪测定10 000个细胞的细胞凋亡发生水平。结果各染砷组细胞增殖速率与对照组相比均显著增高(P<0.05),且0.10μmol/L组细胞增殖率(245.00±8.66)%显著高于0.05μmol/L组(165.00±15.00)%(P<0.05),细胞增殖水平与染砷剂量间呈显著剂量-效应关系;0.05μmol/L组(0.28±0.08)%及0.10μmol/L组(0.34±0.09)%细胞凋亡率均明显低于对照组(0.74±0.18)%(P<0.05)。结论长期低剂量砷暴露可使HaCat细胞的增殖能力明显增强,并诱导细胞凋亡率显著降低。     

一种新型肽对Lewis肿瘤细胞凋亡的影响

目的探讨新型肽对Lewis肿瘤细胞凋亡作用的影响。方法采用吖橙啶/溴乙啶(AO/EB)及线粒体膜电位法检测Lewis肿瘤细胞在48 h细胞凋亡情况,荧光显微镜观察AO/EB双染法检测细胞凋亡及线粒体膜电位的变化。结果新型肽对Lewis细胞具有明显促进凋亡的作用。荧光显微镜下观察:新型肽(2 000μg/ml)治疗组可见典型的细胞凋亡形态学特征性改变;线粒体膜电位显著降低;细胞凋亡率明显增加分别与空白对照及新型肽(1 000μl/ml)治疗组比较均有统计学差异(P0.05)。结论新型肽可能通过降低Lewis肿瘤细胞线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,发挥抗肿瘤生长作用。     

虾青素对碘海醇诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的观察虾青素(AST)对碘海醇(I)诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)正常培养生长80%后,随机分为空白对照(Control)组、溶剂对照(DMSO)组、I组、AST预处理(AST+I)组、AST预处理+沉默信息调节因子2相关酶(SIRT)1抑制剂烟酰胺(AST+I+NA)组,I+SIRT1抑制剂(I+NA)组。不同因素干预细胞后,采用4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测细胞凋亡的形态学变化;膜联蛋白(Annexin)-V-FITC/碘化丙啶(PI)双标流式细胞仪检测细胞凋亡率;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)荧光探针检测线粒体膜电位;Western印迹检测SIRT1、P53、Bax和Bcl-2蛋白表达。结果 AST能显著减轻I诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡,稳定线粒体膜电位,显著上调SIRT1蛋白表达,显著减少线粒体凋亡相关蛋白P53、Bax表达,显著增加Bcl-2表达(均P0.05)。结论 AST可能通过上调SIRT1蛋白表达,稳定线粒体膜电位,调控细胞凋亡相关蛋白表达对I诱导的大鼠肾小管上皮损伤发挥保护作用。     

自噬对三氧化二砷所致正常淋巴细胞损伤的保护效应

目的研究三氧化二砷(As2O3)致外周血淋巴细胞(PBL)损伤中自噬与凋亡的作用。方法应用密度梯度离心法从正常人外周血中分离淋巴细胞,MTT法检测细胞增殖活性;Annexin-V/PI双标记染色检测凋亡;电镜观察细胞形态学改变;单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色观察细胞自噬水平;流式细胞术(FCM)检测Bcl-2的表达水平。结果 1.0⁸.0μmol/L As2O3呈剂量、时间依赖性地抑制人PBL增殖和诱导凋亡,24 h和48 h的IC50分别为12.46μmol/L和3.76μmol/L,并可诱导细胞发生自噬活化。用3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制细胞自噬可增强As2O3对PBL的抑制效应,24 h和48 h的IC50分别为10.40μmol/L和2.31μmol/L,细胞出现显著凋亡形态学改变,凋亡率明显增高,Bcl-2的表达水平降低。结论自噬可作为一种保护机制来抵御As2O3对外周血淋巴细胞的损伤,3-MA可能通过下调Bcl-2的表达而增加As2O3对外周血淋巴细胞的损伤效应。     

人参皂苷单体Rh2诱导小鼠前胃癌细胞系凋亡的分子机制

目的:观察人参皂苷Rh2(G-Rh2)诱导小鼠前胃癌MFC细胞的凋亡,探讨Ca2 在G-Rh2诱导细胞凋亡中的作用,揭示G-Rh2诱导MFC细胞凋亡的分子机制.方法:分别对无血清培养24h后的MFC正常细胞组、G-Rh2(3、10、30mg/L)给药组、Ca2 螯合剂BAPTA(20μmol) G-Rh2(10mg/L)给药组及BAPTA(20μmol)组,荧光显微镜(Hoechst33258)观察细胞形态学改变;流式细胞仪Annexin V-FITC双染法检测细胞早期凋亡率;琼脂糖凝胶电泳法观察细胞晚期凋亡;共聚焦显微镜分析G-Rh2给药后细胞内钙和细胞线粒体膜电位,Western blot分析caspase3的表达.结果:10mg/L的G-Rh2能显著抑制无血清培养的MFC细胞增殖和诱导MFC细胞凋亡,可剂量和时间依赖性的提高细胞内钙浓度,降低细胞线粒体膜电位,增加caspase3的表达,但这些作用均可被BAPTA(20μmol)抑制.结论:G-Rh2可激活细胞内Ca2 信号转导途径,从而最终通过线粒体凋亡途径诱导胃癌细胞凋亡.     

亚砷酸钠诱导外周血淋巴细胞凋亡的实验研究

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)诱导淋巴细胞凋亡的作用机制。方法用倒置显微镜、透射电子显微镜、噻唑蓝(MTT)还原实验、细胞免疫组化法,分别对不同浓度的实验组及对照组淋巴细胞形态学改变,细胞存活率及Bcl-2蛋白的表达进行观察和测定。结果MTT实验显示,0.1、1.0、5.0μmol/L的NaAsO2均能抑制淋巴细胞的生长增殖(P<0.05);透射电镜观察到淋巴细胞表面的突起减少或脱失,部分细胞核染色质聚集、边移,线粒体结构模糊不清;Bcl-2在实验组中表达的强度均低于对照组。结论NaAsO2不仅抑制淋巴细胞增殖,而且诱导细胞凋亡,诱导细胞凋亡与Bcl-2表达有关。