肿瘤单克隆抗体

一、什么是肿瘤单克隆抗体(Monoclon-al antibody,简称 McAb)?首先,要从抗原-抗体反应谈起。任何外界抗原(微生物、瘤细胞等)作用于机体,即引起免疫反应,激活 B 淋巴细胞(多克隆的),产生相应的抗体(多克隆的)。故这个免疫学反应是多克隆的,产生的抗体也是多克隆的。即抗体的分子结构不相同,反过来可识别刺激性抗原上不同的分子结构——抗原决定簇。每个细胞可有数百万个不同的抗原决定簇。克隆(clone)是把单个细胞在培养基上培养,生长成为肉眼可见的由无数细胞构成的小堆,即叫克隆。这表示这一克隆的细胞都是从一个细胞繁殖生长而来的,是纯系     

抗人分化抑制因子3蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

目的 分化抑制因子3(inhibitor of differentiation 3,Id3)是重要的细胞生长调控分子,在细胞增殖、分化等过程中发挥重要作用.文中探讨在大肠杆菌中表达及纯化重组人Id3蛋白,制备抗人Id3单克隆抗体(McAb),以进一步研究Id3的生物学功能及其临床应用.方法 将重组表达载体Id3/pET32a转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转化菌表达Id3重组融合蛋白(Trx-His-hId3),通过镍亲和层析柱纯化Trx-His-hId3.以纯化的Id3重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备Id3 McAb,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot进行抗体鉴定.结果 经免疫小鼠、脾细胞分离、细胞融合及克隆筛选等步骤,筛选出2株分泌抗人Id3 McAb的杂交瘤细胞株,分别命名为McAb 6G7和6G9,免疫球蛋白亚类鉴定均为IgG1亚类.Western blot分析表明,McAb 6G7和6G9能与重组人Id3蛋白特异性结合.间接ELISA法检测2株细胞冻融前后所产生上清中的抗体效价均分别为1∶ 1000、1∶ 5000.结论 成功制备了抗人Id3 McAb,为研究该蛋白的功能提供了有利工具.     

间接血凝检测霍乱弧菌多克隆抗体及单克隆抗体的应用

在单克隆抗体(McAb)的制备中,对检出能分泌所期望的抗体杂交细胞,并进行克隆化筛选的工作既重要而工作量又较大,故选择的检测方法必须敏感、特异、简便和迅速。目前国内外一般常用双向扩散、ELISA、RIA、IHA等方法。我们用霍乱弧菌脂多糖致敏红细胞,并用抗霍乱弧菌多克隆抗体检测其敏感度,在制备霍乱弧菌单克隆抗体     

载脂蛋白B单克隆抗体透射免疫比浊测定法的探讨

应用本室制备的载脂蛋白(apo)B单克隆抗体(McAb)经纯化后建立了透射免疫比浊法,并对实验中的各项条件和影响因素进行了探讨,经与多克隆抗体(PcAb)免疫比浊法比较.相关系数γ=0.911.     

单克隆抗体技术

单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb是单克隆细胞(即单细胞系细胞群)所产生的针对单一抗原决定簇的抗体。因此,McAb具有高度的特异性和均一性。1975年Kohler和Milstein首次应用杂交瘤技术成功地制备出抗绵羊红细胞的McAb。此后,单克隆抗体技术发展迅速,并广泛应用于医学、生物学的许多研究领域。     

抗乳腺癌人单克隆抗体CM-1的制备和初步鉴定

用乳腺癌患者术后腋下淋巴结制备的淋巴细胞与人骨髓瘤细胞系SHM-D_(33)融合,获得1株分泌抗乳腺癌人McAb抗体的杂交瘤细胞克隆株CM-1.该株细胞已传代2年,仍能稳定地分泌特异性抗体.该株细胞的染色体为103,SHM-D_(33)人骨髓瘤细胞的染色体为80,证明CM-1细胞株确是杂交瘤细胞株.ELISA和琼脂免疫双扩散法测得CM-1细胞分泌的抗体为人IgM(λ链).CM-1细胞培养液中的抗体含量为35.9μg/ml,裸鼠腹水中的抗体含量为8mg/ml.用ELISA检测CM-1细胞培养上清液的抗体滴度     

霍乱弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞建株研究

根据霍乱弧菌菌体抗原的差异,用多克隆抗体可将其分为小川(Ogawa)、稻叶(Inaba)和彦岛(Hikojima)3个亚型。单克隆抗体具有高度特异性,运用杂交瘤产生的单克隆抗体(McAb)研究霍乱弧菌,国内尚未见有报道。目前,抗霍乱弧菌脂     

单克隆抗体及其应用概况

克隆(Clone)一词为无性繁殖细胞系的意思,即由单个细胞分裂繁殖而形成的一簇细胞纯系。单克隆抗体(Monoclonal antibody,下面简称单抗)是指由B细胞纯系所产生的抗单一抗原的抗体。免疫学的研究和应用需要获得纯的抗体,但用一般方法从免疫动物制备的抗体不纯,因动物免疫血清中,含有无数抗体分泌纯系的产物,为多克隆抗体。1975年Kohler(西德人)和Milstein(英国人)研究成功了淋     

抗ICAM-5单克隆抗体的制备及实验研究

目的 制备抗细胞间黏附分子5 (intercellular adhesion molecule-5,ICAM-5)单克隆抗体(McAb)并进行实验研究.方法 采用淋巴细胞杂交瘤技术制备小鼠源性单克隆抗体.采用ELISA法测定腹水ICAM-5 McAb的效价,通过免疫荧光技术及Western blotting检测McAb的抗体特异性.结果 获得3株分泌ICAM-5 McAb的杂交瘤细胞株.ELISA检测效价可达1:(4×105),免疫荧光与Western blotting显示3株McAb与ICAM-5分子具有良好的结合活性.结论 成功制备了抗ICAM-5的McAb,为其进一步研究和应用奠定了基础.     

抗人IgG结合型Lambda单克隆抗体和抗人IgG单克隆抗体的鉴定(摘要)

用人IgG 的Fab 抗原免疫BALB/C 小鼠,取脾细胞与SP2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞,在PEG 作用下进行融合,其融合率为97.22%。经微量ELISA 和间接血球凝集试验(PHA)检测抗体,筛选出两个克隆株,反复克隆后,对其中的两个细胞株C31、10和C31、6进行鉴定,结果如下。用人IgG 作抗原,两个单克隆抗体(McAb)     

抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的研究——12株杂交瘤细胞的建立及其分泌抗体的分析

本文报道12株分泌抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体(HBsAg McAb)杂交瘤细胞的建株及其 McAb 性质的分析结果,用 ID、CEP、PHA 和 ELISA 等四种方法均测得较高水平的McAb。杂交瘤细胞培养液中 McAb 的 PHA 效价为1:80～1:320,由杂交瘤诱生的小鼠腹水 McAb的 ID 和 CEP 效价可高达1:3,200～6,400,PHA 和 ELISA 滴度分别为10~(-4)～10~(-5)和10~(-5)～5×10~(-7)。将这些腹水以 PBS 稀释到 10~(-5),分别与~(125)I-HBsAg(2×10~4cpm)结合,其结合率为52.8～68.4%.12个 McAb 的特异性均良好,其中1个为抗“HBs/d”亚型抗体,其余的均为抗“HBs/a”型特异性抗体。这些 McAb 均属小鼠 IgG_1亚类。选出其中3个 McAb 用于制备 HBsAg 诊断试剂,获得良好结果。     

抗入■链单克隆抗体(McAb)的研制及临床应用

抗μ链是临床诊断及实验研究的重要试剂之一,广泛应用于肾组织 IgM 定位及各种细菌、病毒性感染早期特异性 IgM 抗体的检测。提取及纯化μ链,并免疫动物,制备抗μ链多克隆抗体。生产过程繁杂,我们从巨球蛋白血症患者血清中提纯了 IgM、免疫BAIB/C 小鼠后,成功地建立了分泌抗μ链的杂交瘤细菌株。所获抗μ链 McAb 效价高(腹水 McAb 琼脂双扩散效价可达1:28)、稳定性好(液氮中保存1年以上效价不变)、     

用体外免疫方法制备分泌抗7型腺病毒单克隆抗体的杂交瘤

本文报道用两种体外免疫的方法获得的BALB/c小鼠活化B淋巴细胞与NS—O骨髓瘤细胞融合,制备分泌抗7型腺病毒(7—AV)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤。用同系小鼠腹腔巨噬细胞预先处理抗原的体处免疫方法并延长体外培养时间至7天,融合后获得了较高的阳性杂交率,已克隆的6株阳性杂交瘤所分泌的McAb均为1gG类,为针对腺病毒六邻体蛋白抗原的型特异性中和抗体。     

轮状病毒单克隆抗体的研究和鉴定

运用杂交瘤技术,制备出7株分泌抗人轮状病毒短型S_2株单克隆抗体的杂交瘤,其中6株分泌IgG_(2a),1株分泌IgG_(2b)抗体。7株杂交瘤培养上清的免疫荧光抗体(IFA)滴度为1:32～256,腹水IFA滴度为1:8000～25600。双夹心ELISA腹水抗体滴度达10~(-4)～10~(-6)。7株McAb均与HSV、CMV、RSV、ADV等其它常见病毒无交叉反应。7株McAb均能与HRV长型Wa株反应,滴度为10~(-3)～10~(-6)。将其中二株或数株McAb混合后用ELISA检测其相应的OD值较每一单株为高,但相加指数(AI)值均在10%左右。结果表明,7株McAb均属RV群特异性抗体,但各自作用的抗原决定簇可能稍有差异。     

抗红细胞生成素单克隆抗体的制备与初步鉴定(简报)

红细胞生成素(Epo)是红系造血十分重要的成份。我们利用亲和层析法从再生障碍性贫血病人尿液中分离提取出来的Epo对BALB/C小鼠进行了多次免疫,取其脾细胞与P_3-X63-59小鼠骨髓瘤细胞在50％浓度的PEG作用下进行了融合。在一次融合率达90％以上的成功试验中,从330个有克隆生长孔中筛选出20个阳性孔,经过扩大培养,冻存及数次亚克隆,获得了5个稳定的能持续分泌抗Epo单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,并制备了腹水。McAb用酶联免疫测定法(ELISA)筛选和鉴定,并用CFU-E方法鉴定了抗     

应用单克隆抗体鉴定组织培养中的腺病毒型别

<正> 材料和方法一、抗原:为1984年10月～1986年5月从患儿分离到的59株腺病毒(Adv)接种于Hela 细胞,制成细胞涂片,丙酮固定后待检。用标准3、7型 Adv(Ad_3、Ad_7)感染 Hela 细胞涂片为阳性对照,正常 Hela 细胞涂片为阴性对照。二、按已报道过的方法制备分泌腺病毒单克隆抗体(McAb)的杂交瘤,并制备含McAb 的小鼠腹水:经免疫酶组化法及 IgG亚类测定证实分泌组特异性 McAb 1株,分泌Ad_3、Ad_7型特异性 McAb 各2株。腹水的效价分别为1:2,560～1:51,200,工作浓度为1:20。三、McAb 检测法:按已报道过的方法按顺序滴加 McAb、酶标记葡萄球菌蛋白 A(SPA)、底物溶液,镜检。阳性细胞为核     

风疹病毒单克隆抗体的研究

用风疹病毒(RV)Gos-10株免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,用ELISA法筛选分泌RV McAb的杂交瘤细胞6株,经克隆培养后发现其中的1A_9株能稳定分泌高效价特异性McAb,经鉴定为IgG2a,经ELISA检测、抗原吸收试验、中和试验及HI试验征明该McAb是种特异性的,能与各株RV发生交叉反应,而与其它种病毒不发生反应,证明此McAb对RV抗原有高度特异性与敏感性,可用以制备诊断试剂,实现风疹的早期、快速诊断和基础理论研究。     

抗伏马菌素B1单克隆抗体的制备及鉴定

目的建立抗伏马菌素B1(FB1)的单克隆杂交瘤细胞株,制备抗FB1的单克隆抗体(McAb)。方法采用FB1-KLH偶联物小剂量长周期免疫BALB/c小鼠后,采用细胞融合方法获得分泌抗FB1的杂交瘤细胞株,采用多次亚克隆的方法建立了4株稳定分泌抗FB1抗体的杂交瘤细胞株。腹水诱生法获得大量McAb,采用抗体亚类测定试剂盒鉴定抗体的亚类,SDS-PAGE测定抗体分子量,McAb的特异性和灵敏度用间接竞争抑制ELISA。结果免疫小鼠血清检测结果显示经过5次免疫后血清的效价稳定在1×10-6,经过4次亚克隆后建立4株稳定分泌抗FB1抗体的杂交瘤细胞株,获得腹水,纯化抗体,抗体亚类属于IgG2a类,轻链为κ,轻链和重链的相对分子质量分别是55000和32000,ELISA检测抗体特异性显示可与FB1发生特异性反应,采用此抗体建立间接竞争抑制ELISA方法的线性范围在2～500ng/ml。结论制备了特异性和灵敏度较高的抗FB1单克隆抗体,为建立伏马菌素免疫学检测方法打下良好基础。     

单克隆抗体与链黑菌素偶联物的抗肝癌BEL-7402细胞活性

采用活化酯法制备链黑菌素与抗人肝癌单克隆抗体(McAb)3A5的免疫偶联物,该偶联物兼有二者的生物活性和紫外吸收特征。抗体与链黑菌素偶联分子比为1:2～6,蛋白回收率为76％,链黑菌素保留原活性的12.5％,抗体活性基本上完全保持。但随着药物分子偶联数目的增加,抗体活性减小。偶联物在体外细胞克隆生成试验中,对肝癌BEL-7402细胞的抑制作用为游离链黑菌素的63倍,而对与抗原性无关的人咽上皮癌KB细胞的作用则较游离的链黑菌素弱11倍。以上结果表明,该免疫偶联物对靶细胞显示选择性杀伤作用。     

抗人树突状细胞单克隆抗体可变区基因克隆和序列分析

目的:为了将抗树突状细胞(dendritic cells,DC)抗体应用于临床疾病治疗,计划克隆获得抗人DC单克隆抗体(McAb)的可变区序列,在此基础上进一步获得人源化的抗人DC抗体.方法:运用RT-PCR技术,从分泌抗人DC McAb的杂交瘤细胞株(H1E11)中,克隆出VH和VL基因片段,并对VH和VL进行了测序分析.所测得的重链和轻链在基因库中与相关的Ig的VH和VL基因序列进行经Blast同源性比较.结果:通过碱基和蛋白序列的比较确认为小鼠IgG的VH和VL基因.运用Dnasis软件对VH和VL基因进行阅读框分析和模拟翻译,并参照Kabat等人(1991)编写的Ig蛋白质编码序列图谱,根据其FRs和CDRs的序列特征进行Ig的家族分析,发现VH共有414 bp,编码138个氨基酸序列,属于小鼠IgG重链Ⅲ(A)家族;VL由396 bp编码,产生132氨基酸,属于轻链κV家族.结论:成功克隆抗人DC McAb重链和轻链的可变区.